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宫寒的形成与寒痛通道活化的关联性研究
宫寒是一个重要的中医概念,具有因果二重性:既是某些外寒或内寒作用的病理结果,又是某些妇科病证的成因.宫寒的发病具有慢性、普遍性、易感性的特征.现代医学认识到女性的月经各期都处于程度不同的炎症侵袭之下,广泛存在的其他腹腔炎症,通过多渠道交叉致敏女性生殖系统.炎症因素可以活化热敏通道,慢性过程导致寒痛通道的活化产生寒痛反应,符合热敏通道急性热痛、慢性寒痛的活化特性.基于现代热敏通道理论,我们大致推定热敏通道中寒通道(TRPA1\TRPM8)敏化、活化是宫寒形成的重要因素,而热敏通道的激动剂桂枝、肉桂、吴茱萸等正是某些经典名方中治疗宫寒证的主要药物.
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不同寒热药性中药对酵母致热大鼠体温调节及温度敏感瞬时感受器电位离子通道(TRPs)蛋白的影响
目的:观察比较4种典型寒、热药性中药对酵母致大鼠发热模型体温的干预影响以及温度敏感瞬时感受器电位离子通道(TRPs)蛋白的调节作用.方法:背部皮下注射酵母混悬液建立大鼠发热模型,108只SD大鼠随机平均分为正常组、模型组、大黄组、黄连组、吴茱萸组和高良姜组,分别于造模后第4,8,12 h取下丘脑和背根神经节,通过免疫组化和Western blot方法检测下丘脑和背根神经节中温度敏感瞬时感受器电位离子通道蛋白TRPV1和TRPM8的水平.结果:与正常组相比,注射酵母后模型组大鼠体温明显上升,8h达到高峰期(P＜0.01);下丘脑和背根神经节中TRPV1水平显著升高,TRPM8水平则明显降低.与模型组比较,大黄和黄连可显著降低酵母引起的大鼠体温升高,下调下丘脑和背根神经节中TRPV1水平,上调TRPM8水平(P＜0.05或P＜0.01);吴茱萸和高良姜对发热大鼠的体温和TRPs均无明显影响.结论:寒性中药大黄和黄连能降低酵母致热大鼠的体温,其作用可能与其对下丘脑和背根神经节中TRPV1和TRPM8的有效调节有关;热性中药吴茱萸和高良姜无相关作用.
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痛觉感受相关的TRP离子通道蛋白研究进展
疼痛是机体对外界伤害性刺激产生的一种不愉快感觉,与临床上包括癌症、糖尿病、关节炎等在内的多种疾病的病理过程相关.瞬变感受器离子通道蛋白是一类非选择性阳离子通道蛋白超家族,目前已有七个亚族、30多个成员在哺乳动物中被相继发现.近年研究表明TRPV亚家族中TRPV1、TRPV2、TRPV3、TRPV4以及TRPM亚家族中 TRPM8和TRPA亚家族中TRPA1与痛觉的产生关系密切.本文主要对上述离子通道与各种伤害性刺激引起的痛觉增敏的病理机制进行简要综述.
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雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞中TRPM8和TRPA1的表达及活性研究
目的 探讨TRPM8和TRPA1在雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞中是否表达,以及薄荷醇是否通过作用于TRPM8通道来影响DU145细胞的生物学行为.方法 采用Nested RT-PCR实验、Western Blot实验和免疫组织化学法从不同水平(mRNA水平、蛋白水平)以及直观观察层面检测TRPM8和TRPA1在DU145细胞中的表达;采用Ca2+成像实验观察薄荷醇能否诱导DU145细胞内Ca2+浓度的变化;采用MTT法检测梯度浓度的薄荷醇对DU145细胞增殖能力的影响.结果 Nested RT-PCR实验、Western Blot实验和免疫组织化学法结果证明,在DU145细胞中检测到TRPM8表达,而未检测到TRPA1表达.Ca2+成像实验结果显示,在37℃环境下细胞荧光非常弱,加入薄荷醇后细胞内Ca2+荧光强度急剧升高.MTT法检测结果显示,与未经薄荷醇处理的对照组相比不同浓度(25、50、75、100μmol/L)薄荷醇处理组的细胞增殖率均下降(P﹤0.05).经BCTC预处理20 min,薄荷醇所致的细胞增殖抑制被部分恢复(P﹤0.05).结论 雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞中有大量的具有生物活性的TRPM8通道蛋白表达,而可同被薄荷醇激活的TRPA1却未被检测到表达.薄荷醇可激活DU145细胞中的TRPM8通道诱导Ca2+荧光强度急剧升高,抑制DU145细胞的增殖.
