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肺岩宁方对转移性肺癌小鼠上皮标志因子表达的影响
目的 研究上皮-间质细胞转化相关上皮细胞标志因子在C57小鼠Lewis肺癌中的表达以及肺岩宁方对其mRNA表达的影响. 方法 采用实时PCR观察C57小鼠Lewis肺癌右腋下移植瘤和远处转移灶发生的肺组织中上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)、α-连环蛋白(α-catenin)、β-连环蛋白(β-catenin)mRNA表达及肺岩宁方对其表达的影响.结果 肺岩宁治疗组较模型组肺转移率明显降低(P＜0.01);对于各组移植瘤组织中,肺岩宁治疗组及化疗阳性对照组的移植瘤组织中E-cadherin、α-catenin及β-catenin均较模型组升高(P＜0.01);模型组肺组织中E-cadherin、α-catenin、β-catenin表达明显低于正常肺组织中的表达(P<0.05),而经过肺岩宁方治疗后,三个标志因子均有显著升高(P<0.05或P<0.01).结论 肺岩宁方具有上调上皮细胞标志因子的作用,其可能通过抑制上皮-间质细胞转化过程的发生而达到抗肿瘤转移的作用.
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热损伤对肝细胞肝癌细胞增殖及侵袭转移特性影响的实验研究
目的 体外实验评价热损伤对肝细胞肝癌(HCC)细胞增殖、侵袭转移能力及上皮-间质细胞转化(EMT)等特性的影响,探索热消融与HCC复发转移之间的关系.方法 通过体外加热构建McA-RH7777 HCC细胞热损伤模型.CCK-8法检测热损伤对HCC细胞增殖能力的影响,流式细胞技术检测细胞周期情况.Transwell实验研究热损伤对HCC细胞侵袭能力的影响.荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)分析热损伤对HCC细胞侵袭及EMT相关分子标志物VEGF、MMP-9、Nm23、E-cadherin、vimentin的mRNA和蛋白表达的影响.结果 McA-RH7777 HCC细胞热处理条件为43.5C水浴30 min.热处理后2～5 d细胞增殖能力显著高于对照组(P＜0.05).热处理48 h及72 h后处于G1期细胞比例降低,S+G2期细胞比例增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,热处理后24 h后HCC细胞侵袭能力差异不明显,而热处理72 h后细胞侵袭能力显著增加(22.3±2.46对14.2±1.82,P＜0.001).RT-PCR和蛋白印迹分析结果显示,热处理72 h后HCC细胞VEGF、MMP-9和vimentin表达水平显著增加,E-cadherin表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 亚致死量热损伤诱导McA-RH7777 HCC细胞发生EMT并增加其增殖和侵袭转移能力,表现出更高的恶性潜能.
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肺岩宁方对EMT间质细胞标志因子Vimentin、Fibronectin和N-cadherin表达的影响
目的:研究标志EMT过程发生的间质细胞因子Vimentin、Fibronectin和N-cadherin在C57小鼠Lewis肺癌中的表达,以及肺岩宁方对其mRNA表达的影响.方法:采用Real-Time PCR观察C57小鼠Lewis肺癌右腋下移植瘤和远处转移灶发生的肺组织中Vimentin、Fibronectin和N-cadherin mRNA表达及肺岩宁方对它表达的影响.结果:对于各组移植肿瘤组织中,间质细胞标志因子Vimentin经肺岩宁方治疗后,与模型组相比无差异(P>0.05);而Fibronectin和N-cadherin的表达经肺岩宁方治疗后,与模型组相比明显降低(P<0.01):对于各组肺组织中,Vimentin、Fibronectin和N-cadherin在转移率发生高的模型组,其表达明显高于正常肺组织中的表达(P<0.01),而经过肺岩宁方治疗后,与模型组相比,Fibronectin和N-cadherin标志因子表达均显著性下降(P<0.05),而Vimentin标志因子治疗前后无差异(P>0.05).结论:EMT有可能参与了肺癌转移的发生;肺岩宁方具有下调标志EMT过程发生的间质细胞因子Fibronectin和N-cadherin的作用.
