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高迁移率族蛋白B1参与心肺复苏术后大鼠海马组织P38 MAPK信号通路的激活
目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在心肺复苏（CPR）术后大鼠海马组织激活P38 MAPK信号通路的作用。方法将SD大鼠随机分为假手术组和复苏组（按复苏后自主循环恢复后2、6、12、24和48 h各时间点分5个亚组）。在相应的时间点断头处死，取海马组织，HE染色观察海马病理变化，干湿称重法测定脑组织含水量，RT－PCR法检测HMGB1 mRNA表达，Western blot检测HMGB1和P38激酶活性。结果假手术组海马组织结构未见明显变化，复苏组存在缺血病理改变，24 h为显著。与假手术组比较：复苏组脑组织含水量、海马HMGB1 mRNA表达均呈先上升后下降的趋势，于24 h达到峰值（ P＜0．01）；复苏组HMGB1表达在ROSC后2 h显著降低，6和12 h逐渐增高，24 h达到峰值（P＜0．01）；复苏组海马组织P38激酶活性于2 h表达显著升高（P＜0．01），6 h达到高峰（P＜0．01），后缓慢下降。结论 HMGB1可能通过参与P38 MAPK信号通路的激活介导CPR术后早期脑组织炎性反应损伤。
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高迁移率族蛋白B1和神经元烯醇化酶对心脏骤停大鼠复苏后脑损伤评价的研究
目的：观察高迁移率族蛋白 B1（HMGB1）和神经元烯醇化酶（NSE）在心脏骤停大鼠复苏后海马组织和血清中的表达变化，并探讨其可能意义。方法40只SD大鼠随机分为假手术组和复苏组（按复苏后自主循环恢复后2、6、12、24和48 h各时间点分5亚组）。在相应的时间点断头处死，取海马组织，HE染色观察海马病理变化，干湿称重法测定脑组织含水量，Western blot检测海马HMGB1变化，ELISA法分别检测血清HMGB1、NSE表达变化。结果假手术组海马组织结构未见明显变化，复苏组存在缺血病理改变，24 h为显著。与假手术组比较：复苏组脑组织含水量、血清中HMGB1和NSE表达均呈先上升后下降的趋势，24 h达峰值（P＜0.01）；复苏组海马组织HMGB1表达在自主循环恢复后2 h显著降低，6、12 h逐渐增高，24 h达到峰值（P＜0.01）。结论 HMGB1和 NSE水平对评价心肺复苏后大鼠的脑损伤程度具有诊断意义，两者联合动态观察，对严重而持续的脑损伤更有诊断价值。
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Sestrin2对高迁移率族蛋白B1诱导树突细胞凋亡的保护作用
目的 探讨Sestrin2(SESN2)在高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导树突细胞(DC)凋亡中的作用.方法 将培养的小鼠树突细胞DC2.4分为正常对照组及HMGB1 8、24、48h组(n=4),HMGB1各亚组加入10ng/ml HMGB1培养相应时间;另将DC2.4细胞分为正常对照组及HMGB1组,HMGB1组设1、10、100ng/ml亚组(n=4),予以不同浓度HMGB1刺激48h.采用Western blotting检测各组细胞SESN2、cleaved-caspase-3、Bcl-2蛋白的表达水平,共聚焦激光显微镜检测SESN2在细胞中的定位及表达,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况.将载有过表达空载体NC、沉默空载体NS、过表达病毒载体SESN2 LV-RNA及沉默病毒载体SESN2 siRNA转入DC2.4细胞中(n=4),以100ng/ml HMGB1刺激48h,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,并检测凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、Bcl-2的表达水平.结果 与正常对照组比较,10ng/ml HMGB1刺激24、48h后,以及1、10、100ng/mlHMGB1刺激48h后,DC2.4细胞中SESN2的表达水平均显著上调,差异有统计学意义(P＜0.05).10、100ng/ml HMGB1刺激48h后,DC2.4细胞的凋亡率(分别为17.02％±4.85％、17.48％±4.04％)明显高于正常对照组(7.35％±1.33％,P＜0.05,P＜0.01),而10ng/ml HMGB1刺激8h后DC2.4细胞凋亡率与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).在不同转染组中,100ng/ml HMGB1刺激48h后,SESN2 siRNA组D C2.4细胞凋亡率(65.96％±2.50％)明显高于空载体组(50.01％±2.07％),同时凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3表达明显升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);而SESN2 LV-RNA组细胞凋亡率(35.57％±1.69％)明显低于空载体组(49.04％±4.87％),cleaved-caspase-3表达明显下降,Bcl-2表达明显升高(P＜0.05).结论 SESN2在HMGB1诱导DC2.4细胞的凋亡过程中具有一定保护作用.
