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基于蛋白质相互作用网络探讨化痰散结方对三阴性乳腺癌Hedgehog信号通路相关蛋白Gli1的影响
目的:在构建三阴性乳腺癌(TNBC)的蛋白质相互作用网络基础上,探讨化痰散结方对TNBC MDA-MB-231细胞增殖抑制作用以及对Hedgehog(Hh)通路转录因子Gli1表达的影响.方法:筛选在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)获得TNBC相关基因;使用STRING进行文本挖掘并构建TNBC蛋白质相互作用网络;将互作数据读入C ytoscape3.4.0,分别应用插件JEPETTO 1.3.1和MCODE1.4.2实现拓扑分析和聚类分析;基于DAVID数据库富集关键通路用于表征簇的生物学重要性.针对关键通路Hh及其转录因子Gli1,采用MTT法检测化痰散结方对MDA-MB-231细胞的增殖抑制率,Western blot法检测Gli1蛋白的表达情况.结果:构建了由1 537个节点(蛋白质)和23 681个边(相互作用)组成的蛋白质相互作用网络,分析得出关键通路Hh信号传导通路和基因Gli1.实验结果表明化痰散结方能抑制MDA-MB-231细胞的增殖并能降低Gli1蛋白的表达.结论:TNBC蛋白质相互作用网络是一个受多信号通路传导、多基因调控的复杂过程,其中Hh通路及其下游转录基因Gli1很可能是关键节点,而化痰散结方对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用机制之一是降低Hh通路中Gli1的表达.
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CGRP减轻高氧诱导的早产鼠肺泡Ⅱ型细胞损伤及对Gli1表达的影响
目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对高氧致早产鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)损伤的保护作用及对Sonichedgehog(Shh)通路Gli1蛋白表达的影响和意义.方法 分离纯化早产鼠AECⅡ,分为空气、空气+CGRP、空气+CGRP+ CGRP拮抗剂(CGRP8-37)、高氧(95％O2)、高氧+CGRP及高氧+CGRP+ CGRP8-37组.培养24h后观察AECⅡ形态,流式细胞术检测凋亡率,荧光分子探针法检测细胞内活性氧(ROS),分光光度法检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)；RT-qPCR检测表面活性蛋白C(SPC) mRNA,Western blot检测Gli1蛋白表达.结果 95％ O2诱导24 h后,AECⅡ凋亡率比空气对照增加3.6倍,ROS水平增加1.5倍,MDA增加65％,SOD降低近一半,SPC mRNA和Gli1蛋白表达显著降低(均P＜0.05)；CGRP干预后可显著减轻上述变化(P＜0.05).结论 CGRP可减轻高氧诱导的AECⅡ损伤,其机制可能与Shh信号通路的激活有关.
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肝细胞肝癌中Hedgehog信号通路效应蛋白的功能分析
目的 探讨Gli1、Gli3蛋白在肝细胞癌组织中的表达及临床意义.方法 免疫组化法检测36例肝细胞癌组织及其癌旁肝组织中Gli1、Gli3蛋白的表达,并与临床因素进行相关性分析.结果 在肝细胞癌组织及癌旁肝组织中Gli1的阳性表达率分别为75％和36.1％,Gli3的阳性表达率分别为58.3％和30.6％.Gli1和Gli3在肝细胞癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁肝组织(P＜0.05).Gli1和Gli3两种蛋白的表达呈正相关(r=0.423,P＜0.05).Gli3的表达与临床指标(年龄、肿瘤大小、分化和淋巴结转移)无关.Gli1的表达与年龄、肿瘤大小无关,但与肿瘤分化程度和淋巴结转移相关(P＜0.05).结论 Gli1、Gli3蛋白在肝细胞癌组织中有较高的阳性表达率且具有相关性,且Gli1的表达率与肿瘤分化程度和淋巴结转移相关.检测Gli1、Gli3蛋白表达有助于肝细胞癌的诊断,可能作为判断肝细胞癌恶性程度及预后的指标.
