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CBP治疗对重症脓毒症患者外周血单核细胞mCD14的影响
目的 探讨连续性血液滤过技术(CBP)治疗对重症脓毒症患者外周血单核细胞mCD14的影响及其治疗脓毒症的机制.方法 将笔者医院重症医学科收治的60例重症脓毒症患者分为CBP组及非CBP组.在两组患者治疗过程的0、12、24、48、72h时相点,留取外周血标本,检测其mCD14及白细胞弹性蛋白酶表达量的变化.将治疗24h后的两组患者分离出外周血单核细胞,并于体外培养,以LPS刺激后,在4、8、12、24、48h时相点检测单核细胞中mCD14表达量的变化;同时用ELISA法检测单核细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-10水平.结果 随着治疗的进行,CBP组白细胞弹性蛋白酶水平较非CBP组下调更显著,差异具有统计学意义(P<0.05),而CBP组mCD14水平较非CBP组上调亦更显著,差异有统计学意义(P<0.05);CBP组在孵育前及孵育后4、8h时相点mCD14水平明显高于同时相的脓毒症组,差异有统计学意义(P<0.05),其单核细胞接受LPS再刺激后对炎性反应能力也较脓毒症组强.结论 CBP治疗可通过高效清除循环中的炎性因子及白细胞弹性蛋白酶,使mCD14水平上调,使部分免疫细胞免疫功能得到一定的恢复,从而改善机体内环境,参与重建机体免疫内稳状态.
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LPS对THP-1细胞sCD14和mCD14表达的影响
目的 观察不同浓度脂多糖(LPS)刺激THP-1细胞(human acute monocytic leukemia cell line)不同时间对可溶性CD14(soluble CD14,sCD14)和膜CD14(Membrane CD14,mCD14)表达的影响及sCD14、mCD14表达之间的关系.方法 不同浓度LPS(0、0.1、1.0、10、50ng/ml)刺激经佛波酯(PMA)诱导的THP-1细胞不同时间(0.5、1、3、5、8h),用酶联免疫吸附法检测sCD14的量,流式细胞术检测mCD14的量.结果 LPS浓度为0ng/ml时,sCD14的表达与时间呈正相关(r=0.915,P=0.029),8h达高值(1044.39±12.21 pg/ml),mCD14的表达与时间呈正相关(r=0.945,P=0.015),8h达高值(4.23％±2.11％),且随着时间的延长,sCD14的表达与mCD14的表达呈正相关(r=0.969,P=0.006);LPS浓度为0.1ng/ml时,随着时间的延长,sCD14的表达与mCD14的表达呈正相关(r=0.944,P=0.016);当LPS刺激细胞0.5h时,sCD14的表达与mCD14的表达呈负相关(r=-0.839,P=0.037);1h时,mCD14的表达与LPS浓度呈正相关(r=0.839,P=0.037),100ng/ml时达高值(3.24％±1.95％).结论 未经LPS刺激的THP-1细胞可以表达sCD14及mCD14;LPS的浓度及刺激细胞的时间促进sCD14和mCD14表达.
