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益气逐瘀方对心肌梗死大鼠心功能、细胞凋亡及miR-24相关基因表达的影响
目的 探讨益气逐瘀方参元益气活血胶囊(SYD)对急性心肌梗死大鼠心功能、细胞凋亡及miR-24相关基因表达的影响.方法 50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、SYD高剂量组、SYD中剂量组、SYD低剂量组,每组10只,采用左冠状动脉前降支结扎法建立心肌梗死模型,SYD高、中、低剂量组从术后第2天开始给予SYD药液灌胃,共给药2周.治疗结束后检测大鼠血清CK、LDH水平,超声心动图检测左室功能,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,RT-PCR检测心肌组织miR-24、Bim、Bcl-2、Bax、caspase-9mRNA表达.结果 与模型组比较,SYD高、中、低剂量组均能显著降低血清CK、LDH水平(P＜0.05,P＜0.01),降低左室舒张和收缩末期内径(P＜0.05,P＜0.01),升高左室短轴缩短率及射血分数(P＜0.05,P＜0.01),升高心肌组织miR-24、Bcl-2 mRNA表达(P ＜0.05,P＜0.01),降低Bim、Bax、caspase-9 mRNA表达(P ＜0.05,P＜0.01),同时降低心肌细胞凋亡指数(P ＜0.05,P＜0.01).结论 SYD能够减轻心肌梗死大鼠心肌损伤及细胞凋亡,其作用机制可能与上调miR-24表达,抑制靶基因Bim及促凋亡基因Bax、caspse-9表达有关.
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益气逐瘀方对心肌梗死大鼠心肌损伤标志物及miR-24基因表达的影响
目的 观察益气逐瘀方参元丹对心肌梗死大鼠心肌损伤标志物及缺血心肌组织miR-24基因表达的影响.方法 50只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、参元丹高剂量组(H-SYD组)、参元丹中剂量组(M-SYD组)、参元丹低剂量组(L-SYD组),每组10只,采用左冠状动脉前降支结扎法复制心肌梗死模型,H-SYD组、M-SYD组、L-SYD组从术后第2天开始参元丹药液灌胃,Sham组和Model组等剂量生理盐水灌胃,共给药2周.治疗结束时,观察各组大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平及缺血心肌组织miR-24基因表达情况.结果 与Model组比较,H-SYD组、M-SYD组及L-SYD组均能显著降低血清CK、LDH水平(P＜0.05,P＜0.01),H-SYD组、M-SYD组能够显著升高缺血心肌组织miR-24表达水平(P＜0.05,P＜0.01).结论 益气逐瘀方参元丹能够减轻心肌梗死大鼠心肌损伤,其作用机制可能与上调缺血心肌组织miR-24基因表达有关.
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益气逐瘀方对急性心肌梗死大鼠miR-24表达及心肌细胞凋亡的影响
目的:观察益气逐瘀方参元丹对急性心肌梗死大鼠miR-24表达及心肌细胞凋亡的影响.方法:50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、参元丹高、中、低剂量组,每组10只,采用左冠状动脉前降支结扎法复制心肌梗死模型,参元丹高、中、低剂量组从术后第2天开始给予参元丹药液灌胃,假手术组和模型组给予等剂量生理盐水灌胃,共给药2周.治疗结束后检测大鼠血清CK、LDH水平及心肌组织miR-24基因表达情况,TUNEL法检测心肌细胞凋亡.结果:实验结束时,与模型组相比,参元丹高、中、低剂量组均能显著降低血清CK、LDH水平(P＜0.05,P＜0.01),升高心肌组织miR-24 mRNA表达(P＜0.05,P＜0.01),同时降低心肌细胞凋亡指数(P＜0.05,P＜0.01).结论:益气逐瘀方参元丹能够减轻心肌梗死大鼠心肌损伤及细胞凋亡,其作用机制可能与上调心梗大鼠缺血心肌组织miR-24基因表达有关.