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MTSS1和Gli1蛋白在子宫内膜腺癌组织中的表达及意义
目的：探讨MTSS1和Gli1蛋白在子宫内膜腺癌组织中的表达及临床意义。方法选取2010年5月—2015年7月我院妇产科收治的36例子宫内膜腺癌患者的病变内膜组织作为研究组，同时选取36例因子宫平滑肌瘤行全子宫切除术的患者的子宫内膜组织作为对照组，采用免疫组化法检测2组研究样本中MTSS1和Gli1蛋白的阳性表达情况。结果研究组患者的病变组织中MTSS1蛋白阳性表达率明显低于对照组患者子宫内膜组织（P＜0.05）；Gli1蛋白阳性表达率明显高于对照组患者子宫内膜组织（P＜0.05）。结论 MTSS1蛋白在子宫内膜腺癌组织中低表达，Gli1蛋白在子宫内膜腺癌组织中高表达，两种蛋白可能与子宫内膜癌的发生、发展存在密切关系，有可能成为子宫内膜腺癌诊断及病情监测的辅助参考指标。
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Shh和Gli1在宫颈癌中的表达与临床意义
目的 探讨hedgehog信号通路Shh蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在宫颈癌组织中的表达及其意义.方法 采用免疫组化S-P法分别检测83例子宫颈鳞状细胞癌(SCC)、39例子宫颈上皮内瘤样病变(GIN)和23例正常宫颈组织(NC)中Shh和Gli1蛋白的表达.结果 Shh和Gli1蛋白在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌组织的表达呈逐渐上升趋势,3组比较有统计学差异(P＜0.01).Shh和Gli1蛋白表达率与病理分化程度和临床分期有密切关系,且有淋巴结转移的宫颈癌组织的表达率显著高于无淋巴结转移组(P均＜0.01).Shh和Gli1蛋白在宫颈癌中的表达呈正相关(P＜0.01).结论 在宫颈癌中Shh蛋白高度表达上调下游转录因子Gli1蛋白,Hh信号通路的激活可能在宫颈癌的发生过程中其重要作用.
关键词： 宫颈癌 免疫组织化学 Hedgehog信号通路 SHH蛋白 Gli1蛋白 -
Gli1蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义
目的 探讨Gli1在乳腺癌组织中的表达及其意义.方法 采用免疫组化S-P方法 测定64例乳腺癌组织以及52例癌旁正常乳腺组织、42例乳腺纤维腺瘤组织中Gli1蛋白的表达情况.结果 Gli1蛋白在癌旁乳腺组织及纤维腺瘤组织中不表达或弱表达,在乳腺癌组织中的明显表达,差异有统计学意义(P ＜ 0.05);Gli1蛋白在乳腺癌患者腋窝淋巴结有无转移中的表达差异有统计学意义(P ＜ 0.05),在Ⅲ期乳腺癌中的阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌(P ＜ 0.05).结论 Gli1蛋白与乳腺癌组织的发生发展有一定的关系.
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Hedgehog信号通路阻断对人胃癌细胞SGC-7901侵袭和血管内皮生长因子表达的影响
目的 探讨Hedgehog(Hh)信号通路阻断对人胃癌细胞SGC-7901侵袭的影响及其可能的机制.方法 免疫荧光检测Hh信号通路分子Shh和Gli 1蛋白在SGC-7901细胞中的表达;用不同浓度((2.5、5、10μmol/L)的Hh信号通路特异性阻断剂环靶明作用SGC-7901细胞48 h后,Transwell小室试验检测SGC-7901细胞的侵袭能力,半定量RT-PCR检测SGC-7901细胞中Shh、Gli 1和血管内皮生长因子(VEGF)基因mRNA的表达.结果 Shh和Gli 1蛋白在SGC-7901细胞中高表达;环靶明能显著抑制SGC-7901细胞的侵袭,且呈剂量依赖性;Hh信号通路阻断后,SGC-7901细胞中Shh基因mRNA的表达水平无明显改变,Gli 1和VEGF基因mRNA的表达水平显著下降.结论 Hh信号通路分子在SGC-7901细胞中高表达,阻断Hh信号通路可以抑制SGC-7901细胞的侵袭,可能是通过抑制Glil下调VEGF起作用.
