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黄芪散对高糖作用下成骨细胞相关功能的影响
目的:观察黄芪散含药血清对高糖条件下成骨细胞功能的影响及与糖尿病性骨质疏松发病机制相关基因的影响,探讨黄芪散(HQS)对糖尿病性骨质疏松症的疗效机制.方法:选用健康清洁级5周龄Wistar大鼠10只,随机分为正常组和药物组.制备黄芪散含药血清和空白血清,选用健康清洁级新生大鼠乳鼠4只,体外以酶消化法分离培养新生乳鼠颅骨成骨细胞(0b),行细胞计数(CCK-8)法测定高糖条件下(25.5 mmol·L-1)5％,10％,20％,30％含药血清对细胞增殖的影响,选取增殖活性佳血清浓度,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测黄芪散对成骨功能相关基因骨桥蛋白(OPN),骨钙素(OC),碱性磷酸酶(ALP)和胰腺-骨骼相关基因骨保护素(OPG),叉头转录因子1(FoxO1)表达的影响.结果:10％和30％血清浓度组细胞增殖较空白组有明显升高(P＜0.05);20％血清浓度组较空白组有显著升高(P＜0.01).与空白组比较,5％浓度条件下,OPN,OPG mRNA表达明显下调(P＜0.05);10％浓度条件下,OC,ALP,OPNmRNA表达明显上调(P＜0.05,P＜0.01);OPG,FoxO1 mRNA较空白组表达显著下调(P＜0.01).20％浓度和10％浓度条件差异性一致,OPN,OPG,FoxO1 mRNA影响趋势较10％浓度药物血清组更明显.20％浓度血清条件下,与空白组比较,OC和OPN蛋白表达显著上调(p＜0.01),OPG蛋白表达显著下调(P＜0.01).结论:黄芪散对糖尿病性骨质疏松的疗效机制可能与其促进高糖作用下成骨细胞增殖作用有关,与下调胰腺-骨骼相关基因OPG,FoxO1表达有关.
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黄芪散及其拆方对T2DM大鼠胰岛素抵抗及肝组织11β-HSD1,PEPCK的影响
目的:通过糖皮质激素联合高脂喂养建立2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,观察黄芪散及其拆方对T2DM大鼠胰岛素抵抗及肝组织11β-羟基类固醇脱氢酶1(11β-HSD1),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK) mRNA与蛋白表达的影响.方法:SD大鼠适应性饲养1周后,将大鼠随机分为正常组,糖皮质激素组(GC),高脂饮食组(HFD),高脂+糖皮质激素复合模型组(HFD+ GC),罗格列酮组,黄芪散处方1组(HQS-1,2.91 g·kg-1),黄芪散处方2组(HQS-2,3.85 g·kg-1)和黄芪散原方组(HQS,2.96 g·kg-1),每组8只.正常组和GC组大鼠喂以基础饲料,其他各组喂以高脂饲料.同时除正常组和HFD组给予等体积的生理盐水外,其他各组大鼠灌胃醋酸泼尼松龙(3.5 mg·kg-1,每天1次),并于1h后灌胃相应受试药物.于给药10周后,测定各组大鼠空腹血糖(FBG)及胰岛素(FINS)含量,并计算胰岛素敏感指数(ISI);苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠肝脏病理变化;实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测肝组织中11β-HSD1,PEPCK mRNA和蛋白表达水平.结果:与正常组比较,HFD+ GC复合模型组大鼠表现为高血糖、高胰岛素血症,肝细胞变性,肝11β-HSD1,PEPCK表达显著性升高(P＜0.01),病理学检测发现大鼠肝脏组织的病变较为明显.与HFD+ GC复合模型组比较,各受试药物均不同程度地降低糖尿病大鼠FBG,FINS水平,提高ISI水平(P ＜0.05,P＜0.01),对肝组织病理学形态也有不同程度的改善.比较HQS-1,HQS-2和罗格列酮的作用幅度,黄芪散原方对FINS水平及肝组织病理形态的改善更明显.HQS及其拆方均可不同程度地降低肝11β-HSD1,PEPCK mRNA和蛋白水平(P＜0.05,P＜0.01),且黄芪散原方组对11β-HSD1的降低幅度优于其他各组.结论:黄芪散具有提高胰岛素敏感性、改善肝脏病理的作用,其发挥防治糖尿病及改善胰岛素抵抗的作用机制可能与降低11β-HSD1水平有关.
