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M2型丙酮酸激酶对肺癌合并胸腔积液的诊断价值
目的 分析和观察M2型丙酮酸激酶(M2-PK)在肺癌合并胸腔积液当中的诊断价值.方法 选取某院2013年5月-2014年8月收治的58例肺癌合并胸腔积液患者为观察对象,并将患者按照肺癌合并胸腔积液及良性胸腔积液进行分组,即A、B两组,患者分别为28例和30例;针对两组患者使用夹心ELISA法测定,记录患者M2-PK、CEA的数值,对比数值差异.结果 A组患者的M2-PK水平为(20.3±7.7)U/ml,CEA水平为(15.5±6.2)ug/L;B组患者的M2-PK水平(10.2±5.4)U/ml,CEA水平为(2.9±1.5)ug/L;I-II期患者6例,M2-PK阳性2例,CEA阳性1例;III-IV期患者24例,M2-PK阳性16例,CEA阳性13例;M2-PK诊断肺癌的灵敏度为82.14％,CEA诊断肺癌的灵敏度为71.42％.结果对比,差异存在统计学意义.结论 M2-PK在肺癌合并胸腔积液的诊断中的灵敏度、特异度高于CEA,可为临床早期发现及诊断提供有效依据.
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PKM2是TCRγδ的配体吗?
目的 检验M2型丙酮酸激酶(PKM2)是否是肿瘤细胞表面TCRγδ识别的配体.方法 用Western blot的方法验证OT3肽(合成的TCRγδ中δ链的CDR3区肽)与PKM2结合,用Western blot及免疫组化法观察PKM2在肿瘤细胞及组织中的表达,用流式细胞术及激光扫描共聚焦显微镜术验证PKM2在肿瘤细胞的定位,用固相化PKM2体外扩增γδT细胞和PKM2刺激γδT细胞分泌IFN-γ的实验检验PKM2的功能.结果 (1)PKM2可与OT3肽结合,肿瘤细胞总蛋白提取物中含有大量PKM2,提示以OT3为探针,从肿瘤细胞总蛋白提取物中钓取到PKM2是合理的,用此方法筛选OT3结合蛋白的方法是可行的;(2)PKM2普遍表达于肿瘤细胞及组织,但不表达于肿瘤细胞膜;(3)PKM2在体外不能扩增γδT细胞,无刺激γδT细胞产生IFN-γ的功能.结论 PKM2不表达于肿瘤细胞表面,对γδT细胞不具有刺激活化的功能,PKM2不具备TCRγδ的配体特性.
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M2型丙酮酸激酶在肿瘤代谢和发展中的作用
肿瘤细胞不同于正常细胞,即使在氧气充足的条件下,主要依赖糖酵解代谢,称为有氧糖酵解.丙酮酸激酶(PK)是糖酵解后一个限速酶,催化磷酸烯醇式丙酮酸产生丙酮酸和ATP.M2型丙酮酸激酶(PKM2),丙酮酸激酶同工酶之一,在肿瘤细胞中高表达.PKM2不仅在肿瘤代谢中,而且在基因表达的调控及细胞增殖中都具有重要作用.
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Pkm2-shRNA真核表达载体的构建和对急性早幼粒细胞白血病耐药细胞株的作用研究
本研究旨在构建M2型丙酮酸激酶(M2-pyruvate kinase;PKM2)的小发夹结构BNA(shRNA)的真核表达载体,研究特异性沉默pkm2基因对急性早幼粒细胞白血病(APL)耐药性的影响.设计pkm2基因的3个特异shRNA序列,利用基因重组技术将其克隆到含有U6启动予的PBSU6载体上,通过酶切和测序等方法鉴定重组质粒的正确性.利用Western blot方法检测了pkm2-shRNA对急性早幼粒细胞白血病耐药细胞株NB4R2细胞内源性M2-PK蛋白表达的影响,通过NBT还原实验检测了pkm2基因沉默后NB4R2细胞分化情况.结果表明:成功构建了3个有效特异的pkm2-shRNA,在蛋白水平上证明了其对NB4R2细胞M2-PK基因沉默的有效性.发现干涉M2-PK基因后,可显著地促进耐药细胞NB4R2细胞的分化.结论:DNA载体途径的pkm2-shRNA能促进早幼粒细胞白血病细胞的分化,具有基因靶向药物开发前景.
