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香烟烟雾凝集物对BEAS-2B细胞损伤作用及对IL-8表达的影响
目的 探讨香烟烟雾凝集物(cigarette smoke extracts，CSE)对人支气管上皮BEAS-2B细胞的损害作用和对细胞炎症因子IL-8表达的影响。方法 CSE原液的制备参照Su Y的方法并改良；利用MTT比色法研究CSE对BEAS-2B细胞的抑制作用；通过荧光定量PCR分析不同浓度CSE处理后细胞IL-8 mRNA水平的变化。结果 CSE处理后的BEAS-2B贴壁细胞形态变得不规则，细胞回缩变圆，显示低活力或死亡形态；MTT结果表明CSE对BEAS-2B细胞的生长有显著的抑制作用(P＜0.001)，且随着药物浓度的增加，CSE对细胞的抑制作用增强，呈剂量-效应关系；CSE暴露BEAS-2B细胞后可导致IL-8mRNA表达增加(P＜0.001)。低浓度(2.5％、5.0％和7.5％)的CSE刺激增加IL-8mRNA的表达(P＜0.001)，且呈浓度依赖型；10.0％CSE处理组大量细胞死亡，其IL-8 mRNA表达量与无CSE处理组间差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 CSE对支气管上皮BEAS-2B细胞有细胞毒性。低浓度的CSE引起BEAS-2B细胞IL-8 mRNA表达增加，且呈剂量依赖型；高浓度的CSE作用后其IL-8 mRNA的表达没有明显改变。
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烟草烟雾凝集物对BEAS-2B细胞caspase-1及相关炎性细胞因子表达的影响
目的 观察烟草烟雾凝集物CSC(cigarette smoke condensate,CSC)刺激永生化人支气管上皮细胞(Immortalized human bronchial epithelial cells,BEAS-2B),其caspase-1及相关炎性细胞因子的改变.方法 分别以终浓度为0 mg/ml(空白对照与DMSO溶剂对照)、0.015 mg/ml(1/4 IC50)、0.03mg/ml(1/2 IC50)及0.06 mg/ml(IC50)的CSC溶液作用于BEAS-2B细胞8、16和24 h,检测caspase-1活性,并用ELISA方法检测细胞内caspase-1活性及含量和细胞培养上清液中IL-1β和IL-18的水平.结果 随CSC刺激浓度增加,BEAS-2B细胞抑制率增大,CSC对BEAS-2B细胞的半数抑制浓度约为0.06 mg/ml.不同浓度CSC处理细胞8和16 h后,1/4IC50、1/2IC50与IC50组caspase-1活性和含量以及IL-1β、IL-18水平均高于对照组(P＜0.05),且随染毒浓度增高而增高(P＜0.05);不同浓度CSC处理细胞24h后,各染毒组细胞caspase-1活性和含量以及IL-1β、IL-18水平均高于对照组(P＜0.05),但1/2IC50组与IC50组caspase-1活性及含量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CSC处理BEAS-2B细胞可引起caspase-1活化,且IL-1β、IL-18表达水平增高,提示可能存在caspase-1依赖的细胞焦亡(pyroptosis).
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煤焦沥青提取物对BEAS-2B细胞Keap1-Nrf2/ARE通路的作用机制
目的 研究煤焦沥青烟提取物对BEAS-2B细胞Nrf2、Keap1、NQO1的基因及其蛋白表达的影响,以探讨煤焦沥青烟提取物在造成细胞氧化损伤过程中Nrf2-Keap1/ARE通路的作用机制.方法 设立未处理对照组、0.1％DMSO溶剂对照组、5μg/ml B(a)P阳性对照组、6μmol/L全反式维甲酸组、6μmol/L全反式维甲酸预处理0.5h后5 μg/ml CTP染毒组和CTP染毒组(1、5、10和20 μg/ml),染毒3、6、12和24 h后提取总RNA；RT-PCR检测Nrf2、Keap1、NQO1 mRNA的相对表达量;Western blot测定Nrf2、Keap1、NQO1蛋白的相对表达量.结果 不同CTP染毒剂量作用后各个基因mRNA相对表达量差异无统计学意义(P＞0.05),而不同时间点相对表达量差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示,随着CTP烟提取物染毒浓度的增加,Keap1蛋白无明显变化,NQO1蛋白表达量逐渐上升;Nrf2蛋白在5 μg/ml染毒浓度时表达高,在5μg/ml CTP染毒浓度作用下,BEAS-2B细胞Nrf2蛋白表达量随时间逐渐升高,在染毒6h后达到高,之后表达量又呈下降趋势.结论 煤焦沥青烟提取物作用于BEAS-2B细胞后,代谢酶NQO1表达上调,推测Keap1 -Nrf2/ARE通路可能通过上调细胞保护性基因NQO1的表达而对抗煤焦沥青毒性作用,降低细胞氧化损伤.
