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应激诱导蛋白Sestrin2研究进展
Sestrins是一类高度保守的应激诱导蛋白,通过多种机制保护细胞免受应激、老化等病理生理因素损伤.Sestrin2(Sesn2)是Sestrins蛋白亚型,缺氧、氧化应激等可诱导其表达,Sesn2参与代谢相关性和年龄相关性疾病的病理过程,也参与细胞生长和代谢的调节,与细胞功能密切相关.细胞免疫功能紊乱是严重创(烧)伤感染、脓毒症发病机制中的重要病理生理过程,是目前研究的热点问题之一.本文主要阐述Sesn2功能及其在机体免疫反应中的潜在意义.
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Sestrin2/一磷酸腺苷活化的蛋白激酶介导的细胞自噬在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及叔丁基对苯二酚预处理的保护作用
目的 探讨Sestrin2/一磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)介导的细胞自噬在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及叔丁基对苯二酚(TBHQ)预处理的保护作用.方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠60只,体重200~220 g,腹腔注射1%链脲佐菌素60 mg/kg制备大鼠糖尿病模型,采用随机数字表法分为6组(n=10):正常大鼠对照组(NS组)、正常大鼠缺血再灌注组(NIR组)、正常大鼠TBHQ预处理组(NIPC组)、糖尿病大鼠对照组(DS组)、糖尿病大鼠心肌缺血再灌注组(DIR组)、糖尿病大鼠TBHQ预处理组(DIPC组).结扎冠状动脉左前降支30 min,再灌注120 min建立心肌缺血再灌注模型,NIPC组、DIPC组实验前连续5 d腹腔注射TBHQ 40μg/kg.苏木素伊红染色观察心肌组织,酶联免疫法检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,Western blotting测定心肌组织Sestrin2、磷酸化AMPK(p-AMPK)、自噬效应蛋白Beclin1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的表达.组间比较采用单因素方差分析.结果 与NIR组相比,NIPC组CK-MB、LDH活性降低(343±37比453±36、428±65比576±45,t=0.0066、0.0134,均P<0.05),SOD活性升高(706±17比566±21,t<0.0001,P<0.05),Sestrin2、p-AMPK、Beclin1表达显著升高(t=0.0004~0.0056,均P<0.05),Caspase3表达降低(t=0.0009,P<0.05).与NS组相比,NIR组和NIPC组CK-MB、LDH、SOD活性显著升高(F=17.04~413.16,均P<0.05),与DS组相比较,DIR组和DIPC组CK-MB、LDH、SOD活性显著升高(F=91.83~183.28,均P<0.05),Sestrin2、p-AMPK、Beclin1、Caspase3表达显著升高(F=8.63~128.69,均P<0.05).与DIR组相比较,DIPC组CK-MB、LDH活性、Caspase3表达显著降低(t=0.0080~0.0227,均P<0.05),SOD活性、Sestrin2、p-AMPK、Beclin1表达明显升高(t=0.0003~0.0069,均P<0.05).结论 TBHQ预处理可能通过上调Sestrin2,激活AMPK通路,进而使线粒体自噬水平增高,减轻糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤.
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Sestrin2对高迁移率族蛋白B1诱导树突细胞凋亡的保护作用
目的 探讨Sestrin2(SESN2)在高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导树突细胞(DC)凋亡中的作用.方法 将培养的小鼠树突细胞DC2.4分为正常对照组及HMGB1 8、24、48h组(n=4),HMGB1各亚组加入10ng/ml HMGB1培养相应时间;另将DC2.4细胞分为正常对照组及HMGB1组,HMGB1组设1、10、100ng/ml亚组(n=4),予以不同浓度HMGB1刺激48h.采用Western blotting检测各组细胞SESN2、cleaved-caspase-3、Bcl-2蛋白的表达水平,共聚焦激光显微镜检测SESN2在细胞中的定位及表达,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况.将载有过表达空载体NC、沉默空载体NS、过表达病毒载体SESN2 LV-RNA及沉默病毒载体SESN2 siRNA转入DC2.4细胞中(n=4),以100ng/ml HMGB1刺激48h,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,并检测凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、Bcl-2的表达水平.结果 与正常对照组比较,10ng/ml HMGB1刺激24、48h后,以及1、10、100ng/mlHMGB1刺激48h后,DC2.4细胞中SESN2的表达水平均显著上调,差异有统计学意义(P＜0.05).10、100ng/ml HMGB1刺激48h后,DC2.4细胞的凋亡率(分别为17.02％±4.85％、17.48％±4.04％)明显高于正常对照组(7.35％±1.33％,P＜0.05,P＜0.01),而10ng/ml HMGB1刺激8h后DC2.4细胞凋亡率与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).在不同转染组中,100ng/ml HMGB1刺激48h后,SESN2 siRNA组D C2.4细胞凋亡率(65.96％±2.50％)明显高于空载体组(50.01％±2.07％),同时凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3表达明显升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);而SESN2 LV-RNA组细胞凋亡率(35.57％±1.69％)明显低于空载体组(49.04％±4.87％),cleaved-caspase-3表达明显下降,Bcl-2表达明显升高(P＜0.05).结论 SESN2在HMGB1诱导DC2.4细胞的凋亡过程中具有一定保护作用.