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粪便标志物在炎症性肠病中的应用进展
炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,uC)和克罗恩病(Crohn's disease,CD),目前主要依靠内镜检查联合病理活检进行诊断及评价炎症活动性.粪便标志物具有非侵入性、简便、快捷、短期内可重复检测等优点,在判断炎症活动程度、监测病情变化、鉴别器质性与功能性疾病、评估治疗效果等方面都有作用.本文对粪便钙卫蛋白、乳铁蛋白、M2型丙酮酸激酶、S100A12、髓过氧化物酶等多种IBD粪便标志物作一综述.
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PKM2基因沉默对人肺癌细胞生物学特性的影响
目的 探讨M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)下调对人肺癌A549细胞生物学特性的影响.方法 采用免疫荧光技术检测A549细胞中PKM2蛋白的表达;将构建有PKM2-shRNA的重组质粒转入A549细胞;分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测PKM2 mRNA和蛋白表达水平;CCK-8法检测PKM2基因沉默对A549细胞增殖能力的影响;采用葡萄糖测定试剂盒测定细胞对葡萄糖的消耗量;Transwell实验检测细胞穿过人工基膜的能力.结果 肺癌A549细胞的细胞质及细胞核中均有PKM2表达;PKM2-shRNA质粒转染A549细胞48h后,可明显下调A549细胞中PKM2 mRNA及蛋白的表达水平,并且明显抑制A549细胞增殖;PKM2 shRNA可减少A549细胞葡萄糖的消耗,还可抑制细胞侵袭能力.结论 在肺癌细胞A549中,抑制PKM2表达可显著抑制细胞增殖、侵袭和糖代谢能力.
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血浆M2-PK与血清CEA、ADAM8联合检测诊断非小细胞肺癌的临床价值研究
目的 研究血浆M2型丙酮酸激酶(M2-PK)、血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)和血清解整合素样-金属蛋白酶8(ADAM8)检测在诊断非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的应用价值.方法 随机选择2014年4月～ 2016年8月期间笔者医院收治的75例NSCLC患者作为研究组,另外随机选择75例笔者医院健康的体检者作为对照组.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测所有研究对象患者的血清ADAM8和M2-PK水平,使用电化学发光法(ECLIA)检测所有研究对象的血清CEA水平.并使用ROC曲线分析比较M2-PK、CEA和ADAM8单独和联合检测诊断NSCLC的临床价值.结果 研究组患者M2-PK、CEA和ADAM8水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).腺癌组患者M2-PK、CEA水平明显高于鳞癌组患者,Ⅲ～Ⅳ期患者的M2-PK、CEA和ADAM8水平均明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P＜0.05).M2-PK、CEA、ADAM8联合检测诊断NSCLC的AUC(0.924)明显高于M2-PK、CEA、ADAM8单独检测(0.731、0.858、0.790),差异有统计学意义(P＜0.05).M2-PK、CEA和ADAM8联合检测NSCLC的敏感度和特异性均明显高于M2-PK、CEA和ADAM8单独检测组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 M2-PK、CEA、ADAM8检测诊断NSCLC具有一定的临床应用价值,且M2-PK、CEA、ADAM8联合检测诊断价值优于单独检测,值得临床推广使用.