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乳腺癌组织Smo和Gli1蛋白表达的临床意义
目的 探讨Hedgehog信号通路中Smo及Gli1蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义. 方法 采用免疫组化法分别检测本院2009.02-2013.02期间79例乳腺癌、68例癌旁正常组织及42例乳腺纤维腺瘤组织中Smo和Gli1蛋白的表达,并分析两者的表达水平与乳腺癌临床病理特征的关系. 结果 Smo和Gli1蛋白在乳腺癌组织中的阳性率分别为(73.4％、77.2％),与癌旁正常组织(21.4％、19.0％)及乳腺纤维腺瘤组织(20.6％、23.5％)比较,差异有统计学意义(P=0.023,P=0.045).Smo和Gli1蛋白表达与患者临床病理分期(P=0.041,P=0.034)及是否腋窝淋巴结转移(P=0.003,P=0.006)有关,而与年龄(P=0.109,P=0.107)及病理类型无关(P=0.078,P=0.083);相关分析显示Smo和Gli1蛋白在乳腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.527,P=0.038).结论 Hedgehog信号通路中Smo与Gli1蛋白的异常高表达可能在乳腺癌的发生和发展中起重要作用.
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Hedgehog信号通路中下游转录因子GLI1 在鼻咽癌中的表达
目的 检测hedgehog信号通路下游转录因子GLI1在鼻咽癌组织中的表达活性及其临床病理意义.方法 50例鼻咽癌组织标本,免疫组织化学染色法检测GLI1的表达活性水平,并与26例鼻咽慢性炎症组织标本检测结果进行比较,分析其表达差异的临床病理意义.结果 鼻咽癌组织GLI1表达水平较鼻咽慢性炎症组织显著升高(P<0.05),其活性水平与颈淋巴结转移显著相关(P<0.05),并显示随瘤细胞浸润程度加剧而活性升高趋势,但无显著性意义(P>0.05).结论 鼻咽癌细胞Hedgehog信号通路下游转录因子GLI1显示异常活化,可能在鼻咽癌的进展过程中起重要作用,有希望成为鼻咽癌诊断及治疗的分子靶点.
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胃癌组织中ADD1、Ptch1、Gli1表达观察
目的 观察胃癌组织中细胞膜骨架蛋白α-Adducin(ADD1)及Hedgehog(Hh)信号通路分子跨膜蛋白Patched1(Ptch1)、转录因子Gli1的表达变化,并分析其相关性.方法 行手术治疗的胃癌患者60例,术中留取胃癌组织和癌旁正常胃组织各60例.采用Western blotting法检测胃癌组织及正常胃组织中的ADD1、Ptch1、Gli1蛋白,采用real-time PCR法检测ADD1、Ptch1、Gli1 mRNA.分析ADD1、Ptch1、Gli1蛋白及mRNA表达与胃癌临床病理参数的关系,分析胃癌组织中ADD1、Ptch1、Gli1蛋白及mRNA表达的相关性.结果 胃癌组织中ADD1、Ptch1、Gli1蛋白及mRNA相对表达量均高于正常胃组织(P均<0.05).低分化、Ⅲ～Ⅳ期、有浆膜浸润、有淋巴结转移的胃癌组织中ADD1、Ptch1、Gli1蛋白及mRNA表达分别高于高分化、Ⅰ～Ⅱ期、无浆膜浸润、无淋巴结转移的胃癌组织(P均<0.05).胃癌组织中ADD1蛋白与Ptch1蛋白、Gli1蛋白表达均呈正相关关系(r分别为0.759、0.681,P均<0.01),ADD1 mRNA与Ptch1 mRNA、Gli1 mRNA表达也呈正相关关系(r分别为0.811、0.719,P均<0.01).结论 胃癌组织中ADD1、Ptch1、Gli1蛋白及mRNA呈高表达,ADD1、Ptch1、Gli1可能共同参与胃癌的发生发展,且ADD1与Hh信号通路之间可能存在一定相互作用关系.
