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低浓度雷公藤内酯联合伊达比星在急性髓系白血病干细胞凋亡中的作用
目的 研究IC20浓度(5 nmoL/L)的雷公藤内酯(TPL)联合IC50浓度(27 nmol/L)的伊达比星(IDA)能否通过下调MDR1基因表达水平诱导急性髓系白血病(AML)干细胞凋亡.方法 从KG1a细胞株中分选CD34+ CD38-亚群,将其作为AML干细胞模型;分成空白对照组、TPL组、IDA组、联合组.空白对照组:培养液中不合TPL及IDA;TPL组:培养液中含IC20浓度(5 nmoL/L)的TPL;IDA组:培养液中合IC50浓度(27 nmoL/L)的IDA;联合组:培养液中含IC20浓度(5 nmoL/L)的TPL及IC50浓度(27 nmoL/L)的IDA.Annexin V-FITC/PI双标法流式细胞术检测处理后AML干细胞的凋亡情况;RT-PCR法检测上述4组中AML干细胞MDR1 mRNA表达水平的变化;Western blot检测上述4组AML干细胞给药后MDR1蛋白表达水平的变化.结果 空白对照组、TPL组、IDA组及联合组中AML干细胞在处理24 h后凋亡率分别为(0.37±0.29)％、(18.07±0.32)％、(20.13±0.06)％和(60.17±1.45)％,联合组中AML干细胞凋亡比例显著高于TPL组及IDA组,差异有统计学意义(P＜0.001).RT-PCR结果显示TPL组、IDA组及联合组中AML干细胞内MDR1 mRNA表达水平均有不同程度下调,空白对照组、TPL组、IDA组及联合组中MDR1 mRNA表达水平分别为0.927±0.084、0.462±0.048、0.396±0.019和0.231±0.023,联合组MDR1 mRNA表达水平均显著低于TPL组及IDA组,差异有统计学意义(P＜0.001).Western blot结果显示TPL组、IDA组及联合组AML干细胞内MDR1蛋白表达水平均不同程度下调,其中联合组更加明显.结论 IC20浓度的TPL可显著提高IC50浓度的IDA对AML干细胞的凋亡诱导作用,其机制可能与抑制MDR1基因及蛋白的表达有关.
关键词： 急性髓系白血病干细胞 雷公藤内酯 伊达比星 MDR1基因 -
雷公藤内酯与辅酶Q10联合干预MPP+帕金森模型大鼠的作用及其机制
目的:探讨雷公藤内酯与辅酶Q10(CoQ10)联合干预1-甲基-4-苯基-吡啶(MPP+)帕金森(PD)模型鼠的效果及其机制.方法:MPP+黑质内注射建立PD大鼠模型.将制作成功的模型大鼠随机分为假手术组、模型组、雷公藤内酯组、CoQ10组和联合给药组.对比各组行为学、TH、OX-42免疫荧光、Western blot结果、线粒体酶复合体Ⅰ (Complex Ⅰ)活性.结果:雷公藤内酯与CoQ10均可部分减轻MPP+诱导的PD模型鼠行为学缺陷,联合给药效果优于单一用药.TH阳性神经元数量联合给药组比雷公藤内酯组(P＜0.01)及CoQ10组(P＜0.01)显著增多.雷公藤内酯组及联合给药组CX3CR1蛋白表达量均较模型组低(P＜0.01).CoQ10组及联合给药组可使Complex Ⅰ的活性增高(P＜0.01).结论:CX3CR1抑制剂与线粒体Complex I增强剂联合给药较单一给药对MPP+ PD大鼠模型具有更好的神经保护作用.
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雷公藤内酯醇诱导T淋巴细胞凋亡时Fas/FasL的表达
目的:检测Fas/FasL在雷公藤内酯醇诱导的T淋巴细胞凋亡中的表达.方法:培养人T淋巴细胞,10、20、30μg/L的雷公藤内酯醇分别刺激细胞4、8、16 h,流式细胞仪DNA分析、FITC-Annexin V binding/PI染色检测细胞凋亡,Western blot分析检测Fas/FasL蛋白的表达.结果:雷公藤内酯醇以剂量和时间依赖的形式诱导T淋巴细胞凋亡,雷公藤内酯醇诱导T淋巴细胞凋亡的同时伴随有Fas和FasL表达的上调,同样,雷公藤内酯醇诱导Fas和FasL表达呈现剂量和时间依赖性.结论:雷公藤内酯醇以剂量和时间依赖的形式诱导人T淋巴细胞凋亡,雷公藤内酯醇诱导T淋巴细胞凋亡的信号通路可能是通过Fas/FasL途径激活的.
