首页 > 文献资料
-
褪黑素在病毒性心肌炎中的保护作用
目的 探讨褪黑素在柯萨奇病毒B3(Coxsackie virus B3,CV B3)感染的病毒性心肌炎小鼠中的保护作用,为病毒性心肌炎的治疗提供新的手段.方法 将64只5周龄的雄性BALB/c小鼠随机分为3组:正常对照组、实验对照组、褪黑素组.以腹腔注射CVB3建立急性病毒性心肌炎模型,接种当天记为第0天,24h后正常对照组、实验对照组每日分别经腹腔注射等量生理盐水,褪黑素组每日经腹腔注射溶于乙醇及生理盐水的褪黑素.分别于接种后第7天和第14天从各组随机抽取8只处死,留取心肌组织标本.用苏木素-伊红染色法观察心肌炎症病理改变,蛋白印迹法定量检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 9的蛋白水平表达,用免疫组织化学法检测心肌组织中Cleaved-caspase 3的表达量.结果 与正常对照组比较,实验对照组心肌炎症病理评分较高,Bax、Cleaved-caspase 9凋亡蛋白表达水平和Cleaved-caspase 3表达量上调,Bcl-2蛋白水平表达下调,给予褪黑素干预后心肌炎症病理评分降低,并可明显下调Bax、Cleaved-caspase 9凋亡蛋白表达水平和Cleaved-caspase 3表达量,上调Bcl-2蛋白表达水平.结论 褪黑素能够减轻心肌损伤,下调病毒性心肌炎小鼠心肌组织中Bax、Cleaved-caspase 3、Cleaved-caspase 9的表达和上调Bcl-2的表达,从而对病毒性心肌炎小鼠起到保护作用.
-
黄芪注射液对病毒性心肌炎动物模型白细胞介素作用
目的 研究黄芪注射液对病毒性心肌炎动物模型白细胞介素水平的影响,探讨治疗病毒性心肌炎的有效方法 .方法 用亲心肌细胞株柯萨奇病毒B3感染Balb/c小鼠,建立心肌炎模型.用黄芪注射液腹腔注射治疗,分别检测外周血中IL-2、IL-8和IL-18的水平,并做心脏组织病理学检查.结果 黄芪治疗后5～21 d,小鼠外周血中IL-2、IL-8和IL-18水平明显降低,心肌炎症状明显改善.结论 黄芪通过调节IL-2、IL-8和IL-18等细胞因子水平,从而对病毒性心肌炎起到明显的治疗作用.
-
益心康对感染柯萨奇病毒B3的大鼠体外心肌细胞CVB3mRNA复制及相关细胞因子的影响
[目的]通过检测益心康药液作用于感染柯萨奇病毒B3(CVB3)后的乳鼠心肌细胞中柯萨奇病毒mRNA的复制情况及其所释放的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及转化生长因子-β(TGF-β)表达情况,进一步探讨益心康对病毒性心肌炎的病毒复制及相关细胞因子的作用机制.[方法]使益心康的药液作用于乳鼠心肌细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌细胞中柯萨奇病毒mRNA的复制情况及其所释放的TNF-α及TGF-β的表达水平.[结果]益心康在CVB3感染的病毒性心肌炎的发病及发展过程中有抑制CVB3复制的作用,同时可以减少相关细胞因子TNF-α、TGF-β的分泌.益心康组(D组)、益心康加地塞米松组(E组)的细胞中的CVB3mRNA、TNF-α、TGF-β表达水平明显低于病毒感染组(P＜0.01),同时低于利巴韦林组(P＜0.05),均有统计学意义；D组、E组之间P＞0.05,无统计意义.[结论]益心康对柯萨奇病毒感染心肌细胞具有显著保护作用.
