首页 > 文献资料
-
瘢痕灸肝俞穴、足三里穴对原发性肝癌大鼠Wnt10b、Wnt3a表达的影响
目的:探讨瘢痕灸肝俞穴、足三里穴对原发性肝癌大鼠Wnt/β-catenin信号传导通路中Wnt3a、Wnt1ob表达的影响.方法:健康雄性Wistar大鼠随机分成对照组、模型组、阿霉素组、肝俞组、足三里组,通过注射二乙基亚硝胺制备肝癌模型,用RT-PCR检测各组Wnt3a、Wnt1ob表达量,观察肝细胞结构和形态变化.结果:与对照组比较,模型组、阿霉素组、肝俞组和足三里组Wnt3a、Wnt10b表达量均显著升高;与模型组比较,阿霉素组、肝俞组和足三里组表达量降低;与阿霉素组比较,肝俞组、足三里组表达幅度下降;与肝俞组比较,足三里组表达量升高.镜下观察可见,对照组为正常肝细胞,模型组细胞有假小叶形成,阿霉素组有明显增生灶,肝俞组细胞核多形、核浆部分消失,足三里组纤维样变.结论:瘢痕灸肝俞穴、足三里穴对原发性肝癌大鼠有治疗效果,其机制可能是通过调节Wnt/β-catenin信号传导通路中Wnt3a、Wnt1ob的表达量来实现的.
-
去势大鼠股骨组织中Wnt10b的表达
目的 观测去势大鼠骨质疏松模型中股骨组织Wnt10b的表达.方法 20只SD雌性大鼠随机分为去势组和对照组两组.大鼠切除双侧卵巢去势诱发骨质疏松症.术后3个月腹主静脉取血,用放射免疫法测定各组大鼠血清E2水平.从股骨中提取总RNA和蛋白,分别采用RT-PCR和免疫印迹的方法检测Wnt10b在mRNA和蛋白表达水平上的变化.结果 去势组大鼠血清E2含量为10.228±4.094 pmol/L;对照组血清E2含量为21.975±3.021 pmol/L.经RT-PCR和免疫印迹检测发现,与对照组相比,去势大鼠Wnt10b的mRNA和蛋白水平表达量均降低.结论 去势大鼠骨质疏松模型体内股骨组织中Wnt10b的mRNA和蛋白表达水平均下降,以上结果提示Wnt10b可能在大鼠去势诱发骨质疏松模型中通过调节成骨等过程参与了骨质疏松的发展过程.
-
大鼠毛囊发育启动阶段模型构建及其Wnt10b/β连环蛋白信号表达的观察
目的 构建适合研究毛囊发育启动的体外培养模型,观察Wnt10b/β连环蛋白信号在毛囊发育初期的表达情况.方法 将不同胎龄的SD大鼠胚胎(胎鼠)背部皮肤以明胶海绵为载体,在Dulbecco改良Eagle培养液(DMEM)的气液交界平面中漂浮培养3～6 d,HE染色,观察毛囊发育情况;免疫荧光法动态观察Wnt10b及β连环蛋白在毛囊发育初期的表达;将胎龄15 d胎鼠背部皮肤在含不同胎牛血清浓度的DMEM中培养,观察胎牛血清对毛囊形态发生的影响.结果 (1)胎龄14 d后期至15 d早期的胎鼠背部皮肤培养效果好,体外培养3 d以内,毛囊的发育保持与体内过程一致,培养3 d后毛囊发育逐渐减慢,直至停止于第4阶段;(2)胎牛血清对毛囊的发育没有明显促进作用;(3)在培养的前几天,Wnt10b/β连环蛋白的表达与体内一致,随着培养天数的增加,Wnt10b/β连环蛋白的表达逐渐减弱,在培养的第6天,毛囊的形态发生停止时,Wnt10b/β连环蛋白的表达也随之消失.结论 在体外短期培养的胎鼠背部皮肤毛囊发育与体内基本一致,可以作为研究毛囊发育启动的模型;Wnt10b/β连环蛋白信号的表达与毛囊的早期发育密切相关.
-
Wnt10B在肿瘤和疾病发生中的作用
Wnt10B是Wnt蛋白家族成员之一,在正常发育和肿瘤性转化中起着至关重要的作用.Wnt10B在脂肪组织、骨骼、肝、胃肠和皮肤中,可以调控细胞多能性及决定细胞命运,这些过程的异常会引起肥胖、糖尿病、骨质疏松、组织器官纤维化以及癌症等.本文就Wnt10B在疾病中所起作用及相关分子生物学机制的新研究进展作一综述,为相关疾病研究提供新思路.
