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从动物中分离到携带耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌
产志贺样毒素且具有侵袭力大肠杆菌(ESIEC)是由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所1993年发现的一种新的致泻性大肠杆菌.从1994年该所发现在原来鉴定为ESIEC的菌株中,有一部分携带耶尔森氏菌HPI毒力岛.为探讨此类大肠杆菌在动物中的存在情况,我们率先在国内开展对动物标本进行检测,现将结果报告如下:
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我国腹泻病患者和家畜家禽粪便标本中携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌的调查
目的 了解携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国腹泻病患者粪便标本、动物粪便标本及部分食品标本中的存在情况和所致腹泻病的临床特征.方法 使用菌落原位杂交、DNA打点杂交和PCR扩增等方法.结果 在各地送检的从腹泻病患者粪便标本中分离到的、用常规方法不能鉴定的大肠杆菌中,均检出带有小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌菌株,检出率为27.05%(436/1 612).从市售食品标本中分离的大肠杆菌中,携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌的检出率为1 0.23%(9/88).从家畜家禽粪便中分离的大肠杆菌中,携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌检出率为5.71%(16/280).携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌所致腹泻的典型临床表现为食欲不振、腹痛、寒战乏力、正常体温或低热、每日腹泻多在 6次以上、多为粘液便.结论 携带小肠结肠炎耶尔森氏菌HPI毒力岛的大肠杆菌在我国分布广泛,检出率高于其他几类致泻性大肠杆菌,对我国人民的健康是一个潜在的威胁.
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致病性小肠结肠炎耶氏菌DNA多态性
探讨致病性小肠结肠炎耶氏菌(简称:耶氏菌)DNA分子遗传特征.用聚合酶链反应( PCR)、DNA序列分析、随机扩增多态性DNA(RAPD)检测致病及非致病性耶氏菌10株.耶氏菌0∶3、0∶9、0∶5,27血清型均含有致病基因粘附侵袭位点(ail),DNA指纹图谱也极其相似,与非致病型耶氏菌完全不同.然而,非致病性耶氏菌0∶22血清型也含有ail基因,DNA指纹图谱在分子构像上部分与致病血清型相似.致病性耶氏菌具有相似的分子遗传特征,并表现为多态性.0∶22血清型与致病性耶氏菌存在较近缘的种系进化关系.可能存在潜在致病性.
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鼠疫耶尔森菌活疫苗株的比较基因组学研究
目的揭示不同来源的鼠疫活疫苗株在基因组组成上的差异.方法以芯片比较基因组杂交为主要研究手段,结合PCR验证,对19株鼠疫活疫苗株进行比较基因组分析.结果鼠疫活疫苗株基因组中缺失了大量基因,但也有某些大片段基因的拷贝增多.结论不同来源的疫苗株在基因组组成上存在差异,构成了不同疫苗株的表型与使用效果具有差异性的遗传基础.
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鼠疫耶尔森菌菌株91001全基因组序列测定及初步分析
目的测定对人不致病的鼠疫耶尔森菌布氏田鼠疫源地菌株91001的全基因组序列,并通过比较基因组学研究,探索鼠疫耶尔森菌致病性的遗传学机制和进化路线.方法采用全基因组鸟枪法测定91001菌株的全基因组序列,利用比较基因组方法对91001与另外2株鼠疫耶尔森菌(CO92和KIM)的全基因组进行比较研究.结果 91001菌株的基因组包括1条染色体和4个质粒(pPCP1、pCD1、pMT1和pCRY).pPCP1质粒长度为9 609bp,与参考菌株基本一致;pCD1质粒是编码Ⅲ型分泌系统的质粒,长度为70 159bp,编码情况与参考菌株基本相同,但重排导致了质粒的结构与参考菌株存在差异;pMT1质粒长度为106 642bp,保留了较多的原始质粒片段,毒力相关基因与参考菌株没有差异;pCRY质粒是本研究中新发现的质粒,在国内外研究中未曾报道,这一质粒长度为21 742bp,具有独立复制能力,有一群编码Ⅳ型分泌系统的基因.91001菌株的染色体长度为4 595 065bp,有4 037个编码序列(CDS),其中141个是假基因;染色体中存在着非常丰富的插入序列,由于存在IS序列介导的基因组重排,91001菌株染色体的结构与参考菌株存在较大差异.通过比较基因组学分析,初步确定了91001菌株甘油降解阳性、硝酸盐还原阴性、阿拉伯糖分解代谢阴性以及蜜二糖分解阳性的遗传基础.结论根据质粒结构、染色体基因组重排、硝酸盐还原阴性的机制以及假基因的分布等信息,推测以91001菌株为代表的田鼠型菌株是原始鼠疫耶尔森菌进化过程中的另一个分支,与现有菌株存在着比较明显的差异;而91001菌株独特的致病性可能与基因组中的假基因或大片段缺失有关.
