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miR-124a通过抑制TGF-β通路促进人胎盘间充质干细胞向胰腺祖细胞分化
目的 研究miR-124a参与抑制TGFBR1和BMPR1B的转录后调控,及其对人胎盘间充质干细胞(PMSCs)向胰腺祖细胞分化的影响.方法 用慢病毒过表达miR-124a前体,建立PMSCs中过表达miR-124a细胞模型;转染miR-124a反义寡核苷酸,抑制miR-124a表达;real-time PCR分析miR-124a与其调控的靶基因TGFBR1和BMPR1B的表达调控关系;real-time PCR、Western blot和免疫荧光化学染色检测miR-124a过表达后,胰腺祖细胞特征基因和蛋白表达变化.结果 PMSCs中过表达和抑制表达miR-124a,能反向调控其靶基因TGFBR1和BMPR1B的表达;miR-124a过表达后,胰腺祖细胞特异性基因PDX-1、Nkx6.1、NGN3和β细胞特征基因Insulin的表达量显著上升(P＜0.05),PDX-1和Insulin的蛋白表达水平也同样升高.结论 miR-124a可能通过抑制TGFBR1的表达,阻断TGF-β/TGF-β R信号,使细胞发生间质上皮转化,并可能通过抑制BMPR1B的表达阻碍细胞向成骨方向分化,从而 指导胎盘间充质干细胞向胰腺祖细胞分化.
关键词： miR-124a 转化生长因子βⅠ型受体 胰腺祖细胞 胎盘间充质干细胞 分化 -
转化生长因子β1及其Ⅰ型受体在实验性脉络膜新生血管中的表达与意义
目的探讨激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管(CNV)形成过程中转化生长因子β1(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)表达变化趋势及其作用.设计实验性研究.研究对象5组30只雄性BN大鼠.方法BN大鼠单眼视网膜氪激光光凝,诱导CNV形成.分别在光凝后3天,1、2、3、4周摘除眼球,应用免疫组织化学及原位杂交技术检测CNV形成过程中Ⅷ因子相关抗原(FⅧR:Ag)、TGF-β1、TβRⅠ和TGF-β1mRNA的表达及变化.主要指标FⅧR:Ag、TGF-β1、TGF-β1mRNA和TβRⅠ.结果FⅧR:Ag免疫组织化学结果显示,光凝后1周开始形成CNV,3～4周达到高峰.正常BN大鼠TGF-β1、TβRⅠ在视网膜神经节细胞、内核层部分细胞、视网膜色素上皮层表达;TGF-β1mRNA在视网膜神经节细胞、视网膜色素上皮层表达.视网膜光凝后3天～4周,损伤区内FⅧR:Ag阳性染色密度逐渐增加(P＜0.05);TGF-β1、TGF-β1mRNA和TβR Ⅰ阳性染色密度逐渐下降(P＜0.05);三者与FⅧR:Ag阳性染色密度负相关(r=-0.87、-0.87、-0.80,P＜0.05);TGF-β1和TβRⅠ阳性染色密度正相关(r=0.84,P＜0.05).结论光凝区内TGF-β1合成、分泌不足可能是CNV形成和增殖的主要原因之一;TGF-β1在受体水平表现出调节作用,存在由TβRⅠ介导的生物学效应.TβRⅠ表达低下,信号转导减弱,可能也是CNV形成和增殖的一个重要因素.