-
Wnt10b与肿瘤的研究现状
Wnt信号通路参与了乳腺癌、消化系统肿瘤、生殖系统肿瘤和骨骼系统肿瘤等多种肿瘤的发生发展过程，在肿瘤的发生发展中所起到的作用的研究备受关注，其经典通路尤为受到重视，W n t10b作为W n t蛋白家族重要成员之一，通过W n t经典通路发挥作用，故本文对近年来关于W n t10b与肿瘤关系的研究做一综述。
-
腺病毒介导的Wnt10b对HaCaT细胞迁移的作用及机制
目的:探讨Wnt 10b对HaCaT表皮细胞迁移的影响及机制.方法:分别用重组腺病毒Ad-GFP、Ad-GFP-Wnt 10b感染HaCaT表皮细胞,利用细胞免疫荧光技术检测腺病毒Ad-GFP-Wnt 10b感染细胞后的过表达情况;采用细胞划痕实验,于不同时间点观察并记录经Wnt10b处理后,HaCaT细胞体外迁移功能的改变;进一步采用Westen blot技术检测不同腺病毒处理后,HaCaT细胞中Wnt信号关键分子β-catenin、细胞粘附分子E-cadherin表达的改变情况.结果:①Ad-GFP-Wnt 10b感染HaCaT细胞48 h后,细胞内GFP表达上调,细胞免疫荧光染色显示Wnt 10b处理组高表达Wnt1 0b蛋白;②HaCaT细胞经Ad-GFP-Wnt 10b处理后,细胞创面愈合速度明显增快;③Wnt 10b处理组细胞β-catenin蛋白表达水平显著高于对照组,而E-cadherin蛋白表达水平显著低于对照组.结论:Wnt 10b能促进HaCaT细胞迁移,且该效应涉及经典Wnt/β-catenin信号的激活及由E-cadherin介导的细胞粘附性的减弱.
-
静态张应力对人牙周膜成纤维细胞Wnt10b及DKK1蛋白表达的影响
目的 研究不同静态张应力作用下人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs) Wnt10b和DKK1蛋白的表达.方法 采用酶解组织块法培养hPDLFs.用加载装置,对hPDLFs施加不同的静态张应力.按加力时间不同将细胞随机分为2h、4h和6h组,每组再按弹力形变不同分为0％、8％、12％和16％形变组,0％为对照组.Western blot技术检测不同时间点和不同形变率hPDLFs中Wnt10b,DKK1蛋白的表达.各组分别进行组内比较.结果 在2h、4h、6h组加力与未加力的hPDLFs比较,Wnt10b蛋白表达显著减少,DKK1蛋白表达显著增多.各组内随着形变率的增大,Wnt10b蛋白表达逐渐减少,DKK1蛋白表达逐渐增多.结论 静态张应力影响hPDLFs中Wnt10b及DKK1蛋白的表达.
-
大鼠正畸牙移动中牙周组织 Wnt10 b和β－catenin 的表达研究
目的：观察Wnt10b和β－catenin在大鼠正畸牙齿移动牙周组织中的表达，探讨Wnt10b和β－catenin在正畸牙齿移动牙周组织改建中的作用。方法建立30只雄性SD大鼠左侧上颌第一磨牙近中移动模型，右侧上颌第一磨牙不加力作为自身对照。分别在牙齿移动1、3、5、7、10、14 d时处死动物，制取上颌标本。进行免疫组化分析。结果对照组大鼠牙周组织中，Wnt10b和β－catenin低表达。实验组牙周组织中，β－catenin表达增加在各时间点均有显著差异（P＜0．01），Wnt10b仅在5、7、10 d时有显著差异（ P＜0．01）。结论 Wnt10b和β－catenin参与正畸牙齿移动中牙周组织改建。
-
子宫颈鳞状细胞癌中Klotho与Wnt10b的表达及其相关性
目的 检测正常子宫颈上皮、子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)以及子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)组织中Klotho和Wnt10b的表达,探讨二者在子宫颈癌发生、发展过程中的作用及其相关性.方法 采用免疫组化SP法检测Klotho及Wnt10b在正常子宫颈上皮、CIN及CSCC组织中的表达.结果 Klotho在正常子宫颈组织中的表达显著高于CIN及CSCC组织,其表达与子宫颈癌患者的年龄无关,与子宫颈癌FIGO分期、癌细胞分化程度以及淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P＜0.05).Wnt10b在CSCC组织中的表达明显高于正常子宫颈上皮组织及CIN组织,其表达与分化程度、FIGO分期及淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P＜0.05).Klotho与Wnt10b的表达呈负相关(r.=-0.416,P＜0.01).结论 Klotho和Wnt10b可能在子宫颈癌的发生、发展过程中起重要作用,联合检测二者有助于子宫颈癌发病机制的进一步研究.
