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Ezrin介导中性粒细胞弹性蛋白酶诱导的人气道上皮细胞株分泌黏蛋白增加
目的 探讨膜连接蛋白Ezrin在中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)诱导气道黏液高分泌的作用及相关调节机制.方法 以中性粒细胞弹性蛋白酶刺激培养的人气道上皮HBE16细胞,ELISA法、real-time PCR法测定黏蛋白(MUC)5AC的蛋白及mRNA水平.免疫荧光法检测Ezrin蛋白含量.结果 NE刺激30 min后MUC5AC mRNA表达增强,细胞中及培养上清中黏蛋白MUC5AC的含量均显著高于对照组(P＜0.01);转染Ezrin永久磷酸化载体pEGFP-N1-Ezrin-T567D的细胞经NE刺激后,胞质内磷酸化Ezrin表达明显增强,且胞膜分布增多.同时,细胞培养上清液中的MUC5AC蛋白含量亦显著高于单纯NE组(P＜0.01).遏制Eznn磷酸化pEGFP-N1-Ezrin-T567A载体转染组在NE刺激后,Ezrin蛋白与pEGFP-N 1-Ezrin-T567D组相比有明显减少,且未出现向胞膜聚集的趋势,同时分泌至培养上清的MUC5AC蛋白也有明显减少(P＜0.01),同时伴随胞质内MUC5AC蛋白有所增加(P＜0.05).结论 Ezrin蛋白参与了NE诱导的MUC5AC蛋白分泌,是气道上皮细胞MUC5AC分泌的重要调控分子.
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c-src/NADPH氧化酶1/活性氧对中性粒细胞弹力蛋白酶诱导气道黏蛋白5 AC表达的影响
目的 探讨中性粒细胞弹力蛋白酶(NE)诱导气道黏液高分泌的上游信号调节机制.方法 体外培养人气道BEAS-2B上皮细胞,将细胞分为空白对照组(不加任何刺激)、NE组(NE刺激)、NE+PP2组(NE刺激合并c-src抑制剂PP2)、NE+c-src siRNA组(NE刺激合并c-src siRNA)、NE+Noxl siRNA组[NE刺激合并NADPH氧化酶1(Nox1)siRNA]、阴件siRNA对照组(加入阴性对照siRNA)及NE+阴性siRNA组(NE刺激合并阴性对照siRNA)为干预条件.检测干预前后各组细胞巾活性氧含量、NoxI蛋白含量、黏蛋白5AC的蛋白及mRNA水平.用四甲基偶氮唑盐法测定各组细胞活性;活性氧试剂盒测定活性氧相对含量;逆转录PCR法检测各组黏蛋白5AC mRNA水平;ELISA法分析细胞黏蛋白5AC的蛋白相对含量;Western blot法检测Noxl蛋白及c-src蛋白的相对含量.结果 NE组细胞中Nox1蛋白相对含量为0.88±0.12,高于空白对照组的0.32±0.09(t=9.12.P=0.003);活性氧相对含量为0.76±0.09,高于空白对照组的0.18±0.02(t=9.44,P=0.003);黏蛋白5AC蛋白相对含量为0.82±0.09,基因转录水平为0.77±0.05,均高于空白对照组(分别为0.21±0.11和0.18±0.08,t值分别为7.75和6.13,P值分别为0.004和0.006).NE+c-src siRNA组细胞的Nox1蛋白相对含(0.39±0.08)、活性氧相对含量(0.29±0.05)均低于NE组(t值分别为5.43和5.60,均P=0.007);黏蛋白5AC蛋白相对含量(0.38±0.09)及mRNA水平(0.41±0.04)低于NE组(t值分别为5.28和4.09,P值分别为0.008和0.034).NE+PP2组活性氧相对含量为0.41±0.11,Nox1蛋白相对含量为0.44±0.05,黏蛋白5AC蛋白及mRNA水平分别为0.48±0.08和0.46±0.07,均低于NE组(均P<0.05).NE+Noxl siRNA组中活性氧相对含量(0.19±0.06)、黏蛋白5AC蛋白相对含量(0.31±0.05)及mRNA水平(0.32±0.06)也低于NE组(均P<0.05).结论 c-src/Noxl参与了NE诱导的活性氧活化,是气道上皮细胞黏蛋白5AC合成及分泌的上游信号调节因子.