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鼠疫耶尔森菌基因组进化与生态位适应研究
目的探索鼠疫耶尔森菌基因组进化的基本规律及其与该菌在自然界适应性演化之间的内在联系.方法对36株鼠疫耶尔森菌和7株假结核耶尔森菌进行芯片比较基因组分析,鉴定差异区段(DFR),并对260株鼠疫耶尔森菌进行PCR验证,分析各DFR在这些鼠疫耶尔森菌中的分布,同时进行基因组岛分析.结果在鼠疫耶尔森菌基因组中鉴定出22个DFR,基于DFR图谱,将鼠疫耶尔森菌中国分离株分成14个基因组型.鼠疫耶尔森菌共有21个基因组岛,其中18个已存在于假结核杆菌中,余下3个为鼠疫耶尔森菌独有. 结论探明了各基因组岛在鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌间的差异分布,探究了鼠疫耶尔森菌的起源进化;建立了鼠疫耶尔森菌基因组分型系统;建立了各基因组型别间的系统发育关系,初步揭示了鼠疫耶尔森菌基因组的进化规律及其与鼠疫耶尔森菌生态位适应和鼠疫疫源地扩展之间的关系,基本探明了鼠疫耶尔森菌在中国的演化规律.
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鼠疫耶尔森菌全基因组DNA芯片的研制及用于比较基因组学分析
目的研制鼠疫耶尔森菌全基因组DNA芯片,并将其用于比较基因组分析.方法挑选出4 005条鼠疫耶尔森菌基因,PCR扩增各基因,以纯化的PCR产物点样制备芯片,采用双色荧光杂交策略,进行芯片比较基因组杂交.结果设计了若干质控杂交组合,芯片杂交结果与全基因组测序结果完全一致.结论成功建立了基于全基因组DNA芯片的鼠疫耶尔森菌比较基因组学技术平台.
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鼠疫耶尔森菌pgm位点及其侧翼序列遗传变异的比较分析
目的研究鼠疫耶尔森菌中国自然分离株pgm位点及其侧翼序列的变异,了解不同疫源地菌株间的毒力差异,为鼠疫防治提供帮助.方法比较分析现有4株菌的pgm位点及其侧翼序列的变异,采用PCR、等位基因特异性PCR扩增260株中国自然分离株和7株假结核耶尔森菌.结果除锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株外,其他菌株均缺失了YP1666的70～87bp之间的18bp碱基.1 406bp处T的缺失仅存在于东方型菌株中.北天山东段型及西段A、B型,锡林郭勒高原型,青海田鼠型菌株的pgm位点下游都没有IS100插入;锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株的色素沉着区有1个IS285插入,在其下游3kb区域还有1个IS100插入.冈底斯山型和昆仑山A、B型菌株的pgm位点上游侧翼区与其他菌株不同.36株菌的pgm位点缺失,缺失的菌株主要集中在鄂尔多斯高原型,松辽平原B型,昆仑山A、B型4种生态型菌株中.结论北天山东段型及西段A、B型,锡林郭勒高原型,青海田鼠型菌株是中国鼠疫耶尔森菌中比较古老的菌株.锡林郭勒高原型和青海田鼠型菌株是一个独特的分支,建议归为第4个生物型--田鼠型.北天山东段型及西段A、B型,锡林郭勒高原型,青海田鼠型菌株的pgm位点,由于在其下游没有IS100插入,所以稳定、不易缺失.pgm位点及其侧翼序列的变异与菌株的生物型、自然疫源地和生态型都具有一定的相关性.
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鼠疫耶尔森菌菌株91001的蛋白质组学初步研究
目的建立鼠疫耶尔森菌的蛋白质组学研究方法,获得鼠疫耶尔森菌的基本蛋白质组数据.方法以对人无致病能力的布氏田鼠疫源地菌株91001为研究对象,按照溶解性的不同分别收集菌体蛋白,以3种不同方法(Shotgun-LC-MS-MS,1D-LC-MS-MS和2D-MS)进行分析,将分析数据与基于91001菌株基因组全序列建立的蛋白质理论数据库进行比对,确定91001菌株本实验培养条件下所表达的蛋白组分.结果 Shotgun-LC-MS-MS方法鉴定了971种蛋白,1D-LC-MS-MS鉴定了915种,而2D-MS方法则鉴定了233种蛋白质,三者合计为1 193种蛋白质,占基因组预测CDS的28.7%(1 193/4 143).结论不同的蛋白质组分析方法鉴定的蛋白质种类和数目都存在差异,为更全面地获得鼠疫耶尔森菌蛋白质组数据,有必要同时采取多种方法进行分析.