-
Wnt10b、β-catenin与鼻咽癌放射敏感性的关系
目的 探讨Wnt/β-catenin信号通路与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系.方法 收集对数生长期以及经直线加速器6MV X射线0、2、4、6 Gy照后48 h的鼻咽癌CNE2细胞和放射抗拒的CNE-2 (R743)细胞,RT-PCR方法检测Wnt10b基因、β-catenin基因mRNA的表达,Western blot检测Wnt10b、β-catenin蛋白的表达.结果 放射抗拒株CNE-2(R743)细胞的Wnt10b和β-catenin基因mRNA及蛋白的表达均高于放射敏感的CNE 2细胞(P＜0.05).经照射后CNE 2细胞和CNE-2 (R743)细胞的Wnt10b和β-catenin的mRNA及蛋白表达量随着照射剂量的增加而增加;在相同照射剂量下放射抗拒株CNE-2 (R743)细胞Wnt10b和β-catenin的表达量均高于CNE 2细胞(P＜0.05).结论 Wnt/β-catenin信号通路可能与鼻咽癌细胞放射敏感性有关.
-
结直肠癌预后分子标志物WNT10B 及WNT家族对结直肠癌的影响
目的:探讨WNT10B对结直肠癌预后的影响和分子机制以及WNT家族对结直肠癌进展的影响.方法:采用癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)中结直肠癌与癌旁47对样本的mRNA表达数据分析WNT家族差异表达基因,对差异基因501例结直肠癌样本进行总生存期和无复发生存期的生存分析,并对预后有影响的基因进行年龄、性别、临床分期的多因素校正预后分析及临床病理特征的相关性分析,后进行基因富集分析(GSEA)确定分子通路.结果:WNT家族中的WNT2、WNT2B、WNT3、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT9A、WNT10A、WNT10B和WNT16共10个基因在癌与癌旁组织差异有统计学意义(P<0.01),其中WNT5A和WNT10B对于总生存期有显著影响(P<0.05),WNT10A和WNT10B对于无复发生存期有显著影响(P<0.01);WNT10B校正年龄、性别、临床分期之后,对总生存期(P=0.003)和无复发生存期(P=0.08)影响仍然有统计学意义;WNT10B表达水平与患者肿瘤大小、淋巴结转移有关(P<0.05),与其他临床病理特征无关(P>0.05);神经活性的配体-受体相互作用信号通路和细胞黏附分子通路可能是WNT10B影响结直肠癌预后的重要分子通路.结论:WNT家族对于结直肠癌的进展有重要的影响,其中WNT10B对于总生存期和无复发生存期影响显著,可以作为结直肠癌诊断和预后的分子标志物.
-
胃癌组织Wnt10b的表达及意义
目的：检测胃癌及癌旁组织中 Wnt10b 的表达,探讨其与临床病理参数的关系。方法收集25例胃癌患者手术切除的癌组织及对应的癌旁组织,用实时荧光定量 PCR检测 Wnt10b mRNA的表达,Western-blot技术检测 Wnt10b蛋白的表达,分析 Wnt10b mRNA在胃癌组织中的表达与临床病理参数的关系。结果胃癌组织中 Wnt10b mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁组织(P<0.001),胃癌组织中 Wnt10b mRNA 表达阳性率与肿瘤远处转移相关(P<0.05),但与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、分化程度和浸润深度无关。结论 Wnt10b在胃癌组织中呈活化状态,可能参与胃癌的发生发展。
关键词： 胃癌 Wnt10b 实时荧光定量PCR Western-Blot -
癌相关成纤维细胞通过上调WNT10B促进乳腺癌细胞增殖
目的 观察成纤维细胞对乳腺癌细胞MCF-7表达WNT10B和增殖能力的影响.方法 Transwell实验共培养1.0 ×105个MCF-7细胞和1.0×105个成纤维细胞2d,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测成纤维细胞对MCF-7表达WNT10B的影响;三维立体培养2.0×102个MCF-7和5.0×103个成纤维细胞12d,检测MCF-7细胞克隆形成率(CFE).结果 与正常乳腺成纤维细胞(NBFs)共培养2d后,MCF-7细胞中WNT10B的相对表达量为2.1706±0.0646,与癌相关成纤维细胞(CAFs)共培养2d后,MCF-7细胞中WNT10B的相对表达量为3.8642±0.1052,CAFs促进MCF-7细胞表达WNT10B作用更明显(P＜0.05).三维立体共培养实验中,空白对照组中MCF-7细胞的克隆形成率是(6.67±1.89)％,NBFs细胞组中MCF-7细胞克隆形成率是(8.83±2.52)％,与空白对照组比较略有升高,差异无统计学意义(P＞0.05);CAFs细胞组中MCF-7细胞克隆形成率是(37.83±2.02)％,与空白对照组和NBFs组比较均有明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);在CAFs细胞组加入WNT10B单抗后,MCF-7细胞克隆形成率是(11.67±2.56)％,与加入单抗前比较明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CAFs可以通过上调WNT10B促进乳腺癌细胞增殖.