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益气逐瘀方改善心肌梗死大鼠心肌损伤及对miR-24/Bim通路相关蛋白表达的影响
目的:探讨益气逐瘀方参元丹对急性心肌梗死大鼠心肌损伤及miR-24/Bim通路相关蛋白表达的影响.方法:50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、参元丹高、中、低剂量组,每组10只,采用左冠状动脉前降支结扎法复制心肌梗死模型,参元丹高、中、低剂量组从术后第2天开始给予参元丹药液灌胃,假手术组和模型组给予等剂量生理盐水灌胃,共给药2周.治疗结束后检测大鼠血清CK、LDH水平及心肌组织miR-24基因表达,超声心动图检测左室功能,Western-blot检测心肌组织Bim、Bcl-2、Bax、caspase-9蛋白表达.结果:实验结束时,与模型组比较,参元丹高、中、低剂量组均能显著降低血清CK、LDH水平(P＜0.05,P＜0.01),升高心肌组织miR-24基因表达(P＜0.05,P＜0.01),降低左室舒张和收缩末期内径(P＜0.05,P＜0.01),升高左室短轴缩短率及射血分数(P＜0.05,P＜0.01),升高心肌组织Bcl-2蛋白表达(P＜0.05),降低Bim、Bax、caspase-9蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:益气逐瘀方参元丹可能通过调控miR-24/Bim信号通路相关细胞因子蛋白表达改善心肌梗死细胞损伤.
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克拉霉素治疗鼻咽癌放疗后鼻窦的损伤及血浆miR-24表达的影响
目的 探讨克拉霉素对鼻咽癌放疗后鼻窦损伤治疗及血浆miR-24基因表达的作用.方法 选自2014年12月至2016年6月我院行鼻咽癌放疗后出现鼻窦损伤的82例患者,随机分为对照组和观察组,观察组给予克拉霉素片(250mg/次,1日/次),对照组给予阿奇霉素片治疗,250mg/次,1日/次,治疗15天,观察鼻窦的损伤修复情况及对miR-24基因表达的影响.结果 观察组的临床总有效率92.68％明显高于对照组85.37％ (P ＜0.05);观察组的鼻部症状改善差异具有统计学意义(P＜0.05),观察组的VAS及鼻窦CT影像的Lund-Mackay评分改善治疗效果显著优于对照组;观察组的血浆miR-24基因表达相对于对照组显著受到抑制.讨论 克拉霉素治疗鼻咽癌放疗后引起的鼻窦损伤,且能够通过抑制miR-24基因表达,提高患者5年的生存率.
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Let-7和miR-24在紫外线B诱导的细胞凋亡中的作用
目的 研究let-7和miR-24在紫外线B(UVB)诱导的细胞凋亡中的可能作用.方法 NIH3T3细胞受50 J/m2 UVB照射后,用Hoechest 33342/PI染色观察其凋亡情况;RT-PCR检测let-7和miR-24的表达水平.利用在线数据库PicTar等预测它们的靶基因,并用GOstat软件对这些靶基因进行功能分类.结果 荧光显微镜下,NIH3T3细胞经UVB照射后可见典型的凋亡和坏死细胞;let-7和miR-24在UVB照射组的表达水平较对照组明显增加.用GOstat进行功能分类后发现,casp3、bcl212、map3kl和cdk5等基因同时也是UVB诱导的细胞周期调节的靶基因.结论 let-7和miR-24可能参与UVB诱导的细胞凋亡.
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miR-24对胃癌细胞株BGC-803及SGC-7901凋亡和增殖的影响
目的 探讨在两株胃癌细胞株BGC-823及SGC-7901中抑制内源性miR-24的表达后对细胞凋亡和增殖的作用.方法 使用INTERFERin转染试剂将锁核苷酸标记的反义核酸miR-24-ASO转染进入胃癌细胞株,使用倒置荧光显微镜观察细胞生长变化,流式细胞计检测细胞凋亡的比例,然后使用CCK-8试剂盒对细胞增殖情况进行检测.结果 转染miR-24-ASO的BGC-803细胞和SGC-7901细胞相对于转染内参的凋亡水平分别增加了约25倍和21倍左右.转染了miR-24-ASO抑制内源性miR-24的表达之后细胞的增殖能力相对于转染阴性对照的细胞株的增殖能力均明显降低.结论 抑制内源性miR-24的表达可以诱导胃癌细胞的凋亡并导致胃癌细胞增殖能力的降低.miR-24调控了胃癌细胞的增殖和凋亡过程.揭示了miRNA在胃癌发生过程中的调控机制,并为胃癌的治疗提供了良好的应用前景.