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鼠疫耶尔森菌生物型变异遗传基础的研究和新生物型--田鼠型的提出
目的探究鼠疫耶尔森菌生物型变异的遗传基础.方法通过全基因组序列的比较分析,鉴定可能与生物型变异相关的基因突变,采用DNA测序和位点特异性PCR的方法,分析基因突变在鼠疫耶尔森菌自然分离株中的分布.结果田鼠鼠疫自然疫源地菌株在毒力、生化表型和分子特征上与其他型别鼠疫耶尔森菌相差很大.所有脱氮阴性菌株的napA基因发生了突变,所有甘油利用阴性菌株的glpD基因发生了突变,所有阿拉伯糖利用阴性菌株的araC基因发生了突变.结论提出了一个新的生物型--田鼠型;相应糖醇代谢相关基因发生突变是4个生物型变异的遗传基础.
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鼠疫耶尔森菌DNA标识序列的鉴定及其应用研究
目的确定鼠疫耶尔森菌DNA标识序列,以用于鼠疫耶尔森菌的快速检测和鉴定.方法通过芯片比较基因组杂交和PCR验证,鉴定鼠疫耶尔森菌DNA标识序列,针对标识序列设计特定的PCR引物.结果鼠疫耶尔森菌基因组中存在3个区段,共28条基因,均是鼠疫耶尔森菌DNA标识序列.针对其中3条基因设计PCR引物,能特异性扩增出鼠疫耶尔森菌,与来自其他非鼠疫耶尔森菌的DNA无交叉反应.结论鼠疫耶尔森菌存在DNA标识序列,并能用于鼠疫耶尔森菌的快速检测与鉴定.
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鼠疫耶尔森菌比较和进化基因组学研究
鼠疫菌是鼠疫的病原体,曾经引起3次世界范围的鼠疫大流行.从基因组角度认识鼠疫菌在不同疫源地的演化对鼠疫的检验、鉴定和防治具有重要意义.本文论述了目前对鼠疫菌基因组进化的认识,并讨论了这些研究成果的实际意义.
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食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的实验调查
结肠炎耶尔森氏菌是人类腹泻病原菌之一，为详实了解耶氏菌对食品污染的情况，笔者进行了为期二个月的食品小肠结肠炎耶尔森氏菌的调查和实验分析，如实掌握到人体小肠结肠炎耶尔森氏菌的临床表现症状及有效控制耶尔森氏菌的第一手资料，达到了预期研究实验的调查目标。
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蚤类传播鼠疫机制的发现
人类历史上发生过3次世界性鼠疫大流行,丧生人口超过历次战争造成的死亡人数总和.恐怖的幽灵困扰人们上千年,直到1894年,耶尔森( Alexandre Yersin)在香港发现并且正确鉴定了鼠疫杆菌—耶尔森氏菌( Yersionia pestis),才揭开鼠疫神秘的面纱,鼠疫研究开始了真正的科学进程.
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实时定量聚合酶链反应检测腹泻粪便中小肠结肠炎耶尔森菌的研究与评价
目的 建立一种快速准确的分子生物学方法检测腹泻粪便中小肠结肠炎耶尔森菌,以替代繁琐费时的培养鉴定方法.方法 应用针对致病性小肠结肠炎耶尔森菌染色体上yst基因而设计的特异引物和探针进行实时定量聚合酶链反应(PCR,探针法),检测致病性(7种血清型)和非致病性(5种)小肠结肠炎耶尔森菌、耶尔森菌属内的其他菌种(8种)及其他肠道细菌(8种).此外,实时定量PCR检测经过培养方法鉴定的腹泻粪便200例,并比较两种方法的吻合度.结果 引物和探针对致病性小肠结肠炎耶尔森菌100%特异,与其他细菌无交叉反应.在纯培养物和粪便中,低检测浓度分别为102菌落形成单位(CFU)/ml和103 CFU/g.在200例样本中,培养鉴定方法和实时定量PCR检出同样18例阳性样本,吻合度为100%.结论 实时定量PCR反应对致病性小肠结肠炎耶尔森菌高度特异且与培养鉴定方法有很好的吻合性又方便快捷,可应用于临床检测.