关键词： 转化生长因子β1 转化生长因子βⅠ型受体 脉络膜新生血管 大鼠 -
5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad7和转化生长因子βⅠ型受体表达的影响
背景:很多实验已证明5-氟尿嘧啶应用于瘢痕疙瘩治疗可收到良好的效果.但作者所查针对5-氟尿嘧啶经由转化生长因子β信号通路作用于瘢痕疙瘩分子机制的报道较少.目的:实验拟观察5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad7和转化生长因子βⅠ型受体表达的影响.设计、时间及地点:细胞观察实验,于2007-02/10在安徽医科大学微生物教研室完成.材料:标本分别取自因瘢痕疙瘩入院的6例整形手术患者.方法:①瘢痕疙瘩组织成纤维细胞原代培养,取4～6代传代细胞加入5个不同浓度5-氟尿嘧啶(10,20,40,80,160 μmol/L)干预24,48,72 h.②待细胞长至80%汇合时,加入5-氟尿嘧啶配成10,20,30 μmol/L 3个药物干预浓度组,每组再加入转化生长因子β1继续培养.设空白对照和单纯加转化生长因子β1(5 μg/L)的阳性对照.主要观察指标:①利用四甲基偶氮唑盐法测定瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖能力.②蛋白免疫印迹检测各组瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad7和转化生长因子βⅠ型受体的表达.结果:①5-氟尿嘧啶浓度为10,20 μmol/L 作用24 h 时未发现成纤维细胞死亡,与空白对照组相比差异无显著性意义(P > 0.05);其他浓度下作用各组均有显著的成纤维细胞死亡现象(P < 0.01).②与空白对照组相比,转化生长因子β1组Smad7表达明显减弱,转化生长因子βⅠ型受体表达则显著增强(P均 < 0.01).③加入5-氟尿嘧啶干预后可显著增强Smad7的表达,且在5-氟尿嘧啶浓度为20 μmol/L 时的表达强(P < 0.01).④不同浓度5-氟尿嘧啶对转化生长因子βⅠ型受体表达无明显影响.结论:5-氟尿嘧啶浓度为10～20 μmol/L 时无细胞毒性,与转化生长因子β1共同培养成纤维细胞,能够提高该细胞转化生长因子β1诱导的Smad7表达,但对于转化生长因子βⅠ型受体的表达没有明显影响.
关键词： 瘢痕疙瘩 氟尿嘧啶 Smad7 转化生长因子βⅠ型受体 组织构建 -
普伐他汀对心脏成纤维细胞转化生长因子βⅠ型受体mRNA表达的影响
目的 观察普伐他汀对醛固酮诱导新生大鼠心脏成纤维细胞转化生长因子βⅠ型受体(TGF-βR Ⅰ)mRNA表达的影响及其机制.方法 采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取新生大鼠心脏成纤维细胞,应用RT-PCR的方法测定TGF-βR Ⅰ mRNA的表达.结果 醛固酮(0.1 μmol·L-1)可诱导心脏成纤维细胞中TGF-βR Ⅰ mRNA的表达,预先24 h给予普伐他汀(0.01、0.1、1 mmol·L-1)能剂量依赖性抑制醛固酮的上述作用,同时,普伐他汀的这种抑制作用可被甲羟戊酸所逆转.结论 普伐他汀可抑制醛固酮诱导的心脏成纤维细胞TGF-βR Ⅰ mRNA表达,其机制可能与甲羟戊酸代谢途径有关.
关键词： 醛固酮 普伐他汀 成纤维细胞 转化生长因子βⅠ型受体 -
TGFβR Ⅰ和TGFβR Ⅱ在肝细粒棘球蚴外囊壁中的表达
目的 肝细粒棘球蚴外囊壁内存在着具有成骨表型潜能的前体细胞,在肝细粒棘球蚴患者钙化外囊壁和非钙化外囊壁中转化生长因子β Ⅰ型受体(Transforming growth factor-β receptor Ⅰ,TGFβR Ⅰ)、TGFβRⅡ的表达有无差异尚无定论.文章旨在了解TGFβR Ⅰ和TGFβRⅡ作为细胞因子TGFβ超家族受体,在肝细粒棘球蚴病患者钙化外囊壁及非钙化外囊壁上受体TGFβR Ⅰ和TGFβRⅡ的表达水平. 方法 收集石河子大学医学院第一附属医院肝胆外科2012年2月至2015年5月肝细粒棘球蚴病手术住院患者45例,取出患者的钙化外囊壁作为试验组(n=45),同一患者的非钙化外囊壁为对照组(n=45).通过对钙化外囊壁和非钙化外囊壁茜素红染色、免疫组化法和qRT-PCR法分别检测同一肝细粒棘球蚴病患者钙化外囊壁及非钙化外囊壁上钙盐沉积水平、受体TGFβR Ⅰ、TGFβRⅡ的表达水平和mRNA表达量. 结果 试验组钙盐沉积阳性率大于对照组(77.78％ vs 31.11％,P＜0.01),受体TGFβR Ⅰ阳性率高于对照组(78.05％ vs37.78％,P＜0.01),受体TGFβRⅡ阳性率亦高于对照组(74.36％ vs 40.48％,P＜0.01).试验组受体TGFβR Ⅰ、TGFβRⅡ的mRNA表达量(6.32±1.72、6.52±2.50)均高于对照组(1.00 ±±0.00、1.00 ±0.00),差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 肝细粒棘球蚴病患者钙化外囊壁上TGFβRⅠ和TGFβRⅡ表达量较高,TGFβ因子通过与受体TGFβR Ⅰ、TGFβRⅡ特异性结合,在肝细粒棘球蚴外囊钙化和外囊炎症反应过程中发挥着重要作用.
