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新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型上游调控区DNA多态性分析
目的 探讨新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(human papillomavirus 16,HPV-16)上游调控区(upstream regulatory region,URR)的变异及其与新疆维吾尔族妇女宫颈癌发生的关系.方法 从19份中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取DNA,以此DNA为模板,PCR扩增HPV-16 URR DNA片段,PCR产物直接测序或克隆后测序,分析新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织HPV-16 URR DNA多态性.结果 PCR检测结果显示宫颈癌组织中HPV-16URR阳性率为89.47%(17/19);测序和序列分析表明,与HPV-16原型比较,HPV-16 URR核苷酸多处发生变异,URR在核苷酸水平上形成11种突变模式(XJU-1～XJU-11),XJU-1和XJU-4突变模式各占23.53%(4/17),其余各突变模式均占5.88%(1/17),各模式与HPV-16 URR原型比较,同源性在98.50%～99.68%之间.在各位点的突变中,7192位(G→T)、7520位(G→A)的突变(100%,17/17)在新疆地区趋于恒定,该两处突变在亚裔美洲型(AA)中普遍存在,与病毒感染及宫颈癌发生相关;7729位(A→C)、7843位(A→G)、7792位(C→T)的突变可显著提高启动子的转录活性;其余突变尚未见报道,部分突变为新疆地区分离的HPV-16 URR所特有.结论 中国新疆南部HPV-16 URR基因发生变异,HPV-16 URR的突变与HPV-16的系统发生以及新疆维吾尔族妇女高发宫颈癌存在一定关系.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 宫颈癌 上游调控区 多态性 -
HPV-16 URR突变对病毒早期启动子活性影响的研究
背景与目的:新疆是宫颈癌高发区,该地区宫颈癌高发与人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus type 16,HPV-16)感染密切相关.该研究旨在分析新疆地区妇女宫颈病样组织中HPV-16上游调控区(upstream regulatory region,URR)的突变及其功能.方法:以新疆妇女子宫颈上皮非典型增生(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宫颈癌病样组织标本DNA为模板,PCR扩增HPV-16URR片段,PCR产物经测序比对,筛选代表性的URR突变体构建至pGL3-Basic载体,将其转染Vero细胞,48 h后检测荧光素酶活性,分析URR突变体启动子活性.结果:采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)获得了55个HPV-16URR DNA片段,测序及序列分析发现44个突变位点,其中nt7192(G→T)、nt7433(-→T)、nt7435(C→G)和nt7863(A→-)4个位点的突变为所有序列共有,nt7520(G→A)位点的突变存在于54个样品中,剩余39个位点的突变存在于不同样品中.根据突变的位置、频率和程度,筛选出9个URR突变体分别克隆至pGL3-Basic中荧光素酶基因前并转染Vero细胞.荧光素酶活性分析表明,不同URR突变体的启动子活性差异较大,来源于宫颈癌的URR突变体启动子活性显著高于来源于CIN的URR突变体(P<0.01),部分宫颈癌URR突变体的启动子活性显著高于SiHa和Caski细胞来源的URR参照序列的启动子活性.结论:新疆地区分离的HPV-16 URR发生多位点突变,其中部分突变增强了URR内部启动子的活性,导致HPV-16致癌活性增强.
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宫颈癌组织中HPV16 URR基因多态性分析
目的 分析宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型(HPV16)上游调控区(URR)基因多态性.方法 收集宫颈癌组织标本25例,提取DNA作为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增URR目的 片段,扩增产物直接或构建克隆重组质粒后测序,以GenBank Blast软件分析序列.结果 宫颈癌组织标本中,HPV16检出率为72%(18/25);检出10种HPV16 URR核苷酸突变模式,同源性在98.67%～99.69%之间;检出3个URR序列中的热突变位点,分别为G7520A(100.00%)、G7192T(100.00%)和T7713G(33.33%).结论 宫颈癌组织中HPV16 URR存在多种基因突变类型和模式,可能与病毒致癌潜能及宫颈癌的发生相关.
