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小鼠胚泡移植法在研究羟基脲发育毒性中的应用
目的探讨体外染毒后胚泡移植方法评价羟基脲发育毒性的可行性.方法由C57BL/6J雌性小鼠和DBA雄性小鼠交配产生BDF1小鼠,以BDF1雌性小鼠作为供胚鼠进行超排卵,并与BDF1雄性小鼠交配后采集受精卵,再以20μg/ml的羟基脲对着床前胚胎进行体外染毒,将染毒后可胚泡化的胚胎移植于假孕昆明种代母鼠体内继续生长发育,观察出生前胎鼠形态学改变和出生后子鼠的行为改变,并对子鼠大脑进行病理检查.结果(1)在实验剂量下,羟基脲染毒组胎鼠出生前形态学检查未见异常.(2)羟基脲染毒组子鼠出现行为异常:回旋运动、阴性趋地运动、翻正反射和断崖回避阳性日均迟于阴性对照组(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05);悬挂时间短于阴性对照组(P＜0.05);10日龄游泳积分低于阴性对照组(P＜0.01).(3)电镜超微结构显示染毒组子鼠大脑中毒性损伤.结论将胚胎体外培养和胚泡移植技术结合起来,排除母体因素的影响探究羟基脲的发育毒性,是一可行的方法.
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香烟烟雾诱发BEAS-2B细胞体外恶性转化的研究
目的 通过香烟烟雾体外染毒诱发细胞恶性转化,建立吸烟致肺癌的细胞模型.方法 确定合适染烟浓度及时间后,将永生化人支气管上皮细胞系BEAS-2B细胞分为对照组(C)和20%烟雾浓度组(S).以每孔1×10<'5>细胞接种于Transwell培养皿,贴壁后置于气体染毒装置中,香烟烟雾持续泵入直接对细胞染毒.检测染毒后5、10、15、20代细胞恶性转化情况,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡变化.结果 BEAS-2B细胞在20%烟雾浓度下染毒5代后,出现生长动力学和形态学改变,生长失去接触抑制、获得对血清诱导分化的抗性和锚着独立性生长能力.G1期细胞百分比明显降低,S期细胞百分比明显升高,G2期细胞百分比先升高后降低,各代细胞凋亡率均明显降低.结论 香烟烟雾染毒能够诱发BEAS-2B细胞体外转化,且随染毒代数的增加呈现剂量效应关系,可作为体外研究吸烟致肺癌的细胞模型.