关键词： 细粒棘球蚴病 钙化外囊 转化生长因子βⅠ型受体 转化生长因子βⅡ型受体 -
胆囊癌中TβR Ⅰ与细胞增殖及细胞周期的关系
目的 探讨T13R Ⅰ与胆囊癌细胞增殖和细胞周期的关系,分析其在胆囊癌发病中的机制,评价其对胆囊癌预后的价值.方法 用免疫组化法对原发性胆囊癌及胆囊腺瘤、慢性胆囊炎行转化生长因子βⅠ型受体(transforming growth factor β receptor type Ⅰ,TβR Ⅰ)、增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期素E(Cychn E)进行检测,对胆囊癌患者进行随访.结果 胆囊癌中TβR Ⅰ阳性表达率34.29%,显著低于胆囊腺瘤、胆囊炎(P均小于0.05).伴淋巴结和远处转移者TβR Ⅰ阳性表达率明显低于无转移者(P＜0.05),TβR Ⅰ阳性表达率与PCNA LI呈负相关(r=0.4024,p=0.0166).TβR Ⅰ表达阳性者预后比阴性者好(P＜0.05).结论 TβR Ⅰ与胆囊癌细胞增殖和细胞周期关系密切,是判断胆囊癌发生发展的重要生物学标志.TβR Ⅰ低表达而导致TGF-β负性生长调控作用的逃逸,可能是胆囊癌变过程中的重要机制.TβR Ⅰ是判断胆囊癌预后的良好指标.
关键词： 胆囊肿瘤 转化生长因子βⅠ型受体 发病机制 预后 -
转化生长因子βⅠ型受体在BPH组织中的表达及意义
目的:探讨转化生长因子βⅠ型受体(TGF-βR1)在良性前列腺增生症(BPH)组织中表达的意义.方法:采用免疫组织化学方法研究TGF-βR1在31例BPH组织中的表达.结果:TGF-βR1在BPH上皮、间质组织中的表达率显著高于正常前列腺组织(P＜0.05).结论:TGF-βR1在BPH组织中表达增高,尤其在上皮组织中的过度表达可能影响了TGF-β对前列腺上皮细胞的抑制作用,可能参与了BPH的病理变化过程.
关键词： 前列腺增生症 转化生长因子βⅠ型受体 免疫组织化学 -
转化生长因子β1及其Ⅰ型和Ⅱ型受体在子宫内膜腺癌中的表达及意义
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)在子宫内膜腺癌组织中的表达情况及临床意义.方法 采用免疫组织化学的方法 检测48例子宫内膜腺癌、19例子宫内膜非典型增生、20例正常增殖期子宫内膜组织中TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白的表达情况,并结合临床资料进行分析.结果 TGF-β1、TβRⅠ在子宫内膜腺癌、子宫内膜非典型增生中的表达明显低于正常增殖期子宫内膜(P＜0.01),TβRⅡ在子宫内膜腺癌、子宫内膜非典型增生及正常增殖期子宫内膜之间的表达差异无统计学意义(P＞0.05).TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ在中、低分化癌组织中的表达明显低于高分化癌组织(P＜0.05,P＜0.01),但三者的表达与临床分期、肌层浸润、淋巴结转移无明显关系(P＞0.05).正常增殖期子宫内膜、子宫内膜非典型增生组织中TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ三者之间表达呈一致性,两两均呈正相关,但子宫内膜腺癌组织中TβRⅠ、TβRⅡ的表达缺乏相关性.结论 TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ表达的异常共同参与了子宫内膜腺癌的发生和发展,但TβRⅠ表达的下调可能是始动因素,起着更关键的作用.