关键词： miR-24 miR-24-ASO 胃癌 凋亡 治疗应用 -
miR-24对大鼠脊髓损伤后运动功能的影响
目的 观察miR-24对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响.方法 健康成年Sprague-Dawley大鼠60只,随机分为miR24组、对照组和假手术组(Sham组),每组20只.Sham组只暴露脊髓,不打击.对照组和miR-24组采用Allen's方法损伤大鼠T9脊髓节段,制备脊髓损伤动物模型.造模成功后30 min,miR-24组鞘内注射agomir-24(0.5 nmol/L,5μL),对照组鞘内注射等量的agomir对照,每日1次,共3次.采用BBB评分法分析大鼠后肢运动功能,实时PCR检测脊髓组织中miR-24表达水平,HE染色观察大鼠脊髓组织病理形态学变化,实时PCR和Western blot检测脊髓组织中Bim mRNA和蛋白的表达水平.结果 与Sham组相比,对照组大鼠损伤后1、3、7和14d脊髓组织中miR-24表达均降低,其中3、7及14d差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,miR-24组大鼠损伤后3、7和14 d BBB评分均显著升高(P＜0.05);损伤后1和3d脊髓损伤形态学均有改善,损伤后3d改善更明显;损伤后1和3d脊髓组织Bim mRNA和蛋白的表达水平均显著降低(P＜0.05).结论 miR-24可能通过抑制Bim的表达,促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复.
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大鼠miR-24腺病毒载体构建和鉴定
目的 构建含miR-24基因的重组腺病毒,为后期研究miR-24在大鼠颈动脉球囊损伤所致血管再狭窄(RS)中的作用及分子机制奠定基础.方法 PCR钓取目的基因miR-24,连接入穿梭载体GV139.采用AdMax腺病毒包装系统,将构建的miR-24重组腺病毒穿梭质粒与辅助包装质粒(PBHG)共转染HEK293细胞,通过Cre/loxP重组酶系统的作用实现重组,得到重组腺病毒,并进行重组腺病毒扩增、纯化及滴度测定.结果 成功构建了大鼠miR-24腺病毒载体,滴度为1×109 PFU/ml.结论 成功获得含miR-24基因的重组腺病毒,为后期顺利开展有关miR-24在血管RS中的作用及分子机制研究提供了可能.
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miR-24对心脏成纤维细胞生长和迁移的影响及机制研究
目的:探讨miR-24对心脏成纤维细胞的生长和迁移的影响及机制.方法:采用RT-PCR检测心肌细胞和心脏成纤维细胞中miR-24的表达水平.在心脏成纤维细胞中转染miR-24 mimics、mimics control、miR-24 inhibitors、inhibitors control后,通过Western blot检测细胞中Col-1、α-SMA的表达,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell小室检测细胞迁移能力.通过靶基因预测库预测miR-24的靶基因,荧光素酶鉴定靶基因的正确性,并通过RT-PCR和Western blot检测转染后细胞中Furin的表达.结果:心脏成纤维细胞HEH2中miR-24的表达水平与心肌细胞H9C2相比差异显著(P＜0.01),心脏成纤维细胞中miR-24表达上调.miR-24 mimics组中Col-1、α-SMA的表达水平明显低于mimics control组(P＜0.01).miR-24 mimics组中细胞OD值较mimics control组显著降低(P＜0.01),miR-24 inhibitors组中细胞OD值较inhibitors control组显著升高(P＜0.01).miR-24 mimics组、mimics control组、miR-24 inhibitors组、inhibitors control组细胞凋亡无显著性差异(P＞0.05).miR-24 mimics组细胞迁移数目明显低于mimics control组,差异显著(P＜0.01),miR-24 inhibitors组细胞迁移数目高于inhibitors control组,差异显著(P＜0.05).miR-24 mimics组细胞中Furin蛋白和mRNA水平明显降低,野生型Furin和miR-24 mimics共转染的细胞中荧光素酶活性低.结论:miR-24在心脏成纤维细胞中高表达,通过靶基因Furin抑制心脏成纤维细胞合成Col-1、α-SMA,抑制心脏成纤维细胞增殖和迁移.
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microRNA-24表达与黄曲霉毒素B1相关性肝细胞癌预后的关联性研究
目的 探讨microRNA-24(miR-24)表达对黄曲霉毒素B1(AFB1)相关性肝细胞癌(HCC)预后的影响.方法 收集来自AFB1高暴露区TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期的HCC患者(n =207)手术切除标本,通过TaqMan-PCR技术检测肿瘤组织中miR-24的表达情况,通过风险比例回归模型及逻辑回归模型分析miR-24表达与HCC预后及临床病理学特征的关系.结果 高miR-24表达影响HCC总体生存及肿瘤无复发生存(P＜0.01),增加总体死亡风险及肿瘤复发风险分别为2.58倍和3.75倍,这种风险作用在有高AFB1暴露时更为明显,对应风险值分别为8.13 (95％ CI:4.46～14.84)和11.75(95％CI:5.15 ～26.79).miR-24表达与HCC肿瘤大小、分化程度及血管密切相关(P＜0.05),并调节AFB1-DNA加合物水平.结论 miR-24表达影响AFB1相关性HCC的预后,并可调节HCC临床病理特征.