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香烟烟雾诱发BEAS-2B细胞体外恶性转化的研究
目的 通过香烟烟雾体外染毒诱发细胞恶性转化,建立吸烟致肺癌的细胞模型.方法 确定合适染烟浓度及时间后,将永生化人支气管上皮细胞系BEAS-2B细胞分为对照组(C)和20%烟雾浓度组(S).以每孔1×10<'5>细胞接种于Transwell培养皿,贴壁后置于气体染毒装置中,香烟烟雾持续泵入直接对细胞染毒.检测染毒后5、10、15、20代细胞恶性转化情况,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡变化.结果 BEAS-2B细胞在20%烟雾浓度下染毒5代后,出现生长动力学和形态学改变,生长失去接触抑制、获得对血清诱导分化的抗性和锚着独立性生长能力.G1期细胞百分比明显降低,S期细胞百分比明显升高,G2期细胞百分比先升高后降低,各代细胞凋亡率均明显降低.结论 香烟烟雾染毒能够诱发BEAS-2B细胞体外转化,且随染毒代数的增加呈现剂量效应关系,可作为体外研究吸烟致肺癌的细胞模型.
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支气管上皮细胞气液界面暴露培养在环境毒理学研究中的应用
在气体污染物的体外细胞暴露研究中,由于缺乏合适的气态污染物体外暴露系统,传统的细胞培养方法又无法直接暴露支气管上皮细胞于气态污染物,所以目前国内外关于气态污染物对气道上皮以及肺上皮细胞的体外毒性研究很少.近年来气液界面培养被逐渐用于气态污染物体外毒性研究,气液界面培养系统提供的细胞生长环境与上皮细胞的体内生理条件相似,可以更好的模拟支气管上皮细胞在人和动物体内的生长条件[1].国外一些研究认为,气液界面培养法有利于上皮细胞分化的原因在于其可以为上皮细胞提供更好的气相条件[2].本实验选择室内空气污染物的代表甲醛和室外空气污染物的代表臭氧作为暴露污染物,借鉴了国内外的研究[3],采用petri-PERM培养皿(透气培养皿)建立的气态污染物气液界面培养系统对人支气管上皮细胞株BEAS-2B进行暴露,通过比较低剂量的两种环境污染物对细胞的毒效应来评价气液界面培养系统在环境毒理学研究中的可行性.
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NF-κB在香烟烟雾凝集物诱导人支气管上皮细胞IL-8表达中的作用
目的 研究校因子κB(NF-κB)在香烟烟雾凝集物(CSC)诱导人支气管上皮细胞IL-8表达中的作用.方法 利用IL-8促进子上NF-κB结合位点突变的BEAS-2B细胞株(II-8mNF-κB- BEAS-2B细胞)和野生型BEAS-2B细胞株(IL-8 WT BEAS-2B细胞,其IL-8促进子上含有完整的NF-κB结合位点),经7.5％ CSC处理后,用荧光定量PCR方法检测处理后细胞荧光素酶基因(luciferase,fLCF)mRNA水平的变化,并用荧光素酶报告基因活性检测试剂盒检测处理后细胞的荧光素酶活性大小.结果 7.5％ CSC处理2种BEAS-2B细胞后,IL-8 WT BEAS-2B细胞的fLCF mRNA表达量和荧光素酶活性均高于IL-8mNF-κB - BEAS-2B细胞(P＜0.001),其中fLCF mRNA表达量是IL-8mNF-κB- BEAS-2B细胞的1.32倍(P ＜0.001).结论 NF-κB转录因子通过参与炎症因子IL-8表达,促进吸烟导致的呼吸系统炎症反应.
