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P38 MAPK磷酸化水平增高参与HPC降低MCAO所致小鼠缺血性脑损伤
目的 探讨P38丝裂原激活蛋白激酶(P38 MAPK)磷酸化和蛋白表达水平在低氧预适应(HPC)降低脑中动脉阻塞(MCAO)所致缺血性脑损伤中的变化.方法 利用已建小鼠HPC-MCAO模型,将健康雄性BALB/c小鼠随机分为常氧假手术(H0 Sham)、HPC假手术(H4 Sham)、常氧缺血(H0)和HPC缺血(H4)4组,应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、Nissl染色等方法 观察脑损伤情况,应用Western blot并结合Gel Doc凝胶成像系统,定量检测小鼠脑组织内P38 MAPK磷酸化和蛋白表达水平的变化.结果 HPC可明显减小MCAO所致的脑梗死体积(P＜0.05).与H0 Bhaln相比,缺血组小鼠皮层缺血核心区和半影区P38 MAPK磷酸化水平显著升高(P＜0.05,n=6),HPC可进一步增加缺血半影区和对侧皮层组织中P38 MAPK磷酸化水平(P＜0.05,n=6).各组间P38MAPK蛋白表达量水平无明显变化.结论 P38 MAPK可能参与了HPC降低MCAO所致小鼠缺血性脑损伤的作用.
关键词： 脑低氧预适应 脑中动脉梗塞 p38丝裂原激活蛋白激酶 磷酸化水平 蛋白表达量 -
低氧预适应小鼠脑组织内P38 MAPK磷酸化水平增高
目的 探讨P38丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,P38 MAPK)在小鼠脑低氧预适应形成过程中的作用.方法 用成年雄性BALB/c小鼠制备小鼠整体低氧预适应模型,小鼠随机分为正常对照(H0)、早期(H1～H4)和延迟性(H5～H6)低氧预适应等7组;应用Western bolt并结合Gel Doc凝胶成像系统,定量检测小鼠脑组织内P38 MAPK磷酸化水平和蛋白表达量.结果 与H0组小鼠相比,H2～H6组的海马和皮层及H3～H6组的下丘脑中P38 MAPK磷酸化水平明显增高 (P＜0.05,每组n=6);H1～H6组的皮层、海马和下丘脑中P38 MAPK蛋白表达量无明显变化.结论 P38 MAPK磷酸化激活而非蛋白表达量的变化可能参与了小鼠脑低氧预适应的发生、发展过程.
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低氧预适应对小鼠缺血脑的保护及其p38 MAPK机制的实验研究
目的 观察低氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC)降低脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)所致小鼠缺血性脑损伤的作用,探讨在HPC脑保护作用中p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)的变化.方法 60只健康雄性BALB/c小鼠(18 g～22 g,8周～10周)分为:常氧假手术组(H0 sham),常氧缺血组(H0),HPC假手术组(H4 sham)和HPC缺血组(H4),每组15只.运用整体低氧预适应模型和脑中动脉梗死缺血模型,结合神经行为学评价、氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、免疫组织化学和蛋白印迹(Western blotting)技术,观察HPC对小鼠脑缺血损伤的影响以及皮质组织内p38 MAPK磷酸化水平和蛋白表达量的变化.结果 研究发现,HPC可明显改善小鼠缺血后神经行为学表现,减小MCAO导致的鼠脑梗死面积,减轻半影区神经元的丢失,降低缺血区水肿率和密度值;与H0假手术组相比,缺血组小鼠皮质半影区p38 MAPK磷酸化水平显著增高;与常氧缺血组小鼠皮质半影区相比,HPC缺血组小鼠皮质半影区内p38 MAPK磷酸化水平增高更加明显.结论 p38MAPK信号转导通路可能参与了HPC对小鼠局灶性缺血脑的保护作用.
关键词： 低氧预适应 脑中动脉阻塞 p38丝裂原激活蛋白激酶 磷酸化水平 -
氯胺酮对小鼠海马脑片ERK1、ERK2和CREB磷酸化水平的影响
海马组织神经元细胞外信号调节激酶(ERK)参与调节突触可塑性和记忆的形成[1,2];活化的ERK从胞浆易位到胞核,激活核糖体S6蛋白激酶,然后使转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在133位的丝氨酸磷酸化被激活,活化的CREB参与了长时程增强的维持和记忆形成[3-6].有研究表明,氯胺酮可抑制记忆功能[7,8].ERK和CREB是否与氯胺酮抑制记忆功能的机制有关尚不清楚.本研究拟通过观察氯胺酮对小鼠海马脑片ERK1、ERK2和CREB磷酸化水平的影响,从分子水平探讨其抑制记忆功能的机制.