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腹水 CD64及外周血 mCD14检测在肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎中的价值研究
目的：探讨肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎（ SBP）患者腹水CD64及外周血mCD14的变化及其意义。方法选取肝硬化合并腹水患者87例，根据是否合并SBP将患者分为2组：合并SBP 44例为研究组，未合并SBP 43例为对照组，采用流式细胞术检测2组患者腹水中性粒细胞和淋巴细胞CD64平均荧光强度、CD64指数，外周血白细胞计数、mCD14阳性表达率、mCD14平均荧光强度和mCD14指数。研究组抗感染治疗1周后再按治疗有效与无效、生存与死亡分组评价腹水中性粒细胞和淋巴细胞CD64平均荧光强度、CD64指数，外周血mCD14平均荧光强度和mCD14指数。结果研究组腹水中性粒细胞CD64平均荧光强度、CD64指数和外周血白细胞计数明显高于对照组（P均＜0．05），淋巴细胞CD64平均荧光强度、mCD14阳性表达率、mCD14平均荧光强度和mCD14指数均明显低于对照组（ P均＜0．05）。治疗有效组和生存组中性粒细胞CD64平均荧光强度和CD64指数均明显低于治疗无效组和死亡组（P均＜0．05），淋巴细胞CD64平均荧光强度、mCD14平均荧光强度和mCD14指数均明显高于治疗无效组和死亡组（P均＜0．05）。腹水CD64与外周血mCD14联合检测对治疗效果和预后判断的ROC曲线下面积、临界值、灵敏度和特异度均明显高于CD64、mCD14单项检测（P均＜0．05）。结论肝硬化合并SBP患者腹水中性粒细胞CD64显著增高，腹水淋巴细胞CD64与外周血mCD14显著降低，腹水CD64与外周血mCD14联合检测预示肝硬化合并SBP治疗效果和预后的价值显著。
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重症脓毒症患者外周血单核细胞TLR4和炎性因子的表达及临床意义
目的 观察重症脓毒症患者外周血单核细胞(PBMC)膜结合CD14(mCD14)、TLR4及炎性因子的表达及临床意义.方法 选取符合重症脓毒症患者35例和健康志愿者15例作为对照.在患者被诊断重症脓毒症的第1、3、5天测定其外周血单核细胞mCD14、TLR4的表达及血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)浓度、当天的APACHE-Ⅱ评分和SOFA评分及预后.结果 按预后分为生存组(25例)和死亡组(10例),第1、3天2组PBMC表面mCD14、TLR4比较差异无统计学意义(P＞0.05),生存组PBMC表面mCD14、TLR4第5天升高,并高于死亡组的对应值(P＜0.05)；APACHE-Ⅱ、SOFA评分明显下降,2组血清TNF-α、IL-10各点均没有发生明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 重症脓毒症患者外周血单核细胞mCD14、TLR4表达与患者预后密切相关,血清TNF-α、IL-10的动态变化不能反映患者疾病的演变和预后.
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脂多糖受体mCD14定量研究的方法探讨
本文通过横断面研究,对100例正常人群(一次性)采集外周全血2ml,选用流式细胞技术测定单核细胞群、mCD14平均荧光强度值,行盲法测定.观察正常人群外周血mCD14的表达水平,探讨正常人群mCD14定量研究的方法.结果显示单核细胞与淋巴细胞的比值比单个读取mCD14的平均荧光强度值更具可重复性,集中趋势较好,有利于临床应用和比较研究.此方法可作为流式细胞仪定量检测数据校正的方法参考.
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ARDS患者外周血mCD14阳性单核细胞的检测及其意义
目的观察急性呼吸窘迫综合征(ABDS)患者外周血单核细胞mCD14的表达情况,并探讨其意义.方法对5例ARDS患者及10例健康志愿者,分别分离其外周血单核细胞,用抗生物素-生物素-过氧化酶复合物技术(ABC法)检测其mCD14的表达.结果ARDS组及对照组外周血mCD14阳性单核细胞的百分率分别为94.3%±1.5%、93.6%±1.7%,两组间无显著性差别(P＞0.05).结论ARDS患者及健康志愿者外周血单核细胞高表达mCD14,说明它们对LPS具有较高的潜在识别能力,一旦有LPS存在或入侵,这些细胞将可能被激活并释放介质.
