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人乳头瘤病毒16型E7蛋白的原核表达与鉴定
本研究在大肠杆菌BL21中融合表达人乳头瘤病毒16型E7蛋白,并初步评价其应用价值.采用PCR技术扩增出HPV16 E7基因,将其克隆进原核表达载体pGEX6p-1,转化至大肠杆菌BL21,利用IPTG进行诱导表达.以纯化的融合蛋白作为检测抗原建立间接ELISA方法,用于检测重组李斯特菌(Lm1-2-E7)免疫小鼠后的E7血清抗体水平.在25℃,0.5mM IPTG诱导下,HPV16 E7蛋白在大肠杆菌BL21中获得表达,融合蛋白以可溶性形式存在,Western blot结果显示其与HPV16 E7单克隆抗体发生特异性反应.二次免疫后小鼠血清经间接ELISA结果表明E7特异性抗体滴度为1:200.结果表明GST-E7融合蛋白具有较强的免疫活性.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 E7蛋白 原核表达 蛋白质印迹 ELISA -
人乳头瘤病毒16型E6和E7基因及其突变体转化活性的研究
为筛选出可用于研制HPV治疗性疫苗的HPV16型E6和E7基因突变体,故将HPV16型原型株(德国株)E6和E7基因及其各种突变体分别转染Balb/c3T3细胞,观察转染后的细胞在软琼脂培养中的集落形成能力和在裸鼠体内的成瘤能力.结果表明,单独转染和共转染HPV16野生型E6和E7基因的Balb/c3T3细胞系,在软琼脂中呈集落样生长,并在裸鼠体内成瘤;而转染E6基因突变体mE6(50G)、E7基因的两种突变体mE7-1(24G26G)和mE7-3(24G26G67R)以及共转染mE6和mE7-1的Balb/c3T3细胞,在软琼脂培养中极少形成集落,也不能在裸鼠体内成瘤.提示经结构改造后的HPV16 E6和E7基因已失去了对Balb/c3T3细胞的转化活性,而保留了免疫原性,可用于HPV16相关肿瘤治疗性疫苗的构建.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 诱变 恶性转化 Balb/c3T3细胞 -
采用杆状病毒表达系统表达EGFP标记的HPV-16L1病毒样颗粒
目的 制备增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的人乳头状瘤病毒16型(HPV-16)病毒样颗粒,为研究HPV-16L1的生物学活性提供一种方法.方法 采用Xbal+HindⅢ双酶切pGEM-T-HPV-16质粒,获得HPV-16L1基因片段,用PCR法从pEGFP质粒中扩增EGFP基因片段,NcoⅠ+SalⅠ双酶切,依次克隆入杆状病毒转移载体,获得重组pFB-EGFP-HPV-16L1转移载体;在DH1OBac内通过转座子Tn7的介导,获得重组Ac-EGFP-HPV-16L1杆状病毒;感染Sf-9昆虫细胞;荧光显微镜、激光共聚焦显微镜和免疫组织化学法确定融合蛋白的荧光特性及细胞学定位;利用Western blot分析融合蛋白的表达;电子显微镜观察病毒样颗粒(VLP)的形成;利用小鼠红细胞凝集试验及凝集抑制试验分析生物学活性.结果 重组pFB-EGFP-HPV-16L1辅助表达载体及重组杆状病毒中EGFP-HPV-16L1融合基因构建正确;荧光显微镜和激光共聚焦显微镜证实感染重组杆状病毒Ac-EGFP-HPV-16L1的Sf-9细胞核内可见耀眼的绿色荧光,免疫组织化学证实EGFP-HPV-16L1融合蛋白主要位于Sf-9细胞核内;Western blot证实EGFP-HPV-16L1融合蛋白相对分子质量(Mr)为83×103,与理论值一致;透射电子显微镜观察发现感染重组Ac-EGFP-HPV-16L1杆状病毒的Sf-9细胞核内和裂解上清内均可发现大量形态均一的VLP形成;小鼠红细胞凝集试验证实EGFP-HPV-16L1融合蛋白可引起小鼠红细胞凝集,且可被抗HPV-16L1单克隆抗体抑制.