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miR-24对内皮细胞功能的调节及其在心血管疾病发生发展中的作用
microRNA-24 (miR-24)属于miR-23～27～24家族,高表达于血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs),并调控VECs多种特异性基因的表达.研究显示,miR-24参与VECs增殖、凋亡、血管形成、炎性反应和分化等功能的调节,而它的表达异常与VECs功能紊乱及损伤密切相关,且参与心血管疾病的发生和发展.本文就miR-24参与调控VECs功能的分子机制,及其在心血管疾病发生发展过程中的作用作一综述.
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MiR-24反义核酸通过BIM-Smac/Diablo途径促进多柔比星对结肠癌细胞的凋亡诱导效应
目的 探讨miR-24在结肠癌中发挥的作用并研究其是否和多柔比星的体外治疗有关.方法 用RT-qPCR法检测miR-24在结肠癌患者血浆中及结肠癌细胞系中的表达水平.MTT法检测miR-24反义核酸对多柔比星杀伤结肠癌细胞能力的影响.利用生物信息学、定量PCR及Western blot法验证miR-24是否调节结肠癌细胞BIM的表达.运用JC-1染色、Annexin V染色及Western blot法研究miR-24反义核酸影响多柔比星疗效的信号通路.结果 结肠癌患者血浆及结肠癌细胞系中miR-24表达水平显著升高.miR-24反义核酸可显著增强多柔比星对SW480细胞的杀伤活性.定量PCR及Western blot实验表明miR-24的靶基因可能为BIM.miR-24反义核酸联合多柔比星可引起SW480细胞线粒体膜电位的丧失并诱导线粒体内Smac/DIABLO的释放,进而引起caspase-3的活化和凋亡的发生.转染BIM siRNA后miR-24反义核酸联合多柔比星对SW480细胞的凋亡诱导效应显著降低.结论 MiR-24反义核酸通过BIM-Smac/Diablo途径促进多柔比星对结肠癌细胞的凋亡诱导效应.
关键词： miR-24 BIM Smac/DIABLO SW480 多柔比星 -
miR-24和miR-22在胃癌中的表达及其临床意义
目的 探讨miR-24和miR-22在胃癌细胞与组织中的表达及其与胃癌临床病理特征之间的关系.方法 应用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-24和miR-22在人正常胃黏膜细胞株(GES-1)、4株人胃癌细胞株以及胃癌组织和相应的癌旁胃黏膜组织中的表达,分析miR-24和miR-22在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征之间的关系.结果 与GES-1比较,miR-24在人胃癌细胞株SGC-7901 和BGC-823中表达明显升高(P=0.003、P=0.007),而在MGC-803和AGS中表达差异无统计学意义 (P=0.304、P=0.120);与GES-1比较,miR-22在SGC-7901中表达明显升高(P=0.000),在MGC-803中表达显著降低(P=0.000),而在AGS 和BGC-823中表达差异无统计学意义(P=0.151、P=0.307);胃癌组织中miR-24的表达明显高于其相应的癌旁胃黏膜组织(P=0.005);miR-22在胃癌组织及其相应的癌旁胃黏膜组织中的表达差异无统计学意义(P=0.501);胃癌组织中除miR-24的表达与性别具有显著相关性外(P=0.029),miR-24、miR-22与其他临床病理特征,如年龄、肿块大小、浸润深度、分化程度、Borrmann分型以及淋巴结转移、TNM分期等均无明显相关性.结论 miR-24在人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-803以及胃癌组织中表达是上调的,可能在胃癌的发生发展中发挥重要作用.