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雷公藤内酯醇对哮喘豚鼠肺组织病理变化影响的研究
目的:研究雷公藤内酯醇(TP)干预对急、慢性哮喘豚鼠模型肺组织病理变化的影响.方法:30只雄性豚鼠随机分为A组(哮喘组)、B组(干预组)、C组(慢性哮喘组)、D组(慢性干预组)、E组(对照组).建立豚鼠哮喘模型,分别于后一次诱喘后4 h取肺组织常规切片染色,进行气道壁、气道和血管平滑肌及肺泡壁的图像分析和炎性细胞分类计数.结果:各哮喘组段、细支气管壁内及周围大量炎性细胞特别是嗜酸性粒细胞(Eos)浸润,管腔内气道黏膜脱落,可见大量分泌物.慢性哮喘组段、细支气管及血管平滑肌增生肥厚.各干预组炎性细胞减轻,管腔内炎性渗出物减少或消失,慢性干预组气道及血管平滑肌增生肥厚等被抑制.结论:推测TP能减少气道炎性分泌物,减轻段、细支气管炎性细胞特别是Eos的浸润,抑制气道、血管重塑.
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雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠海马区P-糖蛋白表达的影响
目的:探讨雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠海马区神经元的作用及对P-糖蛋白表达水平的影响.方法:30只SD大鼠随机分成3组,其中对照组10只,海人酸致痫组10只,雷公藤内酯干预组10只.应用结晶紫染色观察海马神经元的形态变化,Western-Blot法检测海人酸致痫后6,24,48,72eh海马区P-糖蛋白表达水平的变化.结果:结晶紫染色结果显示,雷公藤内酯干预组中海马神经元的数量和形态与对照组相似;海人酸致痫组中,海马神经元变性或丢失,胞体皱缩,形态不规则.Western-Blot结果显示,雷公藤内酯干预后48 h下调P-糖蛋白作用明显,海人酸致痫组中海马区P-糖蛋白表达水平与对照组比较显著增多(P＜0.05);雷公藤内酯干预组中海马区P-糖蛋白表达水平与海人酸致痫组比较显著减少(P＜0.05).结论:雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠海马神经元具有保护作用;雷公藤内酯对癫痫大鼠P糖蛋白的表达有一定抑制作用.
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雷公藤内酯对癫痫模型大鼠海马神经元凋亡的保护作用研究
目的:研究雷公藤内酯对癫痫模型大鼠海马神经元凋亡的保护作用.方法:皮下注射海人酸(10 mg/kg)以复制大鼠癫痫模型.实验分为对照(等容生理盐水)、模型(等容生理盐水)与雷公藤内酯(15 μg/kg)组,腹腔注射给药,每天1次,连续7d.结晶紫染色观察海马神经元形态；免疫组化染色和Western blot法检测海马神经元B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平.结果:模型组大鼠海马神经元变性或丢失,胞体皱缩,形态不规则；雷公藤内酯组大鼠海马神经元的数量和形态明显改善.与对照组比较,模型组大鼠Bcl-2蛋白表达水平显著减弱,Bax蛋白表达显著增强(P＜0.05)；与模型组比较,雷公藤内酯组大鼠Bcl-2蛋白表达水平显著增强,Bax蛋白表达显著减弱(P＜0.05).结论:雷公藤内酯可通过上调癫痫模型大鼠海马神经元Bcl-2、下调Bax蛋白表达而抑制大鼠神经元凋亡.
关键词： 雷公藤内酯 海人酸 神经元 B细胞淋巴瘤/白血病-2 Bcl-2相关X蛋白 -
雷公藤甲素对U251细胞自噬活性的影响及机制研究
目的 探讨雷公藤甲素对U251细胞自噬活性的影响及机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测雷公藤甲素对U251细胞的增殖抑制率、半数抑制浓度(IC50);免疫荧光化学法测定细胞中LC3-Ⅱ表达,Western blot法测定LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、磷酸化P70、磷酸化Erk、磷酸化AKT蛋白的表达.结果 雷公藤甲素作用于U251细胞后,细胞增殖受抑制,24 h的IC50为0.73 μmol/L,48 h的IC50为0.27μmol/L.免疫荧光法测定6、12、24 h后LC3-Ⅱ水平增高;Western blot法测定LC3-Ⅱ水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值随时间增高;Beclin-1水平增高,磷酸化P70、磷酸化Erk表达降低、磷酸化AKT无明显变化.结论 雷公藤甲素可抑制U251细胞增殖并促进自噬,并可通过上调Beclin-1表达和抑制mTOR的活性来促进自噬.