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海马LTP/LTD诱导中CaMKⅡ磷酸化水平的变化
长时程增强(LTP)/长时程压抑(LTD)是由强直/低频刺激作用于兴奋性突触传递通路诱发的一种突触传递效率长时间增强/减弱的现象,两者均被认为是很好的研究学习和记忆机制的电生理模型,特别是在大脑皮层和海马等脑区.不同的是一般认为LTP与新的学习记忆有关,而LTD与清除旧记忆有关. 在LTP产生机制中基因突变和抑制剂的实验已经表明:Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的激活在海马LTP诱导中起关键作用[1].有证据表明CaMKⅡ也参与了LTD的诱导.在电生理方法诱导海马LTP/LTD的同时,是否一定伴随有CaMKⅡ表达的变化还不清楚.因此,本研究采用电生理手段记录大鼠海马CA1区场电位变化并结合免疫组织化学技术同步测定海马脑片CaMKⅡ活性,探讨了LTP/LTD诱导与CaMKⅡ磷酸化水平的关系.
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SHP-1基因的研究进展
含有SH2结构域的酪氨酸磷酸酶SHP-1主要表达于造血细胞,作为关键的调控因子调节细胞内的磷酸化水平.SHP-1已被认为是在淋巴瘤、白血病和其他肿瘤中的抑癌基因,SHP-1基因甲基化导致SHP-1蛋白表达的减少和缺失被认为是淋巴瘤、白血病细胞株和其他肿瘤细胞的典型特征.相反,SHP-1蛋白在非肿瘤细胞中可以表现为正常表达或过度表达.SHP-1调节机能障碍可导致细胞的过渡增长,从而表现为各种肿瘤的发生.
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UCF -101对大鼠脑缺血再灌注损伤p38 MAPK 通路的影响
目的：探讨UCF-101在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及分子机制。方法采用线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉闭塞（ middle cerebral arteryocclusion ， MCAO）模型，随机分为假手术组、缺血再灌注组和UCF-101组，术后观察神经功能缺损症状，TUNEL法检测神经元凋亡，免疫组化法及 Western blot 检测脑皮层神经元磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶（ mitogen activated protein kinase ， MAPK）蛋白的表达。结果 UCF-101改善大鼠脑缺血再灌注后的神经功能缺损症状，减少细胞凋亡（P＜0．05）；与假手术组比较，大鼠缺血后磷酸化p38 MAPK表达水平增加；与脑缺血组比较，UCF-101组磷酸化p38 MAPK表达水平有所降低（ P＜0．05）。结论UCF-101对脑缺血再灌注损伤有保护作用，其机制可能与p38 MAPK信号通路有关。
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Synapsin在正常发育小鼠视皮层的表达
背景 视觉发育可塑性与弱视治疗时间和方法的选择密切相关,synapsin(突触素)作为一种突触前特异性蛋白家族,在视觉发育可塑性中的作用尚未明确. 目的 动态观察正常小鼠视皮层内synapsin蛋白表达水平(T-synapsin)及其磷酸化水平(p-synapsin)随生长和发育发生的量的变化.方法 选用清洁级健康新生C57BL/6小鼠42只,分别于出生后第7、14、21、28、35、42、60天取左右两侧视皮层,每个时间点选6只小鼠.采用Western bolt法检测不同鼠龄小鼠视皮层内不同亚型synapsin的表达量及其位点1的磷酸化水平. 结果 正常C57BL/6小鼠视皮层中synapsin的表达随生长和发育发生动态变化,出生后第7、14、21、28、35、42天,小鼠视皮层中T-synapsin Ⅰ a/b的表达量分别为成年小鼠(出生后第60天,P60)表达量的(21.32±3.27)％、(56.27±10.18)％、(77.05±10.05)％、(83.75± 10.52)％、(94.69±11.46)％和(98.75±5.86)％,不同鼠龄小鼠视皮层中T-synapsin Ⅰ a/b表达量的总体比较差异有统计学意义(F=69.538,P＜0.001),其中P7、P14、P21、P28组表达量明显低于成年组,差异均有统计学意义(P＜0.05),P35、P42组与成年组相比差异均无统计学意义(P=0.280、0 798);不同亚型T-synapsin在视皮层中的表达趋势随小鼠的生长和发育略有不同,其中T-synapsinⅡa、Ⅲa增长相对缓慢,P60时仍呈增长趋势,不同鼠龄间T-synapsinⅡa、Ⅱb、Ⅲa表达的总体比较差异均有统计学意义(F=42.492、55.595、39.172,P＜0.001);p-Synapsin Ⅰ a/b的表达在出生后随小鼠的发育而逐渐增高,P21左右达高峰,为成年小鼠磷酸化水平的(2.86±0.17)倍,此后迅速下降,成年后维持低磷酸化水平,不同鼠龄间小鼠视皮层中p-synapsin Ⅰ a/b表达量的总体比较差异有统计学意义(F=22.620,P＜0.001).结论 小鼠视皮层中synapsin的表达量随生长和发育发生的动态变化与视觉发育关键期的起始和终止在时间上具有一定的同步性,synapsin可能参与视觉发育敏感期视皮层神经元可塑性的调节.
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新疆玫瑰花提取物体外降糖活性?