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TRPM8在口腔白斑和口腔鳞癌中的表达及意义
目的 研究瞬时受体电位M8(TRPM8)在口腔白斑和口腔鳞状细胞癌组织中的表达情况,并分析其与口腔鳞癌临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学方法 检测20 例正常口腔组织、20 例口腔白斑、45 例口腔鳞癌组织标本中TRPM8 的表达.结果 TRPM8 的染色阳性率在正常口腔黏膜组、白斑组、鳞癌组分别为5.0%、30.0%、66.7%.正常黏膜组、白斑组、鳞癌组染色阳性率差异均有统计学意义(P〈0.05).TRPM8 的表达水平与肿瘤病理分级关系密切(P=0.01),而与是否有颈淋巴结转移(P=0.639)、肿瘤的T 分期(P=0.320)、患者的年龄(P=1.00)、性别(P=0.815)无明显相关性.结论 TRPM8 在口腔鳞状细胞癌中的高表达表明离子通道蛋白可能在肿瘤的发生和增殖的过程中发挥了重要作用.
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慢性萎缩性胃炎胃黏膜癌前病变病理变化与中医证型及 TRPV1、TRPM8的相关性研究
目的：观察慢性萎缩性胃炎（ CAG）癌前病变的病理变化与中医证型及瞬时电位受体（TRPV1、TRPM8）表达的相关性，为慢性萎缩性胃炎中医辨证提供更多的客观依据。方法选取内镜确诊CAG及病理确诊为CAG伴不典型增生或不同程度肠上皮化生患者317例，选取常规体检发现的无症状性浅表性胃炎10例作为对照，并进行TRPV1、TRPM8受体表达检测及CAG中医证型辨证，分析CAG的病理变化与中医证型及TRPV1、TRPM8表达的相关性。结果①CAG前病变中医证型按照所占比率排序为脾虚气滞＞脾胃湿热＞脾胃虚弱＞肝胃不和＞胃阴不足＞胃络瘀阻。②6种证型在TRPV1、TRPM8表达上存在显著性差异。 TR-PV1的表达的中医证型排序为脾胃湿热＞胃阴亏虚＞肝胃不和＞胃络瘀阻、浅表性胃炎＞脾虚气滞＞脾胃虚弱；TRPM8表达的中医证型排序为脾胃虚弱＞脾虚气滞＞胃络瘀阻、浅表性胃炎＞肝胃不和＞胃阴亏虚＞脾胃湿热。 TRPV1以脾胃湿热表达为明显（415 bp），TRPM8表达以脾胃虚弱明显（387 bp）。胃络瘀阻型近似于浅表性胃炎胃黏膜表达。③同一证型在不同程度肠上皮化生分布上具有非常显著性差异（P均＜0．01）；不同证型在同一程度肠上皮化生差异有显著性（P＜0．05）；各证型在轻度异型增生分布上无显著性差异，在中、重度分布上有显著性差异（P均＜0．05），且以脾胃虚弱、胃阴不足及胃络瘀阻三型在重度异型增生时分布较高；各证型在轻、中、重度萎缩程度分布上具有显著性差异（ P＜0．05或0．01）。结论 CAG癌前病变与中医证型之间及瞬时电位受体（ TRPV1、TRPM8）表达之间存在一定相关性，病理程度较轻时以实证为主，并伴有TRPV1受体表达增高；病理程度中、重度时以虚为主，虚实夹杂表现多见，并伴有TRPM8表达增高。本研究为该病发病机制及治疗提供理论依据，为CAG中医辨证提供了更多的客观依据。
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有关TRPM8通道的中医药研究进展
TRPM8是TRP基因超家族中的一个亚型,可被温度、渗透压、PH值及机械力等激活发生一系列病理生理反应.现代医学对其研究相对深入,阐述较完善,中医药对其调控机制的研究较少.本文对近几年中医药对TRPM8的研究进行整理总结..对中医药治疗疾病的作用机制进行更深一步的探讨,使TRPM8有望成为新的药物作用靶点.
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中医药调控TRP离子通道的研究进展
TRP通道是广泛存在于细胞膜上的非选择性阳离子通道,其亚型包括TRPV,TRPA,TRPC,TRPM和TRPP.国内外学者对其进行了深入研究,现代医学对TRPV1、TRPA1和TRPM8的阐述相对完善,而中医药对其调控作用研究较少.对近几年中医药对TRPV1、TRPA1和TRPM8通道的研究进行了总结整理,做一简要综述.