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不同麻醉方法对单核细胞mCD14与TLR4表达的影响
目的:研究不同麻醉方法对外周血单核细胞mCD14与Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法:选择择期行结、直肠癌根治术患者,共24例,年龄18～65岁,性别不限;体质量指数(BMI)18～23 kg/m2;美国麻醉医师学会(ASA)I～II级.所有患者分为2组:单纯全麻组(GA组)和全麻复合硬膜外阻滞组(GA+E组),每组各12例.GA组以6 μg/kg芬太尼、1.5～2.0 mg/kg丙泊酚和0.6～0.8 mg/kg罗库溴铵行全麻诱导,术中以七氟醚维持麻醉,呼气末浓度维持在1.0～1.3低肺泡有效浓度(MAC).GA+E组患者入手术室后于T12～L1穿刺并放置硬膜外导管,全麻诱导方法和药物同GA组,气管插管后硬膜外分次给予1%利多卡因及0.2%丁卡因混合液共9～12 mL,并维持呼气末七氟醚浓度在0.6～0.8 MAC,术中每小时追加1%利多卡因及0.2%丁卡因混合液3～4 mL.分别于手术前、手术开始(切皮)时、切皮后2 h及术后24 h采外周血测定单核细胞膜型CD14(mCD14)、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)数值.结果:GA+E组和GA组相比,患者各时间点单核细胞mCD14数值均无显著变化.GA组手术开始时单核细胞TLR4较术前显著下降(P<0.05),而GA+E组各时间点单核细胞TLR4无显著变化.结论:硬膜外阻滞可能通过影响TLR4的表达平衡手术应激产生的免疫抑制.
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慢性重型乙型肝炎外周血单核细胞上mCD14的表达及意义
慢性重型乙型肝炎患者由于肝细胞功能严重受损,来自肠道的革兰氏阴性杆菌内毒素脂多糖(LPS)易进入体循环,而产生肠源性内毒素(IETM).IETM对肝脏的影响,并不在于内毒素的直接作用,而是内毒素诱导单核巨噬细胞产生过多的炎症介质导致肝细胞炎症坏死[1].
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呼吸窘迫综合征机械通气早产儿肺泡巨噬细胞表面mCD14的表达
目的探讨肺泡巨噬细胞(AM)表面mCD14的表达在新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)发病和并肺炎中的作用.方法用流式细胞仪检测早产新生儿呼吸道清洗液中AM表面mCD14的阳性表达率,用酶联免疫吸附试验检测早产新生儿呼吸道清洗液中IL-1β、IL-8含量.结果1.病例组AM的mCD14阳性表达率[(54.772±17.341)%]高于对照组[(14.023±10.713)%],差异有显著性(t=-7.739 P＜0 001);病例组IL-1β含量[(263.220±69.015)ng/L]高于对照组[(73.979±40.850)ng/L],差异有显著性(t=-9.139 P＜0.001);病例组IL-8含量[(377.564±165.867)ng/L]高于对照组[(61.064±39.894)ng/L],差异有显著性(t=-7.185 P＜0.001).2.IL-1β和IL-8均与AM表面的mCD14阳性表达率呈显著正相关(r=0.872,0 847 P均＜0.01);IL-8与IL-1β含量呈显著正相关(r=0.861 P＜0.01).结论mCD14在AM表面的高表达以及细胞因子IL-1β和IL-8在NRDS发病及并肺部炎症的病理生理过程中起重要作用.
