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Pichia pastoris酵母中表达人源中和性抗甲型肝炎病毒scFv-Fc融合抗体的研究
为了探讨人源抗甲型肝炎(甲肝)病毒scFv-Fc融合抗体在酵母中的表达特性,将获得的人源抗甲肝病毒中和性单链可变区抗体(scFv抗体)基因克隆入含信号肽及人IgG1Fc抗体基因的酵母细胞表达载体中,获得了一株中和性人源抗甲肝病毒pPiscFv-FcHA16融合抗体的分泌表达,并对表达产物进行了纯化.同时对表达产物的生物学特性进行了一系列鉴定.表达的pPiscFv-FcHA16融合抗体为具有不同糖基化形式的同源二聚体,与相应的CHO细胞表达的IgG抗体相比,pPiscFv-FcHA16融合抗体仍保持很好的抗原结合活性,以及与中和性鼠抗甲肝病毒单克隆抗体的竞争抑制能力.同时也保持了对甲肝病毒的体外中和活性.这些结果表明,在酵母中表达的单链可变区(scFv)与IgG1Fc区的融合抗体具有很好的生物学活性,有希望用做体外诊断,用纯化相应的抗原,或者可能用于体内预防与治疗.
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链球菌蛋白G快速纯化人源生物工程抗体
目的根据链球菌蛋白G与人抗体的Fab片段有弱结合位点的特征,探索应用蛋白G亲合纯化原核表达的人源mAb片段的可行性,为人源基因工程抗体的批量制备提供依据.方法扩增抗HBs+菌株,经IPTG诱导表达后制备表达产物上清,与商品化链球菌蛋白G亲合胶(GammaBind)反应,PBS洗去非特异结合蛋白,梯度酸洗脱结合UV检测观察解离效果,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检验纯化产物的纯度,Dot Blot鉴定亲合纯化后Fab的抗原反应性,并与抗Fab抗体亲合纯化法进行比较.结果在酸洗脱的早期(pH4.5)即有特异蛋白解离,峰值在pH3.54.0之间,纯化后的抗体片段在PAGE中形成单一区带,达到电泳纯;酶标抗Fab抗体免疫印迹结果证明,电泳显示的单一区带确为Fab蛋白区带;抗原特异Dot blot检测表明,该法制备出的Fab保持了抗原结合活性,且在得率和活性方面优于抗-Fab抗体法.结论本实验采用的一步亲合纯化法具有操作简便、纯化快速和高效的特点,是人源性mAb Fab片段纯化的较佳方法.