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茶黄素和表皮生长因子受体对气道黏液分泌的影响
目的 探讨茶黄素对炎症反应时气道上皮细胞黏液分泌的影响.方法 通过人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)刺激人肺腺癌细胞A549,构建炎症反应时气道黏液高分泌模型,以茶黄素和表皮生长因子受体(EGFR)阻断剂表皮生长因子受体阻断剂(AG1478)进行干预,观察黏蛋白5AC(MUCSAC)、EGFR、磷酸化EGFR(P-EGFR)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(P-ERK1/2)、兔抗磷酸化p38(P-p38)及磷酸化JNK丝裂原活化蛋白激酶(P-JNK)的表达.用四甲基偶氮唑盐法测定细胞活性,再将A549细胞分为对照组、HNE处理组、茶黄素组、AG1478组和茶黄素+AG1478组.用逆转录PCR方法检测各组MUC5AC mRNA、EGFR mRNA的变化;Western blot法检测EGFR、P-EGFR、P-ERK1/2、P-p38和P-JNK蛋白的表达;酶联免疫吸附测定法观察MUCSAC蛋白表达的变化,并用细胞免疫激光共聚焦显微镜观察作用前后黏蛋白的分布.两样本均数间比较采用t检验,多样本均数间比较采用单因素方差分析.结果 HNE处理组MUC5AC的mRNA和蛋白的积分吸光度值分别为0.99±0.03和(169±6)μg/mg,EGFR mRNA和蛋白表达的积分吸光度值分别为0.98±0.02和(0.89±0.03)μg/mg,均较对照组[0.53±0.02、(105±4)μg/mg和0.61±0.11、0.21±0.05]明显升高;P-EGFR、P-ERK1/2的蛋白表达也较对照组显著增加,而P-p38的表达则有较低幅度的增强,P-JNK无明显变化.给予茶黄素及AG1478预处理后,与HNE刺激组相比,EGFR、P-EGFR、P-ERK1/2、P-p38均明显下调,P-JNK无相应改变;而茶黄素+AG1478组MUCSAC mRNA和MUC5AC的下调较单独用茶黄素或AG1478处理更为明显,其积分吸光度值分别为0.20±0.02和(125±3)μg/mg,差异均有统计学意义(t值分别为3.02和1405.94,均P<0.05).结论 茶黄素可通过下调EGFR水平、减少EGFR的活化、部分阻遏EGFR信号转导途径及细胞外信号调节激酶来实现对下游途径的影响,从而发挥茶黄素抑制炎性气道黏液高分泌形成的作用.
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兔缺血再灌注肺损伤中蛋白酶变化及蛋白酶抑制剂的保护作用
目的 观察兔缺血再灌注肺损伤中蛋白酶及细胞因子的表达变化,并探讨蛋白酶抑制剂乌司他丁对缺血再灌注肺损伤的保护作用.方法 30只新西兰白兔随机均分为对照组、创伤失血性休克组(休克组)和创伤失血性休克乌司他丁治疗组(治疗组),观察休克前、休克末及复苏后2、4h血清中细胞因子TNF-α、IL-8的动态变化,并于复苏后4h测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)及肺泡灌洗液中中性粒细胞弹性蛋白酶(BALF-NE)的活性.结果 休克组和治疗组休克末及复苏后2、4h血清TNF-α水平及复苏后4hIL-8水平均明显高于休克前,但治疗组均明显低于休克组(P<0.05).复苏后4h休克组和治疗组肺组织MPO活性及BALF-NE活性均明显高于对照组,但治疗组明显低于休克组(P<0.05).结论 乌司他丁可降低血清TNF-α、IL-8水平及肺组织MPO、BALFNE活性,对兔缺血再灌注肺损伤具有一定的保护作用.