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哈萨克斯坦动物鼠疫流行病学参数
对于鼠疫自然疫源地耶尔森氏菌引起鼠疫疫情的评估缺乏重要的流行病学参数.对哈萨克斯坦鼠疫保存宿主-大沙鼠的2个群落进行了为期3年的鼠疫动态研究.血清学结果显示在盛夏,鼠疫感染宿主数量出现高峰,从宿主感染到人可能性也随之加大.抗体滴度水平降低到检不出则与季节无关.此次研究的结果不支持对鼠疫感染宿主使用NBT(四唑氮蓝)实验.鼠疫菌感染降低了隐性感染宿主的生存率.
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拉肚子为何惹出关节炎
张大爷的小孙子,半月前闹了一次肠炎,上吐下泻,发高热,折腾了四五天,又是吃药又是挂水,总算是止住了.可是人瘦了一圈.提起这件事,张奶奶总是骂老头子"抠不死":"就那么一片烂西瓜,有啥舍不得的","别的不说,光这药费钱就足够买一车西瓜了,还白白地让小孩遭这么大的一场罪".原来张大爷的小孙子放暑假到爷爷这里小住,城里人好吃冷饮,张大爷买了一个大西瓜,第一天没吃完,张大爷又舍不得丢,就放在冰箱里第二天让小孙子吃,不想就得了胃肠炎.根据发病经过、症状和体征以及大便化验结果等,我怀疑是耶尔森氏菌肠炎,可能与吃冰箱西瓜有关,遂作了相应处理,病人也很快恢复.
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半套式聚合酶链反应检测牛奶中部分肠道致病菌
目的建立一套食物中的单核细胞增生性李斯特氏菌、耶尔森氏菌和副溶血性弧菌等肠道致病菌的快速检测方法.方法采用裂解法提取DNA与各自的三条引物进行二次聚合酶链反应扩增(简称半套式PCR),检测模拟阳性牛奶中部分肠道致病菌.结果常规PCR能检出100个活菌的存在,在其产物进行半套式PCR检测时有10个活菌存在时即可扩增出特异性产物,提高10倍.低检测限可达10 cfu(集落形成单位).结论本方法具有特异性强、敏感性高、简便快速等特点.
关键词： 半套式聚合酶链反应 单核细胞增生性李斯特氏菌 耶尔森氏菌 副溶血性弧菌 牛奶 -
宁夏鼠疫自然疫源地耶尔森氏菌分布调查
目的查明在宁夏鼠疫自然疫源地是否存在其他2种致病性的耶尔森氏菌分布.方法将疫源地捕获的啮齿动物取其舌、肠系膜淋巴结、盲肠末端及肠内容物放入PBS缓冲液中,在4℃条件下冷增菌3周,接着经KOH溶液处理后,涂布在IN、VYE培养基上,28℃培养24 h.后在培养基挑选可疑菌落做菌株的鉴定.结果未检出假结核菌,但检出致病性小肠结肠炎菌65株.结论在宁夏鼠疫自然疫源地存在致病性的小肠结肠炎耶尔森氏菌分布.
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四种耶尔森氏菌的抗原抗体相关性研究
目的了解鼠疫、假结核、小肠结肠炎和中间型耶尔森氏菌抗原抗体在免疫血清学中是否存在相关性?方法用四种耶尔森氏活菌分别或混合家兔耳静脉注射4次获得高效价抗血清,用鼠疫FI抗原和其他耶尔森氏菌全菌冻溶和耐热抗原,作鼠疫RIP试验和抑制试验.结果RIP仅能检出鼠疫菌单独或混合其他菌抗血清中的特异性FI抗体,FI抗原能完全抑制EV株、A2株和A2株混合其他耶尔森氏菌抗血清中的特异性抗体,假结核、小肠结肠炎、中间型耶尔森氏菌冻溶抗原对EV株抗血清抑制2～3管,对A2株混合不同耶尔森氏菌的抗血清不能抑制,假结核耐热抗原对EV株抗血清能抑制6～7管,对A2株混合其他耶尔森氏菌抗血清抑制2管.结论FI抗原对三种耶尔森氏菌抗体没有相关性,其他3种耶尔森氏菌冻溶抗原对EV株、A2株抗体有一定的相关性,而伪F2、519、520株耐热抗原对EV株抗体有较强亲缘相关性,对A2株抗体仅有一定的相关性.