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鞘内注射PDTC对神经病理性痛大鼠TRPM8受体表达的影响
目的 探讨NF-κB参与TRPM8受体在大鼠神经病理性痛觉调制中的作用.方法 鞘内置管成功的SPF级健康雄性SD大鼠36只,4～6周龄,体重180～200 g,采用随机数字表法分为三组:假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和NF-κB阻滞剂PDTC组(PDTC组),每组12只.鞘内置管成功后第3天,NP组和PDTC组采用坐骨神经缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)法制备大鼠神经病理性痛模型;S组只游离坐骨神经不做损伤处理.三组大鼠术后1 d开始连续鞘内注射,连续14 d(2次/天),PDTC组鞘内注射PDTC 20μg/10μl(20μg PDTC溶于10μl生理盐水),注射完成后10μl生理盐水冲管,S组和NP组分别鞘内注射等容量生理盐水,三组大鼠分别于术前1 d、术后1、3、7、10和14 d鞘内给药后30 min测定冷痛阈、热痛阈和机械痛阈.分别在术后7、14 d处死大鼠,采用Western blot法检测背根神经节(DRG)中TRPM8受体和NF-κB p65蛋白含量.结果 与S组比较,术后1～14 d NP组冷痛阈明显降低、热痛阈明显缩短、机械痛阈明显降低(P<0.05);与NP组比较,术后3～14 d PDTC组冷痛阈明显增多、热痛阈明显延长、机械痛阈明显升高(P<0.05).与S组比较,术后7、14 d NP组TRPM8受体和NF-κB p65蛋白含量明显升高(P<0.05);与NP组比较,术后7、14 d PDTC组TRPM8受体和NF-κB p65蛋白含量明显降低(P<0.05).结论 大鼠DRG中TRPM8和NF-κB p65表达上调参与神经病理性痛的发生发展,抑制NF-κB活化可以减少TRPM8受体的表达上调并且改善大鼠痛觉过敏的症状.
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薄荷醇及其受体TRPM8与肿瘤关系研究进展
薄荷是一种被广泛使用的植物药和食品添加剂，其发挥功能的主要成分为薄荷醇。研究发现薄荷醇具有抗炎镇痛、抗菌抗病毒及止咳等多种生理功能。近年来，研究发现薄荷醇具有明显的抗肿瘤活性，能抑制多种恶性肿瘤的生长和演进。然而，也有研究发现使用添加薄荷醇的香烟制品其肺癌发病率明显高于一般烟民。该文对薄荷醇的生理功能及其受体TRPM8进行综述，着重对近年来薄荷醇及其受体与肿瘤关系的研究进展进行综述，并探讨薄荷醇在临床应用的局限性和不良反应，为后续的科学研究及指导临床提供参考。
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TRP通道与偏头痛
偏头痛的发病原因和病理机制尚未得到充分解释,特别是对相关的初级感觉神经元的研究仍然存在诸多争议.近年来,脑膜末梢化学感受神经纤维上表达的瞬时受体电位通道(transient receptor potential,TRP)家族蛋白的重要性越来越受到人们的重视.这类非选择性阳离子通道蛋白对多种环境性和内源性刺激敏感,在体内参与多种组织器官对伤害性刺激的调节.该文将着眼于目前TRP家族蛋白在头痛特别是偏头痛中的作用进行总结.
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TRPM8的研究进展
TRP(transient receptor potential)离子通道是一类广泛存在于细胞膜上的跨膜蛋白质,可以辨别酸甜苦辣等各种味觉和温暖、冷、热等各种温度觉.TRP通道亚型TRPM8初作为一种前列腺特异性蛋白被克隆出来,并可在热敏反应中被冷刺激和薄荷醇激活.TRPM8可以感知温度觉和痛觉,并可缓解疼痛,具有重要的研究意义.该文拟就当前TRPM8的生物物理学、门控机制和这类TRP通道的药理及病理生理机制等进行综述.
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TRPM8在慢性非细菌性前列腺炎SD大鼠前列腺组织的表达
将40只SD大鼠随机分成实验模型组和正常对照组,采用大鼠前列腺蛋白提取液与弗氏完全佐剂(FCA)建立慢性非细菌性前列腺炎(CNP)大鼠模型,荧光定量PCR检测瞬时受体电位通道M8(TRPM8)mRNA相对表达水平,比较两组间的差异.实验模型组与正常对照组SD大鼠前列腺组织内均见TRPM8 mRNA表达,分别为0.811±0.044、0.937±0.050,差异具有统计学意义(P<0.05).