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不同牙周状况下唾液和龈沟液中弹性蛋白酶的含量
目的:比较不同牙周状况者唾液和龈沟液( gingival crevicular fluild,GCF)中的中性多形核粒细胞弹性蛋白酶( granulocyte elastase,EA)含量,并分析唾液与龈沟液EA水平的相关性.方法:采用底物法对牙周健康者(17例)、牙龈炎患者(14例)、慢性牙周炎( chronic periodontitis,CP)患者(24例)和侵袭性牙周炎(aggressive periodontitis,AgP)患者(24例)的唾液和/或龈沟液样本中的EA含量进行测定分析.结果:AgP患者龈沟液EA水平高于CP患者(0.485 3 ±0.225 0 vs.0.288 4±0.193 1,P＜O.01)；牙周炎患者(AgP和CP)唾液EA水平高于牙周健康者和牙龈炎患者(0.844 5±0.660 6,0.637 3±0.648 9 vs.0.012 2±0.005 8,0.031 6±0.020 6；P均＜0.001).牙周炎患者唾液与龈沟液EA水平呈正相关关系(r=0.660).结论:龈沟液EA的测定对不同类型牙周炎的诊断可起一定的辅助作用,唾液EA水平的测定可用于在人群普查中筛选牙周炎患者及进行全口牙周评估.
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乌司他丁在预防急性呼吸窘迫综合征中的作用
目的：探讨乌司他丁对预防急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）的作用。方法：采用前瞻性随机对照试验，选择2012年1月至2014年12月北京大学第三医院危重医学科、沧州市人民医院、中国中医科学院西苑医院和北京中日友好医院重症医学科的185例患者，随机分为干预组（n ＝77）和对照组（n ＝108）。两组患者均接受常规治疗，干预组患者入重症监护病房（intensive care unit，ICU）后在常规治疗基础上每天加用乌司他丁60万单位，静脉输注，连用5 d；对照组静脉输注等体积生理盐水，连续5 d。于干预的第1、3、7天分别检测静脉血中性粒细胞弹性蛋白酶（human neutrophil elastase，HNE）和中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂（peptidase inhibitor 3，PI3）的水平，计算 HNE ／PI3比值，监测患者急性生理学及慢性健康状况评分（acute physiology and chronic health evaluation scoring Ⅱ，APACHE Ⅱ）、体温、呼吸频率、心率、平均动脉压、白细胞计数、氧合指数（PaO2／FiO2），并记录两组患者 ARDS 发生率、机械通气时间、ICU 治疗时间、住院时间及28 d 生存率。结果：两组患者在性别、年龄、APACHE Ⅱ评分、吸烟情况、基础疾病情况、入院诊断等方面差异无统计学意义。两组患者的3次 HNE 检测值比较（第1、3、7天）差异均无统计学意义，两组患者第1天 PI3检测值比较差异无统计学意义，第3天及第7天 PI3的检测值比较差异均有统计学意义（P ＜0．01）；两组患者第1天 HNE ／PI3比值比较差异无统计学意义，第3天及第7天的 HNE ／PI3比值差异有统计学意义（P ＜0．05）。两组患者在第1、3、7天的体温、呼吸频率、心率、平均动脉压、白细胞计数方面的比较差异均无统计学意义；两组患者第1天的氧合指数比较差异无统计学意义，第3天及第7天的氧合指数比较差异有统计学意义（P ＜0．05）。干预组患者 ARDS 的发生率为15．58％，明显低于对照组的33．33％，差异有统计学意义（P ＜0．05）。在两组进展为 ARDS 的患者中，均以脓毒症、腹部术后及胰腺炎患者为主。干预组患者的机械通气时间、ICU 治疗时间短于对照组，差异有统计学意义（P ＜0．05）。两组患者的住院时间差异无统计学意义，干预组患者的28 d 生存率高于对照组，但两组差异无统计学意义。结论：通过增加外源性HNE 拮抗剂乌司他丁，可以恢复 HNE 与其拮抗剂的平衡，对抗 HNE 对肺组织的破坏作用，降低 ARDS 的发病率。
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兔急性肺损伤中NE变化及血晶素的干预作用
目的:观察内毒素致兔急性肺损伤(ALI)时血清中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)含量变化及血晶素对其影响.方法:24只雄性新西兰白兔随机分为3组:生理盐水对照组(A组),内毒素损伤组(B组),血晶素预处理组(C组).内毒素(700μg/kg)一次性静脉注射复制急性肺损伤模型.各组分别于0 h、0.5 h、1 h、2 h、4 h观测动物生命体征,检测动脉血气、血清NE值,实验后4 h处死动物,检测肺组织的干/湿重比及行肺组织病理学观察.结果:静脉注射内毒素后,B组动物呼吸显著加快,血压下降,氧合指数下降,血清NE值在实验后1 h明显高于A、C组(P<0.01),肺组织干/湿重比值低于A组(P<0.01),病理可见肺水肿、出血等改变.C组呼吸稍快,血清NE值及肺组织干/湿重比与A组比较无明显差异(P>0.05).结论:NE在内毒素所致ALl时明显升高,血晶素下调NE含量,对ALI可能有一定保护作用.