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微小RNA鄄101在心房颤动心房纤维化中的作用
目的：探讨微小RNA-101（miRNA-101）在心房颤动心房纤维化中的作用。方法：59例开胸手术患者（心脏瓣膜病47例，先天性心脏病12例），分为房颤组30例、窦律组29例。qPCR及锁定核苷酸原位杂交技术检测两组右心耳 miRNA-101表达；qPCR 检测两组右心耳转化生长因子βⅠ型受体（ TGFβRⅠ）、Ⅰ型胶原（COL1）mRNA 表达；免疫印迹法检测两组右心耳 TGFβRI、COL1蛋白表达；Masson 染色观察两组右心耳胶原的沉积。结果：房颤组右心耳 miRNA-101表达明显低于窦律组（P ＜0．05），原位杂交显示miRNA-101主要分布于心房结缔组织，房颤组 miRNA-101表达较窦律组下降24．9％；房颤组 TGFβRⅠmRNA表达与窦律组无明显差异（P ＞0．05），但蛋白表达明显高于窦律组（P ＜0．05）；COL1mRNA及蛋白表达均明显高于窦律组（P ＜0．05）；房颤组右心耳胶原沉积明显多于窦律组（P ＜0．05）。结论：miRNA-101下调在心房颤动心房纤维化过程中起重要作用，其可能通过调控TGFβRⅠ而参与心房纤维化。
关键词： 心房颤动 微小RNA-101 心房纤维化 转化生长因子βⅠ型受体 -
转化生长因子β型受体Ⅰ基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其在人胚成纤维细胞中的表达
目的:构建转化生长因子β型受体Ⅰ (transforming growth factor beta receptor Ⅰ,TGFβRⅠ)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体并在人胚肺成纤维细胞株MRC-5上鉴定其沉默效应.方法:构建4种针对人TGFβR Ⅰ基因不同干扰靶点的慢病毒干扰载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定,将筛选出的4种有效重组慢病毒干扰载体和其它辅助质粒一起共转染293T细胞并测定病毒滴度.后将4种重组的慢病毒干扰载体分别感染MRC-5细胞,采用Real-time PCR和Western blot检测它们对靶基因的沉默效率.结果:经双酶切鉴定和DNA测序,证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体且插入的序列正确.4种重组慢病毒干扰载体经293T细胞成功包装后,其病毒滴度分别为:siRNA-1 6.37×107 TU/ml、siRNA-2 1.65×108 TU/ml、siRNA-3 4.50×108 TU/ml、siRNA-4 2.31×108 TU/ml,阴性对照组载体包装后的病毒滴度为:1.79×109 TU/ml.4种重组慢病毒干扰载体感染MRC-5细胞的效率均为93％左右.与正常对照组和阴性对照组比较,在感染4种重组慢病毒干扰载体(siRNA-1～4)后,MRC-5细胞内TGFβR Ⅰ mRNA表达水平均明显下降(P=0.000),其中TGFβRⅠ-siRNA-2下降明显,沉默效率好.Western blot结果与qRT-PCR结果一致,4种重组慢病毒干扰载体均能使MRC-5细胞内TGFβR Ⅰ蛋白表达明显下降(=0.000),且TGFβR Ⅰ-siRNA-2干扰效率大.结论:筛选并构建了能有效沉默TGFβR Ⅰ基因的佳RNAi重组慢病毒载体——TGFβR-siRNA-2,从而为后续研究奠定基础.
关键词： RNA干扰 慢病毒载体 转化生长因子βⅠ型受体 人胚肺成纤维细胞 -
阻断TGF-β/TGF-βRⅠ通路对ATDC5细胞增殖、分化及细胞外基质的影响
目的 研究转化生长因子βⅠ型受体(transforming growth factor beta type Ⅰ receptor,TGF-βR Ⅰ)阻断剂SB-505124对软骨细胞增殖、分化及细胞外基质的影响与机制.方法 利用Western blot检测不同浓度的SB-505124处理后,前软骨细胞系ATDC5中p-Smad2/3的变化.MTT法检测SB-505124处理对ATDC5细胞生长、增殖的影响及时间、浓度依赖性效应.Western blot检测c-Myc蛋白水平的变化.Real-time PCR检测SB-505124处理后软骨分化、细胞外基质合成及降解相关分子CollagenⅡ、Aggrecan及Adamts5表达与变化,并利用阿尔新蓝染色法检测SB-505124处理对ATDC5细胞中蛋白聚糖合成的影响.结果 Western blot检测结果示:SB-505124处理ATDC5细胞明显抑制TGF-β1激活的p-Smad2/3,并呈浓度依赖性；MTT检测结果示:SB-505124浓度和时间依赖性的抑制ATDC5细胞增殖；Real-time PCR检测结果示:SB-505124处理明显抑制ATDC5细胞中CollagenⅡ、Aggrecan的表达,同时上调了Adamts5的表达；阿尔新蓝染色结果提示SB-505124处理明显抑制ATDC5细胞中蛋白聚糖的合成.结论 利用SB-505124阻断内源性TGF-β信号,可抑制软骨细胞增殖、分化及细胞外基质的合成,同时促进细胞外基质的降解.
