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清毒活血化痰复方抑制脐静脉内皮细胞株ECV304氧糖剥夺/复糖复氧模型中NF-κB和STAT3的表达
目的 探讨清毒活血化痰复方对脐静脉内皮细胞氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的保护作用及其作用机制.方法 SD大鼠连续5d每天灌胃清毒活血化痰复方(12 g/kg),正常对照组给予等量生理盐水,制备药物血清和正常血清.OGD/R损伤脐静脉内皮细胞株ECV304,复氧复糖过程中添加清毒活血化痰复方药物血清,并以正常血清为对照.正常对照组、缺氧缺糖后复氧复糖组(模型组)、清毒活血化痰复方药物血清组(中药组)分别于复氧复糖后4、24、48、72 h提取基因和蛋白用于检测.以MTT法检测细胞存活率,用RT-PCR检测NF-κB和STAT3的mRNA水平,Western blot检测NF-κB和STAT3的蛋白表达.结果 清毒活血化痰复方药物血清作用24 h即显现出明显的促ECV304增殖的作用,于48 h时作用明显.在各个时间段对NF-κB和STAT3的mRNA和蛋白表达均有抑制作用.结论 清毒活血化痰复方药物血清可以有效改善OGD/R对脐静脉内皮细胞的损伤,促进细胞增殖,其作用机制可能与抑制NF-κB和STAT3的表达相关.
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17βE2对氧糖剥夺/复糖复氧诱导神经元损伤的保护作用
将培养8 d的大鼠皮质神经元分为4组,A组为正常对照组、B组采用氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)、C组采用17βE2预处理+OGD/R、D组采用17βE2与PI3K抑制剂LY294002共同预处理+OGD/R.发现OGD/R后神经元活性逐渐下降,p-Akt、凋亡诱导因子(AIF)表达较正常对照组增加;17βE2可明显提高OGD/R后神经元的存活率,使p-Akt的表达明显增加,AIF表达降低;LY294002与17βE2共同预处理,抑制了17βE2的作用.提示17βE2可减轻OGD/R诱导的皮质神经元损伤,这种保护作用可能与AIF及PI3K/Akt信号通路相关.
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胰岛素对氧糖剥夺诱导大鼠脑神经元损伤的改善作用
目的:探讨胰岛素对氧糖剥夺诱导新生大鼠脑皮质神经元损伤的改善作用.方法:将培养7 d的大鼠皮质神经元随机分为3组,A组为正常对照组,B组采用氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)处理,C组采用胰岛素预处理加OGD/R处理,B、C组在OGD/R后0、1、6、12、24 h各时间点,以MTT法检测细胞活性.采用脱氧尿嘧啶缺口末端标记法检测神经元凋亡情况,采用免疫细胞化学方法检测生长相关蛋白(GAP-43)、脑源性神经营养子(BDNF)的表达.结果:①B组的神经元细胞活性较A组明显下降,C组细胞活性明显高于B组,3组比较差异有统计学意义(P<0.05).②B组凋亡神经元细胞明显多于正常对照组,OGD/R后6、12、24 h,C组凋亡细胞数日明显少于B组,3组比较差异有统计学意义(P<0.05).③B组GAP-43、BDNF的表达较正常对照组明显增加,OGD/R后6、12、24 h,C组GAP-43、BDNF表达较B组明显增加.结论:胰岛素预处理可明显提高OGD/R后神经元的存活率,抑制神经元凋亡,使GAP-43、BDNF表达增加,实现神经元损伤的改善作用.
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TRPM8通过cAMP-PKA/UCP4信号调控氧糖剥夺/复糖复氧诱导的神经元凋亡
目的：探究TRPM8在氧糖剥夺/复糖复氧诱导神经元PC12细胞凋亡中的分子机制。方法体外建立氧糖剥夺/复糖复氧模型模拟脊髓缺血再灌注损伤，流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡，RT-PCR和western blot检测TRPM8、UCP4和cAMP、p-PKA、Bax、Bcl-2的表达变化；向PC12细胞分别加入AMTB（TRPM8阻断剂）和转染UCP4质粒，western blot检测cAMP、p-PKA、UCP4、Bax、Bcl-2的表达水平；抑制PKA信号，检测UCP4、Bax、Bcl-2的蛋白表达水平。结果氧糖剥夺/复糖复氧导致脊髓神经元PC12细胞发生凋亡，TRPM8过表达，UCP4表达下降，抑制cAMP-PKA信号。抑制TRPM8表达，则细胞凋亡减少， cAMP-PKA信号被激活，且UCP4的表达有所恢复。抑制TRPM8和cAMP-PKA信号，UCP4的表达减少，细胞凋亡增加。结论在氧糖剥夺/复糖复氧模型中，PC12细胞TRPM8过表达，且通过cAMP-PKA/UCP4诱导神经元PC12细胞凋亡。
关键词： PC12细胞 氧糖剥夺/复糖复氧 TRPM8 cAMP-PKA/UCP4 凋亡