结论 杆状病毒表达系统表达的EGFP标记的HPV-16L1蛋白既能自组装成病毒样颗粒、具有构象依赖性生物学活性,又能发射易于检测的绿色荧光,有可能用于HPV-16L1蛋白的生物行为研究,并实时可视化追踪其在宿主细胞内的转运过程.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 重组杆状病毒 增强型绿色荧光蛋白 病毒样颗粒 融合蛋白 -
HPV-16-11 L1双价重组杆状病毒的构建及VLP形成
目的 将本地区流行株HPV-16 L1基因与HPV-11 L1基因双表达于杆状病毒昆虫细胞表达系统,组装成类病毒颗粒(viruslike particles,VLP).为研制同时预防宫颈癌和尖锐湿疣等多种疾病的HPV-16-11型基因工程疫苗奠定基础.方法 对本地流行株HPV-16 L1基因进行亚克隆,构建pBluescript-HPV-16L1克隆质粒,并对其测序.再将质粒中HPV-16 L1基因切下,连接到pFastBacDual的强启动子phol后;从克隆质粒Psp73-HPV-11 L1切下HPV-11 L1,连接到pFastBacDual的弱启动子p10后,利用Bac to Bac系统在昆虫细胞Sf9中表达外源蛋白.SDS-PAGE和Western blot鉴定HPV-16 L1和HPV-11 L1蛋白的表达量及特异性,电镜观察昆虫细胞内VLP的存在.结果 酶切和PCR法证实pFastBacDual-HPV-16 L1-HPV-11 L1转移质粒连接正确,转染昆虫细胞Sf9后,检测到HPV-16和HPV-11L1特异蛋白,两种蛋白的相对分子质量(Mr)相近,约56×103;电镜观察到了VLP.结论 本研究利用Bac to Bac系统构建Bacmid/HPV-16-HPV-11 L1,转染到Sf9昆虫细胞后重组外源蛋白得到高效表达,并经电镜证实昆虫细胞内存在较大量VLP,用此VLP免疫BALB/c小鼠后产生抗L1蛋白的抗体.共表达HPV L1蛋白可能为预防多型别HPV感染提供新途径.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 人乳头状瘤病毒L1型 L1基因 共表达 类病毒颗粒 杆状病毒 -
98例宫颈癌人乳头状瘤病毒16型E6基因突变及多态性分析
目的 研究湖北地区宫颈癌患者人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E6基因点突变分布及频率,与国内外其他研究人员发现的E6突变进行对比,分析E6突变在宫颈癌发生中的意义.方法 从宫颈癌患者手术切除标本中提取组织DNA,用HPV16 E6特异性引物进行PCR扩增,对扩增的E6基因片段进行测序分析.结果 在35例宫颈癌组织DNA中有18例发生E6基因178位核苷酸的突变,变突频率为51.43%,相应核苷酸改变为Asp→Glu,442位核苷酸有4例发生核苷酸序列的改变,突变频率为11.43%,另有10例发生1～2个核苷酸序列的改变.结论 湖北地区98例宫颈癌患者人乳头状瘤病毒E6基因存在高频率的178和442位核苷酸突变,一些为新发现的核苷酸序列的突变,这些突变在宫颈癌发生中的作用有待于进一步研究.