关键词： 慢性非细菌性前列腺炎 TRPM8 动物模型 聚合酶链反应 -
TRPM8对前列腺癌细胞PC-3细胞增殖和迁移影响的研究
目的 探讨TRPM8对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞增殖和迁移能力的影响. 方法 PC-3细胞分别转染空载体pcDNA3和目的 基因TRPM8,筛选稳定表达细胞株;分别通过免疫荧光和钙成像检测TRPM8蛋白表达、分布以及功能;通过流式细胞术和划痕实验检测TRPM8对PC-3细胞周期和细胞迁移率的影响. 结果 免疫细胞化学和钙成像提示PC-3-TRPM8细胞表达有功能的TRPM8通道;TRPM8能诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,与PC-3和PC-3-vector细胞相比,处于G0/G1期的PC-3-TRPM8细胞显著增加(71.89%±3.43% vs 54.67%±4.59%、51.48%±3.54%,P＜0.05),易化饥饿诱导的细胞凋亡(12.56%±1.78% vs 4.67%±1.49%、5.28±1.35%,P＜0.05),并抑制细胞迁移(P＜0.01). 结论 TRPM8并不为PC-3细胞存活所必需,相反,高表达的TRPM8能抑制PC-3细胞的增殖和迁移,可能为前列腺癌治疗的一个新靶点.
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TRPM8抑制剂BCTC对前列腺癌DU145细胞的抑癌作用
目的:探讨TRPM8抑制剂BCTC对前列腺癌DU145细胞的抑癌作用.方法:PCR和Western blot检测TRPM8的表达;MTT法检测DU145细胞增殖能力;划痕实验、transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测周期相关蛋白(p-AKT,p-GSK 3β,cyclin B1,cyclin D1,CDK2/4/6)、凋亡相关蛋白(Bcl-2,Bax,caspase-3)、迁移相关蛋白(pFAK,MMP2)表达水平的变化.结果:PCR和Westernblot提示TRPM8在前列腺癌DU145细胞中表达显著高于正常前列腺上皮PNT1A细胞;BCTC处理后,DU145细胞增殖能力下降(P＜0.05),细胞周期表现为G0/G1阻滞期(P＜0.05),迁移、侵袭能力也明显下降(P＜0.05),但凋亡相关实验显示BCTC并不引起细胞凋亡(P＞0.05).Western blot显示BCTC能下调p AKT,cyclin D1,CDK2,CDK6,MMP2和pFAK等的表达,而上调p-GSK-3β的表达.结论:TRPM8抑制剂BCTC能抑制前列腺癌DU145细胞增殖、迁移和侵袭能力,是一个极具潜力的抗前列腺癌药物.
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TRPM8的研究进展
瞬时受体电位通道(transient receptor potential,TRP)是位于细胞膜上的一类重要的阳离子通道超家族.TRP通道分布广泛,调节机制各异,通过感受细胞内外环境的各种刺激,参与痛觉、机械感觉、味觉的发生和维持细胞内外环境的离子稳态等众多生命活动,具有调节肌肉收缩、递质释放、细胞增殖、细胞分化、基因转录、细胞凋亡及细胞死亡等作用.TRP通道亚型TRPM8是一种非选择性阳离子通道,初作为一种前列腺特异性蛋白被克隆出来,现发现在结肠癌、肺癌、乳腺癌以及皮肤来源的恶性肿瘤中均有表达.TRPM8可以被冷刺激和薄荷醇激活,TRPM8参与温度觉和疼痛觉调控,并可调节血管收缩和扩张,尤其是TRPM8在调节细胞生长和死亡方面具有重要的作用,为我们研究肿瘤的发生发展提供了重要的研究线索.