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右美托咪定对脾切除术后老龄大鼠认知功能的影响
目的 观察右美托咪定对脾切除术后老龄大鼠认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction,POCD)及海马CA1区高迁移率组蛋白B1(high mobility group box-1,HMGB1)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠24只,18~20个月龄,体质量500~600 g,按随机数字表法将其分为3组(n=8):正常对照组(C组)、手术组(S组)和右美托咪定组(D组).采用脾脏切除术制备大鼠POCD模型,于脾切除术后1~6 d行Morris水迷宫定位航行实验,第7天行空间探索实验测试大鼠学习记忆能力,随后处死大鼠取脑,采用免疫组化法检测海马CA1区HMGB1表达.结果 与C组相比,S组大鼠逃逸潜伏期延长(P<0.05),目标象限停留时间百分比及准确跨越平台次数减少(P<0.05),海马CA1区HMGB1表达增加(P<0.05);与S组相比,D组大鼠潜伏期缩短(P<0.05),目标象限停留时间百分比及准确跨越平台次数增加(P<0.05),海马CA1区HMGB1表达减少(P<0.05).结论 右美托咪定能降低脾切除术后老龄大鼠海马CA1区HMGB1表达,改善其术后认知功能.
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木犀草素对脑梗死动物模型大脑皮质HMGB1/TLR4/NF-κ B通路的干预
目的 观察脑缺血后HMGB1/TLR4/NF-κB的表达变化,探讨木犀草素的干预研究.方法 用改良线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型.梗死后腹腔内立即注射木犀草素,在梗死后24h采用Western blot和RT-qPCR观察HMGB1/TLR4/NF-κ B蛋白和基因表达变化.结果 脑梗死后24 h HMGB1/TLR4/NF-κ B的表达明显上调(P＜0.05).木犀草素低剂量组下调HMGB 1/TLR4/NF-κ B的表达不明显(P＞0.05).木犀草素高剂量组下调TLR4/NF-κ B的表达明显(P＜0.05).木犀草素可能是通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κ B的表达起到脑保护作用.结论 HMGB1/TLR4/NF-κ B可能是木犀草素的靶点之一,木犀草素可能是通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κ B的表达发挥其脑保护的作用.
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急性颅脑损伤患者血清中HMGB1及Fas的表达及临床意义
目的:研究高迁移率族蛋白B1(High-mobility group box 1 HMGB1)与Fas在急性颅脑损伤患者血清中的表达及内在联系.方法:急性颅脑损伤患者62例,根据入院时格拉斯哥昏迷评分(Glasgow coma score GCS)将其分为轻度组(GCS评分＞12分)、中度组(8分＜GCS评分≤12分和重度组(GCS评分≤8分),选择正常健康志愿者15例做为对照组.所有患者入院后即采集外周静脉血,分离血清,采用双抗体夹心酶联免疫分析法(Enzyme Linked-Immuno-Sorbent Assay,ELISA)测定血中HMGB1及Fas含量.结果:①急性颅脑损伤患者血清中HMGB1、Fas水平在各组之间差异有显著统计学意义(P＜0.05).②相关分析发现急性颅脑损伤患者血清中Fas和HMGB1水平呈正线性相关关系,r=0.836,P＜0.01.结论:急性颅脑损伤患者血清中HMGB1和Fas可判断患者病情轻重；急性颅脑损伤患者血清中Fas的升高可能是通过HMGB1-炎症反应途径导致继发性颅脑损伤.
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急性心肌梗死患者溶栓前后血清中高迁移率组蛋白B1水平的表达
高迁移率组蛋白B1（HMGB1）是广泛存在于真核细胞核中重要的非组蛋白之一,它具有高度保守的序列,而且几乎表达于所有细胞系.在细胞核内,HMGB1主要参与细胞分化、稳定染色质结构、调节基因转录和翻译以及类固醇激素调控等生命活动.