关键词： 宫颈癌 人乳头状瘤病毒16型 序列分析 突变 -
新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型上游调控区DNA多态性分析
目的 探讨新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(human papillomavirus 16,HPV-16)上游调控区(upstream regulatory region,URR)的变异及其与新疆维吾尔族妇女宫颈癌发生的关系.方法 从19份中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取DNA,以此DNA为模板,PCR扩增HPV-16 URR DNA片段,PCR产物直接测序或克隆后测序,分析新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织HPV-16 URR DNA多态性.结果 PCR检测结果显示宫颈癌组织中HPV-16URR阳性率为89.47%(17/19);测序和序列分析表明,与HPV-16原型比较,HPV-16 URR核苷酸多处发生变异,URR在核苷酸水平上形成11种突变模式(XJU-1～XJU-11),XJU-1和XJU-4突变模式各占23.53%(4/17),其余各突变模式均占5.88%(1/17),各模式与HPV-16 URR原型比较,同源性在98.50%～99.68%之间.在各位点的突变中,7192位(G→T)、7520位(G→A)的突变(100%,17/17)在新疆地区趋于恒定,该两处突变在亚裔美洲型(AA)中普遍存在,与病毒感染及宫颈癌发生相关;7729位(A→C)、7843位(A→G)、7792位(C→T)的突变可显著提高启动子的转录活性;其余突变尚未见报道,部分突变为新疆地区分离的HPV-16 URR所特有.结论 中国新疆南部HPV-16 URR基因发生变异,HPV-16 URR的突变与HPV-16的系统发生以及新疆维吾尔族妇女高发宫颈癌存在一定关系.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 宫颈癌 上游调控区 多态性 -
宿主p53基因第4外显子72位密码子多态性（Pro/Arg）与HPV16感染的相关性研究
目的：研究宿主p53基因密码子72多态性（Pro/Arg）在HPV16感染者和正常健康人群中的分布情况。方法采用 TaqMan SNP Genotyping Assays 方法进行 p53基因密码子72（Pro/Arg）多态性分析。结果 p53基因密码子72（Pro/Arg）突变的基因型和等位基因频率在HPV16感染组和对照组中差异无统计学意义（P＝0.30和P＝0.88）。不同遗传模型分析显示，p53基因密码子72（Pro/Arg）多态性在HPV16感染组和对照组中差异无统计学意义（P 0.12～0.88）。结论本研究未发现宿主p53基因密码子72（Pro/Arg）多态性与HPV16感染相关，结合其他报道数据，推测该突变可能在宫颈正常细胞向癌症细胞转化中起到重要作用。
关键词： 基因 P53 多态性 单核苷酸 人乳头状瘤病毒16型 -
宫颈癌患者人乳头状瘤病毒16型感染与P53基因表达及临床意义
目的 探讨宫颈癌中人乳头状瘤病毒(HPV)16型感染和P53基因表达情况,并探讨两者之间的交互作用.方法 收集119例宫颈鳞癌患者为病例组,124例经检查证实无宫颈癌病变的患者为对照组;采用PCR及免疫组化法检测HPV16 DNA及P53基因的表达情况.结果 HPV16型感染阳性率病例组88.7％,对照组5.2％,两组比较差异有统计学意义(x2=173.4,P＜0.05),P53基因表达阳性率病例组67.4％、对照组11.3％,两组比较差异有统计学意义(x2 =80.1,P＜0.05);多元回归模型结果显示,HPV16型感染及P53基因表达呈现阳性均显著增加宫颈癌的发病风险,OR为74.1及16.2、95％ CI:30.8～181.5及7.9～34.1 (P＜0.05);由Spearman相关分析可知,HPV16型感染和P53基因表达相关(P＜0.05).结论 HPV、P53是宫颈癌独立的致癌物,两者在宫颈癌的发展过程中有交互作用.