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CBP治疗对重症脓毒症患者外周血单核细胞mCD14的影响
目的 探讨连续性血液滤过技术(CBP)治疗对重症脓毒症患者外周血单核细胞mCD14的影响及其治疗脓毒症的机制.方法 将笔者医院重症医学科收治的60例重症脓毒症患者分为CBP组及非CBP组.在两组患者治疗过程的0、12、24、48、72h时相点,留取外周血标本,检测其mCD14及白细胞弹性蛋白酶表达量的变化.将治疗24h后的两组患者分离出外周血单核细胞,并于体外培养,以LPS刺激后,在4、8、12、24、48h时相点检测单核细胞中mCD14表达量的变化;同时用ELISA法检测单核细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-10水平.结果 随着治疗的进行,CBP组白细胞弹性蛋白酶水平较非CBP组下调更显著,差异具有统计学意义(P<0.05),而CBP组mCD14水平较非CBP组上调亦更显著,差异有统计学意义(P<0.05);CBP组在孵育前及孵育后4、8h时相点mCD14水平明显高于同时相的脓毒症组,差异有统计学意义(P<0.05),其单核细胞接受LPS再刺激后对炎性反应能力也较脓毒症组强.结论 CBP治疗可通过高效清除循环中的炎性因子及白细胞弹性蛋白酶,使mCD14水平上调,使部分免疫细胞免疫功能得到一定的恢复,从而改善机体内环境,参与重建机体免疫内稳状态.
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Ⅲ型前列腺炎患者前列腺液中性粒细胞弹性蛋白酶、枸橼酸和pH值水平分析
目的 了解中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、枸橼酸和pH值在Ⅲ型前列腺炎患者前列腺液中的变化.方法 对52例ⅢA型(ⅢA组)与98例ⅢB型(ⅢB组)患者行前列腺按摩液(EPS)常规检查和细菌培养、美国国立卫生研究院(NIH)-前列腺炎症状评分(NIH-CPSI)、NE和枸橼酸浓度、pH值测定.以105例正常者为对照.结果 ESP中WBC计数、NE和枸橼酸浓度、pH值,ⅢA组分别为(17.9±5.4)个/HP、(898±704) μg/L和(14.5±1.7) ng/L、7.60 ±0.43,ⅢB组分别为(3.9±2.2)个/HP、(93±76) μg/L和(21.9±3.8) ng/L、6.71 ±0.25,对照组分别为(3.6±2.2)个/HP、(86±57) μg/L和(22.5±3.9) ng/L、6.48±0.51.ⅢA组和ⅢB组EPS中NE和枸橼酸浓度、pH值比较,差异有统计学意义(t值分别为8.22、16.64和13.88,均P＜0.05),NIH-CPSI差异无统计学意义(t=1.90,P＞0.05);ⅢA组和对照组EPS中WBC计数、NE和枸橼酸浓度、pH值、NIH-CPSI比较,差异有统计学意义(t值分别为18.92、8.47、26.53、18.37和32.47,均P＜0.05);ⅢB组和对照组EPS中WBC计数、NE和枸橼酸浓度、pH值比较,差异无统计学意义(t值分别为1.38、1.55、1.02和1.21,均P＞0.05),NIH-CPSI差异有统计学意义(t=49.46,P＜0.05).EPS中,NE浓度与WBC计数、NIH-CPSI呈正相关(r值分别为0.819和0.698,均P＜0.01),与枸橼酸浓度呈负相关(r=-0.625,P＜0.01);枸橼酸浓度与WBC计数、NIH-CPSI、pH值呈负相关(r值分别为-0.728、-0.644和-0.817,均P ＜0.01).结论 不同亚型的Ⅲ型前列腺炎患者EPS中NE和枸橼酸浓度、pH值等存在差异.
