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ITS2序列鉴定“功劳叶”药材及其近缘混伪品＊
目的：中药材同名异物现象对临床安全用药造成了潜在的威胁。本研究对两种“功劳叶”药材及其近缘混伪品进行分子鉴定，以确保临床准确用药。方法：本实验收集枸骨、阔叶十大功劳和细叶十大功劳及其近缘混伪品共9个物种45份实验样品，用改良的CTAB法提取总DNA ，扩增ITS2序列并双向测序，采用CondonCode Aligner V 4.2.4对测序峰图进行拼接，应用MEGA 6.0进行序列变异分析，计算种内种间Kimura 2-Parameter（K2P）遗传距离，构建系统邻接（NJ）树。结果：基于ITS2序列的序列变异、近距离法和系统邻接树分析结果均表明，冬青属枸骨以及十大功劳属阔叶十大功劳和细叶十大功劳均能与其混伪品很好地区分开。结论：ITS2序列可有效区分两种“功劳叶”药材及其近缘混伪品，为临床准确用药提供依据。
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中药枸骨叶的化学成分研究
目的:对中药枸骨叶的化学成分进行研究.方法:采用溶剂提取和柱层析色谱分离,根据化合物理化性质和光谱数据鉴定其结构.结果:分离并鉴定了6个化合物:七叶内酯(1)、槲皮素(2)、异鼠李素(3)、金丝桃苷(4)、3-0-α-L-阿拉伯吡喃糖-28-0-6'-0-甲基葡萄糖坡摸醇酸苷(5)、23-羟基乌索酸-3-0-α-L-阿拉伯吡喃糖(1→2)β-D-葡萄糖醛酸-28-0-β-D-葡萄糖苷(6).结论:以上化合物均为首次从该植物中分离得到.
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RP-HPLC测定枸骨叶中羽扇豆醇的含量
目的:建立RP-HPLC法测定枸骨叶中羽扇豆醇含量的方法,为枸骨叶的质量分析和评价提供科学依据.方法:采用Aglent zorbax ODS柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),柱温为25℃,乙腈-水(8:2)为流动相,在流速1.0mL·min-1和紫外检测波长210 nm下进样20μL对枸骨叶甲醇提取物进行HPLC分析.结果:羽扇豆醇在0.25～12.7μg(r=0.999 8)呈良好的线性关系,平均加样回收率为100.2%(RSD4.3%).结论:本方法简便,重复性好,为评价枸骨叶药材的质量提供科学依据.
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中药枸骨叶研究进展
枸骨叶是苦丁茶的主要基源植物之一,作为日常保健饮品,具有减肥、强身健体的功效,其化学成分包括黄酮及其多酚类化合物、三萜及其皂苷和多种微量元素等.近年药理学研究表明,枸骨叶具有抗心肌缺血,降血脂、抗氧化、抗菌、免疫抑制,抗生育等广泛的药理作用.为了解枸骨叶与苦丁茶、十大功劳叶之间的关系,进一步深入研究枸骨叶的药效物质基础和作用机制,本文对枸骨叶的本草考证、化学成分、提取工艺、药理作用等方面进行综述,以期对今后枸骨叶的研究开发有所裨益.
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中药枸骨叶脂溶性化学成分的研究
目的研究中药枸骨叶(Ilex cornuta)的脂溶性化学成分,为其抗动脉粥样硬化活性寻找可能的先导化合物.方法利用硅胶和Sephadex LH-20等柱色谱进行分离,用化合物的波谱数据鉴定其结构.结果从枸骨叶的氯仿部位分得11个脂溶性成分,其中包括7个三萜类成分即羽扇豆醇(Ⅰ),11-酮基-α-香树脂醇棕榈酸酯(Ⅱ),α-香树脂醇棕榈酸酯(Ⅲ),3,28-乌索酸二醇(Ⅳ),熊果酸(Ⅴ),30-醛基羽扇豆醇(Ⅵ),30-酮基降羽扇豆醇(Ⅶ);1个链状倍半萜tanacetene(Ⅷ);1个甾醇β-谷甾醇(Ⅸ),2个有机酸类成分即正二十二烷酸(Ⅹ)和正二十六烷(Ⅺ).结论化合物Ⅳ,Ⅶ,Ⅷ,Ⅹ和Ⅺ为首此从冬青属植物中分得,化合物Ⅱ,Ⅲ和Ⅸ为首次从该植物中分得.倍半萜类成分为首此从冬青属植物中分得的化合物类型.