关键词： 宫颈癌 人乳头状瘤病毒16型 感染 p53基因表达 -
HPV16 E6/E7重组体DNA免疫对小鼠脾细胞分泌活性的影响
目的 研究人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E6/E7蛋白与结核杆菌热休克蛋白70(HSP70)表达重组体DNA免疫对小鼠活化脾细胞分泌活性的影响.方法 采用肌肉注射DNA的方法免疫小鼠,分离脾细胞,用ELISA检测细胞因子的表达水平及抗体的水平,用RT-PCR的方法检测细胞中细胞因子mRNA的水平.结果 以HPV16 E6/E7为基础的DNA免疫小鼠后,检测到的细胞因子IL-2,IFNγ的含量明显升高;与结核杆菌HSP70重组后,IL-2,IFNγ的含量较重组前明显升高.与结核杆菌HSP70重组后,IL-]0及抗体水平没有明显变化.结论 以HPV16 E6/E7为基础的DNA免疫能增强小鼠的细胞免疫反应.与结核杆菌HSP70重组后能提高细胞免疫的效果,但对体液免疫几乎没有影响.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 热休克蛋白70 DNA免疫 -
HPV16E7E6抗原表位嵌合体DNA抗肿瘤疫苗的研究
目的:探讨HPV16 E7、E6抗原表位与HSP70 N端重组DNA疫苗抗肿瘤活性.方法:以重叠PCR将HPV16 E7基因N端60个氨基酸的编码序列与E6基因的10个(48～57)氨基酸的编码序列及HSP70 N端序列进行融合.以pcDNA3.0为载体,构建真核表达载体pcD-E76HSP.重组质粒免疫C57BL/6小鼠后,通过淋巴细胞增殖实验和细胞毒性杀伤实验研究该疫苗激发的细胞免疫反应及反应强度;观察该疫苗对C57BL/6小鼠TC-1肿瘤细胞移植瘤的治疗效果.结果:重组DNA疫苗免疫C57BL/6小鼠后,小鼠脾淋巴细胞体外增殖明显,并可诱导产生针对TC-1肿瘤细胞的特异性CTL反应;体内抑瘤试验显示该疫苗对HPV16病毒转化的TC-1细胞小鼠移植瘤的生长有抑制作用.结论:该疫苗能激发特异性细胞免疫反应,显著抑制HPV16转化的TC-1肿瘤细胞生长.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 抗原表位 热休克蛋白70 融合基因 DNA疫苗 -
人乳头状瘤病毒16型的伪病毒载体对肝癌细胞系HepG2细胞的杀伤研究
目的 构建基于人乳头状瘤病毒(HPV) 16型的伪病毒载体,并检测其对肝癌细胞系HepG2细胞的杀伤活性.方法 利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白,在体外将病毒蛋白包装白喉毒(DT)A链表达型质粒,形成伪病毒.透射电镜观察病毒样颗粒(VLP)的结构,并转染肝癌细胞系HepG2,乳酸脱氢酶释放法检测对肝癌细胞系HepG2的杀伤能力.结果 透射电镜观察显示病毒蛋白可自我组装成VLP,在转染肝癌细胞系HepG2后,乳酸脱氢酶释放法成功检测到伪病毒对肝癌细胞系HepG2的杀伤作用.结论 基于HPV16的新型伪病毒载体能成功转染肝癌细胞系HepG2,并产生杀伤活性,为肝癌的基因治疗提供了一种可选择的方法 .
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 伪病毒 载体 杀伤活性 -
雌激素对人乳头状瘤病毒16型E6基因转染人永生化表皮细胞效率的影响
目的:探讨雌激素对人乳头状瘤病毒16(HPV 16)型E6基因转染人永生化表皮细胞效率的影响.方法:以不同浓度的17-β-雌二醇(E2)处理人永生化表皮细胞系(HaCat)后,绘制其生长曲线,以细胞活性测定法(MTT)测定细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期分布,溴脱氧尿嘧啶核苷法(BrdU)测定细胞周期时相.脂质体转染法将含HPV 16 E6基因的质粒转染入经不同药物处理后的细胞中,以Real-time PCR法测定细胞中该基因的表达.结果:浓度为10-7~10-5mol/L的E2促进细胞数目的增加(P<0.05);浓度为10-8~10-6mol/L的E2明显增强细胞活性(P<0.05);浓度为10-7~10-5mol/L的E2使HaCat细胞的细胞周期时相缩短(P<0.05);不同浓度E2处理组细胞周期的分布差异无统计学意义(P>0.05).当HaCat细胞被HPV 16 E6质粒转染,随着E2浓度的增加,HPV 16 E6 mRNA表达明显增加(P<0.05).结论:E2可加速HaCat细胞生长与增殖,增加HPV 16 E6转染HaCat细胞的效率,E2水平升高可能增加HPV感染的风险.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 E6基因 17-β-雌二醇 雌激素受体 HaCaT细胞 -