关键词： 转化生长因子βⅠ型受体 SB-505124 ATDC5 细胞增殖 细胞外基质 -
TGF-β1和TβRⅠ在胆囊癌发病及预后中的作用
目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)和转化生长因子βⅠ型受体(TβRⅠ)与胆囊癌细胞增殖和细胞周期的关系,分析其在胆囊癌发病中的机理,评价其对胆囊癌预后的价值.方法 用免疫组化方法检测原发性胆囊癌、胆囊腺瘤及慢性胆囊炎组织中TGF-β1、TβRⅠ、增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期素E(cyclin E)的表达,对胆囊癌患者进行随访.结果 胆囊癌TGF-β1表达阳性率为57.14%(20/35),显著高于胆囊腺瘤[20.00%(2/10)]和胆囊炎[10.00%(1/10)],P＜0.01,TGF-β1表达阳性率在Nevin各分期间和是否伴淋巴结及远处转移患者中差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),TGF-β1表达阳性率与PCNA LI和cyclin E表达阳性率呈正相关(r=0.523 2,P=0.001 3; r=0.406 5,P=0.015 4).胆囊癌中TβRⅠ表达阳性率为34.29%(12/35),显著低于胆囊腺瘤[70.00%(7/10)]和胆囊炎[70.00%(7/10)],P＜0.05,伴淋巴结和远处转移者 TβRⅠ表达阳性率明显低于无转移者(P＜0.05),TβRⅠ表达阳性率与PCNA LI呈负相关(r=-0.402 4,P=0.016 6).TGF-β1和TβRⅠ表达与胆囊癌预后密切相关,TGF-β1阳性表达者预后比阴性者差(P＜0.01),TβRⅠ阳性表达者预后比阴性者好(P＜0.05).结论 TGF-β1和TβRⅠ表达与胆囊癌细胞增殖和细胞周期关系密切,是判断胆囊癌发生、发展的重要生物学标志.TβR Ⅰ低表达而导致TGF-β1负性生长调控作用的逃逸,以及TGF-β1的促肿瘤形成作用,可能是胆囊癌变过程中的重要机理.TGF-β1和TβR Ⅰ是判断胆囊癌预后的良好指标.
关键词： 胆囊癌 转化生长因子-β1 转化生长因子βⅠ型受体 发病机理 预后 -
转化生长因子βⅠ型及Ⅱ型受体mRNA在子宫内膜腺癌中的表达及临床意义
目的:检测转化生长因子βⅠ型受体(TβRⅠ)及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)mRNA在正常子宫内膜组织及子宫内膜样腺癌组织中表达水平的差异,以探讨TβRⅠ及TβRⅡ在子宫内膜癌组织中的临床意义.方法:利用RT-PCR方法检测15例正常子宫内膜组织及50例子宫内膜样腺癌组织中TβRⅠ及TβRⅡ的mRNA表达水平,比较这两种受体在正常子宫内膜组织及子宫内膜样腺癌组织中表达的差异,并分析这两种受体的表达水平与临床病理参数之间的关系.结果:TβRⅠ及TβRⅡmRNA在子宫内膜样腺癌组织中的表达水平均明显低于正常子宫内膜组织(P＜0.05),且TβRⅠ及TβRⅡmRNA的表达水平与子宫内膜样腺癌的临床病理分期、肌层浸润深度及淋巴结转移显著相关(P＜0.05),而与组织学分级未见明显相关(P＞0.05).结论:TβRⅠ及TβRⅡ基因转录水平表达的异常可能与子宫内膜癌的发生和发展密切相关,检测子宫内膜样腺癌组织中TβRⅠ及TβRⅡmRNA的表达水平对评价子宫内膜癌的预后有重要价值,可能为将来子宫内膜癌的分子靶向治疗提供新的理论依据,从而寻找出潜在的治疗靶点.
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反义TβRI对实验性大鼠肝纤维化的影响
目的:观察反义转化生长因子βⅠ型受体真核表达质粒对实验性大鼠肝纤维化的影响.方法:构建大鼠反义真核细胞表达质粒,导入大鼠肝纤维化模型体内,通过Ⅰ型胶原的免疫组化以及VG染色观察两种反义质粒联合作用对大鼠肝纤维化的影响.结果:反义TβRI表达质粒可减少受损肝脏中Ⅰ型胶原的沉积(P＜0.05),并可使受损肝脏的病理形态有一定改善(P＜0.05).结论:反义TβRI真核表达质粒对肝纤维化的发展有一定的干预作用.
关键词： 反义 肝纤维化 转化生长因子βⅠ型受体