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TRPM8通过cAMP-PKA/UCP4信号调控氧糖剥夺/复糖复氧诱导的神经元凋亡
目的：探究TRPM8在氧糖剥夺/复糖复氧诱导神经元PC12细胞凋亡中的分子机制。方法体外建立氧糖剥夺/复糖复氧模型模拟脊髓缺血再灌注损伤，流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡，RT-PCR和western blot检测TRPM8、UCP4和cAMP、p-PKA、Bax、Bcl-2的表达变化；向PC12细胞分别加入AMTB（TRPM8阻断剂）和转染UCP4质粒，western blot检测cAMP、p-PKA、UCP4、Bax、Bcl-2的表达水平；抑制PKA信号，检测UCP4、Bax、Bcl-2的蛋白表达水平。结果氧糖剥夺/复糖复氧导致脊髓神经元PC12细胞发生凋亡，TRPM8过表达，UCP4表达下降，抑制cAMP-PKA信号。抑制TRPM8表达，则细胞凋亡减少， cAMP-PKA信号被激活，且UCP4的表达有所恢复。抑制TRPM8和cAMP-PKA信号，UCP4的表达减少，细胞凋亡增加。结论在氧糖剥夺/复糖复氧模型中，PC12细胞TRPM8过表达，且通过cAMP-PKA/UCP4诱导神经元PC12细胞凋亡。
关键词： PC12细胞 氧糖剥夺/复糖复氧 TRPM8 cAMP-PKA/UCP4 凋亡 -
过表达 TRPM8对膀胱癌 T24细胞增殖和侵袭的影响
目的：观察过表达TRPM8基因的质粒pcDNA3．1－TRPM8对人膀胱癌 T24细胞增殖和侵袭能力的影响。方法将连有 TRPM8的质粒 pcDNA3．1－TRPM8稳定转染 T24细胞后筛选出阳性克隆。根据转染的质粒不同分为3组： T24组（未转染）、T24－0组[转染 pcDNA3．1（＋）质粒]和 T24－TRPM8组（转染 pcDNA3．1－TRPM8质粒）。应用 RT －PCR 检测 TRPM8 mRNA 改变，MTT 法检测 T24细胞的增殖情况，Transwell 检测细胞侵袭转移能力。结果T24－TRPM8组 TRPM8的 mRNA 水平表达较其他两组升高（P ＜0．05），MTT 和 Transwell 分别显示 T24－TRPM8组 T24细胞增殖和转移率较其他两组增加（P ＜0．05）。结论过表达 TRPM8可以促进 T24细胞增殖及侵袭能力，从而促进膀胱癌的进展，是潜在的膀胱癌治疗靶点。
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哮喘小鼠肺组织TRPM8与TRPA1mRNA的表达
目的 观察哮喘小鼠肺组织TRPM8与TRPA1 mRNA的表达.方法 SPF级雌性Balb/c小鼠16只,随机分为哮喘组和对照组,每组8只.哮喘组应用卵蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型,末次激发后留取肺组织,采用荧光实时定量 RT-PCR 技术检测支气管肺组织中TRPM8与TRPA1的mRNA表达水平.结果 哮喘组肺组织中TRPM8与TRPA1 mRNA水平分别为(0.619 1±0.213 1)和(0.272 2±0.167 1),明显高于对照组(0.347 1±0.221 1和0.107 9±0.041 5),差异有统计学意义(P<0.05).结论 哮喘小鼠肺组织TRPM8与TRPA1 mRNA的表达上调,可能是冷刺激诱发哮喘发作的分子机制.
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TRPM8调控EMT促进人肾癌细胞A498迁移及侵袭的作用研究
目的：探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)是否通过上皮-间充质转化(EMT)影响人肾癌细胞的侵袭及迁移能力。方法利用荧光定量PCR来检测人肾癌细胞A498、786-0以及GRC-1中TRPM8的表达水平；设计并合成靶向TRPM8的特异性shRNA，通过脂质体转染法转染TRPM8表达高的肾癌细胞A498以构建稳定低表达TRPM8细胞株，通过Western blot和定量PCR来验证shRNA的干扰效率；通过Transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力，Western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail和WNT-5a的变化。结果 TRPM8-shRNA转染后，能够有效抑制A498细胞中TRPM8的表达；Transwell法检测细胞侵袭能力结果显示，A498组、Control组和shRNA组的穿膜细胞数分别为(102.56±11.41)、(105.67±10.83)、(74.62±8.65)，A498/shRNA组细胞侵袭能力受到显著抑制(F=49.105，P<0.01)；Transwell法检测细胞迁移能力结果显示，A498组、Control组和shRNA组的穿膜细胞数分别为(115.45±10.31)、(109.33±7.53)、(76.21±13.28)，A498/shRNA组细胞迁移能力受到显著抑制（F=36.168，P<0.01）；Western blot法结果发现，TRPM8干扰组细胞的E-cadherin表达增加，N-cadherin的表达降低；此外，TRPM8干扰组细胞的Snail以及WNT-5a表达较对照组显著下降。结论运用RNA干扰技术能够有效沉默A498细胞的TRPM8基因，并诱导其迁移侵袭能力的下降，其可能的机制是通过调节EMT的上游信号分子Snail、WNT-5a的表达来调控EMT，从而影响肾癌细胞的迁移及侵袭。以上提示TRPM8在肾癌的发生发展中起重要作用，抑制TRPM8的表达可能成为一种治疗肾癌的新方法。