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M2型丙酮酸激酶在肿瘤形成中的作用
丙酮酸激酶有4种同工酶,其中活性强的M2型丙酮酸激酶(PKM2)是糖酵解途径中的限速酶,它在催化磷酸烯醇式丙酮酸生成丙酮酸中起关键作用.PKM2可根据肿瘤细胞代谢的需要在低活性二聚体和高活性四聚体之间进行动态转换,从而在肿瘤代谢和增殖中起重要作用.目前,关于PKM2的调控机制尚不清楚.但通过探讨PKM2在蛋白质相互作用、微RNA、信号分子等方面对肿瘤代谢的影响,阐述PKM2和肿瘤信号通路之间的联系,挖掘PKM2作为临床肿瘤诊断和治疗靶点的潜力,可为临床恶性肿瘤的早期诊断和治疗提供新思路.
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ATF4过表达对HepG2细胞凋亡的影响及其机制
目的 观察转录激活因子4(ATF4)过表达对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法 构建ATF4表达质粒,采用脂质体瞬时转染HepG2细胞.实验分为空白对照组、空质粒组和ATF4质粒组.采用流式细胞术检测细胞凋亡率,检测HepG2细胞培养液中乳酸含量,Western blot检测Warburg效应蛋白M2型丙酮酸激酶(PKM2)的表达.结果 与空质粒组比较,ATF4质粒组HepG2细胞凋亡率显著增加,细胞培养液中乳酸含量显著降低,HepG2细胞中PKM2蛋白的表达显著下调(均P＜0.05).结论 过表达ATF4促进HepG2细胞的凋亡,其机制可能与抑制Warburg效应有关.
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缺氧诱导因子-1α和M2型丙酮酸激酶在胆管癌细胞中的表达及对糖酵解的影响
目的 分析缺氧诱导因子-1α和M2型丙酮酸激酶在胆管癌细胞中的表达情况及其对糖酵解的影响.方法 分别以不同浓度的氯化钴溶液诱导的缺氧条件下培养胆管癌QBC939细胞,测定并比较培养24h后各组细胞HIF-1α、PK-M2蛋白表达水平和乳酸分泌量.结果 缺氧组的HIF-1α、PK-M2蛋白表达水平均显著高于常氧组,胆管癌QBC939细胞24h乳酸分泌量,随氯化钴浓度逐渐增加,且均显著高于常氧培养时分泌的乳酸量,比较差异具有统计学意义(P<0.05).经Pearson相关分析法分析,PK-M2与HIF-1α呈显著正相关(r=0.436,P=0.002).结论 缺氧诱导因子-1α和M2型丙酮酸激酶在人胆管癌QBC939细胞中的蛋白表达水平显著提高,且均在胆管癌细胞糖酵解水平的升高过程中发挥重要作用.
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PKM2在肿瘤细胞代谢中的调控作用研究进展
M2型丙酮酸激酶(PKM2)是细胞糖酵解通路的关键酶,催化磷酸烯醇丙酮酸转化为丙酮酸并产生三磷酸腺苷(ATP).作为有氧糖酵解途径的一个重要调节因子,PKM2在肿瘤进程中发挥着举足轻重的作用.除了通过糖代谢途径促进肿瘤细胞增殖,PKM2还能够为肿瘤细胞提供中间代谢产物以支持快速分裂细胞所需的生物合成,并避免氧化应激损伤.同时,PKM2能够进入细胞核内,作为共转录因子和蛋白激酶调节基因转录.因此PKM2在氧代谢途径、核内信号转导、蛋白合成、蛋白质相互作用等多种途径行使功能.目前,针对PKM2的干扰肿瘤代谢的治疗方案正在积极地探索过程之中.现就PKM2在调控肿瘤细胞代谢的研究现状作一综述,为肿瘤的临床治疗提供新的思路.