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烧伤、冲击伤及烧冲复合伤后大鼠早期血清中性粒细胞弹性蛋白酶的变化及意义
目的 探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)在大鼠烧伤、冲击伤与烧冲复合伤后早期血清中浓度的变化及意义.方法 选择雄性SD大鼠176只,随机分为对照(C)组、烫伤(BU)组、冲击伤(BL)组与烧冲复合伤(BB)组.C组不致伤;BU组背部脱毛置人94 ℃水中12 s,致25%体表面积(TBSA)Ⅲ°烫伤;BL组以5 g 8701压缩炸药柱为爆炸源,以左侧胸壁距爆炸源75 cm距离进行爆炸,致中度冲击伤;BB组同BL、BU组伤情先致冲击伤后立即烫伤.伤后24 h内,BU、BB组按照50 ml/kg,腹腔注射乳酸钠林格注射液抗休克治疗,1次/12 h.致伤组分为伤后3 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、7 d共7个时相点.测定各时相点支气管肺泡灌洗液(BALF)总蛋白浓度(BCA法)、肺组织含水率(称重法)及血清NE浓度(ELISA法).结果 各致伤组SD大鼠的BALF总蛋白浓度、肺组织含水率及血清NE浓度伤后各时相点均高于C组(P＜0.01或P＜0.05),其伤后峰值均出现在2 d以内,尤其是伤后2 d,BU组、BL组及BB组血清NE浓度分别为(319.85±19.50)ng/ml,(467.43±31.64)ng/ml,(626.00±26.38)ng/ml;C组(78.53±25.10)ng/ml.组间比较,总体伤情水平BB组＞BU组及BL组(P＜0.01或P＜0.05).相关分析表明,伤后3d内,BU组血清NE浓度与BALF总蛋白浓度、肺组织含水率均存在显著正相关(r=0.7910,0.8078,P＜0.05),BB组血清NE浓度与BALF总蛋白浓度存在显著正相关(r=0.8672,P＜0.05).结论 NE可能在烧伤、冲击伤,尤其是烧冲复合伤的早期肺损伤中起到了重要作用.
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中性粒细胞弹力蛋白酶引起黏蛋白5AC高表达的信号转导机制
目的 研究中性粒细胞弹力蛋白酶(NE)通过表皮生长因子受体(EGFR)引起黏蛋白(MUC)5AC高表达的上游信号通路.方法 培养人气道BEAS-2B上皮细胞,给予NE刺激,以肿瘤坏死因子转换酶抑制剂-1(TAPI-1)及活性氧(ROS)清除剂DMTU为干预因素.RT-PCR检测干预前后细胞中MUC5AC mRNA含量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测培养上清中MUC5AC、可溶性转化生长因子(TGF)-α蛋白含量;Western印迹分析磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)蛋白水平.结果 NE刺激后引起MUC5AC基因转录和蛋白表达水平明显高于未给予NE刺激的对照组(P＜0.01),同时伴随可溶性TGF-α及p-EGFR蛋白水平的增高,与对照组相比,差异有统计学意义(均P＜0.01);加入浓度为20 μmol/L的肿瘤坏死因子转换酶抑制剂TAPI-1后可明显下调上述指标的表达水平(均P＜0.01),DMTU也同样降低了MUC5AC的基因转录、产物水平以及可溶性TGF-α蛋白相对含量,与单纯NE刺激组比较差异均有统计学意义(P＜0.01),但对单纯外源性TGF-α刺激组引起的MUC5AC基因转录和蛋白合成增加无明显作用(均P＞0.05).结论 NE能刺激细胞产生ROS,再活化肿瘤坏死因子转换酶(TACE)引起黏蛋白产生的增多,组成EGFR通路上游的主要信号分子,故ROS/TACE/TGF-α前体/EGFR转导途经是NE引起气道黏液高分泌的重要机制.