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Gli1对人肝癌细胞中Twist1蛋白表达及细胞迁移的影响
目的 探讨Hedgehog信号通路关键蛋白Gli1对人肝癌细胞中Twist1蛋白表达和细胞迁移的影响.方法 应用蛋白免疫印迹技术在Huh7、HepG2、PLC、SMMC-7721、Bel-7404五种人肝癌细胞中筛选Gli1高表达细胞系,根据GenBank数据库设计并合成3条Gli1-siRNA经质粒转染到已筛选出Gli1高表达的人肝癌细胞中,分别为pGCsi-U6-GLi1 siRNA-1(siRNA-1组)、pGCsi-U6-GLi1 siRNA-2(siRNA-2组)、pGCsi-U6-GLi1 siRNA-3(siRNA-3组),而空白对照组(N组)不转染任何序列,阴性对照组转染阴性对照序列(NC组).转染48h后分别使用实时荧光定量PCR和Western blotting法检测各组Gli1mRNA和蛋白表达,筛选出佳siRNA序列.对筛选出的佳siRNA序列组的细胞,采用细胞划痕实验观察其迁移能力,用Western blotting检测该组细胞中Twist1、E-Cadherin蛋白表达.结果 Western blotting检测结果提示,与另外4种人肝癌细胞比较,Bel-7404细胞株中Gli1表达量增加(P均＜0.05);与其他组比较,siRNA-2组中的Gli1表达量低(P均＜0.05);与N组比较,siRNA-2组中的Twist1蛋白表达下调,E-cadherin表达上调,N-Cadherin和Vimentin表达下调,迁移能力下降(P均＜0.05).结论 Gli1可上调肝癌Bel-7404细胞中Twist1蛋白表达,促进入上皮-间质细胞转化及迁移.
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百草枯致肺纤维化大鼠肺组织中Smo、Gli1的表达变化及意义
目的 观察百草枯(PQ)致肺纤维化大鼠肺组织中Smo、Gli1的水平变化,并探讨其意义.方法 40只雄性SD大鼠随机分为PQ组和生理盐水对照组(NS组),分别一次性腹腔注入PQ农药(40mg/kg)和生理盐水(40 mL/kg),21 d后处死大鼠,行肺组织病理组织学检查,观察肺纤维化程度；免疫组化检测Smo和Gli1的表达.结果 PQ组大鼠肺组织Smo和Gli1蛋白表达明显增强,与NS组比较P＜0.01.PQ组Smo及Gli1蛋白的表达呈正相关(r=0.956,P＜0.001).结论 PQ致肺纤维化大鼠肺组织中Smo、Gli1蛋白表达增强,这可能是Sonic hedgehog(SHH)信号途径异常激活的机制之一,SHH信号途径的异常激活可能直接参与了PQ所致肺纤维化的发生、发展过程.
关键词： Sonic hedgehog信号途径 百草枯 肺纤维化 Smo蛋白 Gli1蛋白 -
Hedgehog信号通路效应蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义
目的 探讨Hedgehog(Hh)信号通路中效应蛋白在人前列腺癌、癌旁正常前列腺组织中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学方法检测51例前列腺癌和癌旁正常前列腺组织中Shh、Ptch1和Gli1的表达.结果 Shh、Ptch1和Gli1在前列腺癌组织中均为高表达,Shh与Ptch1的表达呈正相关.结论 在前列腺癌Hh信号通路中Shh、Ptch1和Gli1呈现高度表达状态,Gti1更能准确地反映前列腺癌细胞的增殖水平和分化程度.
