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紫外线B照射对小鼠免疫功能影响的研究
目的探讨紫外线B(UVB)照射对小鼠免疫功能的抑制效应和程度.方法UVB照射后小鼠脾细胞对丝裂原反应,混合淋巴细胞培养,溶血空斑形成细胞及脾细胞的白细胞介素-2(IL-2)产生等非特异免疫功能指标的测定.结果发现UVB照射小鼠可抑制小鼠脾细胞对ConA、LPS刺激的反应.在20kJ/m2时,分别为36.6%和41.0%.对异型淋巴细胞混合培养的反应也是有明显抑制效应(抑制率为41.0%),并在约两周恢复正常,对溶血空斑形成细胞(PFC)及脾细胞IL-2的产生亦呈抑制效应(抑制率分别为35.5%和75.0%).结论UVB照射小鼠可使其机体免疫功能下降.
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皮肤光老化动物模型的建立
目的:应用中波紫外线(UVB 290-320nm)照射无毛鼠,观察UVB对无毛鼠皮肤纹理、表皮、及真皮基质的影响,建立皮肤光老化动物模型,为临床防治皮肤光老化打下基础.方法:应用皮肤图像分析系统、皮肤组织学及特殊染色方法,对接受中波紫外线照射20周的无毛鼠进行皮肤纹理、表皮、真皮、基底膜、粘多糖、胶原纤维、弹性纤维进行对比观察.结果:无毛鼠经UVB照射20周、总计量5.9J/cm2,皮肤出现粗糙,皮纹加深、加宽.皮肤增厚,表皮增生、伴有角化过度及角化不全.真皮水肿,纤维母细胞增生,弥漫性单核细胞、肥大细胞、嗜中性白细胞侵润.基底膜不规则增厚.胶原含量减少,染色变浅,胶原纤维明显变性,均质化,形成片、块状,变性的胶原纤维延伸至真皮深层.弹性纤维增多变粗,部分增生的弹性纤维聚集、断裂、缠结.结论:中波紫外线引起的皮肤损害是一个慢性炎症过程.真皮及真皮基质的改变是紫外线引起皮肤光老化的病理基础.中波紫外线照射后的无毛鼠的皮肤所发生的变化与临床皮肤光老化疾病一致,因此该模型是较为理想的研究皮肤光老化的动物模型.
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紫外线B辐射敏感的miR-365在皮肤鳞癌发生中的作用研究
目的 探讨紫外线(UVB)辐射敏感miR-365在皮肤鳞状细胞癌发生中的作用.方法 取对数生长期正常人皮肤角质细胞HaCaT分为对照组和照射组,照射组给予50 J/m2的UVB照射.照射后培养不同时间,分析miRNA的表达谱.实时荧光定量PCR分析HaCaT细胞和皮肤鳞癌细胞系A431、Tca8113和HSC-1的miR-365的表达.平板克隆形成实验和Transwell小室细胞运动实验分别检测细胞的克隆形成能力和体外运动能力.构建miR-365高表达的HaCaT细胞系HaC aTPre-miR-365-2.裸鼠皮下注射HaCaTpre-miR-365-2观察其成瘤能力.结果 UVB照射后,HaCaT差异表达的miRNAs共30个,其中miR-365敏感,且照后6h升高明显,为对照的6.7倍;皮肤鳞癌细胞系A431、Tca8113和HSC-1的miR-365的表达均高于HaCaT细胞(P＜0.05),其中,A431增加多,为(15.67±1.12)倍,Tca8113少,为(4.72 ±0.85)倍;抑制皮肤鳞癌细胞系miR-365的表达可以显著抑制其克隆形成能力(=13.68,P＜0.05)和体外细胞迁移能力(t=19.98,P＜0.05),而提高HaCaT的miR-365的表达则可以显著提高其克隆形成能力(t=7.11,P＜0.05)和体外细胞迁移能力(t=22.03,P＜0.05),且能够在裸鼠皮下成功地成瘤.结论 miR-365是一种皮肤鳞状细胞癌的促癌基因.