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实时细胞分析技术与Alamar Blue法用于测定纳米氧化铜细胞毒性的比较研究
目的 通过比较研究实时细胞分析技术(real time cell analyze,RTCA)及Alamar Blue法测定纳米氧化铜体外作用于人胚肺成纤维细胞MRC-5及人正常肺上皮细胞BEAS-2B的毒性作用,探讨RTCA实时细胞分析技术用于测定纳米材料体外细胞毒性的可行性.方法 分别将MRC-5及BEAS-2B细胞接种于RTCA配套16孔板中及普通96孔板中,96孔板中细胞用于Alamar Blue法测定细胞毒性.分别用剂量为0.75 g/L、0.38 g/L、0.19 g/L、0.094 g/L、0.047 g/L的纳米氧化铜混悬液进行染毒.选择12 h、24 h、36 h、48 h、60 h时间点计算两种方法测得的IC50值.采用SPSS 16.0分析软件,利用配对t检验,对两种方法所得相同时间点的IC50值进行统计分析,判断其相关性及是否存在差异.结果 MRC-5细胞用RTCA法测定染毒后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h的IC50值分别为391 mg/L、249 mg/L、185 mg/L、165 mg/L、147 mg/L;Alamar Blue法所得相同时间点的IC50值分别为507 mg/L、206 mg/L、172 mg/L、154 mg/L、95.2 mg/L.两种方法所测得IC50值进行统计分析,差异无统计学意义.BEAS-2B细胞用RTCA法测定染毒后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h的IC50值分别为131 mg/L、83.78 mg/L、65.37 mg/L、53.98 mg/L、51.23 mg/L;Alamar Blue法所得相同时间点的IC50值分别为148 mg/L、104 mg/L、77.3 mg/L、42.5 mg/L、39.2 mg/L.两种方法所测得IC50值进行统计分析,差异无统计学意义.结论 RTCA实时监测法与Alamar Blue法在相同时间点测定纳米氧化铜体外细胞毒性得IC50值差异无统计学意义,说明RTCA实时监测法测定体外细胞毒性结果可靠,适用于纳米材料的体外毒性研究.
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组织工程化三维支气管模型体外再造的实验研究
目的 以人支气管上皮细胞系和人胎肺成纤维细胞系为种子细胞、胶原凝胶复合Matrigel为支架材料,探索采用体外构建组织工程化三维支气管模型的可行性,为研究支气管上皮细胞和成纤维细胞相互作用提供模型.方法 将支气管上皮细胞和肺脏成纤维细胞在添加Matrigel的液态Ⅰ型胶原中共培养,应用静态拉仲系统体外构建支气管模型.通过大体观察、相差显微镜观察、HE染色和免疫组织化学染色(广谱CK等)的方法对细胞的生长情况及形成的三维组织结构进行鉴定.结果 在体外应用静态拉伸系统能构建出组织工程化三维支气管模型.大体观察可以看到收缩良好的组织片层,并具有一定韧性;相差显微镜下可以观察到网状结构的形成,细胞活性良好;HE染色表明了三维刚状结构的形成;免疫组织化学染色广谱CK和Vimentin呈阳性.结论 体外成功构建出组织工程化三维支气管模型,种子细胞共培养可在支架材料中完成极性生长过程并形成网状结构.
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贫铀对BEAS-2B细胞的氧化损伤及二甲基亚砜的保护作用
目的 观察贫铀(DU)诱发细胞氧化损伤和二甲基亚砜(DMSO)的保护作用.方法 以人支气管上皮细胞(BEAS-2B)为靶细胞,分别用辣根过氧化物酶介导的酚红氧化法、细胞色素C还原法和番红花红褪色法测定细胞外过氧化氢(H2O2)、超氧阴离子(O2-·)和羟自由基(·OH)含量;细胞内H2O2和O2-·分别用2,7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH2DA)和氢化乙锭(HE)标记,荧光法测定荧光产物2,7'-二氯荧光黄(DCF)和溴乙锭(EB)荧光强度.化学发光法检测SOD活力,分光光度法检测谷胱甘肽活力.结果 BEAS-2B细胞经DU染毒后,细胞内和细胞外ROS含量显著增高;细胞SOD活力及GSH活力下降,DMSO对贫铀诱发的ROS增高及SOD、GSH活力的降低有明显的抑制作用.结论 贫铀可造成细胞的氧化损伤,DMSO通过清除活性氧而达到保护作用,可为DU损伤的防护提供有效措施.