关键词： 前列腺肿瘤 Hedgehog信号通路 SHH蛋白 Gli1蛋白 Ptch1蛋白 -
Sonic Hedgehog在非小细胞肺癌中的表达及其与患者生存周期的关系
目的 观察非小细胞肺癌患者Sonic Hedgehog(Shh)信号通路相关蛋白的表达,探讨在肺癌发展过程中的作用.方法 选择本院2013年1月至6月非小细胞肺癌手术患者46例,取切除肺癌组织为观察组,取癌旁组织39例,以非非小细胞肺癌患者28例肺部组织为对照组.采用免疫组织化学方法观察Shh和Gli2蛋白表达.结果 观察组Shh和Gli1蛋白阳性率分别为73.91％(34/46)和67.40％(31/46),均高于癌旁组织和对照组(P＜0.05),Ⅳ、Ⅲ期患者Shh和Gli1蛋白阳性率分别为80.95％(17/21)、71.43％ (15/21)和91.67％(11/12)、83.33％(10/12),均高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P＜0.05).结论 Shh信号通路可能通过激活Shh蛋白和Gli蛋白表达促进非小细胞肺癌组织异常增殖及细胞癌变.
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Gli1蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与血管生成的关系
目的 研究Hedgehog/Gli1信号通路中Gli1蛋白在人乳腺癌组织中的表达,初步探讨Gli1与乳腺癌血管生成的关系.方法 采用免疫组织化学SP法测定79例乳腺癌标本、68例癌旁组织及42例乳腺纤维腺瘤组织中Gli1蛋白的表达；同时用CD34单克隆抗体标记乳腺癌组织中新生血管,计算肿瘤MVD并分析Gli1蛋白的表达与MVD的关系.结果 乳腺癌组织中Gli1阳性率显著高于乳腺纤维腺瘤和癌旁正常组织；Gli1在Ⅲ期乳腺癌中的阳性表达率要高于Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌(P＜0.05).Gli1在有腋窝淋巴结转移组中的阳性表达率高于无淋巴结转移组(P＜0.05)；相关性分析显示乳腺癌组织中Gli1与MVD表达呈正相关(r＝0.325,P＜0.05).结论 Gli1蛋白在乳腺癌中活化,并参与了乳腺癌的发生发展,促进新生血管的生成是其可能的机制之一.
关键词： 乳腺癌 Hedgehog信号通路 Gli1蛋白 血管生成 -
Sonic hedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Glil蛋白在胃癌组织中的表达及其意义
目的 探讨Sonic hedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义.方法 收集85例胃癌组织及25例正常胃粘膜组织构建成组织芯片,应用免疫组化S-P法检测胃癌组织中Smo蛋白及G1il蛋白的表达,并以正常胃粘膜组织作对照,分析两者的相关性.结果 Smo和Gli1蛋白均在正常胃粘膜中不表达或弱表达;在胃乳头状腺癌、管状腺癌、低分化腺癌中,两者的表达强度和阳性表达率显著高于正常胃粘膜(P＜0.05,并随着胃腺癌分化程度下降而上升;相关分析显示Smo和Gli1蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关,相关系数为0.989,P＜0.001.结论 胃癌发生过程中的Sonic hedgehog信号通路异常激活可能通过Smo蛋白高表达上调下游转录因子Gli1蛋白的表达参与部分胃腺癌的发生.
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VDR和GLi1在前列腺癌细胞PC-3中的表达及其相关性
目的 初步探讨慢病毒携带shRNA-VDR载体干扰前列腺癌PC-3细胞中VDR基因对GLi1的影响.方法 依照PC-3细胞的培养条件培养细胞;采用荧光定量PCR法和免疫细胞化学SP法检测PC-3细胞中VDR、GLi1两个基因表达情况;对PC-3细胞病毒侵染进行效率评价;运用RT-PCR法检测PC-3细胞VDR基因干扰效果及Gli1转录水平改变情况.结果 细胞培养:拍照记录细胞状态:PC-3细胞生长状态良好,以4 d为1周期进行传代;荧光定量PCR法和免疫细胞化学SP法显示VDR、GLi1均在PC-3细胞中表达;慢病毒侵染效率显示为按照1:10的比例向PC-3细胞加入LV3-NC慢病毒时,细胞侵染效率好,约为95%左右;RT-PCR显示:VDR-shRNA慢病毒成功干扰VDR表达,在VDR-shRNA慢病毒转染72 h后与对照组相比实验组VDR基因转录水平下降85%(P<0.05),同时实验组GLi1基因转录水平与对照组相比上升9%(P<0.05);而当转染96 h后实验组VDR基因转录水平与对照组相比下降99%(沉默),同时实验组GLi1基因转录水平与对照组相比上升248%(P<0.05).结论 所培养的PC-3细胞状态较好;VDR和GLi1基因在PC-3细胞中均表达;慢病毒按照1:10的比例侵染PC-3效率高;当VDR被干扰后GLi1表达增高,因而在前列腺癌细胞中维生素D可抑制Hh信号通路可致GLi1表达下调.