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西维来司钠对烟雾吸入性肺损伤大鼠早期炎症反应的影响
目的 探讨西维来司钠对大鼠烟雾吸入性肺损伤早期炎症反应的影响.方法 40只健康雄性SD大鼠随机分成正常组、模型组、治疗组,治疗组又分为10、20、30 mg/kg组,每组8只.建立大鼠烟雾吸入性肺损伤模型.治疗组分别给予西维来司钠10、20、30 mg/kg腹腔注射,模型组给予等量生理盐水.24 h后用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、髓过氧化物酶(MPO)、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,同时测定各组大鼠肺组织含水量,肺组织HE染色后观察,测量比较肺泡间隔厚度.结果 与正常组比较,模型组和治疗组血清中NE、MPO、IL-6、TNF-α水平、肺组织含水量、肺泡间隔厚度均明显升高(均P<0.05);与模型组比较,各治疗组血清NE、MPO、IL-6、TNF-α表达水平、肺组织含水量、肺泡间隔厚度均明显降低(均P<0.05);与20、30 mg/kg组比较,10 mg/kg组血清NE、MPO、IL-6、TNF-α含量、肺组织含水量、肺泡间隔厚度均明显降低(P<0.05).结论 西维来司钠能减轻大鼠烟雾吸入性肺损伤早期炎症反应及肺水肿,其中,10 mg/kg剂量处理效果优于其他剂量.
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西维来司钠对大鼠重症急性胰腺炎后急性肝损伤的保护作用
目的:探讨西维来司钠对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)后急性肝损伤的治疗价值.方法:SD大鼠54只随机分为3组,A组为对照组,仅开腹,轻翻动胰腺,B组采用经十二指肠乳头逆行胆胰管注射3.5%牛磺胆酸钠的方法制备大鼠SAP模型,C组为西维来司钠药物治疗组,在制备SAP大鼠模型后微量泵持续静脉滴注西维来司钠;各组又分为3 h、6 h、12 h 3个亚组,每时间点6只.检测血浆白介素-6(IL-6)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、淀粉酶(AMY)及肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平并观察肝、胰病理变化.结果:(1)B组IL-6、NE、AMY、MDA较A组明显升高(P<0.05),SOD明显降低(P<0.05),镜下可见胰腺水肿、炎细胞浸润、坏死,肝脏肝窦充血、细胞浊肿及坏死,且损伤程度随时限延长而加重.(2)C组较B组血浆IL-6、NE、AMY(12 h)及肝组织匀浆中MDA水平下降(P<0.05),SOD升高(P<0.05),胰、肝病理损害程度减轻.结论:西维来司钠通过抑制NE的活性及在肝组织中的表达,抑制SAP急性期炎症反应及有效提高机体对氧自由基的清除能力,减轻SAP致肝损伤的程度.
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全反式维甲酸与弹性蛋白酶对肺组织破坏的干预作用
目的 采用胚肺成纤维细胞三维立体培养技术,直接观察全反式维甲酸(RA)和中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对肺的主要成分之一胶原组织降解的干预作用.方法 在胚肺成纤维细胞三维立体培养过程中加入细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)]来诱导基质金属蛋白酶(MMPs)的表达,同时加入RA或NE干预MMPs及其组织抑制因子(TIMPs)的表达;用明胶酶谱法测定MMP-2、MMP-9,用Western blotting法测定MMP-1、MMP-3及TIMP-1、TIMP-2,同时在培养5 d后测定胶原的含量及面积大小.结果 TNF-α和IL-1β诱导在立体胶原内培养的胚肺成纤维细胞产生MMP-1、MMP-3和MMP-9,但是只引起少量胶原降解(P＞0.05),同时加入NE,结果导致胶原几乎完全降解(P＜0.01).NE使MMP-1、MMP-2、MMP-3和MMP-9由非活化的形式转化为分子量较小的活化形式,同时,清除TIMP-1和TIMP-2.RA抑制了MMP-1的表达及MMP-3、MMP-9的活化,并削弱了NE对TIMP-1、TIMP-2的清除作用,进而抑制了胶原的降解.胶原降解后基质发生强烈收缩.结论 MMPs可直接降解肺内胶原和其他间质组织,导致肺组织破坏;NE通过活化MMPs引起或加速细胞外基质的破坏;MMPs与NE的协同作用可能是肺气肿等肺组织破坏的机制.RA通过抑制MMPs的表达与活化对抗NE对肺组织的破坏作用.