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二苯乙烯苷通过MAPK、HIF-1α和p53通路减轻缺氧/复氧损伤诱导的支气管上皮细胞凋亡
本文研究二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glycoside,TSG)对缺氧/复氧损伤诱导的支气管上皮细胞(BEAS-2B)氧化应激损伤的保护作用及机制.正常培养的BEAS-2B细胞,以缺氧/复氧处理,采用DCFH-DA探针检测细胞内ROS生成,试剂盒检测MDA生成和SOD活性,DAPI染色观察细胞核形态学改变,MCF-7/GFP-Bax细胞观察Bax至线粒体的转位,JC-1探针检测线粒体膜电位,免疫荧光检测细胞色素C自线粒体的释放,Western blotting检测胞浆和线粒体Bax、细胞色素C表达,及caspase-9、caspase-3、磷酸化MAPK、HIF-1α和磷酸化p53 (p-p53)表达.结果显示,TSG可显著提高细胞存活率、降低ROS和MDA生成,抑制Bax蛋白向线粒体的转位,改善核固缩、碎裂等改变,抑制线粒体膜电位下降、细胞色素C释放和caspase-9、caspase-3的激活.同时TSG能抑制SAPK JNK1/2和p38 MAPK的激活但不影响ERK1/2信号通路,抑制HIF-1α表达和核蛋白p53的磷酸化.以上结果表明,TSG能显著抑制缺氧/复氧诱导的BEAS-2B细胞线粒体途径凋亡反应,且MAPK、HIF-1α和p53通路可能是其发挥支气管上皮细胞保护作用的潜在机制.
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HSP70在人小细胞肺癌细胞热疗中的作用
目的 探讨HSP70 在人小细胞肺癌细胞热疗中的作用.方法 采用43 ℃加热联合120μg/L 紫杉醇(热化联合组)、120μg/L 紫杉醇(单纯化疗组),43 ℃加热(单纯热疗组)处理H446 细胞和BEAS-2B 细胞,以未处理的细胞作对照,噻唑蓝比色法检测细胞增殖率,蛋白免疫印记法检测HSP70 的表达,SPSS13.0 进行统计分析.结果 热化联合组H446 细胞增殖率低于其余三组,单纯化疗组和单纯热疗组的BEAS-2B 细胞低于热化联合组;两种细胞热化联合组HSP70 表达均低于单纯热疗组.结论 热化疗联合作用于H446 细胞,可以明显抑制其生长,可能是通过抑制HSP70 实现的.
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circRNA002144在PM2.5诱导人正常支气管上皮细胞炎性反应中的机制研究
目的 研究circRNA002144在PM2.5暴露人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的表达及其下游靶基因的差异表达情况,并探讨circRNA002144在PM2.5诱导BEAS-2B细胞发生炎性反应中可能的调控机制.方法 分别以0、30、60、90、120、150μ/ml的PM2.5暴露BEAS-2B细胞48 h,收集细胞上清液用酶联免疫(ELISA)实验检测白细胞介素-6(IL-6)的分泌量;收集细胞,以Trizol试剂裂解细胞后提取总RNA,以实时定量PCR(qRT-PCR)检测不同浓度PM2.5染毒BEAS-2B细胞中circRNA 002144表达水平的变化;然后利用RegRNA和TargetScan预测与circRNA002144相互作用的miRNAs以及靶向的下游mRNA,选择炎症相关的mRNA进一步检测.结果 与对照组相比,不同浓度的PM2.5染毒组BEAS-2B细胞炎性细胞因子IL-6的表达均升高,且有剂量依赖关系;circRNA 002144的表达水平均升高,且随着PM2.5染毒浓度的增加呈高表达,在120 μg/ml染毒组,相对表达量增高4.79倍,差异均有统计学意义(P＜0.01);结合生物信息学预测分析和qRT-PCR检测发现,相比于对照组,与circRNA 002144相互作用的hsa-miR-608和hsa-miR-92a-2-5p在PM2.5染毒组细胞呈现低表达的趋势,这两个miRNAs共同靶向的STAT3则呈现高表达,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 circRNA002144在PM2.5诱导BEAS-2B细胞发生炎性反应中可能发挥促炎的作用,可能通过下调hsa-miR-608和hsa-miR-92a-2-5p促进IL-6分泌,进而激活STAT3炎症通路.