安徽省人乳头瘤病毒16型全基因组的结构特征
目的克隆安徽省人乳头状瘤病毒16型( HPV16)全基因组,分析HPV16全基因组序列并了解其结构特征。方法收集5例安徽省宫颈癌病理组织标本并提取总DNA,设计4对特异性引物分段克隆HPV16全基因组,测序后进行序列拼接及核苷酸序列分析。结果检测到1个宫颈癌病理样本中含有 HPV16并获得全基因组序列,序列全长7906 nts ( GenBank登录号：KC935953)。序列比对显示,安徽HPV16( HPV16-Anhui )与泰国HPV16和日本HPV16的全基因组核苷酸序列相似性高,达99.5%。系统关系树分析显示,HPV16-Anhui与其他7个HPV16型聚成1个单独的分支。结论获得安徽省首例HPV16全基因组核苷酸序列,HPV16-Anhui与不同地区 HPV16亲缘关系均较近且基因组变异性较小。
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 全基因组 克隆 序列分析 -
rBCG-HPV16L1-E7疫苗的构建和免疫原性研究
[目的]构建以BCG为载体的rBCG-HPV16L1-E7疫苗,研究rBCG-HPV16L1-E7重组表达体嵌合乳头状瘤病毒样颗粒(VLPs)对小鼠免疫功能的影响,初步评价此疫苗对HPV相关肿瘤(宫颈癌)的预防作用.[方法]电穿孔法将pIJ702-HPV16L1-E7分泌型穿梭表达质粒导入BCG中表达,构成rBCG-HPV16L1-E7疫苗.Western blot检测E7蛋白的表达.采用rBCG-HPV16L1-E7疫苗皮下注射于C57BL/6小鼠,51Cr释放法体外分析免疫鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性(cytotoxic T lymphocyte,CTL),ELISA法检测免疫鼠血清中E7特异性抗体和细胞因子的表达水平.[结果]Western blot法分析证实,该重组疫苗能特异地表达HPV16 E7蛋白.以rBCG-HPV16L1-E7免疫小鼠后,检测到的细胞因子IL-2、IFNγ及E7抗体的含量明显升高,诱导机体产生特异的抗体反应以及CTL反应.[结论]rBCG-HPV16L1-E7能增强小鼠的细胞和体液免疫反应,可作为HPV16预防性疫苗.
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反义HPV16 E6/E7-EGFP重组质粒的构建及其对宫颈癌SiHa细胞的促凋亡作用
目的:构建HPV16早期基因E6/E7的反义重组质粒,探讨其对SiHa细胞的促凋亡作用.方法:将HPV16 E6/E7基因片段反向克隆于真核表达载体pEGFP-C1并转染SiHa细胞,用RT-PCR方法检测转染后SiHa细胞E6、E7基因mRNA的表达,Western blot方法检测转染后E6/E7蛋白的表达,流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡率.结果:成功构建携带HPV16 E6/E7基因反义片段的真核表达载体,转染该质粒后,SiHa细胞E6、E7基因的mRNA和蛋白均明显下调;转染后细胞凋亡率为(59.3±11.3)%,明显高于转染空载体组[(9.4±1.8)%]和未转染组[(2.1±0.4)%](P＜0.05).结论:反义HPV16 E6/E7基因可下调宫颈癌细胞中E6/E7癌基因的表达,诱导宫颈癌细胞凋亡,为宫颈癌的基因治疗提供了实验依据.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 E6/E7癌基因 细胞凋亡 宫颈肿瘤 -
HPV16相关宫颈鳞癌组织中microRNA-138的表达及意义
目的 分析microRNA-138在HPV16相关宫颈鳞癌组织中表达的情况及其与临床病理之间的关系.方法 采用PCR方法检测4种宫颈癌细胞系和82例临床宫颈鳞癌组织中的HPV16基因;同时用实时荧光定量PCR技术分析上述2类标本宫颈鳞癌,以及15例相应的癌旁组织样本和39例正常宫颈标本中的microRNA-138的表达水平.结果 与癌旁组和正常宫颈癌组相比,宫颈鳞癌组的microRNA-138表达水平均下调,差异均有统计学意义(P＜0.05);与HPV16阴性宫颈鳞癌相比,HPV16阳性宫颈鳞癌组的microRNA-138的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).miRNA-138的下调与淋巴结转移和脉管浸润明显相关(P＜0.05),但与年龄、宫颈壁累及范围、宫颈鳞癌的临床分期、体积均无明显相关性(P＞0.05).结论 microRNA-138在HPV 16相关宫颈鳞癌组织中均低表达,且与宫颈鳞癌、淋巴结转移和脉管浸润明显相关,但是与HPV16感染无特异相关性.