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腹水CD64、外周血mCD14在肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎中的变化及其意义
目的 探讨腹水CD64、外周血mCD14在肝硬化合并自发性细菌性腹膜炎(SBP)中的变化及其意义.方法 选取该院肝硬化合并腹水患者174例,根据是否合并SBP将患者分为研究组(合并SBP,88例)和对照组(未合并SBP,86例).采用流式细胞术检测腹水CD64与外周血mCD14,全部患者均采用头孢他啶联合氧氟沙星抗菌治疗.结果 与对照组相比,研究组的外周血白细胞计数[(4.41±1.05)×109/L]、腹水中性粒细胞CD64平均荧光强度(16 421.35±289.37)和腹水CD64指数(182.34±16.31)均显著升高(P＜0.05),而淋巴细胞的外周血mCD14阳性表达率[(2.71±0.07)％]、外周血mCD14平均荧光强度(45.62±14.07)、外周血mCD14指数(115.24±24.15)及腹水CD64平均荧光强度(86.47±10.24)则均显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05);与治疗无效/死亡患者相比,治疗有效/生存患者的腹水中性粒细胞CD64平均荧光强度(574.34±114.01)和腹水CD64指数(52.33±11.25)均显著降低(P＜0.05),而外周血mCD14平均荧光强度(130.11±15.31)、外周血mCD14指数(289.01±30.11)和腹水淋巴细胞CD64平均荧光强度(131.06±20.33)则显著升高,比较差异有统计学意义(P＜0.05);此外,与腹水CD64、外周血mCD14单项检测相比,二者联合检测对治疗效果和预后的预测的准确度显著升高,比较差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 腹水CD64与外周血mCD14检测可以提示肝硬化是否合并SBP,二者联合检测在对肝硬化合并SBP的诊断和治疗效果判定中有显著的临床意义.
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CD14的结构和功能
CD14分为膜上CD14(mCD14)和可溶性CD14(sCD14).mCD14分布在单核细胞等表面;sCD14存在于正常人和动物的血清中.编码CD14的基因已被克隆,该基因位于人5号常染色体长臂端5q23-q31.mCD14是一种55kDa糖蛋白,化学组成为糖基磷脂酰肌醇(GPI)-蛋白质,通过PI的磷脂部分与细胞膜连接;sCD14蛋白部分与mCD14基本相同,但不含PI部分,故分子量稍小,为48kDa.mCD14作为LPS受体,介导LPS对单核细胞等的刺激作用,sCD14也可与LPS结合,激活、损伤无mCD14的上皮细胞等.
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急性呼吸窘迫综合征患者外周血单核细胞mCD14的表达及意义
目的观察急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者外周血单核细胞mCD14的表达情况,并探讨其意义.方法对5例ARDS患者及10例健康志愿者,分别分离其外周血单核细胞,用抗生物素-生物素-过氧化酶复合物技术(ABC法)检测其mCD14的表达.结果ARDS组及对照组外周血mCD14阳性单核细胞的百分率分别为94.3%±1.5%、93.6%±1.7%,两组间无统计差别(P＞0.05).结论ARDS患者及健康志愿者外周血单核细胞高表达mCD14,说明它们对LPS具有较高的潜在识别能力,一旦有LPS存在或入侵,这些细胞将可能被激活并释放介质.
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内毒素对牙龈成纤维细胞mCD14表达的影响
目的:研究mCD14在牙龈成纤维细胞的膜表面分布及内毒素对mCD14在牙龈成纤维细胞膜表面表达的影响.方法:组织块法培养人牙龈成纤维细胞,利用免疫组化和Western blot方法研究mCD14在牙龈成纤维细胞的膜表面分布,同时观察内毒素对mCD14在牙龈成纤维细胞膜表面表达的影响.结果:免疫组织化学染色实验和蛋白印迹实验结果均表明mCD14在牙龈成纤维细胞的膜表面表达阳性,同时LPS可增强膜表面的mCD14的表达.结论:本实验表明正常人牙龈成纤维细胞可表达mCD14, LPS 可以上调膜表面mCD14 的表达,从而导致牙周损伤.
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LPS刺激牙龈成纤维细胞IL-6、IL-8的产生和膜表面受体CD14的表达
目的:观察牙龈卟啉菌和中间普氏菌LPS刺激人牙龈成纤维细胞合成IL-6、IL-8的能力,并了解LPS是否通过细胞表面膜受体mCD14介导信号传导.方法:4种浓度的LPS在不同时间段,分别作用于体外培养的人牙龈成纤维细胞.采用ELISA检测IL-6、IL-8含量的变化,同时利用逆转录聚合酶链反应,进一步观察IL-6、 IL-8、 CD14在 mRNA水平的表达特征.结果:ELISA和RT-PCR的反应结果证实,受LPS的刺激,细胞合成和分泌细胞因子IL-6、IL-8的能力明显增强,但未检测到细胞表面膜受体mCD14 mRNA的表达.结论:LPS作用于牙龈成纤维细胞合成和分泌细胞因子没有通过膜受体mCD14的介导.