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体外循环对冠脉搭桥手术中性粒细胞凋亡的影响与意义
目的 探讨体外循环(CPB)对冠脉搭桥术(CABG)中性粒细胞(PMN)凋亡及其机能的影响和意义.方法 将60例行冠状动脉搭桥术患者随机分为体外循环冠脉搭桥(CCABG)组(n=30)和非体外循环冠脉搭桥(OPCAB)组(n=30),分别于麻醉诱导后、CPB(手术)结束时、CPB(手术)后4 h、CPB(手术)后8 h、术后第1天晨5个时点采集静脉血.用全血细胞计数仪测定PMN数量,流式细胞仪测定PMN凋亡率和PMN表面黏附分子CD11b表达变化,ELISA法测定血浆弹性蛋白酶浓度变化,透射电镜观察PMN凋亡细胞形态学变化.结果 CCABG组PMN凋亡率在国CPB期明显降低,PMN数量、CD11b表达、血浆弹性蛋白酶浓度则明显升高,透射电镜下可见典型的PMN凋亡细胞.OPCAB组各指标无明显变化.结论 CPB导致PMN的凋亡受抑,PMN数量增加、生存周期延长、CD11b表达上调、脱颗粒释放弹性蛋白酶增加,从而加剧炎症反应扩散和组织损伤.
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气道黏液高分泌诱导因素的研究
目的比较不同因素对气道黏液高分泌的诱导作用,为动物模型制造和临床防治提供指导.方法Wistar大鼠30只随机分成3组:正常组雾化吸入生理盐水;对照组雾化吸入脂多糖(LPS);试验组雾化吸入中性粒细胞弹性蛋白酶(NE).采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学和斑点印迹法分别测定支气管肺泡灌洗液中黏蛋白(MUC)的含量、气道上皮MUC5AC以及MUC5ACmRNA表达.结果试验组和对照组比正常组的MUC,MUC 5AC以及MUC5AC mRNA水平均显著增加(P＜0.01);试验组MUC,MUC5AC以及MUC5AC mRNA表达较对照组明显增加(P＜0.05).结论LPS和NE均为黏液高分泌的有效诱导因素,但NE的黏液促分泌效应较LPS更显著,为强有力的诱导剂,是理想的黏液高分泌造模因子,也是临床防治的重要靶目标.
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缺血后处理对异品系大鼠移植肝脏的保护作用
目的:观察缺血预处理和缺血后处理对异品系大鼠移植肝脏肝功能、抗氧化酶活力、脂质过氧化物产物、炎性细胞因子和病理组织学变化的影响,探讨在体条件下,缺血后处理对异品系大鼠移植肝脏是否具有保护作用.方法:实验于2003-12/2004-08在陕西西安第四军医大学唐都医院中心实验室完成.采用健康雄性SD大鼠和Wistar大鼠各36只,随机分为3组,每组SD大鼠和Wistar大鼠各12只,行SD大鼠至Wistar大鼠的原位肝移植.①对照组:供肝切除前及移植后无特殊处理.②预处理组:获取供肝前短暂肝脏缺血作为预处理.③后处理组:供肝植入后完全再灌注前,给予多次短暂复灌复停作为缺血后处理.接受肝移植后各组大鼠取6只于再灌注后2 h留取血液及肝脏,检测血清肝功、炎性细胞因子、肝组织过氧化产物和抗氧化酶水平,另6只于再灌注后6 h取肝脏制成切片进行病理学检测.结果:完成实验大鼠72只.①再灌注后2 h的血清天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、乳酸脱氢酶含量:预处理组及后处理组明显低于对照组(P＜0.05～0.01);而预处理和后处理组之间无明显差异(P＞0.05).②再灌注后2 h肝组织的谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活力:预处理组明显高于对照组[(1.560±0.240)?kat/g,(15.981喝毖蟠砗腿毖ご矶砸炱废荡笫笠浦哺卧嗑哂邢嗨频谋?护作用,能够改善移植后肝脏功能,提高组织的抗氧化能力,减轻移植后的缺血再灌注损伤.移植后炎性细胞因子水平的降低和单核细胞浸润的减轻可能是缺血后处理发挥其对异品系大鼠移植肝脏保护作用的机制之一.