关键词： 益心康 柯萨奇病毒B3 心肌细胞 柯萨奇病毒mRNA复制 -
疏风解毒胶囊对小鼠病毒性心肌炎模型的影响
目的 探讨疏风解毒胶囊对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌组织形态和血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、淀粉样蛋白A(SAA)水平的影响.方法 Balb/c小鼠随机分为对照组,模型组,疏风解毒胶囊0.1、0.2、0.5g/kg组和利巴韦林0.1g/kg组,除对照组外ip柯萨奇病毒B3 (CVB3)建立VMC模型,造模2h后给药,连续给药7d,第4、8天各处死一半小鼠,取心肌组织HE染色观察病理变化,眼眶取血测定血清TNF-α、SAA水平.结果 与对照组比较,模型组出现心肌炎症及坏死,血清TNF-α、SAA水平明显升高(P＜0.05);疏风解毒胶囊0.2、0.5 g/kg组与模型组比较,心肌组织病理变化明显减轻;血清TNF-α、SAA水平明显降低(P＜0.05).结论 疏风解毒胶囊缓解VMC小鼠心肌病理形态损伤、抑制炎症,发挥明显的抗病毒作用.
-
复方羌芪水提液体外抗柯萨奇病毒B3作用的研究
目的:测定复方羌芪水提液的体外抗CVB3作用,并对其抗病毒机理进行初步的探讨.方法:用含不同浓度复方羌芪水提液的维持液培养CVB3感染的Vero细胞,48h后用MTT法测定细胞活性;培养上清液滴定TCID50.结果:复方羌芪水提液能抑制CVB3对Vero细胞的致病变作用(CPE),使细胞存活率升高,培养上清病毒滴度降低;且随药物浓度及药物与病毒作用时间的延长抑制作用增强.结论:复方羌芪水提液的抗病毒机制可能是直接杀伤病毒及影响病毒在细胞内的生物合成,而不是影响病毒吸附和穿入环节.
-
反义硫代寡核苷酸对小鼠柯萨奇病毒B3性心肌炎影响的研究
目的:观察AODN对小鼠病毒性心肌炎的影响.方法:选取4～6周龄雄性Ba1b/C鼠(体重18～20 g)48只,随机分为6组,8只/组,其中正常对照和病毒对照各1组,4个实验组.正常对照组小鼠腹腔内注射0.1mlRPMI1640,其它5组小鼠腹腔内接种0.1 ml CVB 3(200TCID50),半小时后4个实验组小鼠腹腔内注射0.2 m1不同剂量的AODN,正常对照组和病毒对照组分别注射0.2 ml AODN媒体溶液.7天后测定血清LDH活性,并且进行心肌组织病理学检查.结果:随注射AODN剂量增加,血清LDH活性逐渐降低;心肌细胞变性、坏死及间质炎性细胞浸润程度逐渐减轻;心肌炎发病率也逐渐降低.结论:AODN可保护小鼠心肌组织抵抗CVB3感染.
-
柠檬提取物对新城疫及柯萨奇病毒作用的实验研究
目的:测试并比较柠檬提取物0#及3#在不同的实验方法下对新城疫病毒和柯萨奇病毒B3的杀灭作用.方法:直接杀灭作用:将新城疫病毒和柯萨奇病毒B3分别与柠檬提取物0#和3#体外作用1 h,然后加入到培养好的Vero细胞中,培养72 h.预防作用:将不同浓度的柠檬提取物0#和3#分别加入培养好的Vero细胞中作用24 h,然后分别加入新城疫病毒和柯萨奇病毒B3与柠檬提取物0#和3#的混合液,培养72 h.治疗作用:将新城疫病毒和柯萨奇病毒B,分别加入培养好的Vero中,作用1 h,然后分别加入0#及3#药品,培养72 h.3种方法与未加柠檬提取物的病毒液对细胞的作用相比较,通过CPE法观察药品对病毒的作用.结果:在柠檬提取物0#对新城疫病毒的直接杀灭作用中,实验组较对照组有显著性差异(P＜0.05);在柠檬提取物3#对柯萨奇病毒B3的预防作用中,实验组较对照组有显著性差异(P＜0.05);在柠檬提取物0#及3#对新城疫病毒和柯萨奇病毒B3的治疗作用中,实验组较对照组无显著性差异(P＞0.05).结论:柠檬提取物0#对新城疫病毒具有杀灭作用;柠檬提取物3#对柯萨奇病毒具有预防作用;0#及3#对新城疫病毒和柯萨奇病毒B3均无治疗作用.