关键词： 黄芪散 2型糖尿病 胰岛素抵抗 11β-羟基类固醇脱氢酶1 -
黄芪散对2型糖尿病大鼠心肌MG53/PPAR-α通路的影响
目的:探索黄芪散对实验性2型糖尿病大鼠心肌病变的保护作用及作用机制.方法:36只雄性SD大鼠随机分为4组,分别为正常组,模型组,黄芪散组(2.4 g·kg-1)和氯沙坦组(0.1 g·kg-1).采用高脂饲料喂养和链脲佐菌素(streptozocin,STZ)腹腔注射的方法复制2型糖尿病大鼠心肌病变模型,连续灌胃给药16周,观察黄芪散对各组大鼠血清中空腹血糖(FBG),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),心肌形态学、胶原纤维变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Mitsugumin 53(MG53)及过氧化物酶体增殖物激活受体-α(peroxisome prolifer-ationactivated receptor-α,PPAR-α)mRNA表达的影响.结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,TC,TG,HDL-C,LDL-C含量均显著升高(P＜0.01),心肌组织排列紊乱,大小不均匀,肌纤维间可见明显的脂肪空泡沉积,肌纤维间隔明显增宽,肌细胞间质、血管周围可见胶原纤维堆积,且肌组织胶原相对含量明显增加(P＜0.01),心肌MG53,PPAR-α mRNA表达有所升高;与模型组比较,黄芪散组可以明显降低血糖、血脂含量(P ＜0.05,P＜0.01),黄芪散组大鼠表现出肌纤维排列规则,纤维间未见脂肪沉积,也未见纤维溶解等,并可明显抑制心肌胶原纤维增生;黄芪散组可显著降低MG53,PPAR-α mRNA的表达(P ＜0.05,P＜0.01).结论:黄芪散对实验性糖尿病心肌病变具有一定的防治作用,其作用机制是通过改善血糖、血脂水平,调控MG53/PPAR-α通路,抑制MG53,PPAR-α mRNA的表达.
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黄芪散对高脂血症大鼠AMPK/ACC/CPT1通路的影响
探讨黄芪散治疗饮食诱导的高脂血症大鼠的作用机制.将40只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,黄芪散低,高剂量组(1,2 g·kg-1),阳性立普妥组(2 mg·kg-1).正常组饲以基础饲料,其他组饲以高脂饲料.造模8周后,灌胃相应药物13周,检测各组大鼠血清中空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肝脏及骨骼肌病理变化;Real-time PCR和Western blot法检测肝脏和骨骼肌中AMPK信号通路相关分子(AMPK,ACC,CPT1A,SREBP2,HMGCR)的mRNA和蛋白表达水平.结果显示,模型组大鼠FPG,TC,TG,LDL-C的含量高,肝脏和骨骼肌病理损害明显.黄芪散和立普妥给药后,血糖血脂显著下降,肝脏和骨骼肌的损伤有明显改善,除SREBF2和HMGCR的mRNA和蛋白表达降低,其他AMPK信号通路相关mRNA和蛋白表达量显著增加,且黄芪散作用效果优于立普妥.结果表明,黄芪散可能通过调控AMPK信号通路,增加脂肪酸氧化,抑制胆固醇合成来改善高脂血症.
关键词： 黄芪散 高脂血症 AMP蛋白激酶信号通路 乙酰辅酶A羧化酶 HMG-CoA还原酶 -
黄芪散对糖尿病大鼠股骨和胫骨的作用研究
目的 观察黄芪散对糖尿病长期造模大鼠股骨和胫骨的影响.方法180 ～ 200 g雄性SD大鼠,实验分组为正常组、模型组、给药组,给药组剂量10 ml·kg-1(前期实验已进行过高中低剂量筛选),一次性低剂量(35 mg· kg-1)腹腔注射链脲佐菌素(STZ)+高脂饲料(HFD)诱导2型糖尿病(T2DM)模型,造模的同时灌胃黄芪散(HQS),实验进行120天后处死大鼠,对股骨进行材料力学与结构力学的考察,对胫骨进行骨小梁面积百分比、厚度、数目等指标测定.结果 黄芪散能显著提高糖尿病大鼠股骨试件所承受的外力,其骨材料韧性、骨内在硬度、骨脆性上都与模型组有显著差异(P＜0.05).模型组胫骨的骨小梁面积百分数及骨小梁数目显著降低(P＜0.05),而骨小梁分离度显著增加(P＜0.05),骨小梁宽度有减少的趋势(P＞0.05),给药组与模型组相比,胫骨骨小梁面积百分数、骨小梁宽度、骨小梁数目均有增大的趋势.结论 黄芪散能显著改善T2DM模型大鼠股骨和胫骨质量,有预防其骨质疏松发生的可能作用.