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不同粒径谱汽油发动机尾气气-液界面染毒对BEAS-2B细胞存活率的影响
目的 采用气-液界面(ALI)体外细胞染毒技术,评价不同粒径谱汽油发动机尾气(GEE)对人肺BEAS-2B细胞存活率的影响.方法 用Tedlar集气袋收集GEE,并通过TSI-3321和SMPS-3938两种粒径谱仪分析过滤后的汽车尾气组、汽车尾气组和非三元催化配置的摩托车尾气组的颗粒物个数、表面积和质量浓度,同时设置空白对照组和洁净空气组.除了空白对照组,其余4组采用ALI体外细胞染毒技术,在染毒流量为25 ml/min,37℃水浴条件下,对生长在Transwell插件多孔膜上的BEAS-2B细胞持续染毒60 min.通过CCK-8细胞毒性检测试剂盒测定细胞的相对存活率.结果 过滤后的汽车尾气组、汽车尾气组和摩托车尾气组均可检出较高浓度的细颗粒物,但粗颗粒物很少,且呈摩托车尾气组>汽车尾气组>过滤后的汽车尾气组的趋势(P<0.001).与洁净空气组比较,过滤后的汽车尾气组、汽车尾气组和摩托车尾气组的细胞相对存活率均明显降低,差异有统计学意义(P<0.001).各GEE暴露组之间的比较显示,细胞相对存活率呈过滤后的汽车尾气组>汽车尾气组>摩托车尾气组的趋势(P<0.001);以洁净空气组为参考,过滤后的汽车尾气组、 汽车尾气组、 非三元催化配置的摩托车尾气组的细胞相对存活率均数依次降低了26.34%、36.00%和49.59%.结论 人肺BEAS-2B细胞ALI暴露于不同粒径谱的GEE可产生不同程度的毒性作用,降低GEE颗粒物浓度以及配置三元催化装置可明显改善肺细胞的存活率.
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烹调油烟冷凝物对细胞的氧化损伤研究
目的通过测定细胞内和细胞上清液中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,以及细胞膜上ATP酶的含量,对烹调油烟冷凝物(COFC)诱发永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)产生ROS及其对细胞膜损伤进行研究.方法采用分光光度法检测细胞外活性氧,荧光标记细胞内活性氧及ATP酶.结果在烹调油烟染毒的细胞内ROS的产生与ATP酶的活性降低有关.结论 COF引起细胞膜损伤时,ROS的大量产生可能是ATP酶活性降低的主要因素,Ca2+-ATP酶及Mg2+-ATP酶对ROS敏感性强.
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AP-1在锌离子诱导BEAS-2B细胞COX-2基因转录中作用
目的 探讨外源性锌离子对人支气管上皮细胞环氧化酶2(COX-2)基因诱导表达及转录因子激活蛋白-1 (AP-1)的转录活性调节作用.方法 以人支气管上皮细胞株BEAS-2B作为体外模型,Real-timePCR方法检测锌离子对BEAS-2B细胞COX-2基因表达影响；染色质免疫沉淀(ChIP)实验检测50.0 μmol/L锌离子温育8h后c-Jun(AP-1亚单位)和COX-2启动子的结合；用野生型和AP-1结合位点突变的COX-2启动子报告质粒转染BEAS-2B细胞,50.0μmol/L锌离子温育8h,采用荧光素酶报告基因检测COX-2基因启动子转录活性.结果 50.0μmol/L Zn2+组BEAS-2B细胞中COX-2的mRNA相对表达量为(1.23±0.16),是对照组表达量(0.16±0.02)的7.68倍,表达明显升高(P ＜0.5)；AP-1可与COX-2的基因启动子结合,COX-2基因启动子区AP-1结合位点突变可使锌离子所致的COX-2高转录活性降低82％.结论 转录因子AP-1可调节外源性锌离子所致人支气管上皮细胞COX-2基因的转录表达.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对硫酸镍诱导Beas-2B细胞氧化损伤的保护作用
为确定表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人支气管上皮Beas-2B细胞的抗氧化作用,本实验采用500μmol/L硫酸镍诱导建立细胞氧化损伤模型,通过测定细胞存活率、ROS生成量、谷胱甘肽水平及丙二醛含量,探讨不同剂量(2.5、5、10μmol/L)EGCG对硫酸镍诱导氧化损伤Beas-2B细胞的保护作用.结果表明,EGCG可以提高Beas-2B细胞的存活率,降低ROS生成量,提高GSH含量,降低MDA水平(P＜0.05).提示EGCG对Beas-2B细胞具有保护作用,其机制可能与减少细胞氧化损伤有关.