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中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂对小鼠实验性结肠炎的作用研究
目的 观察中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)抑制剂西维来司他对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠实验性结肠炎的作用.方法 26只健康雄性BALB/C小鼠分为正常对照组(6只)、实验对照组(6只,腹腔注射磷酸盐缓冲液,9 d)、低剂量组(7只,腹腔注射西维来司他50 mg/kg,9 d)、高剂量组(7只,腹腔注射西维来司他100 mg/kg,9 d).除正常对照组外,其余小鼠均予5%DSS溶液自由饮用以制备实验性结肠炎模型.实验第10天时处死全部小鼠并取结肠组织,行组织学损伤评分.酶联免疫吸附法检测小鼠血浆及结肠组织培养上清中NE含量.Western印迹法检测远端结肠组织中NE表达水平.结果 实验对照组小鼠结肠组织学损伤评分(12.00±2.45)显著高于正常对照组(1.88±0.83,P＜0.01).低剂量组和高剂量组的结肠组织学损伤评分差异有统计学意义(分别为10.17±1.17和5.00±1.15,P＜0.05),均显著低于实验对照组(P值均＜0.05),但均显著高于正常对照组(P值均＜0.05).实验对照组血浆NE浓度、结肠组织培养上清NE含量、结肠组织中NE表达水平均较正常对照组明显升高(P值均＜0.05);与实验对照组相比,低剂量组稍有降低(P值均＞0.05),但仍高于正常对照组(P值均＜0.05);高剂量组则显著降低(P值均＜0.05),与正常对照组无差异(P值均＞0.05);高剂量组较实验组和低剂量组显著降低(P值均＜0.05).结论 NE抑制剂西维来司他可改善DSS诱导的小鼠实验性结肠炎病理损伤,高剂量应用效果优于低剂量.NE可能参与溃疡性结肠炎的发病.
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海洋盐单胞菌属微生物的鉴定及生物学活性分析
对36株海洋盐单胞菌进行16S rDNA的序列测定和生物学活性的初步分析.方法 用PCR方法扩增36株细菌的16S rDNA序列,将获得的全部序列运用Clustal X1.8软件进行多序列比对并用MEGA4.1软件绘制进化树.利用MTT法测定菌株发酵液的细胞毒活性;采用DPPH和ABTS抗氧化模型检测菌株发酵液的抗氧化活性；采用人白细胞弹性蛋白酶(human leukocyte elastase,HLE)抑制剂筛选模型检测菌株发酵液对HLE的抑制率.结果 经与GenBank数据库比对,36株菌均与盐单胞菌属有很高的相似性(96%～99%).菌株发酵液有不同程度的细胞毒活性、抗氧化活性和HLE抑制活性.11株菌对HepG2细胞有抑制作用,抑制率为(4.40±1.2)%～(24.90±3.5)%；20株菌对HL-60细胞有抑制活性,抑制率为(1.70±1.1)%～(50.90±4.2)%.7株菌对ABTS自由基有清除能力,清除率为(4.49±2.1)%～(58.43±4.4)%;3株菌对DPPH自由基有清除能力,清除率为(5.68±3.7)%～(59.06±3.2)%;3株菌具有HLE抑制活性,抑制率为(12.71±1.81)%～(71.19±5.62)%.结论36株海洋盐单胞菌属微生物表现出不同程度的细胞毒活性、抗氧化活性和HLE抑制活性,部分高活性菌株具有潜在的药用研究价值.
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人白细胞弹性蛋白酶抑制剂体外筛选模型的建立及优化
目的 探讨人白细胞弹性蛋白酶(HLE)与其底物反应的适条件,建立一种高通量的HLE抑制剂体外筛选模型.方法 通过测定反应产物--对硝基苯胺(p-NA)的光密度值,研究电解质浓度、反应温度、反应体系pH值、酶和底物作用浓度、反应时间及检测波长等对酶促反应的影响程度,确定酶与底物反应的佳条件.结果 确定的优反应条件为:HLE (0.2 U/ml) 30 μl,底物(50 mmol/L)100 μl,含1.0 mol/L NaCl的Tris缓冲液(pH 7.5),反应温度37℃,反应时间24 h,检测波长为545 nm.结论 建立了一种稳定的HLE抑制剂体外筛选模型,该模型灵敏度高、准确性和重复性强,可用作筛选HLE抑制剂的平台.