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低氧诱导高迁移率组蛋白B1对人胰腺癌细胞凋亡抵抗和迁移的作用研究
目的 观察低氧诱导人胰腺癌细胞系(SW1990)分泌高迁移率组蛋白B1(HMGB1)作用,并探讨胞外HMGB1在胰腺癌细胞凋亡抵抗及转移中的作用.方法 取对数生长期SW1990细胞分别给予以下处理:(1)常氧+PBS;(2)低氧+PBS;(3)低氧+HMGB1(100μg/L);(4)低氧+HMGB1(100μg/L)+EP(胞外HMGB1特异性抑制剂).细胞处理72 h后,ELISA检测(1)及(2)2组细胞培养上清中HMGB1表达的差异;AnnexinV/PI流式细胞术检测(2)、(3)、(4)各组细胞的凋亡率;Transwell迁移实验检测(2)、(3)、(4)各组细胞迁移能力差异;Western-blotting检测(2)、(3)、(4)各组细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2)及迁移相关蛋白(E-cadherin、MMP-9)表达的差异.结果 ELISA结果显示低氧条件下,细胞培养上清中HMGB1表达含量升高,是常氧条件下的5倍;AnnexinV/PI流式细胞术检测以上3组细胞的凋亡率分别为:(23.47±2.20)%、(6.57±1.20)%、(20.03±1.89)%;低氧+HMGB1处理组细胞凋亡比率明显低于其他2组,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell迁移实验中各组穿至下室的细胞数分别平均为(161.3±16.0)、(399.7±13.0)、(184.3±16.0)个,差异有统计学意义(P<0.05),提示低氧条件下HMGB1能明显促进人胰腺癌SW1990细胞的迁移;Western-blotting结果显示HMGB1处理组Bcl-2及MMP-9表达增高,E-cadherin表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 低氧可以促进肿瘤细胞释放HMGB1,从而促进人胰腺癌SW1990凋亡抵抗与迁移.
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血清高迁移率组蛋白B1、可溶性晚期糖基化终末产物受体、脱氧核糖核酸酶与TACE早期疗效相关性研究
目的 探讨原发性肝癌患者血清高迁移率组蛋白B1(HMGBl)、人可溶性晚期糖基化终末产物(sRAGE)、脱氧核糖核酸酶(DNase)对TACE近期疗效的评估价值.方法 对收住的42例患者(共计56次TACE治疗)分别在TACE术前、术后24h采集外周静脉血标本,用ELISA法检测外周血清中HMGB1、sRAGE、DNase的表达水平.根据mRECIST标准进行TACE术后疗效评估,将完全缓解+部分缓解+疾病稳定的病例归为获益组,疾病进展者归为无效组.比较TACE术前、术后,获益组及无效组之间的血清HMGB1、sRAGE、Dnase的表达水平,并进行统计学分析.结果 TACE术前与术后24 h血清HMGB1、sRAGE、DNase表达水平比较差异有显著统计学意义(P=0.003,P=000,P=0.001),且术后较术前呈升高趋势.56例次TACE中,24例次为稳定(SD),2例次部分缓解(PR),30例次为肿瘤进展(PD),将SD和PR患者归为获益组(n=26),PD患者为无效组(n=30).在TACE术前,获益组与无效组血清HMGB1、DNase表达水平比较差异无统计意义(P=0.395,P=0.091);在TACE术后24 h,血清HMGB1、DNase在获益组和无效组对比差异也无统计学意义(P=0.354,P=0.182).而sRAGE在获益组与无效组之间的表达水平在术前差异无统计学意义(P=0.143),而在术后24h,两组间sRAGE表达水平差异有统计学意义(P=0.030).结论 ①TACE术后血清HMGB1、sRAGE、DNase表达水平较术前升高;②中晚期肝癌患者外周血清中sRAGE与TACE疗效相关,可以作为TACE治疗肝癌疗效早期评估的指标.
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胰高血糖素样多肽1抑制高糖诱导的高迁移率组蛋白B1表达及机制研究
目的 研究胰高血糖素样多肽1(glucagon like peptide 1,GLP-1)对高糖环境下培养的人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells,HRCEC)中,高迁移率组蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)表达的影响及相关机制.方法 高糖刺激HRCEC不同时间(24h、48 h及96 h)后,分别使用不同浓度的GLP-1(10 mmol/L、100 nmol/L及1 000 nmol/L)刺激HRCEC 96h后,分别通过RT-PCR、ELISA及Western Blot检测HMGB1的mRNA、分泌及蛋白水平.使用高糖和GLP-1刺激细胞1h后,Western Blot检测HMGB1表达相关信号通路(p38 MAPK、JNK和NF-κB)磷酸化水平.结果 相较于正常糖水平,高糖促使HMGB1的mRNA、分泌及蛋白水平显著升高,GLP-1可有效抑制这一效应.高糖可显著性激活p38 MAPK、JNK和NF-κB,而GLP-1则抑制高糖所诱导的这些信号通路激活.结论 GLP-1可能通过抑制高糖刺激下HMGB1的表达及炎症信号通路激活,从而抑制糖尿病视网膜病变的发生及发展.