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黄芪散对T2DM大鼠体脂系数和脂肪组织MCP-1、UCP-1、PRDM16、Cidea mRNA表达的影响
目的:采用糖皮质激素联合高脂喂养建立2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,探讨黄芪散对T2DM大鼠体脂系数(肾周脂肪、附睾脂肪和棕色脂肪)及相关基因MCP-1、UCP-1、PRDM16、Cidea mRNA表达的影响.方法:SD大鼠适应性饲养1周后,随机分为正常组(Nor)、糖皮质激素+高脂模型组(HFD+ GC),黄芪散组(HQS),每组10只.正常组喂基础饲料,其他两组喂高脂饲料.同时除正常组给予等体积的生理盐水外,其他两组大鼠灌胃醋酸泼尼松3.5 mg/kg,1次/d,给药组1h后灌胃黄芪散2.96 g/kg.于给药12周后,测定各组大鼠空腹血糖(FBG),分离肾周、附睾周围组织的白色脂肪,分离背部颈下肩胛间区中间棕色脂肪,称重,计算体脂系数.采用real-time PCR法检测白色脂肪组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和棕色脂肪组织中解偶联蛋白(UCP-1)、PR域包含16(PRDM16)、细胞死亡诱导DNA断裂因子α类似效应A(Cidea) mRNA表达的影响.结果:与正常组比较,HFD+ GC模型组大鼠表现为高血糖、肾周脂肪系数、附睾脂肪系数显著性升高,MCP-1上调明显,棕色脂肪系数下降,UCP-1、PRDM16、Cidea表达降低.与模型组比较,HQS可降低大鼠白色脂肪系数及MCP-1表达,升高棕色脂肪系数及UCP-1、Cidea的表达.结论:黄芪散可减少T2DM模型大鼠伴随的肥胖症状,可提高机体能量代谢,可作用可有与降低MCP-1表达,升高UCP-1、Cidea表达有关.
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黄芪散含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和分化功能的影响
目的 观察黄芪散含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖和成脂分化、成骨分化相关基因的影响,初探黄芪散对体内脂骨间代谢的影响.方法 选用健康清洁级5周龄Sprague Dawley(SD)大鼠10只,随机分为正常饮食组和药物组.制备黄芪散含药血清和对照血清,选用健康清洁级4周龄SD大鼠4只,无菌条件下分离股骨与胫骨,剪开,以DMEM液冲洗骨髓培养BMSCs.采用细胞计数(CCK-8)法测定5％、10％、20％、40％含药血清对细胞增殖的影响,选取增殖较佳的5％、10％、20％血清剂量,采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)法检测黄芪散含药血清对成骨功能基因骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OC)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、成骨分化相关基因核心结合蛋白因子2(runt-related transcription factor2,RUNX2)和成脂分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptors,PPARγ)与成脂功能基因脂肪细胞脂结合蛋白2(activating protein 2,aP2)表达的影响.结果 细胞增殖实验:与各自剂量空白血清组比较,5％、10％血清剂量组有明显升高(P ＜0.05,P＜0.01).基因测定结果:与空白血清组比较,5％、10％血清剂量组OPN、OC、ALP、PPARγ、RUNX2、aP2mRNA表达都明显上调(P＜0.01);20％剂量条件下,OPN、OC、ALP、aP2mRNA表达都明显上调(P＜0.01),PPARγ表达上调(P＜0.05);且OPN表达随含药血清剂量增加而梯度上升,aP2表达随含药血清剂量的增加,血清对其表达的促进作用在梯度降低.其他基因均在10％血清剂量下表达值高.结论 黄芪散含药血清可促进BMSCs增殖及成骨、成脂分化相关基因的上调,对成脂代表基因aP2的促进作用会随剂量增加而降低.提示黄芪散含药血清随着剂量增大,促进BMSCs更多向成骨方向分化,成脂分化趋势减弱,其作用可能不是通过抑制PPARγ相关通路达到,机理待进一步研究.
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黄芪散对糖皮质激素性骨质疏松大鼠股骨和胫骨的影响
目的 探讨黄芪散(葛根、黄芪、桑白皮)对糖皮质激素骨质疏松大鼠股骨和胫骨的影响.方法 采用1月龄Sprague Dawley (SD)大鼠30只,随机均分3组:正常组(生理盐水)、模型组(醋酸泼尼松)、黄芪散组(剂量选择临床成人剂量).实验维持120 d.动物处死前进行钙黄绿素双荧光标记.测定血清骨吸收和骨形成指标,采用骨生物力学方法测量股骨结构力学和材料力学参数,采用骨组织形态计量学方法测量胫骨上段松质骨和中段皮质骨的静态、动态参数.结果 黄芪散组不能明显改善糖皮质激素对血液和骨生物力学造成的影响,但可明显增加糖皮质激素模型大鼠胫骨上段的骨小梁面积和骨小梁数目、胫骨上段荧光标记周长百分数、胫骨中段骨内膜骨矿化沉积率.结论 黄芪散可明显提高糖皮质激素性骨质疏松大鼠胫骨松质骨骨量,增强骨小梁结构.