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PD-L1表达与上皮-间质细胞转化在卵巢癌进展中的相关性分析
目的 探讨程序性死亡因子配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)表达、上皮-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)发生与卵巢癌临床病理特征的关系及两者的相关性.方法 采用免疫组化SP法染色,并检测106例原发性卵巢上皮性癌、40例良性上皮性肿瘤组织中PD-L1和EMT相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达,分析人卵巢癌组织中PD-L1表达与EMT发生之间的关系.结果 106例卵巢癌组织中PD-L1的阳性率为65.1％(69/106),E-cadherin的阳性率为58.5％(62/106),vimentin的阳性率为53.8％(57/106),EMT发生率为35.8％(38/106).在有淋巴结转移组、有脉管侵犯组及有恶性腹水组中PD-L1表达及EMT发生率均高于无淋巴结转移组、无脉管侵犯组及无恶性腹水组,其差异均有统计学意义(P＜0.05).69例PD-L1阳性卵巢癌组织中有34例EMT表型,PD-L1阳性与EMT表型之间呈明显的正相关(r=0.300,P=0.002).结论 在人卵巢癌组织中,PD-L1表达与EMT相关蛋白的表达有密切关系,两者可能在卵巢癌的发生、发展过程中发挥协调作用.
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Gli1对人肝癌细胞中Twist1蛋白表达及细胞迁移的影响
目的 探讨Hedgehog信号通路关键蛋白Gli1对人肝癌细胞中Twist1蛋白表达和细胞迁移的影响.方法 应用蛋白免疫印迹技术在Huh7、HepG2、PLC、SMMC-7721、Bel-7404五种人肝癌细胞中筛选Gli1高表达细胞系,根据GenBank数据库设计并合成3条Gli1-siRNA经质粒转染到已筛选出Gli1高表达的人肝癌细胞中,分别为pGCsi-U6-GLi1 siRNA-1(siRNA-1组)、pGCsi-U6-GLi1 siRNA-2(siRNA-2组)、pGCsi-U6-GLi1 siRNA-3(siRNA-3组),而空白对照组(N组)不转染任何序列,阴性对照组转染阴性对照序列(NC组).转染48h后分别使用实时荧光定量PCR和Western blotting法检测各组Gli1mRNA和蛋白表达,筛选出佳siRNA序列.对筛选出的佳siRNA序列组的细胞,采用细胞划痕实验观察其迁移能力,用Western blotting检测该组细胞中Twist1、E-Cadherin蛋白表达.结果 Western blotting检测结果提示,与另外4种人肝癌细胞比较,Bel-7404细胞株中Gli1表达量增加(P均＜0.05);与其他组比较,siRNA-2组中的Gli1表达量低(P均＜0.05);与N组比较,siRNA-2组中的Twist1蛋白表达下调,E-cadherin表达上调,N-Cadherin和Vimentin表达下调,迁移能力下降(P均＜0.05).结论 Gli1可上调肝癌Bel-7404细胞中Twist1蛋白表达,促进入上皮-间质细胞转化及迁移.
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促凋亡蛋白Siva1的作用机制及其在肿瘤中的研究进展
Siva1是凋亡诱导因子Siva编码的一种选择性剪接体,其不仅可以与多种受体如CD27、Bcl-2或Bcl-xL、c-Abl、LPA2结合而发生相互作用,并通过调控ARF-MDM2-p53通路、抑制NF-κB的活性和酪氨酸磷酸化等方式促进细胞的凋亡,而且还可以通过抑制微管解聚蛋白Stathmin的活性和稳定微管来抑制上皮-间质细胞转化和肿瘤细胞转移.此外,Siva1可作为肿瘤患者顺铂化疗的增效剂.当今,恶性肿瘤已严重危害人类健康,其发病人数正逐年增加,故对Siva1分子机制的深入研究,必将为肿瘤的靶向治疗提供新的思路和广阔的应用前景.因此,本文就目前Siva1在国内外的相关研究进展作一综述.