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RP-HPLC内标法测定10个不同收集地枸骨叶中熊果酸和羽扇豆醇的含量
目的 建立以三萜类化合物紫菀酮为内标物,同时测定枸骨叶药材中熊果酸和羽扇豆醇含量的反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析方法.方法 色谱柱:Agilent Zorbax ODS(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相:以乙腈-0.1%磷酸水,梯度洗脱;流速:1.0mL·min-1;检测波长:210 nm.结果 10个不同收集地的枸骨叶中熊果酸和羽扇豆醇的含量分别在1.23%～1.63%和0.59%～0.95%之间. 结论 该法快速、灵敏度高、重复性好,可用于测定枸骨叶中主要三萜类化合物熊果酸和羽扇豆醇的含量测定.
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中药枸骨叶和苦丁茶的现代研究进展
目的系统论述中药枸骨叶的本草学、生药学、化学和药理研究情况.方法在文献报道基础上,利用柱层析色谱以及薄层扫描、高效液相色谱法对枸骨叶的化学成分和定量分析进行进一步的深入研究.结果从枸骨叶中分离得到多种三萜皂苷成分并首次分离得到黄酮类成分.选择熊果酸和金丝桃苷作为含量测定指标,对枸骨叶和苦茶进行测定,结果有一定差异.结论通过对枸骨叶和苦丁茶的系统研究,确定了定性、定量研究方法,为两种药材的质量评价提供了依据.
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枸骨叶与十大功劳叶的鉴别
枸骨叶为少常用中药.历代本草将枸骨附于女贞项下,<中国药典>(1977年版)名为"功劳叶".<中国药典>(2010年版)中收载了"枸骨叶",然而枸骨叶与十大功劳叶有较大区别,目前医疗单位及生产单位对这两种药名的使用和鉴别比较模糊,总是习惯将枸骨叶说成功劳叶、写成功劳叶,将功劳叶和枸骨叶混为一谈,实际两种中药在功能主治上完全不一样,在临床工作当中应给予纠正.
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HPLC-ELSD法测定枸骨叶中熊果酸的含量
[目的]建立高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)测定枸骨叶中熊果酸的含量.[方法]采用phe-nomenexC18柱(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相:甲醇-0.5%醋酸铵溶液(92:8);检测器:蒸发光散射检测器(AlltechELSD 400).[结果]在此色谱条件下,熊果酸与干扰峰完全达到基线分离(R>1.6).枸骨叶熊果酸含量均在1.34%以上.熊果酸含量测定的线性范围为0.648～6.48μg(r=0.999 8),平均加样回收率为97.1%,相对平均标准偏差(RSD)为1.7%.[结论]该法快速,简便,重现性好,可为<中国药典>中枸骨叶药材的质量标准提高提供参考.
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HPLC法测定枸骨叶中金丝桃苷的含量
目的：建立HPLC法测定枸骨叶中金丝桃苷含量。方法：色谱柱Kromasil-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸（28：72）；流速1.0mL·min-1；检测波长356nm；柱温25℃。结果：金丝桃苷在0.20～4.00μg范围内线性关系良好（r=0.9998），平均回收率为100.17%，RSD为1.10%；枸骨叶中金丝桃苷的平均含量为1.18mg·g-1。结论：本法操作简便，准确性高，重现性好，可用于测定枸骨叶中金丝桃苷的含量。
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枸骨叶和十大功劳叶考辨
由于历史原因,小檗科十大功劳叶和冬青科枸骨叶的别名和正名在古今本草著作中已完全混淆,造成了十大功劳叶品种使用混乱现象.
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枸骨叶和功劳叶的本草考证与鉴别
对目前临床使用的枸骨叶和功劳叶进行形状、紫外、红外光谱鉴别.认为可以通过两者在药材性状、紫外、红外光谱进行区别.
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枸骨叶不同溶媒萃取物对二种念珠菌作用的研究
据本草纲目记载,枸骨叶味苦,微涩,性寒.有清热解毒、止渴生津的功能.我们证实[1-2],枸骨叶的化学萃取物对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌等细菌均有一定的抑菌活性.本实验旨在进一步探讨枸骨叶不同萃取物成分对病原性念珠菌的生长有无抗菌活性,以期能开发对临床有实用价值的天然抗真菌药物.
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HPLC同时测定枸骨叶中熊果酸和齐墩果酸的含量
目的:建立枸骨叶药材中熊果酸、齐墩果酸的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱:Extend-C 18(4.6mm×250mm,5μm),流动相:甲醇-0.1 moL·L-1醋酸铵溶液(83:17),流速为1.0mL·min-1,柱温30℃,检测波长210nm.结果:熊果酸在23.6-236.0μg·mL-1线性关系良好(r=-0.9999),平均回收率为98.84％,RSD为0.75％.齐墩果酸在10.42-104.20 μg· mL-1线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为98.87％,RSD为1.00％.结论:该方法简单,准确,且专属性强,可作为枸骨叶药材质量控制方法.