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Sestrin2抗氧化应激作用在缺血再灌注中的研究进展
Sestrin2是一种高保守、应激诱导抑制雷帕霉素靶蛋白的重要蛋白分子.作为P53调节哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路抗氧化应激作用的一种重要蛋白分子,Sestrin2可以激活磷酸腺苷依赖蛋白激酶蛋白并磷酸化结节性硬化复合物,进而抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白,可减轻组织因缺血再灌注导致的损伤.近几年,国内外对Sestrin2蛋白分子的研究已有很大的进展,本文就近几年Sestrin2抗氧化应激作用研究进展以及其可能的临床应用进行综述.
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干扰Sestrin2表达对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响
目的 观察干扰Sestrin2表达对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响.方法 用ox-LDL处理HUVEC复制内皮细胞损伤模型.Western blot检测不同浓度ox-LDL处理HUVEC不同时间Sestrin2的蛋白表达水平及转染Sestrin2 siRNA后Sestrin2的蛋白表达水平;流式细胞术检测干扰Sestrin2表达后对ox-LDL诱导的HUVEC凋亡率的影响;Western blot检测干扰Sestrin2表达后对ox-LDL诱导的HUVEC中Caspase-3表达的影响及ox-LDL对HUVEC中JNK通路的影响.结果 不同浓度(20、50和100 mg/L)的ox-LDL处理HUVEC 24 h均能明显上调Sestrin2表达;50 mg/L ox-LDL处理HUVEC不同时间(24 h和48 h)均能明显上调Sestrin2表达,24 h达高峰;转染Sestrin2 siRNA能明显抑制Sestrin2的表达;ox-LDL能明显诱导HUVEC凋亡,转染Sestrin2 siRNA能明显促进由ox-LDL诱导的HUVEC凋亡;ox-LDL能明显诱导p-JNK和p-c-Jun的表达,且SP600125能明显抑制由ox-LDL诱导的Sestrin2表达.结论 ox-LDL通过JNK/c-Jun信号通路诱导Sestrin2表达,干扰Sestrin2表达能明显促进ox-LDL诱导的HUVEC凋亡.
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Sestrin2在miR-19诱导的非小细胞肺癌细胞上皮-间质转化中的表达及六神丸干预研究
目的 探讨Sestrin2在六神丸调控miR-19诱导的非小细胞肺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法 实验分为对照组、miR-19过表达组、六神丸组.对照组为常规血清培养的A549细胞;miR-19过表达组为常规血清培养的过表达miR-19 A549细胞;六神丸组予以六神丸含药血清干预过表达miR-19 A549细胞.48 h后分别以CCK-8检测A549细胞增殖,Transwell小室检测A549细胞迁移能力,实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测miR-19表达,蛋白印迹检测Sestrin2、PTEN以及EMT标记分子E-cadherin、Vimentin的表达.结果 细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测结果显示,六神丸组A549细胞增殖速度较对照组、miR-19过表达组明显减慢;Transwell小室实验显示,六神丸组A549细胞迁移数量较miR-19过表达组、对照组明显减少;qRT-PCR检测结果显示,六神丸组A549细胞中miR-19表达较miR 19过表达组、对照组明显降低;Western blot检测结果显示,与对照组、miR-19过表达组相比,六神丸组A549细胞中Sestrin2、E-cadherin、PTEN表达明显上调,Vimentin表达明显下调.结论 六神丸能够抑制miR-19诱发的人肺腺癌细胞株A549发生EMT,与激活Sestrin2信号通路有关.
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Sestrin1、Sestrin2在子宫内膜异位症组织中的表达及意义
目的 探索应激诱导蛋白家族中Sestrin1、Sestrin2在子宫内膜异位症(EMS)发生、发展过程中的作用,从"类肿瘤"的特点出发研究EMS的发病机制,为EMS的治疗提供新的思路及方向.方法 选取2013年4月至2014年4月就诊于哈尔滨医科大学附属第二医院妇科经术后病理证实为EMS患者的在位内膜、异位内膜35例(实验组)及同期非EMS并经病理证实无内膜疾病患者的子宫内膜30例(对照组),应用免疫组化SP法检测实验组在位内膜、异位内膜及对照组子宫内膜Sestrin1、Sestrin2表达情况.使用SPSS13.0统计软件进行统计学分析.结果 通过免疫组化SP法证实Sestrin1、Sestrin2在实验组在位内膜、异位内膜及对照组子宫内膜中有表达,阳性表达率为25.7%、62.9%、96.7%,表明Sestrin1在EMS异位内膜的表达低于另外两组内膜,且两两比较差异有统计学意义(P<0.05);Sestrin2在实验组异位内膜、在位内膜及对照组子宫内膜阳性表达率为20%、68.6%、96.7%,表明表达在EMS异位内膜的Sestrin2低于另外两组内膜,且两两比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 Sestrin1、Sestrin2通过对细胞生长的影响实现了EMS形成的基础,可能为EMS的早期诊断、靶向治疗、治疗效果及复发风险的评估提供新的理论依据.