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Let-7和miR-24在紫外线B诱导的细胞凋亡中的作用
目的 研究let-7和miR-24在紫外线B(UVB)诱导的细胞凋亡中的可能作用.方法 NIH3T3细胞受50 J/m2 UVB照射后,用Hoechest 33342/PI染色观察其凋亡情况;RT-PCR检测let-7和miR-24的表达水平.利用在线数据库PicTar等预测它们的靶基因,并用GOstat软件对这些靶基因进行功能分类.结果 荧光显微镜下,NIH3T3细胞经UVB照射后可见典型的凋亡和坏死细胞;let-7和miR-24在UVB照射组的表达水平较对照组明显增加.用GOstat进行功能分类后发现,casp3、bcl212、map3kl和cdk5等基因同时也是UVB诱导的细胞周期调节的靶基因.结论 let-7和miR-24可能参与UVB诱导的细胞凋亡.
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人皮肤成纤维细胞在紫外线B照射后的TGF-β和HSP70表达
目的和方法:采用人体皮肤成纤维细胞,观察了紫外线照射后细胞TGF-β表达与HSP70表达水平的相关性.结果:①经不同剂量的紫外线B照射后,GF-βmRNA表达与HSP70表达水平呈正相关(r=0.906);②应用抗TGF-βⅡ型受体抗体后,在紫外线B照射后细胞培养上清液中的TGF-β含量与细胞HSP70表达水平呈负相关(r=-0.995).结论:在紫外线B照射诱导人皮肤成纤维细胞表达HSP70的反应过程中TGF-β参与其信号转导.
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胱天蛋白酶-8在UVB诱导人皮肤成纤维细胞凋亡中的作用
目的:确定胱天蛋白酶- 8(caspase-8)在UVB诱导皮肤成纤维细胞凋亡中的作用.方法:人皮肤成纤维细胞经100、200、300和400 mJ/cn2 UVB照射后48h,用MTT法检测细胞活性变化,用Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡,并用抑制剂Z- IETD- FMK抑制caspase -8活性后,检测凋亡细胞数量.结果:UVB照射明显抑制成纤维细胞活性,引起细胞凋亡,随着照射NB剂量的增加,凋亡细胞逐渐增多.Caspase-8抑制剂Z- IETD- FMK抑制UVB照射引起的细胞凋亡.结论:caspase-8在UVB照射导致的UVB急性光损伤中发挥重要作用.
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UVB对皮肤成纤维细胞相关骨架蛋白表达的影响
目的:确定UVB对皮肤成纤维细胞骨架蛋白的影响.方法:用150 mJ/cm2的UVB照射培养的皮肤成纤维细胞,用MTT法检测细胞活性,用Western blot法检测α-微管蛋白、β-微管蛋白、β-肌动蛋白和波形蛋白的含量.结果:150 mJ/cm2 UVB照射后β-微管蛋白含量逐渐降低,波形蛋白逐渐升高,α-微管蛋白和β-肌动蛋白改变不明显.结论:在UVB诱导人皮肤成纤维细胞光损伤过程中,β-微管蛋白和波形蛋白可能发挥着重要作用.
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Caspase-3在UVB诱导人皮肤成纤维细胞凋亡中的作用
目的:评价caspase-3在UVB诱导皮肤成纤维细胞凋亡中的作用.方法:皮肤成纤维细胞经150 mJ/cm2 UVB照射后,用MTT法检测细胞活性,用Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡,用抑制剂Z-DEVD-FMK抑制caspase-3活性后,检测凋亡细胞数量.结果:UVB明显抑制成纤维细胞的活性,并导致细胞凋亡,并呈时间-效应关系;加入抑制剂Z-DEVD-FMK抑制了UVB导致的细胞凋亡.结论:Caspase-3在UVB照射诱导皮肤成纤维细胞凋亡中发挥重要作用.
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扇贝多肽对UVB辐射小鼠胸腺淋巴细胞PI3K/Akt和ASK1-JNK信号通路的影响
目的 研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)对紫外线B(UVB)辐射损伤小鼠胸腺淋巴细胞后P13K/Akt和ASK1-JNK信号通路的影响.方法 UVB辐射小鼠胸腺淋巴细胞,用比色法测定胸腺淋巴细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;western-blot检测Akt的活性,预先加入或不加入P13K/Akt通路特异性抑制剂LY294002检测细胞凋亡信号调节激酶Ⅰ(apoptosis signal regulating kinase-1,ASK1)、JNK的活性、线粒体膜电位(ACM)和DNA ladder.结果 PCF能激活AKT的活性,抑制UVB对小鼠胸腺淋巴细胞ASK1凋亡通路的活化.结论 PCF通过降低细胞内活性氧的含量,提高AKT的活性,引起ASK1的降解,导致ASK1-JNK诱导的细胞凋亡抑制.