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苦丁茶及伪品的性状鉴别
目前市场上苦丁茶商品混乱，各地运用不尽相同，新版药典又未收载，全国常用苦丁茶以冬青科大叶冬青叶为主，枸骨叶却少见。现将伪充苦丁茶的几种植物叶的性状分述如下。1 正品 叶呈卵状长椭圆形，长8～20 cm，宽4.5～7.5 cm。具叶柄，边缘有锯齿，上面黄绿色或绿褐色，有光泽，下面黄绿色，主脉突起，两面均平滑无毛，革质，不皱缩，有的纵向微卷曲，气微。
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苦丁茶及其混淆品种的鉴别
近年来，苦丁茶作为一种辅助治疗高血压、高血脂的保健茶，正日益受到患者的青睐，用量不断上升。因正品来源稀少，以及各地方用药习惯不同，笔者发现，市场上常有用枸骨叶、女贞叶替代或混入苦丁茶中作药用，但三者的来源功效均不同，应加以区分。
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枸骨叶提取物对高脂血症模型大鼠脂代谢及血液流变学的影响
目的：：探讨枸骨叶提取物对高脂血症模型大鼠血脂调节功能及血液流变学影响,为该药物的开发和应用提供实验依据。方法：高脂饲料喂饲4周建立高脂血症大鼠模型后,随机将试验大鼠分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、枸骨叶提取物高剂量组(0.60 g·ml-1)、中剂量组(0.30 g·ml-1)、低剂量组(0.15 g·ml-1),灌胃给药9周,分别测定各组大鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶( ALT)、超氧化物歧化酶( SOD)及丙二醛( MDA)的含量,并测定血液流变学各项指标。结果：给药9周后,与模型组比较,不同剂量枸骨叶提取物对大鼠TC、TG、LDL-C、ALT、AST、MDA、载脂蛋白B的含量均有不同程度降低,对HDL-C、SOD活性及载脂蛋白A的水平均有不同程度升高,其中以枸骨叶高剂量作用效果显著(P<0.05,P<0.01)；不同剂量枸骨叶提取物均能不同程度地降低大鼠血浆黏度、全血黏度、红细胞聚集指数、红细胞压积,升高红细胞变形指数,且枸骨叶高剂量差异极显著(P<0.05,P<0.01)。结论：枸骨叶对高脂血症模型大鼠的血脂和血流异常具有显著调节作用,从而达到降低血脂水平的目的。
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高效液相色谱法同时测定枸骨叶中槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量
目的:采用高效液相色谱法同时测定枸骨叶中槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量.方法:Kromasil-C1 (4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1％磷酸(30∶70),流速1.0 ml·min-1,柱温25℃,检测波长365 nm.结果:槲皮素、山柰素和异鼠李素的质量浓度在8.14～81.40、1.32～13.20、4.66～46.60 μg·ml-1范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.38％、98.33％、98.71％,RSD分别1.51％、1.21％、1.27％.结论:所建立的方法灵敏、准确、专属性强,回收率高,重复性好,可用于枸骨叶药材的质量控制.
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枸骨叶水提物对高脂小鼠胆固醇合成代谢的影响
目的 探讨枸骨叶水提物对高脂小鼠血清胆固醇水平及合成代谢信号通路的影响机制.方法 实验小鼠随机分5组,其中3组用高、中、低剂量枸骨叶水提物灌胃30d后,测其血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,并与辛伐他汀组进行比较;采用酶联免疫吸附测定(E LISA)肝脏细胞中3-羟基-3-甲戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoA);采用蛋白质印迹法(Western blot)检测磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)的表达.结果 枸骨叶高、中、低剂量组有降低TC的作用(P＜0.01),与辛伐他丁组降低TC作用无差异;此外枸骨叶组均可降低HMG-CoA水平,降低肝细胞中p-EGFR的表达.结论 枸骨叶水提物对高脂饮食小鼠在清除TC方面发挥重要作用,它降低肝细胞中p-EGFR的表达,抑制HMG-CoA活性,进而降低高脂饮食小鼠体内TC水平而发挥降血脂作用.
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枸骨叶中总三萜提取工艺优化
目的:优化枸骨叶中总三萜的提取工艺.方法:以熊果酸为对照品,采用单因素和正交试验,考察乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度对枸骨叶中总三萜提取率的影响,优选出合理的提取工艺.结果:佳提取工艺条件为:用16倍量的75％乙醇,在50℃下超声提取15 min.结论:该提取工艺简便快捷、稳定可行,可作为枸骨叶中总三萜的提取工艺条件.