关键词： PC-3细胞 维生素D受体(VDR) Gli1蛋白 基因干扰 -
Shh和Gli1蛋白在大鼠肝细胞癌中的表达研究
目的 探讨在SD大鼠肝细胞癌中Shh和Gli1蛋白的表达及其意义.方法 取体质量为170～200 g雄性SD大鼠30只,随机分为实验组(20只)和对照组(10只),实验组采用0.01%二乙基亚硝胺(DEN)自由喂养16周,对照组常规标准喂养,诱导大鼠肝细胞癌成功后,应用免疫组化检测肝癌组织和正常肝组织中Shh和Gli1表达情况.结果 免疫组化检测实验组肝癌组织中Shh和Gli1的阳性表达率分别为87.5%(14/16)和75.0%(12/16),对照组肝组织中检测Shh和Gli1的阳性表达率分别为30.0%(3/10)和20.0%(2/10);两种蛋白质在肝癌组织中的表达与正常组织中的表达比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在人工诱导的SD大鼠肝癌模型中,Hedgehog信号通路处于激活状态.
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Hedgehog信号通路蛋白Ptch1和Gli1在胆管癌组织中的表达及意义
目的 分析hedgehog (Hh)信号通路中Ptch1和Gli1蛋白在胆管癌组织中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学方法检测62例胆管癌组织及其癌旁组织中Ptch1及Gli1蛋白的表达情况,并分析其在胆管癌组织中的表达与患者年龄、肿瘤大小、分化程度、肿瘤部位、淋巴结转移状况、TNM分期、手术方式及患者术后生存时间的相关性.结果 Ptch1和Glil蛋白在胆管癌组织中的表达阳性率分别为74.2％ (46/62)和88.7％ (55/62),高于其在癌旁组织中的表达阳性率[14.5％ (9/62)和9.7％ (6/62)],其差异有统计学意义(P＜0.05).胆管癌组织中Ptch1和G1i1蛋白的表达与患者年龄、肿瘤大小及肿瘤部位均无相关性(P＞0.05),而与手术方式、分化程度、淋巴结转移状况、TNM分期及患者术后生存时间具有相关性(P＜0.05).结论 Ptch1和Gli1作为Hh信号通路蛋白在胆管癌组织中呈高表达状态,参与了胆管癌的发生及发展,可能是胆管癌检测与治疗的理想靶标.
关键词： 胆管癌 Hedgehog信号转导通路 Ptch1蛋白 Gli1蛋白 -
Gli1蛋白及E-cadherin蛋白在宫颈癌中的表达及临床意义
目的:探讨Gli1蛋白及E-cadherin蛋白在宫颈癌中的表达及临床意义.方法:应用免疫组化SP法检测50例宫颈癌组织、30例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织、40例正常组织中Gli1蛋白及E-cadherin蛋白的表达.结果:Gli1蛋白在宫颈癌组织中明显高于正常宫颈组织(P＜0.05),E-cadherin蛋白在宫颈癌组织中明显低于正常宫颈组织(P＜0.05).结论:Gli1蛋白的高表达及E-cadherin蛋白的低表达与宫颈癌的病理分级、临床分期、淋巴转移等密切相关,且两者在宫颈癌的表达呈负相关.
关键词： 宫颈癌 免疫组化 Gli1蛋白 E-cadherin蛋白