-
重组人Wnt10b蛋白的制备及其促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达
目的 基因工程制备重组人Wnt10b蛋白,观察其促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达.方法 以pUC19-Wnt10b为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增cDNA,扩增产物和pEGFP-N1载体双酶切,连接酶连接构建pEGFP-N1-Wnt10b真核表达载体,酶切和测序鉴定该载体；LpofectamineTM 2000将该载体转染入COS-7细胞,计算转染率.Western blot和免疫细胞化学法检测COS-7细胞Wnt10b蛋白表达；将子鼠背部皮肤置于含Wnt10b蛋白的培养液中培养2d,Western blot法检测皮肤Wnt10b和β-连环蛋白的表达.结果 PCR扩增出的人Wnt10b基因cDNA正确克隆到pEGFP-N1载体,成功构建pEGFP-N1-Wnt10b；pEGFP-N1-Wnt10b,成功转染COS-7细胞,转染率为20％ ～ 40％,转染后COS-7细胞Wnt10b蛋白表达较对照组增加(P＜0.05),COS-7细胞分泌的Wnt10b蛋白能促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达(P＜0.05).结论 成功制备具有生物活性的重组人Wnt10b蛋白,Wnt10b蛋白促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达增加.
-
正畸力作用下压力侧Wnt10b、RANKL在牙周组织中的表达
目的:研究大鼠在正畸力作用下压力侧wnt10b、RANKL在牙周组织中的表达变化.方法:将42只健康雄性SD大鼠随机分为7组,即0h、6h、12h、24 h、5d、7d、14d组,使用镍钛拉簧对第一磨牙向近中施加50 g正畸力,以0h为对照组,每组处死6只.应用实时定量PCR(RT-PCR)对wnt10b、RANKL的mRNA表达进行检测.结果:Real-time PCR结果显示,与对照组相比,实验组压力侧牙周组织中Wnt10b、RANKL mRNA均有表达,其中wnt10b于加力初期表达受抑制,随后升高,于5d达高峰随后下降,14 d恢复至正常水平.RANKL表达随加力时间延长而逐渐升高,7d达到高峰,随后下降.结论:Wnt10b、RANKL参与正畸加力作用下的牙周组织改建.
-
Wnt10b对体外培养的人毛乳头细胞诱导毛囊生成能力的影响
目的:探讨Wnt10b对体外长期培养的人毛乳头细胞诱导毛囊生成能力的影响作用.方法:将人毛乳头细胞在体外传代培养到第8代后,加入人重组蛋白Wnt10b共培养,通过免疫荧光染色检测人毛乳头细胞的β-catenin表达,Real-time QPCR检测与毛乳头细胞诱导能力相关的特异性标记物碱性磷酸酶(ALP)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达,以及ALP染色检测Wnt10b对人毛乳头细胞的作用.结果:Wnt10b能够通过经典的Wnt/β-catenin信号通路作用于体外长期培养的人毛乳头细胞,上调人毛乳头细胞特异性标记物ALP和IGF-1的表达,从而维持人毛乳头细胞的诱导能力.结论:Wnt10b能够通过上调特异性标记物ALP和IGF-1的表达来维持体外长期培养的人毛乳头细胞的毛囊诱导能力.