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黄芪散调节T2DM大鼠血浆磷脂代谢作用研究
目的:研究黄芪散(HQS)对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠血浆磷脂代谢的影响.方法:给予8周龄SD大鼠53.3％高脂饲料13周,建立T2DM模型.在造模的同时灌胃给予黄芪散(HQS),以UP-LC/Q-TOF MS为分析手段研究大鼠在2型糖尿病状态以及黄芪散干预下的血浆脂质代谢物的情况.得到大量数据,再通过R软件中BioMark软件包实现对两组样品中特异性的标志物进行筛选.结果:筛选出的标志物经过成分鉴定发现主要为磷脂酰胆碱类(PC)以及其它脂类成分.HQS给药后主要改善了T2DM大鼠血浆中PC类等磷脂成分的代谢紊乱,同时增加血浆中高不饱和PC类磷脂的含量,如PC(40∶8)、PC(40∶7)、PC(40∶4)、PC(42∶9).结论:黄芪散对T2DM引起的血浆磷脂代谢紊乱有一定的调节改善作用.
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黄芪散中黄芪的质量控制
目的：建立黄芪散黄芪药材中皂苷类成分及毛蕊异黄酮葡萄糖苷的质量控制方法。方法以毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷为对照品,采用HPLC法、HPLC-ELSD法、UV法控制黄芪散中黄芪的质量。结果采用HPLC法及HPLC-ELSD法测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷的质量分数,各有效成分完全分离,峰面积与其质量浓度分别在0.68~4.52μg、1.96~9.8μg范围内呈良好的线性关系,加样回收率分别是98.85%、98.43%,RSD分别是1.08%、1.31%( n=6)。采用UV法测定黄芪散中总皂苷的质量分数,吸光度与其对照品的质量浓度在4.9~49.0μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率为97．90%,RSD为1.35%( n=6)。结论本方法准确、简便、重复性好,可较好控制黄芪散中皂苷类成分及毛蕊异黄酮葡萄糖苷的质量。
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黄芪散对糖脂代谢和骨生物力学指标影响的实验研究
目的 研究黄芪散对高脂饲料合并STZ诱导的2型糖尿病大鼠糖脂代谢和骨生物力学指标的影响.方法 180～200 g雄性SD大鼠,一次性低剂量(35 mg/kg)腹腔注射链脲佐菌素(STZ)+高脂饲料(HFD)诱导12周,造成2型糖尿病(T2DM)模型.造模的同时灌胃黄芪散(HQS),观察血糖、血脂、胰岛素、胰岛素敏感性、体质量、肝系数、肾周脂肪系数和骨生物力学等指标.结果 黄芪散能显著降低模型大鼠空腹血糖(FPG)、空腹血浆胰岛素(fasting plasma insulin,FINS)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),减轻体质量、降低肝系数和肾周脂肪系数,提高胰岛素敏感性,提高股骨大载荷、大吸收能量和结构硬度.结论 黄芪散能显著改善T2DM模型大鼠的糖脂代谢,降低体质量、肝系数和肾周脂肪系数,提高胰岛素敏感性,并能改善骨生物力学指标.
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古方黄芪散降糖作用的实验研究
目的 研究古方黄芪散对血糖的影响.方法 采用链脲佐菌素(STZ)诱发的糖尿病和肾上腺素导致的高血糖小鼠模型,观察黄芪散对血糖小鼠模型和糖耐量的影响,并观察黄芪散对正常小鼠血糖和糖耐量的影响.结果 黄芪散中剂量能降低STZ糖尿病小鼠的空腹血糖,高、中剂量能改善STZ糖尿病小鼠的糖耐量,降低肾上腺素引起的高血糖,黄芪散高、中、低剂量连续给药3周对正常小鼠的血糖和糖耐量无明显影响.结论 黄芪散具有一定的降糖作用,为其临床治疗糖尿病及其并发症提供了实验依据.
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黄苠散对H22肝癌细胞P53基因表达的影响
目的:观察黄芪散对肝癌荷瘤小鼠P53基因表达的影响.方法:将H22肝癌荷瘤小鼠50只随机分为5组,中药高、中、低剂量组分别予以0.4ml中药灌胃,CTX组予以0.2ml(小鼠给药剂量为20mg/kg·d-)腹腔注射,模型组予以0.4ml生理盐水灌胃,每日1次,给药14天；免疫组织化学法检测肿瘤组织P53基因的表达,同时考察脾、胸腺指数及肿瘤抑制率.结果:黄芪散高中低剂量组都能降低H22肝癌荷瘤小鼠癌组织中P53基因的表达水平,且能升高小鼠的脾、胸腺指数.结论:黄芪散对H22肝癌荷瘤小鼠癌组织中P53基因的表达具有一定抑制作用,且能保护小鼠的免疫器官.