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上皮间质转化与乳腺癌
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，而肿瘤的侵袭与转移是导致乳腺癌患者治疗后复发与死亡的主要原因。上皮-间质细胞转化（EMT）是上皮细胞转变为间充质细胞的过程，参与了肿瘤干细胞的形成以及肿瘤细胞的浸润、迁移和转移，不仅增强了乳腺癌细胞侵袭和转移的能力，还可使癌细胞获得自我更新等干细胞特性，促进乳腺癌干细胞的产生。因此，研究EMT对寻找控制乳腺癌侵袭和转移的有效途径以及降低乳腺癌患者的死亡率有非常重要的意义，亦可为乳腺癌的治疗提供新的靶点。
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肺岩宁对人高转移95-D肺癌细胞上皮-间质细胞标志因子表达的影响
背景与目的 前期体内实验证实肺岩宁方具有上调上皮细胞标志因子、Alpha-catenin、beta-catenin、E-Cadherin和下调间质细胞标志因子N-cadherin、Fibronectin的作用,而对Vimentin无明显作用.在此基础上,本研究旨在进一步以人高转移95-D肺癌细胞为研究对象,探讨肺岩宁方对上皮-间质细胞标志因子基因和蛋白表达的影响.方法 采用不同浓度肺岩宁血清干预治疗人高转移肺癌细胞95-D的基础上,采用Real-time PCR及Western blot方法 检测对上皮-间质细胞标志因子Alpha-catenin、beta-catenin、E-Cadherin、N-cadherin、Fibronectin、Vimentin基因和蛋白表达的影响.结果 Real-time PCR结果 表明:与对照组相比较,20%肺岩宁处理组Alpha-catenin表达上调(P<0.05),2096、2s%肺岩宁处理组E-Cadherin表达上调(P<0.05,P<0.01);各肺岩宁处理组beta-catenin表达无明显改变;5%、10%肺月市岩宁处理组间质细胞标志因子Vimentin表达下调(P<0.01),各肺岩宁处理组N-cadherin、Fibronectin无明显改变;Western blot结果 表明:5%、10%、1596、2096、25%肺岩宁处理组E-Cadherin蛋白表达上调(P<0.01),各肺岩宁处理组Alpha-catenin、beta-catenin蛋白表达无明显改变;5%、10%肺岩宁处理组N-cadherin、Fibronectin蛋白表达下调(P<0.01),各肺岩宁处理组Vimentin蛋白表达无明显改变.结论 肺岩宁方通过调控部分上皮-间质细胞标志因子的表达,从而抑制肿瘤异质粘附能力和运动能力来参与肺癌的侵袭和转移.
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TGF-β1诱导表皮干细胞向间质细胞转化对增生性瘢痕形成的影响
目的：探讨转化生长因子-β1（Transform growth factor-β1，TGF-β1）对人表皮干细胞（Human epidermal stem cell， hESCs）向间质细胞转化的影响及该现象对瘢痕增生的作用。方法：体外原代培养hESCs，分析细胞表面标志物表达，不同浓度TGF-β1刺激后，MTT 法检测细胞增殖活性，酶联免疫吸附法（ELISA）检测上皮-间质细胞转化（Epithelial-mesenchymal transformation，EMT）正相关蛋白：波形蛋白（Vimentin，Vim）、Smad3，负相关蛋白：E-钙粘着蛋白（E-cadherin，E-cad）。建立兔耳瘢痕模型，不同浓度TGF-β1干预，术后4周取材行组织形态学观察。结果：利用人包皮皮肤成功培养出hESCs，表面标记物表达阳性。不同浓度TGF-β1可促进hESCs增殖，使Vim、Smad3表达上调，E-cad表达下调，且在一定浓度范围呈剂量依赖，兔耳瘢痕标本显示各组均有瘢痕增生，TGF-β1刺激组更为明显。结论：hESCs可发生EMT现象，该现象与瘢痕增生程度一致并可被TGF-β1诱导。推测瘢痕增生的实质可能为EMT。