-
表达不同接头长度的MDC与CVB3VP1融合基因疫苗免疫效果的研究
目的:观察表达不同接头(Linker)长度的巨噬细胞源趋化因子(MDC)与CVB3VP1融合基因疫苗的免疫效果.方法:将6～8周龄雄性BALB/C小鼠随机分为A～D 4组,分别肌肉注射pcDNA3、pcDNA3/VP1、pcDNA3/MDC-L10-VP1、和pcDNA3/MDC-L19-VP1,每次接种100μg/只,4周注射一次,共3次,第3次免疫后3周,每组取3只小鼠,制备脾细胞,用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性;每组取3只小鼠以3LD50CVB3病毒攻击,第7天处死,取心脏,制备石蜡切片,观察各组小鼠心肌病理学改变;每组取8只小鼠用5LD50的CVB3腹腔内攻击,观察并记录小鼠死亡情况至感染后的第21天.结果:第3次免疫后,D组中小鼠脾淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性显著高于其它各组(P<0.01);以5LD50CVB3感染小鼠后,D组小鼠存活率高;以3LD50CVB3病毒攻击后,D组小鼠心肌病理改变轻.结论:融合基因疫苗pcDNA3/MDC-L19-VP1能诱导小鼠对CVB3VP1产生较强的特异性免疫应答,提高小鼠的生存率.
-
叶酸对柯萨奇病毒B3诱导乳鼠心肌凋亡保护作用
目的 探讨叶酸对柯萨奇病毒B3诱导的乳鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因与蛋白表达的影响.方法 取成熟健康雌性Wistar大鼠随机分为4组,分别为对照、叶酸、柯萨奇病毒B3及柯萨奇病毒B3+叶酸组；孕前灌胃给予叶酸2周,孕第5d腹腔注射给予柯萨奇病毒B3,连续5d；取自然分娩乳鼠心肌细胞,切片观察乳鼠心肌损伤；原位末端标记法( tunel)检测乳鼠心肌细胞凋亡；蛋白免疫印迹(western blot)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定乳鼠心肌细胞凋亡相关Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白及基因表达.结果 柯萨奇病毒组乳鼠心肌细胞损伤明显,凋亡细胞增加,加用叶酸后状态改善；病毒组乳鼠心肌细胞Bax、Caspase-3蛋白表达(0.608±0.060,0.951±0.038)及基因表达(0.951 ±0.098,0.960±0.074)高于病毒+叶酸组,病毒组Bcl-2蛋白表达(0.350±0.037)及基因表达(0.423±0.051)低于病毒+叶酸组.结论 怀孕母鼠早期感染柯萨奇病毒可致乳鼠心肌细胞凋亡增加,补充叶酸对乳鼠心肌细胞凋亡具有明显保护作用.
-
心肌康颗粒对病毒性心肌炎小鼠模型治疗作用的实验研究
目的:探讨心肌康颗粒治疗病毒性心肌炎(VMC)的作用机制.方法:予BALB/C小鼠腹腔接种柯萨奇病毒B3(CVB3)建立VMC模型,随机分为大、中、小剂量实验组、对照组等7组,观察7组在病态表现及死亡数、血清乳酸脱氢酶(LDH)测定、心肌组织病理学检验及病毒TCID50滴定、中和抗体滴定、干扰素诱生等方面的差别.结果:实验组与对照组在以上各方面均有明显差异,尤以大、中剂量组更为显著.结论:心肌康具有抗病毒、抗炎、调节免疫功能的作用.