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HMGB1和RAGE蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达及临床意义
目的 探讨高迁移率组蛋白B1 (HMGB1)及糖基化终末产物受体(RAGE)在人脑胶质瘤组织中的表达情况及临床意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测65例确诊为胶质瘤患者的肿瘤组织和15例正常脑组织中HMGB1及RAGE的表达情况,分析其蛋白表达的差异性与临床病理因素的关系.结果 HMGB1及RAGE蛋白在胶质瘤的阳性表达率为76.92％、69.23％,在正常脑组织中的阳性表达率为20.00％、13.33％,差异均有统计学意义(P＜0.05);HMGB1和RAGE的阳性表达率与肿瘤的恶性程度均呈正相关(P＜0.05);HMGB1和RAGE之间的表达呈正相关(r =0.347,P=0.005).结论 HMGB1及RAGE蛋白表达在胶质瘤组织中均显著增高,并与胶质瘤恶性程度密切相关,二者的相互作用参与了胶质瘤的发生、发展.
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高迁移率组蛋白B1在感染致急性肺损伤小鼠中作用的研究
目的 观察高迁移率组蛋白B1(HMGB1)在感染导致急性肺损伤(ALI)中的致炎作用。方法 内毒素气管内注射建立感染致ALI小鼠模型，观察ALI病变过程中肺组织HMGB1、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、髓过氧化物酶(MPO)含量和肺泡膜通透性的变化，比较抗-HMGB1抗体干预治疗前后小鼠肺内MPO含量、肺泡膜通透性和肺组织病理学的改变。结果 感染致ALI小鼠肺组织HMGB1浓度于模型建立后16 h升高，24 h达高峰，48 h仍显著高于对照组。模型建立后4 h肺组织IL-1β和TNFα浓度显著升高，随后的16 h到48 h降低，与对照组相比无显著差异。MPO水平于模型建立后4 h达峰值[(55.0±3.6)U/g肺组织]。模型建立后16 h肺内伊文兰显著升高，于24 h达高峰[(19.7±1.7)g/mL肺组织]。应用抗-HMGB1抗体可以显著降低肺内MPO浓度[抗体应用前(55.0±3.6)U/g肺组织、抗体应用后(21.4±3.5)pg/mL/mg肺组织]、减轻肺内伊文兰舍量和肺组织病理损伤。结论 HMGB1具有重要的促炎作用，介导感染致ALI的迟发性炎症反应。
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HMGB1在人脑挫裂伤早期脑水肿中的作用
目的 探讨高迁移率组蛋白(high-mobility group box 1,HMGB1)在人脑挫裂伤早期脑水肿的作用.方法 收集20例脑挫裂伤病人作为实验组,根据伤后时间不同,分为伤后6h组(n=7)、12 h组(n=5)、1d组(n=4)、3d组(n=4),同时收集正常脑组织作为对照组(n=5).采用免疫荧光染色方法检测对照组及实验组各时间点HMGB1和水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)的表达情况.结果 与对照组比较,伤后6h组HMGB1从胞核内转移至胞质的比例明显增加(P＜0.05),并于伤后1d达到高峰(P＜0.05).与对照组比较,伤后6h组AQP4的表达明显增加(P＜0.05),持续升高至伤后3d达到高峰(P＜0.05);AQP4主要表达于星形胶质细胞.结论 HMGB1参与人脑挫裂伤后脑水肿的病理生理过程.