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雷公藤内酯醇联合吉西他滨对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的：观察雷公藤内酯醇（TPL）联合吉西他滨（GEM ）对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响。方法以TPL、GEM单独用药以及两药联合作用于体外培养的PANC-1细胞，采用细胞毒实验（MTT）法检测细胞增殖并计算两药之间的交互作用、Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化、流式细胞仪检测细胞凋亡率、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测信号转导与转录活化因子3（STAT3）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3（caspase-3）蛋白表达。结果 TPL、GEM 单药以及联合用药组的细胞均出现了典型的细胞凋亡形态学改变，且联合用药组的凋亡细胞数较 T PL、GEM 单药组明显增加。与对照组相比，T PL、GEM单药以及联合用药组的细胞凋亡率均明显增加，差异有统计学意义（ P＜0．05）；且联合用药组的细胞凋亡率显著高于单药组，差异有统计学意义（P＜0．05）。TPL联合GEM可协同抑制兔抗人磷酸化转录活化因子3（p-STAT3）蛋白表达，活化caspase-3 TPL、GEM蛋白表达。结论 TPL联合GEM可协同抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖并诱导细胞凋亡，其机制与抑制STAT3通路、促进caspase-3蛋白表达有关。
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金关片的质量标准研究
目的 完善金关片质量标准.方法 采用薄层色谱(TLC)法对续断、秦艽、丹参、淫羊藿、黄芪进行鉴别.建立高效液相色谱(HPLC)法测定双酯型生物碱,以AQ Welch C18色谱柱(4.6 mm×250.0 mm,5μm),以乙腈-四氢呋喃(25:15)为流动相A,以0.1 mol/L醋酸钠溶液作为流动相B,检测波长235 nm,梯度洗脱,柱温35℃,流速1.0 mL/min.结果 建立的TLC法专属性强、分离度好、阴性无干扰;3种双酯型乌头碱HPLC含量测定方法专属性较TLC强,线性关系良好,相关系数为0.9995～0.9999;回收率为94.4％～99.2％.结论 该法操作简便、重现性好、结果准确,可作为该制剂的质量控制方法.
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雷公藤内酯醇联合热疗对MKN28细胞增殖抑制作用的研究
目的:研究雷公藤内酯醇(triptolid,TPL)与热疗联合应用对胃癌细胞MKN28增殖、细胞周期分布及磷酸化蛋白激酶B(phosphorylation of Akt,p-Akt)表达的影响.方法:将体外复苏和培养的胃癌细胞系MKN28分为四个组:对照组、TPL组、热疗组、TPL联合热疗组.其中TPL刺激浓度为20ng/ml,热疗采用43℃下加热150min.使用四甲基偶氮唑盐比色法(measurement of trititaed thymidine incorporation,MTT)检测细胞增殖并计算细胞增殖抑制率.流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测细胞周期分布的变化,使用蛋白质印迹法(Western blot)检测p-Akt水平.结果:热疗组,TPL组和TPL联合热疗组MKN28 细胞增殖抑制率分别为21.2%,28.5%和54.5%,联合组显著高于TPL组和热疗组.FCM结果显示热疗组G0/G1期减少至(62.7±3.8)%,G2/M期增多至(18.1±3.2)%.TPL组G0/G1期增多至(80.62±4.6)%,G2/M期增多至(16.18±2.2)%.联合组G0/G1期(77.72±8.1)%,G2/M期增多至(19.62±2.4)%.热疗组和TPL组对细胞周期的影响不一样.与热疗组和TPL组相比,联合组G2/M期增多明显.Western blot检测各组p-Akt蛋白表达均有降低,其中对照组(1.81±0.05),热疗组(1.28±0.01),TPL组(0.95±0.07),联合组(0.58±0.06),联合组下降明显(P＜0.05).结论:TPL联合热疗对MKN28细胞增殖抑制作用更强,可能与二者对细胞周期的作用点不同,并能同时降低细胞内p-Akt的表达有关.