-
柯萨奇病毒B3VP1重组腺病毒载体疫苗rAd/VP22-L-VP1的构建及表达
背景:VP22 是单纯疱疹病毒1 型(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)UL49 基因编码的碱性蛋白质,具有蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD),能够把与之融合的蛋白或与之结合的DNA 等大分子跨膜送递到邻近细胞,在基因靶向预防中表现出优势.目的:构建表达单纯疱疹病毒1 型VP22 与柯萨奇病毒B3 主要中和抗原VP1 融合蛋白的重组腺病毒载体疫苗,观察外源基因在HEK293 细胞中的良好表达.方法:PCR法扩增目的基因HSV-1 VP22 和CVB3 VP1,经Linker 连接,将VP22-L-VP1 插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,构建重组穿梭质粒AdTrack-CMV/VP22-L-VP1.再将此载体与腺病毒骨架载体pAdEasy-1 在大肠杆菌BJ5183 中进行同源重组,生成重组腺病毒质粒pAd/VP22-L-VP1,脂质体介导pAd/VP22-L-VP1 转染HEK293 细胞包装重组腺病毒rAd/VP22-L-VP1.HEK293 细胞上进行病毒扩增和滴定并检测外源基因的表达.结果与结论:构建的重组腺病毒载体pAd/VP22-L-VP1 经过第4 轮扩增,其滴度达到6.77×107 pfu/mL,体外感染293 细胞可见VP22 和VP1 融合蛋白的表达.说明实验成功构建并包装重组腺病毒rAd/VP22-L-VP1.
-
微小RNA在病毒性心肌炎中的研究进展
微小核糖核酸(microRNAs,miRNAs)是一类内源性小分子非编码RNA,主要在转录后水平调节基因表达.miRNAs参与心脏和血管的发育,其异常表达与动脉粥样硬化、冠心病、心力衰竭及高血压等疾病相关.近年来miRNAs在冠心病、高血压病、心律失常、心力衰竭、心血管重构、心脏发育、心肌细胞和血管内皮与平滑肌细胞的功能调控等方面的研究取得了一系列的进展.病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)是常见的心血管疾病.VMC的发病机制至今尚未完全阐明,主要由柯萨奇病毒B3(coxsackie virus B3,CVB3)感染引起.研究证实,miRNAs和CVB3密切相关,参与VMC的发病机制,在VMC的发生发展中有重要作用.对miRNAs在VMC中的作用研究有助于深入了解VMC的发病机制,也为VMC的治疗提供新的研究方向.该文就miRNAs和CVB3的关系,以及miRNAs在VMC发病机制中的作用进行综述.
-
葛根素对病毒性心肌炎的保护机制研究
目的 探讨Nrf2在病毒性心肌炎小鼠中的表达及葛根素(Pue)治疗后Nrf2的变化及作用.方法 将130只BALB/c纯种4周龄雄性小鼠,随机分成对照组(20只)、VMC组(30只)、Nrf2激活剂组(20只)、不同浓度Pue组(各20只),用柯萨奇B3型病毒(CVB3),通过VMC经典造模方法进行造模.分别在实验第0、4、7、14、28天采血、杀鼠,留取心肌组织.采用流式细胞术检测小鼠心肌细胞的凋亡情况,应用Real-Time PCR法检测Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA、Fas mRNA、TGF-β1 mRNA的水平及用Western blot 法检测Nrf2、HO-1、Fas、TGF-β1的蛋白表达情况.应用统计软件SPSS19.0对结果进行统计学分析,计量资料以均值±标准差(x±s)表示,配对样本用均值t检验,成组资料用双向方差分析,相关性分析应用Spearman相关检验,P＜0.05为差异有显著性.结果 Nrf2 rnRNA及其蛋白在各组均有表达.通过CPDT 以及Pue分析Nrf2与HO-1、Fas、TGF-β1之间的相关关系,得出完全一致的结果,说明Nrf2与HO-1、Fas、TGF-β1之间的关系,不因干预措施的改变而变化.CPDT及Pue组HO-1的转录及蛋白表达明显升高,且与Nrf2呈正相关(r=0.969,P＜0.01).在一定Pue剂量梯度(≤45 mg/kg)下,HO-1的转录及蛋白表达呈剂量依赖性;CPDT及Pue组心肌细胞凋亡数减少,Nrf2与Fas呈负相关(r=-0.968,P＜0.01);CPDT及Pue组中TGF-β31在一定的剂量梯度下,随着剂量的增大,TGF-β1表达降低,Nrf2与TGF-β1呈负相关(r=-0.753,P＜0.01).结论 Nrf2在VMC中表达增高,参与VMC的发生、发展过程.Nrf2在VMC中通过上调抗氧化酶HO-1达到抗氧化作用;通过抑制Fas/FasL信号通路实现抗心肌凋亡作用;通过抑制TGF-β1的转录及蛋白表达,抑制心肌纤维化.Pue对VMC的治疗作用是通过激活Nrf2,进而产生抗氧化、抗心肌凋亡和抗心肌纤维化作用.