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烧伤早期离体肺泡巨噬细胞CD14蛋白表达对细胞因子影响的实验研究
目的探讨烧伤血清对离体大鼠肺泡巨噬细胞(AM)CD14膜蛋白(mCD14)表达变化及其对AM分泌细胞因子的影响.方法分离并收集大鼠AM,以烧伤血清及LPS刺激,再分别以抗CD14抗体作用,用免疫组化法检测mCD14蛋白表达变化,ELISA检测培养液中TNF-α和IL-6浓度.结果烧伤血清和LPS刺激后,AM的CD14蛋白表达从1h起就开始增加,2 h达峰值,尔后逐渐减弱,持续12 h,细胞因子分泌相应增加;抗CD14抗体阻断CD14作用后,CD14的蛋白表达显著降低,细胞因子分泌亦相应减少.结论严重烧伤后可能随着LPS增加,通过激活内毒素信号传导通路,使AM分泌细胞因子增加,这种作用可以被抗CD14抗体所阻断,提示严重烧伤后可以通过调节CD14的作用而减少细胞因子的合成和分泌.
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烧伤大鼠肺泡巨噬细胞CD14蛋白表达对细胞因子的影响
目的:探讨严重烧伤对大鼠肺泡巨噬细胞(AM)CD14膜蛋白(mCD14)表达变化及其对AM分泌细胞因子的影响.方法:20%Ⅲ度烧伤大鼠检测早期外周血LPS浓度.AM以烧伤血清及LPS刺激,再分别以抗CD14抗体作用,免疫组化检测mCD14蛋白表达变化;ELISA检测培养液中TNFα和IL-6浓度.结果:烧伤血清和LPS刺激后,mCD14蛋白表达从1 h起就开始增加,2 h达峰值,尔后逐渐减弱,上述改变在12 h内持续,细胞因子分泌相应增加;抗CD14抗体阻断CD14作用后,mCD14的蛋白表达显著降低,细胞因子分泌亦相应减少.结论:严重烧伤后随LPS增加,激活内毒素信号传导通路,使AM分泌细胞因子增加,此作用可以被抗CD14抗体所阻断,提示严重烧伤后可以通过调节CD14的作用而减少细胞因子的合成和分泌.
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急性胰腺炎早期外周血CD14表达水平及临床意义
目的:观察急性胰腺炎早期病程中外周血mCD14和sCD14的表达水平,探讨急性胰腺炎早期通过CD14信号途径单核/巨噬细胞激活的强度及临床意义.方法:采用前瞻性临床对照研究,共纳入24例急性胰腺炎患者和10例正常对照者.对照组(一次性)和患者于发病24小时采集外周全血2ml,采用流式细胞技术测定单核细胞群的mCD14平均荧光强度值,ELISA法测定血清sCD14的浓度,二者均采用盲法测定.采用t检验,以p＜0.01认为有统计学差异.结果:24例急性胰腺炎24小时外周血mCD14平均荧光强度值(28.42±7.70)和血清sCD14浓度(1.52±0.26μg/ml)分别与正常对照组mCD14(16.97±2.82)和sCD14(1.18±0.16μg/ml)相比,急性胰腺炎组均显著高于正常对照组(p均＜0.001).结论:急性胰腺炎早期病程中外周血mCD14表达水平和sCD14的血清浓度均显著高于正常对照组,提示急性胰腺炎早期单核细胞对CD14表达和分泌是明显增加的,说明急性胰腺炎早期单核细胞通过CD14信号途径的激活是明显加强的.