关键词： 微RNA-138 宫颈鳞癌 人乳头状瘤病毒16型 -
中药联合α干扰素对HPV16型感染合并宫颈柱状上皮异位的疗效
目的 观察中药联合α干扰素治疗宫颈HPV16型感染合并宫颈柱状上皮异位患者的治疗效果.方法 将2009年10月至2013年6月间146例HPV16型感染阳性的女性患者随机分为实验组(76例)与对照组(70例),实验组采用中药联合α干扰素阴道栓治疗,对照组单用α干扰素阴道栓治疗.进行HPV复查和电子阴道镜.结果 实验组HPV转阴率、对Ⅱ度宫颈柱状上皮异位面积改善情况与对照组(51/70)比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 中药联合α干扰素在治疗宫颈HPV16型感染合并宫颈柱状上皮异位患者疗效好,可增加单用α干扰素的疗效.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 宫颈柱状上皮异位 中药 干扰素 -
HPV16 E7-HSP70融合表达质粒的构建及鉴定
采用分子克隆技术,首先将HSP70基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1-上,获得pcDNA-HSP重组质粒,然后采用PCR扩增技术,定点突变编码HPV16E7蛋白C末端锌指结构的基因序列,将该突变的E7基因插入pcDNA-HSP重组质粒,通过粘端连接的方式构建pcd-HPV16E7-HSP70融合表达质粒,后通过限制性内切酶酶切、PCR和DNA测序等技术鉴定.结果显示,重组融合表达质粒经酶切、PCR和DNA测序证明其突变位点、碱基及阅读框架均准确无误.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 E7基因 HSP70 融合表达质粒 -
HPV16 E6/E7与结核杆菌HSP70重组体DNA免疫对小鼠脾细胞分泌活性的影响
目的研究人乳头状瘤病毒16型(HPV16) E6/E7蛋白与结核杆菌热休克蛋白70(HSP70)表达重组体DNA免疫对小鼠活化脾细胞分泌活性的影响. 方法采用肌肉注射DNA的方法免疫小鼠,分离脾细胞,用ELISA检测细胞因子的表达水平及抗体的水平,用RT-PCR的方法检测细胞中细胞因子mRNA的水平. 结果以HPV16 E6/E7为基础的DNA免疫小鼠后,检测到的细胞因子IL-2、IFNγ的含量明显升高;与结核杆菌HSP70重组后,IL-2、IFNγ的含量较重组前明显升高,而IL-10及抗体水平没有明显变化. 结论以HPV16 E6/E7为基础的DNA免疫能增强小鼠的细胞免疫反应;与结核杆菌HSP70重组后能提高细胞免疫的效果,但对体液免疫几乎没有影响.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 热休克蛋白70 DNA免疫 -
人乳头状瘤病毒16型DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系的建立
目的 建立人乳头状瘤病毒(HPV)16型DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系.确证HPV与喉癌的发生有无关系.方法 采用脂质体介导法,将pSV HPV16 DNA导入原代培养的人喉上皮细胞,继续培养、传代,取20代细胞.用PCR检测细胞是否含有病毒的特异片段,用免疫组化染色检测E6、E7蛋白的表迭,用倒置显微镜、生长曲线、流式细胞仪、细胞角蛋白免疫组化染色、透射电镜及软琼脂克隆形成试验检测细胞的生物学特性.结果 有3株细胞已连续培养传代超过20代,细胞含有HPV16 DNA的特异片段并有E6、E7蛋白的表达,细胞呈锚着依赖性、接触抑制性单层平铺生长.生长曲线呈典型的"S"型,细胞增殖指数为48％,所有细胞均表达角蛋白,胞浆含张力原纤维,软琼脂培养克隆形成试验阴性.结论 成功建立了HPV16 DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系,为喉癌研究提供了新的理想模型,HPV16对人喉上皮有致癌作用,在喉癌组织标本中检测到的HPV16 DNA必定在其多步癌变过程中发挥了重要作用.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 人喉上皮 永生化 脂质体转染 细胞培养