-
不同剂量黄芪注射液对病毒性心肌炎小鼠Caspase-3活性的影响
目的 观察黄芪注射液对病毒性心肌炎小鼠发生细胞凋亡及对半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性的影响.方法 4~6周龄雄性Balb/c小鼠60只,随机分为正常对照组、模型对照组、黄芪低剂量组、黄芪中剂量组、黄芪高剂量组5组,每组各12只.制备小鼠急性病毒性心肌炎模型后黄芪低、中、高剂量组分别腹腔注射黄芪注射液0.1、0.2、0.4 mL/(g·d),正常对照组及模型对照组分别给予腹腔注射生理盐水0.1 mL/(g·d),每日1次,连用14 d.在第3、7、10、14天取心脏及血清标本,进行病理学检查、Caspase-3表达活性的检测、肌酸肌酶同工酶(CK-MB)及心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)的检测.结果 (1)模型对照组小鼠心肌病理积分、CK-MB、cTnⅠ值显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)黄芪低、中、高剂量组Caspase-3表达活性、CK-MB、cTnⅠ值、心肌病理积分均明显低于模型对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(3)黄芪低、中、高剂量组各组间心肌病理积分、CK-MB及Caspase-3表达活性差异无统计学意义(P>0.05).结论 (1)细胞凋亡参与了病毒性心肌炎发生时小鼠的心肌损伤,Caspase-3在其中起到重要作用;(2)小剂量的黄芪注射液即可以通过下调心肌细胞Caspase-3活性减少病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡,减轻心肌细胞损伤.
-
益心康对体外心肌细胞感染柯萨奇病毒B3影响的实验研究
目的 观察益心康对体外心肌细胞感染柯萨奇病毒B<,3>的影响.方法 益心康药液作用于乳鼠心肌细胞,观察心肌细胞的搏动、形态及酶学水平的变化.结果 利巴韦林组(C组)CK-MB、LDH、AST水平低于病毒感染组(B组),P<0.01.益心康组(D组)、益心康加地塞米松组(E组)细胞中的CK-MB、LDH、AST水平明显低于B组,同时低于C组.D组、E组的酶学水平与B组比较,P<0.01;与C组比较,P<0.05;D组、E组之间比较,P>0.05.结论 益心康对柯萨奇病毒感染的心肌细胞具有保护作用.
-
小鼠β防御素2与柯萨奇病毒B3 VP1融合基因疫苗的构建和免疫效果研究
目的:构建小鼠β-防御素2(Mouse beta-defensin-2,mBD2)与柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus B3,CVB3)VP1融合基因疫苗,并观察其对小鼠的免疫效果.方法:克隆mBD2基因,构建重组质粒pcDNA3/mBD2和pcDNA3/mBD2-L-VP1.将4～6周龄BALB/c雄性小鼠随机分为5组,分别于股四头肌注射PBS(A组)、pcDNA3(B组)、pcDNA3/mBD2(C组)、pcDNA3/VP1(D组)、pcDNA3/mBD2-L-VP1(E组),每次接种剂量100 μg/只,3周免疫1次,共3次.每次免疫后第14天眼眶静脉取血,用微量中和试验滴定血清中和抗体效价.第三次免疫后第21天,每组随机取3只小鼠,制备脾淋巴细胞悬液,用CCK-8细胞计数法检测特异性CTL的杀伤活性;每组取3只小鼠以3LD50 CVB3病毒攻击,第7天取血处死,检测血清病毒滴度.结果:成功克隆了mBD2基因,构建了pcDNA3/mBD2和pcDNA3/mBD2-L-VP1两种重组质粒;D组和E组血清中和抗体滴度随免疫次数增加而提高(P＜0.01);E组血清中和抗体滴度和脾细胞特异性CTL杀伤活性显著高于其他组(P＜0.01),血中CVB3病毒滴度显著低于其他组(P＜0.01).结论:pcDNA3/mBD2-L-VP1能诱导小鼠对CVB3产生较强的体液免疫和细胞免疫,能有效抑制病毒在体内增殖.