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鼻咽癌患者血浆miR-24异常表达的临床意义
目的：探讨miR-24在鼻咽癌患者血浆中的表达及临床意义。方法收集2007年12月~2011年6月在南方医院耳鼻喉科住院的初诊鼻咽癌患者血浆217例，以同期住院的慢性化脓性中耳炎或慢性鼻窦炎患者血浆73例作为对照，利用荧光定量PCR的方法进行miR-24表达的检测并结合临床资料分析其临床意义。结果血浆miR-24在鼻咽癌组的相对表达水平为对照组的4.808倍，差异具有显著统计学意义（P<0.001）；血浆miR-24在不同T分期之间有统计学差异（P=0.007），miR-24与N分期呈负相关（P=0.028）；鼻咽癌病人血浆EBV-DNA与血浆miR-24呈负相关（P=0.048）；治疗后血浆miR-24含量较治疗前下降差异有显著统计学意义（P=0.001）。结论血浆miR-24可作为肿瘤分子标志物用于鼻咽癌早期诊断及预后分析。
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microRNA-24对自噬的调节及血管内皮细胞管腔形成的影响
目的 探讨microRNA-24(miR-24)对自噬相关基因LC3Ⅱ和Beclin-1的调节及其对血管内皮细胞管腔形成能力的影响.方法 将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)随机分为空白对照组、雷帕霉素+miR-24高表达组以及雷帕霉素组.其中空白对照组的细胞不作任何处理;雷帕霉素+miR-24高表达组的细胞先转染miR-24高表达质粒,再用1000 nmol/L的雷帕霉素干预6 h建立自噬模型;雷帕霉素组的细胞同样用1000 nmol/L的雷帕霉素干预6 h建立自噬模型;然后分别用MTT法检测HUVECs的增殖能力、细胞划痕实验检测HUVECs迁移能力及Matrigel实验检测HUVECs管腔形成能力,进一步用蛋白免疫印迹法(Western blot)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测LC3II和Beclin-1的蛋白和mRNA表达水平.结果 (1)与空白对照组相比,雷帕霉素组、雷帕霉素+miR-24高表达组细胞增殖能力和迁移比例降低(P<0.05),雷帕霉素组的管腔形成数量、长度与空白对照组相近,而雷帕霉素+miR-24高表达组则基本没有形成明显管腔样结构.(2)与空白对照组相比,雷帕霉素+miR-24高表达组和雷帕霉素组的LC3II和Be-clin-1 mRNA和蛋白表达量均不同程度增加(P<0.05).(3)在雷帕霉素+miR-24高表达组中,上述指标较雷帕霉素组均降低(P<0.05),特别是管腔形成数目明显减少.结论 miR-24可在转录后水平调控自噬相关基因LC3II和Beclin-1的表达,进而下调细胞自噬水平.这很有可能是miR-24抑制HUVECs增殖、迁移和管腔形成的机制之一.
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miR-24对鼻咽癌放射敏感性的影响
目的:探讨miR-24在鼻咽癌中的表达和对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响.方法:收集广西医科大学第一附属医院82例鼻咽癌组织及22例正常鼻咽组织,基因芯片筛选鼻咽癌细胞中差异表达的miRNA谱;实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测miR-24的表达,分析miR-24的表达水平与临床分期的关系及对疗效的影响.构建鼻咽癌细胞CNE1稳转株及鼻咽癌细胞CNE1 miR-24裸鼠模型,MTT实验和克隆形成实验检测实验组(miR 24组)与空白对照组(miR-NC组)鼻咽癌细胞增殖率及不同照射剂量处理后的生存率;单剂量12 Gy/f/d局部照射鼻咽癌裸鼠移植瘤后,比较两组裸鼠的肿瘤体积.结果:基因芯片结果显示miR-24表达下调为明显;miR24在鼻咽癌细胞CNE1低于正常鼻咽上皮细胞NP69(P＜0.01);miR-24在T分期、N分期及临床分期的早期表达较高(P＜0.01);低表达miR-24的鼻咽癌患者治疗无效率明显高于高表达患者(P＜0.05);体外实验结果显示,与miR-NC组比较,miR-24组细胞增殖率及生存率明显降低(P＜0.01或P＜0.05);体内实验表明,与miR-NC组比较,照射后miR-24组移植瘤体积明显减小(P＜0.001).结论:过表达miR 24能够抑制鼻咽癌细胞的增殖,增加鼻咽癌细胞的放射敏感性,且高表达miR-24的鼻咽癌患者治疗效果较好.
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Effects of miR-24on the expression of vascular endothelial nitric oxide synthase and nitric oxide level in rats
Objective:To investigate the effects of miR-24 on the expression of vascular endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and plasma nitric oxide (NO) level in rats.Methods:The miR-24 over-expression plasmid was constructed.Twenty healthy male Sprague-Dawley rats were randomly divided into two groups:miR-24 group and blank plasmid group.Rats were injected with plasmid DNA in saline via the tail vein.After eight weeks,the rat artery was removed and HE staining was used to observe the morphological changes.The protein expression and activity of eNOS were detected by immunohistochemistry and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA),respectively,and the NO level in plasma was determined by nitrate reduction assay.Results:Compared with the blank plasmid group,the expression and activity of eNOS as well as the NO production in the miR-24 group was significantly decreased (P ＜ 0.05 or P ＜ 0.01).No significant difference in the morphology of vascular tissue was noted between the two groups.Conclusion:Up-regulation of miR-24 inhibits the expression of eNOS and NO production in rat vascular tissue.It may provide a bio-target for the development of drugs to treat cardiovascular diseases such as hypertension.