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雷公藤内酯在疼痛研究领域中的新进展
疼痛(pain)是当前困扰人类健康为严重的问题之一,有关疼痛的研究已经成为当今神经科学领域研究的热点.由外伤、神经压迫、感染以及神经退行性病变导致的神经病理性痛是临床上常见、难治,也为复杂的一类疾病,严重影响了患者的生活质量[1-3].由于神经病理性痛的发生机制复杂,包括神经元、胶质细胞以及炎性细胞因子等的相互作用和影响,使人们对神经病理性痛的产生和维持认识还较匮乏,因而在临床上有针对性的镇痛手段也就比较局限.
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雷公藤内酯抑制内皮细胞血管内皮生长因子表达与合成
目的：研究雷公藤内酯对血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响，进一步探讨雷公藤内酯降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制.方法：以人内皮细胞系ECV-304为研究对象，利用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)，流式细胞仪，酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同剂量雷公藤内酯对佛波脂(TPA)诱导的内皮细胞VEGFmRNA表达及VEGF合成与分泌的影响，用RT-PCR检测雷公藤内酯对内皮细胞c-los/c-jun mRNA表达的影响.结果：TPA能够明显上调VEGF mRNA表达，蛋白合成与分泌.而雷公藤内酯可以抑制TPA诱导的内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF蛋白合成与分泌，该作用在10μg·L-1时更为明显.同样，雷公藤内酯剂量依赖性地抑制TPA诱导的内皮细胞c-fos/c-jun mRNA的表达.结论：雷公藤内酯通过影响c-fos/c-jun基因转录而抑制内皮细胞VEGFmRNA表达及VEGF合成与分泌是雷公藤内酯降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制之一.
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雷公藤内酯：一种T-淋巴细胞核因子-кB的强效抑制剂
目的：探讨雷公藤内酯醇对T淋巴细胞中核因子-кB活力及其抑制分子IкBα的影响，以进一步阐明其免疫抑制效应的分子机制.方法：将不同浓度的雷公藤内酯醇处理普通培养状态的和同时使用PMA/PHA激活的Jurkat细胞，以凝胶迁移率实验(EMSA)检测细胞NF-кB活力的改变，并以逆转录-半定量PCR方法检测处理前后细胞中IкBα mRNA水平的改变.结果：(1)在普通培养状态下的Jurkat细胞中存在有一定活力的NF-кB，使用PMA/PHA处理可显著升高Jurkat细胞中NF-кB的活力，雷公藤内酯醇可以降低两种培养状况下的Jurkat细胞中NF-кB活力，并以激活状态下更为显著.(2)雷公藤内酯醇可以上调Jurkat细胞中IкBα mRNA的转录水平.结论：雷公藤内酯醇对T细胞内IкBα基因转录的调控以及抑制T细胞内NF-кB的活力是雷公藤免疫抑制效应的分子机制之一.
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雷公藤甲素对高糖刺激足细胞synaptopodin和desmin表达影响
目的 通过观察高糖刺激对小鼠足细胞synaptopodin和desmin表达影响及雷公藤甲素(TP)对其干预作用,探讨TP减少糖尿病肾病尿蛋白的分子机制.方法 以体外培养小鼠永生化足细胞为研究对象,将其分为正常糖组、高糖刺激组、甘露醇对照组、低剂量TP干预组和高剂量TP干预组5组,分别加含有5.5 mmol/L的D-葡萄糖、含有30.0 mmol/L的D-葡萄糖、含有5.5 mmol/L的D-葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇、含有30.0 mmol/L的D-葡萄糖+3 μg/L的TP、含有30.0 mmol/L的D-葡萄糖+10 μg/L的TP培养液培养48 h.应用荧光定量PCR法和Western Blot方法检测各组足细胞synaptopodin、desmin mRNA和蛋白的表达.结果 与正常糖组相比,高糖刺激组足细胞synaptopodin mRNA和蛋白的表达增加,desmin mRNA和蛋白的表达减少;低剂量TP干预和高剂量TP干预组synaptopodin mRNA和蛋白表达水平均较高糖刺激组升高,而desmin mRNA和蛋白表达水平较高糖刺激组降低,且呈一定的剂量-效应关系,差异有显著性(F=25.919～551.012,P＜0.05).结论 TP可以改善高糖诱导的足细胞synaptopodin和desmin表达异常,这可能是TP减少糖尿病肾病尿蛋白的机制之一.
关键词： 足细胞 雷公藤内酯 糖尿病肾病 Synaptopodin Desmin