目的：评价玫瑰花提取物的体外降糖活性，研究玫瑰花多酚作用的胰岛素信号通路并阐明其降糖作用机制。方法采用脂质体介导的质粒转染法构建蛋白酪氨酸磷酸酶-1B( PTP1B)蛋白过表达的CHO-K1细胞模型，通过蛋白印迹分析法( Western blotting)研究玫瑰花多酚对细胞内信号分子蛋白表达量的影响。结果体外玫瑰花提取物抑制PTP1B酶活性，半数抑制浓度( IC50)为62.31 ng.mL－1。玫瑰花提取物可提高细胞葡萄糖消耗，与阳性对照药作用相当；在细胞内可明显提高磷酸化的胰岛素受体底物1( IRS-1)、磷脂酰肌醇依赖性激酶1( PDK1)、蛋白激酶B( AKT)以及糖原合成激酶3β( GSK-3β)蛋白表达量。结论玫瑰花提取物对PTP1B有良好的抑制活性，可促进葡萄糖消耗，具有潜在降糖活性；玫瑰花提取物通过增加IRS-1、下游信号分子PDK1、AKT以及GSK-3β蛋白的磷酸化水平来激活PI3K/AKT胰岛素信号通路，从而促进胰岛素信号传导和糖原合成，达到降低血糖的效果。
关键词： 玫瑰花提取物 降糖活性 葡萄糖消耗 磷酸化水平 PI3K/Akt信号通路 -
NF2基因及其蛋白merlin的生物学研究进展
NF2基因是一种瘤抑制基因,其失活可导致蛋白质的变性并可诱导肿瘤的发生.其编码的merlin蛋白与细胞的运动和增殖有着较密切的关系,磷酸化使merlin蛋白丧失了抑制肿瘤生长的能力.通过对NF2及merlin蛋白的研究,为研制抗肿瘤药物或干预的靶点提供其理论基础.
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低氧预适应小鼠脑内ERK1/2磷酸化水平和蛋白表达量的改变
目的:初步探讨细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinases,ERK1/2)在脑低氧预适应发生发展过程中的作用.方法:按已建小鼠整体低氧预适应模型,将BALB/C小鼠(18～22 g,雌雄不限)随机分为正常对照(H0)、早期(H1-H4)和延迟性(H5-H6)低氧预适应等7组(每组至少6只动物).应用SDS-PAGE和Westem blot等生化技术,并结合Gel Doc凝胶成像系统,半定量检测小鼠脑组织内ERK1/2的磷酸化水平和蛋白表达量.结果:①早期低氧预适应形成过程中,随低氧暴露次数的增加(H1-H4),小鼠海马和皮层组织内ERK1/2磷酸化水平显著降低(P<0.05,n=6),而ERK1/2蛋白表达量并无显著变化;②延迟性低氧预适应中(H5-H6),小鼠大脑皮层和海马组织内ERK1/2的蛋白表达量显著降低(P<0.05,n=6).结论:ERK1/2的活性降低(磷酸化水平降低),以及ERK1/2蛋白表达量下调可能分别参与了脑早期低氧预适应和晚期延迟性低氧预适应的发生发展过程.
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胆固醇合成抑制剂洛伐他汀对MCF-7乳腺癌细胞MAPK活性的影响
目的探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀对MCF-7乳腺癌细胞丝裂泵活化蛋白激酶MAPK活性的影响. 方法 4 、8、16 μmol/L终浓度的洛伐他汀处理上皮来源的MCF-7乳腺癌细胞, Western blotting分析ERK1和p38MAPK蛋白表达,激酶活性分析ERK1和p38MAPK的磷酸化水平. 结果不同剂量的洛伐他汀处理48～72 h,对ERK1蛋白表达无显著影响,但在72 h后能下调p38MAPK蛋白表达,同时洛伐他汀处理48～72 h均能明显降低ERK1和p38MAPK磷酸化水平,二者具有相同趋势. 结论洛伐他汀处理MCF-7乳腺癌细胞可能通过抑制细胞的甲羟戊酸途径,或影响胞内酪氨酸激酶磷酸化水平等,下调细胞MAPK活性.
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参归仁合剂对产后抑郁大鼠雌激素和额叶p-CREB及p-ERK1/2的影响
目的 探讨补虚化淤方药参归仁合剂对产后抑郁大鼠模型雌激素(E2)的水平、额叶环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白磷酸化水平表达的影响.方法 将25只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、参归仁高、低剂量组(14.0、3.5 g·kg-1)、左洛复(盐酸舍曲林)对照组(4.5 mg·kg-1).采用灌胃给药方式,连续30 d.分别取血、额叶组织,采用放射免疫法检测大鼠的E2水平,采用免疫印迹法检测额叶p-CREB、p-ERK1/2的表达水平.结果 与正常组比较,模型组大鼠血清中E2、p-CREB、p-ERK1/2表达的水平明显降低;与模型组比较,参归仁高、低剂量组和左洛复组的额叶p-CREB的表达量明显升高,参归仁低剂量组和左洛复组的额叶p-ERK1/2表达量升高.结论 参归仁合剂能够明显提高PPD大鼠的E2水平,促进额叶p-CREB、p-ERK1/2的表达上调.