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氧化锌抑制紫外线B诱导的人晶状体上皮细胞Ca2+-ATP酶1表达
目的 研究纳米材料氧化锌在有/无紫外线B(ultraviolet B,UVB)照射下对人晶状体上皮细胞系B-3(human lens epithelial cell B-3,HLEB-3)细胞质膜Ca2+-ATP酶1(plasma membrane calcium ATPase1,PMCA1)表达的影响.方法 HLEB-3细胞进行培养和传代,在有/无UVB照射情况下,加入不同浓度的氧化锌,利用DAPI染色细胞核;Annexin V/PI染色检测细胞凋亡;Fluo-3/AM染色检测细胞内Ca2浓度的变化;实时荧光定量PCR检测PMCA1 mRNA表达水平;Western blot方法检测PMCA1蛋白表达水平.结果 DAPI细胞核染色结果显示,氧化锌以浓度依赖方式使HLEB-3细胞产生典型的细胞凋亡反应;UVB照射可增加氧化锌对HLEB-3细胞的毒性效应;在UVB照射下,经氧化锌(2.5 μg· mL-1、5.0 μg·mL-1、10.0 μg· mL-1)处理的HLEB-3细胞凋亡及细胞内Ca2浓度增加(均为P＜0.05),细胞内Ca2水平分别从(156.34±4.59) nmol·L-增加到(173.88±7.17)nmol· L-1、(289.02±9.09)nmol·L-1、(488.36±48.16) nmol·L-,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);在无UVB照射下,2.5 μg· mL-1、5.0 μg· mL-1、10.0μg·mL-1氧化锌组细胞PMCA1 mRNA表达分别是0μg·mL-1氧化锌组的0.75倍、0.57倍和0.41倍,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05);而在有UVB照射下,各浓度氧化锌组细胞PMCA1 mRNA表达分别是0μg·mL-1氧化锌组的0.64倍、0.24倍和0.09倍,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 氧化锌和UVB照射通过Ca2信号转导通路对HLEB-3细胞有协同抑制作用,提示氧化锌在有UVB照射的情况下对后发性白内障的治疗有巨大潜在作用.
关键词： 氧化锌 紫外线B 钙稳态 细胞质膜Ca2-ATP酶1 人晶状体上皮细胞 -
紫外线B照射对人晶状体上皮细胞质膜钙ATP酶3表达的影响
背景 细胞质膜钙ATP酶3(PMCA3)参与维持晶状体上皮细胞(LECs) Ca2+的平衡,可能与白内障的病理过程有关,紫外线B(UVB)是引起白内障的重要因素之一,但UVB对LECs中PMCA3表达的影响少有报道. 目的 研究UVB对人LECs系B-3(HLE B-3) PMCA3表达的影响. 方法 对HLE B-3细胞进行培养和传代,当细胞达80％以上融合时分别暴露于用不同剂量(0、5、10、20 mJ·s/cm2)的UVB分别照射0、20、40和80 s,然后继续培养24、48和72 h,用MTT法检测不同剂量UVB照射后细胞的生存率;用JC-1染色法检测UVB照射后细胞线粒体膜电位(△ψm)的变化;以DCFH-DA染色法检测UVB照射后细胞内活性氧簇(ROS)的变化;采用annexin V-FITC/PI染色法检测UVB照射后细胞的凋亡情况;用Fluo-3/AM染色法检测细胞内Ca2+浓度的变化;分别采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)法和Western blot法检测UVB照射后细胞中PMCA3 mRNA及PMCA蛋白的表达变化. 结果 随着UVB照射剂量的增加和照射时间的延长,细胞生存率均明显下降,差异均有统计学意义(F分组=72.411,P=0.000; F时间=36.588,P=0.000),其中10 mJ·s/cm2、20 mJ·s/cm2 UVB照射后24 h HLE B-3细胞的生存率分别为(75.3±2.2)％和(48.7±4.5)％,明显低于对照组的(100.0±0.0)％,差异均有统计学意义(P=0.001、0.000);5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射后48 h细胞的生存率分别为(84.9±1.2)％、(69.3±17.4)％和(32.8±4.5)％,均明显低于对照组的(100.0±0.0)％,差异均有统计学意义(P=0.047、0.000、0.000);5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射后72 