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孕激素对高迁移率族蛋白B1诱导人脐静脉内皮细胞释放白细胞介素-6作用的影响
目的 观察孕激素对高迁移率组蛋白B1(HMGB1)诱导人脐静脉内皮细胞(HUNVEC)释放细胞因子白细胞介素-6(IL-6)的影响.方法 分离培养人原代HUVEC,克隆构建HMGB1原核重组表达载体pET14b-HMGB1;用不同浓度的原核表达纯化的HMGB1(0、10、100、500、1000 ng/ml)蛋白和不同浓度的孕酮(0、0.1、1、10、100mmol/L)刺激HUVEC,24 h后用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清中IL-6的表达水平;用500 ng/ml的HMGB1分别与不同浓度的孕酮联合作用刺激培养的HUVEC,ELISA法检测细胞上清中IL-6的表达水平;分析孕酮对HMGB1诱导IL-6影响的剂量效应.结果 不同浓度的HMGB1刺激HUVEC后发现,低浓度HMGB1可轻度下调IL-6的分泌表达,但无明显统计学差异(P>0.05),一定浓度以上则可使IL-6水平明显升高(P<0.01);不同浓度孕激素对HUVEC产生IL-6没有明显影响,但以剂量依赖方式抑制HMGB1对IL-6的分泌(P<0.01).结论 HMGB1可诱导HUVEC释放炎性细胞因子IL-6,而孕激素以剂量依赖的方式抑制这些炎症因子的释放,这为孕激素在内毒素血症的发生发展中发挥保护作用提供了分子水平的理论基础.
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饥饿状态下Lewis细胞HMGB1的表达、定位与细胞自噬发生的相关性研究
目的 探讨饥饿状态下小鼠肺癌细胞(Lewis)自噬的发生与高迁移率组蛋白B1(HMGB1)的相关性.方法 分别用HBSS诱导Lewis自噬0、3、6及9h,免疫荧光检测HMGB1在胞内表达水平及迁移情况;收集细胞及培养上清,Western blot检测微管相关蛋白轻链3(LC3)及其磷脂酰乙醇胺共轭物(LC3-Ⅱ)、泛素结合蛋白p62与高迁移率组蛋白(HMGB1)的表达水平;PCR检测Lewis细胞表面HMGB1配体RAGE、TLR2及TLR4的表达.结果 免疫荧光显示,Lewis细胞饥饿6h后HMGB1表达量增加并伴随从胞核向胞浆的迁移;Lewis细胞饥饿3h后,Western blot结果显示,HMGB1及LC3-Ⅱ表达水平逐渐增加;Lewis细胞表面表达HMGB1的配体RAGE、TLR2及TLR4;利用重组的HMGB1蛋白刺激Lewis后细胞自噬明显增加.结论 HMGB1可以促进Lewis细胞自噬的发生.
关键词： 自噬 肿瘤 高迁移率组蛋白B1 LC3-I/LC3-Ⅱ p62 -
粪便高迁移率组蛋白B1鉴别炎症性肠病与肠易激综合征的价值及其与炎症性肠病的相关性
目的 探讨粪便高迁移率组蛋白B1(HMGB1)表达水平对炎症性肠病(IBD)和肠易激综合征(IBS)中的鉴别意义及其与IBD疾病活动度和内镜评分之间的相关性.方法 收集52例IBD患者,包括克罗恩病(CD)25例和溃疡性结肠炎(UC)27例,33例IBS患者及24例健康对照志愿者(HC)粪便样本.使用Western Blot方法检测粪便中HMGB1蛋白水平.分析其在IBD及IBS中表达的差异及与IBD疾病活动度和内镜评分之间的相关性.结果 CD和UC患者粪便中HMGB1表达水平明显高于IBS患者[3.95(2.45,15.55)比2.22(1.06,4.54),P＜0.01;9.42(2.76,39.65)比2.22(1.06,4.54),P＜0.01].CD与UC患者粪便中HMGB1水平差异无统计学意义[3.95(2.45,15.55)比9.42(2.76,39.65),P=0.32].缓解期IBD组粪便HMGB1水平与IBS组[5.34(1.82,11.19)比2.22(1.06,4.54),P=0.03]及HC组[5.34(1.82,11.19)比1.00(1.00,1.89),P＜0.01]的差异具有统计学意义.粪便HMGB1蛋白相对表达量与CD和UC疾病活动度均呈正相关性(CD:r=0.40,P=0.04;UC:r=0.39,P=0.04);与CD和UC内镜评分也呈正相关(CD:r=0.45,P=0.02;UC:r=0.46,P=0.02).结论 UC及CD患者粪便HMGB1表达量高于IBS组,临床缓解期IBD患者HMGB1相对表达量高于IBS组,且CD及UC患者粪便HMGB1水平与临床疾病活动度及内镜评分均呈正相关,结果提示粪便HMGB1可作为鉴别IBD与IBS的一个新的生物标记物,同时有助于评估IBD患者肠道炎症反应活动度.