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聚肌苷酸胞苷酸在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活干扰素β荧光素酶报告基因系统实验条件的优化
目的 优化不同长度聚肌苷酸胞苷酸[polyinosinic acid:polycytidylic acid,poly(I∶C)]在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活I型干扰素(IFNβ)荧光素酶报告基因系统的实验条件.方法 将质粒IFN-β-1uc分别转染HEK293T及BEAS-2B细胞后,HEK293T细胞转染不同浓度(0.25、0.5、1.0、1.5和2.0μg/孔)的高分子量(HMW)poly(I∶C)和低分子量(LMW)poly(I∶C),检测其对HEK293T细胞中IFNβ启动子激活的影响;BEAS-2B细胞直接加入不同浓度(0.1、1.0、10.0、20.0和50.0μg/孔)及转染不同浓度(同HEK293T细胞)的HMW poly(I∶C)和LMWpoly(I∶C),检测其对BEAS-2B细胞中IFNβ启动子激活的影响.结果 poly(I∶C)转染HEK293T细胞激活IFNβ启动子的佳实验条件为:0.5 μg/孔的HMW poly(I:C)和LMW poly(I∶C)转染24 h.poly(I∶C)直接加入BEAS-2B细胞激活IFNβ启动子的佳实验条件为:50 μg/孔的HMW poly(I∶C)和LMW poly(I∶C)作用6h;poly(I∶C)转染BEAS-2B细胞激活IFNβ启动子的佳实验条件为:0.25 μg/孔的HMW poly(I∶C)转染12 h,0.5μg/孔的LMW poly(I∶C)转染12h.结论 成功优化了poly(I∶C)在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活IFNβ启动子的实验条件,为poly(I∶C)激活免疫反应机制的研究提供了实验依据.
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细胞因子诱导支气管上皮细胞表达嗜酸粒细胞趋化因子
Eotaxin和新近发现的Eotaxin-2在支气管上皮细胞中的表达以及Th2型细胞因子的调节作用.以支气管上皮细胞株BEAS-2B细胞为研究对象,通过RT-PCR的方法测定Th2型细胞因子IL-4、IL-13以及促炎症因子TNF-α单独和协同刺激下BEAS-2B细胞Eotaxin和Eotaxin-2的基因表达,通过ELISA方法测定细胞培养上清液中Eotaxin蛋白的表达.Eotaxin mRNA在TNF-α刺激12 h后表达高,Th2型细胞因子IL-4和IL-13与TNF-α协同刺激后表达进一步增强,Eotaxin蛋白的表达在协同刺激下也呈剂量和时间依赖性增高(P＜0.01).Eotaxin-2 mRNA在TNF-α的刺激下于8 h表达高,IL-4或IL-13与TNF-α的协同刺激也使表达进一步增强,Eotaxin和Eotaxin-2两者基因表达具有相关性(P＜0.05).Th2型细胞因子可与促炎症因子TNF-α协同刺激支气管上皮细胞增强表达嗜酸粒细胞趋化因子Eotaxin和Eotaxin-2,从而吸引嗜酸粒细胞浸润至气道参与哮喘炎症过程.
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槲皮素对香烟烟雾提取物诱导的人支气管上皮细胞死亡的抑制效应
目的 研究槲皮索对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的人支气管上皮细胞死亡的影响,并初步探讨其机制.方法 槲皮素预处理人支气管上皮细胞(Beas-2b)16 h,然后以CSE刺激不同时间,倒置显微镜下观察细胞形态,以四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)及Western blot分别检测细胞活力和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白的表达.结果 槲皮素明显减少了CSE诱导的Beas-2b细胞死亡,并对CSE处理后细胞活力的降低具有明显的抑制作用;槲皮素还明显提高了CSE诱导的Beas-2b细胞中HO-1的蛋白表达水平,且呈浓度依赖性.结论 槲皮素对于CSE诱导的人支气管上皮细胞死亡具有明显的抑制作用,其机制可能是通过提高细胞中CSE诱导的HO-1蛋白表达水平.
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NOX4在BEAS-2B细胞上皮间质转化过程中的作用
目的:探索非吞噬细胞氧化酶4(NOX4)在人肺正常上皮细胞BEAS-2B上皮间质转化过程中的作用.方法:选取对数生长期的 BEAS-2B 细胞,分为空白对照组、NOX4抑制剂二苯基氯化碘(DPI)组、TGF-β 组和TGF-β+DPI组.采用Western blot检测E-cadherin、Vimentin、NOX4的表达,用划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞仪检测活性氧(ROS)水平.结果:TGF-β可增加BEAS-2B细胞NOX4、Vimentin的表达及ROS水平,降低E-cad-herin的表达以及划痕宽度,DPI可以抑制NOX4、Vimentin的表达及ROS水平,增加E-cadherin的表达以及划痕宽度(P<0.001);DPI可拮抗TGF-β对NOX4、E-cadherin、ROS的作用(P<0.05).结论:抑制NOX4的表达可以抑制TGF-β诱导的BEAS-2B细胞上皮间质转化,进而抑制BEAS-2B细胞的迁移能力.