h细胞的生存率分别为(55.1±3.0)％、(42.1±1.9)％和(26.1±4.7)％,与对照组的(100.0±0.0)％相比生存率明显降低,差异均有统计学意义(均P=0.000).JC-1染色法检测表明,对照组细胞内可见红色荧光,5mJ·s/cm2 UVB照射后细胞内出现绿色荧光,10 mJ·s/cm2及20 mJ·s/cm2 UVB照射组出现绿色荧光增强,红色荧光减弱.5、10、20 mJ· s/cm2 UVB照射后细胞内的ROS由0.4％分别增加至35.8％、51.9％和76.7％.0 mJ·s/cm2 UVB照射组凋亡和坏死细胞比例为2.0％,5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射组凋亡和坏死细胞率分别为4.2％、7.6％和15.1％.10 mJ·s/cm2和20 mJ·s/cm2 UVB照射组细胞内Ca2+水平分别为0 mJ·s/cm2照射组的(1.2±0.1)倍和(1.3±0.1)倍,差异均有统计学意义(P=0.039、0.004).5、10和20 mJ·s/cm2 UVB照射组HLE B-3细胞PMCA3 mRNA表达量均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P=0.001、0.004、0.000),各组细胞中的PMCA蛋白相对表达量也均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P=0.000、0.000、0.001). 结论 UVB照射可导致白内障发生的机制可能与人LECs中PMCA3表达量下降和诱导LECs凋亡有关,UVB的作用呈剂量和时间依赖性.
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经玻璃紫外线照射对大鼠25-羟维生素D水平及骨代谢的影响
目的 目前研究发现B型紫外线照射与血清25-羟维生素D[25-hydroxy vitamin D,25-(OH)D]水平有剂量-效应关系,并且维生素D与骨代谢相关.该研究探讨经玻璃紫外线照射对大鼠25-(OH)D及骨代谢的影响.方法 选用30只Wistar大鼠建立不同紫外线暴露方式的动物模型,饲以缺乏维生素D饮料,随机分为避光组,紫外线直接照射160 min组,简称直射组,紫外线经单层玻璃照射160 min组,简称经玻组.每组各10例.21 d实验结束时,测定各组大鼠血清25-(OH)D、甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)、骨碱性磷酸酶(bone alka-line phosphatase,BALP)、骨钙素(osteocalcin, OC)和骨Ⅰ型胶原羧皋末端肽(carboxyterminal cross-linked telopeptideof type Ⅰ collagen,ICTP)的浓度及骨密度(bone mieral density, BMD).结果 经玻组骨密度(BMD)为0.036±0.002 g/cm2,显著高于避光组(P<0.01);ICTP浓度0.181±0.067 μg/L,显著低于避光组(P<0.01);PTH、25-(OH)D、BALP及OC浓度分别为3.72±0.38 pg/mL、28.67±1.35 nmol/L、25.03±4.65 μg/mL和0.559±0.067ng/mL,与避光组差异无显著性(P0.05).经玻组BALP和ICTP水平及BMD与直射组差异无显著性(P0.05);OC和PTH浓度显著高于直射组(P<0.05);25-(OH)D水平显著低于直射组(P<0.01).结论 经单层玻璃的紫外线照射不能显著提高血浆25-(OH)D水平,但可降低维生素D缺乏造成的骨转化率升高并提高骨密度,与直接紫外线照射达到相似效果.
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人参皂苷对皮肤细胞紫外线的辐射损伤的保护作用
目的 检测人参皂苷对小鼠皮肤细胞和JB6 C141细胞株的抗紫外线B的损伤作用. 方法 通过对细胞照射后存活率的检测、单细胞电泳和软克隆集落形成实验,评估人参皂苷对细胞的照射后DNA修复抗损伤能力,以及人参皂苷对EGF诱导的皮肤细胞恶性转化能力的抑制作用. 结果人参皂苷能有效地对紫外线B造成的细胞致死性损起抑制作用(p＜0.05),并且对EGF诱导的皮肤细胞转化作用也有明显的抑制作用(p＜0.05). 结论人参皂苷对皮肤细胞抗紫外线辐射损伤的保护作用明显,能显著提高细胞存活率.