关键词： Wnt10b β-连环蛋白 胰岛素样生长因子-1 人毛乳头细胞 碱性磷酸酶 -
rhPTH(1-34)对糖皮质激素性骨质疏松症的防治作用
目的 建立糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)大鼠模型及其提取骨髓间充质干细胞(BMSCs),联合Micro-CT和生物学技术检测rhPTH(1-34)对GIOP的防治作用.方法 SPF级SD雌性大鼠随机均分为正常对照组、甲强龙组(模型组)、甲强龙+生理盐水组(空白对照组)和甲强龙+rhPTH(1-34)组(试验组).分别对股骨近端行Micro-CT检查、组织病理染色,测定Wnt10b、β-catenin蛋白表达;提取模型BM-SCs,经rhPTH(1-34)干预后,行ALP和茜素红染色.结果 在Micro-CT中,试验组与模型组相比,前者BV/TV、Tb.Th、Tb/N降低,Tb/sp升高(P<0.05).ROI三维重建可见试验组骨小梁骨质改善,局部性修复;茜红素染色中,试验组可见骨小梁密度较模型组高、骨小梁形态较好,骨组织中Wnt10b、β-catenin表达较模型组增加(P<0.05);GIOP大鼠模型提取BMSCs予BMP-2诱导,经rhPTH(1-34)干预后,ALP和茜素红染色结果提示试验组成骨增强(P<0.05).结论 rhPTH(1-34)可通过增强Wnt/β-catenin信号通路中成骨因子Wnt10b、β-catenin防治GIOP,改善微观骨性结构.
-
Wnt10b对体外培养小鼠触须毛囊生长的作用研究
目的:研究Wnt10b对体外培养小鼠触须毛囊生长的作用.方法:构建Dct-LacZ小鼠触须毛囊体外培养模型.用腺病毒Ad-Wnt10b和Ad-GFP感染触须毛囊2d、4d并对触须生长长度进行测量.X-gal染色检测触须毛囊中黑素细胞数量.Western blot检测酪氨酸相关蛋白1(tyrosinase-related protein 1,TRP-1)、酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)蛋白的表达水平.结果:腺病毒感染4d后长度测量结果显示Wnt10b处理组的触须毛囊生长长度明显高于GFP对照组(0.58±0.03 vs.0.09±0.05,P=0.000);X-gal染色结果显示Wnt10b处理组的黑素细胞数量明显多于GFP对照组;Western blot结果显示Wnt10b处理组的触须毛囊中TRP-1和TYR的蛋白表达明显升高(1.14±0.16 vs.0.55±0.22,1.34±0.33 vs.0.77±0.09;P=0.020,P=0.045).结论:Wnt10b能够促进小鼠触须毛囊的体外生长.
-
Wnt10b在小鼠毛囊周期中的表达
目的 初步探讨Wnt10b在小鼠毛囊生长周期中的表达变化规律及其意义.方法 首先用RT-PCR检测Wnt10b在小鼠皮肤中的表达情况,然后以免疫组化检测Wnt10b在毛囊生长周期各阶段的表达定位及变化,同时检测了核增殖抗原Ki67在毛母质中的表达情况.结果 Wnt10b在生后第1周期生长期皮肤的mRNA表达量显著高于退化期和静止期(P<0.01),生长中期达到峰值,退化期和静止期呈低表达;第2周期生长早期表达量略高于退化期和静止期.Wnt10b蛋白特异性表达于生长期毛囊的毛母质(Matrix)部位;退化期和静止期在整个毛囊都不表达;第2周期生长早期主要表达于毛囊次级毛芽.Ki67在毛母质中的表达变化情况与Wnt10b具有一致性.结论 Wnt10b的表达具有严格的时空特异性,生后第1周期特异性表达于生长期毛囊的毛母质细胞,第2周期生长早期表达于毛母质细胞的祖细胞次级毛芽,提示Wnt10b可能对毛母质细胞增殖起作用,进而调控毛囊的生长并维持毛囊周期.
-
Wnt10b在肝细胞肝癌中的表达
目的：比较分析 Wnt10b分别在肝细胞肝癌（简称肝癌）及对应癌旁组织中的表达水平，探讨 Wnt10b与肝癌及其临床病理参数的相关性。方法采用实时定量PCR 和 Western blot技术分别检测33例肝癌及其对应癌旁组织中 Wnt10b mRNA及蛋白的表达。结果 Wnt10b mRNA及蛋白在肝癌组织中表达量明显高于对应的癌旁组织（P＜0．05）。结论 Wnt10b在肝癌组织中表达上调，结合 Wnt信号传导途径的功能，提示 Wnt10b异常活化可能参与了肝癌的始动和发展过程。