-
CVB3腺病毒载体疫苗Ad/MDC-VP1的构建及免疫效果研究
目的:构建巨噬细胞源趋化因子(Macrophage-derived chemokine,MDC)与柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)VP1融合基因腺病毒载体疫苗Ad/MDC-VP1,并观察对小鼠的免疫效果.方法:利用AdEasy-1系统构建重组腺病毒Ad/MDC-VP1及腺病毒Ad,并检测融合蛋白MDC-VP1的表达.BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,每组18只,分别肌肉注射Ad/MDC-VP1和Ad,免疫2次,间隔2周.分别用ELISA法和微量中和试验法检测血清CVB3 VP1特异性IgG抗体和中和抗体;末次免疫后3周,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击后检测小鼠血中病毒滴度并观察保护率.结果:Ad/MDC-VP1和Ad构建成功,并检测到MDC-VP1融合蛋白的表达.Ad/MDC-VP1组血清CVB3 特异性VP1 IgG、中和抗体水平、特异性CTL活性较对照组明显增强(P＜0.01);病毒攻击后实验组血中病毒滴度明显降低,生存率明显高于对照组(P＜0.01).结论:Ad/MDC-VP1能提高小鼠细胞和体液免疫水平,增加病毒攻击后的保护率.
-
维生素C、E 对柯萨奇B3病毒感染的心肌细胞的保护作用
目的探讨抗氧化剂维生素C、E在治疗病毒性心肌炎过程中的重要作用.方法体外培养乳鼠心肌细胞,分别在感染柯萨奇B3病毒前后加入一定浓度的维生素C、E及其合剂,待病毒对照组细胞病变达++++时,以MTT法测定细胞存活率,应用全自动生化分析仪测定细胞上清液中的心肌酶活性.结果实验组的细胞存活率明显高于病毒对照组,心肌酶活性明显低于病毒对照组.结论维生素C、E对病毒感染的心肌细胞具有一定的保护作用,联合使用的效果明显优于单独使用.
关键词： 维生素C 维生素E 维生素C-维生素E合剂 柯萨奇病毒B3 -
维生素E对柯萨奇B3病毒感染的心肌细胞保护作用的研究
目的探讨维生素E抗柯萨奇病毒及对感染病毒的心肌细胞的保护作用.方法应用一定浓度的维生素E作用于柯萨奇病毒B3感染的心肌细胞,待病毒对照组细胞病变达++++时,以MTT法测定细胞存活率,应用全自动生化分析仪测定细胞上清液中的心肌酶活性.结果实验组的细胞存活率明显高于病毒对照组,心肌酶活性明显低于病毒对照组.结论维生素E有一定的抗病毒作用,并对病毒感染的心肌细胞具有保护作用.
-
柯萨奇B3病毒VP1基因序列及系统发生树分析
目的 研究柯萨奇B组3型病毒MKP株结构蛋白VP1基因序列及变异性.方法 在Hela细胞中增殖病毒,应用RT-PCR扩增目的基因片段,与pMD18-T载体连接,鉴定后测序,进行序列同源性及系统发生分析.结果 CVB3/MKP株VP1基因含930个碱基,编码310个氨基酸,与其他参考株比,核苷酸同源性在82.50%以上,氨基酸同源性在95.47%以上,CVB3/MKP株VP1基因与Nancy株聚簇.结论 CVB3/MKP株VP1基因与Nancy株在进化上属同一分支.CVB3/MKP株与CVB3/P株在系统发生树中的距离近.