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胃癌BGC-823细胞中HIF-1α、HIF-2α对PKM2的调控作用
目的 研究siRNA特异性沉默人胃癌BGC-823细胞中缺氧诱导因子(HIF-1α、HIF-2α)后PKM2的表达情况,探索HIF-1α、HIF-2α对胃癌细胞内PKM2的调控作用.方法 用Realtime RT-PCR及Western blot法检测转染HIF-1α、HIF-2α及Control siRNA后细胞内PKM2表达情况.结果 RNA干扰技术能有效沉默BGC-823细胞中的HIF-1α、HIF-2α.转染HIF-1α、HIF-2α siRNA后,PKM2在mRNA及蛋白表达水平均下降(P<0.05),其中siRNA抑制HIF-1α后,PKM2下调明显;转染Control siRNA后,PKM2在mRNA及蛋白表达水平均无明显变化(P>0.05).结论 HIF-1α和HIF-2α均参与调控PKM2的表达,其中HIF-1α起主要调控作用,HIF-1α、HIF-2α与PKM2共同促进肿瘤的Warburg效应.
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M2-PK和Cath-D在卵巢交界性浆液性囊腺瘤中的表达及意义
目的:探讨M2型丙酮酸激酶(M2-pyruvate kinase,M2-PK)和组织蛋白酶D(Cathepsin-D,Cath-D)在卵巢浆液性囊腺瘤和交界性浆液性肿瘤组织中的表达情况及临床意义.方法:采用免疫组化S-P法,分别检测40例卵巢浆液性囊腺瘤和38例卵巢交界性浆液性囊腺瘤中M2-PK和Cath-D的表达水平.结果:在卵巢浆液性囊腺瘤、交界性浆液性囊腺瘤组织中,M2-PK的阳性表达率分别为40.00％和76.32％；Cath-D的阳性表达率分别为25.00％和65.79％,两组间阳性表达率均有统计学差异(P＜0.05).M2-PK和Cath-D在交界性卵巢浆液性肿瘤组织中的表达呈正相关(P＜0.05).结论:M2-PK表达升高和Cath-D表达降低在卵巢交界性浆液性囊腺瘤的发生、发展过程中起重要作用,二者可为卵巢交界性肿瘤早期诊断及观察预后提供重要依据.
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探讨M2型丙酮酸激酶和组织蛋白酶D在卵巢浆液性囊腺瘤和交界性浆液性肿瘤组织中的表达情况及意义
目的 探讨卵巢浆液性囊腺瘤和交界性浆液性肿瘤组织中M2型丙酮酸激酶(M2-PK)和组织蛋白酶D(Cath-D)的表达水平,为肿瘤的诊断、治疗及防止复发提供指导性的意见.方法 采用免疫组织化学法(SP)分别对卵巢浆液性囊腺瘤(对照组)和交界性浆液性肿瘤(观察组)组织中M2-PK、Cath-D的表达水平进行检测,对比两组M2-PK、Cath-D表达的阳性率、灵敏度、特异度.结果 M2-PK在对照组和观察组肿瘤组织表达中阳性率分别为38.00％和72.00％,Cath-D在肿瘤组织表达中阳性率分别为24.00％和66.00％,两组间相比差异有统计学意义(P＜0.05);M2-PK蛋白在观察组肿瘤检测中的灵敏度和特异度分别为74.00％和61.54％,Cath-D蛋白分别为66.00％和78.57％.结论 M2-PK和Cath-D蛋白的表达对卵巢交界性浆液性肿瘤早期诊断、治疗及预后有着重要的临床价值.
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M2型丙酮酸激酶与宫颈癌关系的研究进展
M2型丙酮酸激酶是近年来发现的一种器官非特异性肿瘤标记物,在多种恶性肿瘤,尤其是在宫颈癌的发生发展中发挥着重要作用.本文综述了M2型丙酮酸激酶的生物学特征、及其在宫颈癌中的表达情况、致癌机制以及应用前景等.
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端粒酶、M2型丙酮酸激酶、乳酸联合检测鉴别诊断结核性及恶性胸腔积液的价值
目的 探讨端粒酶(TE)、M2型丙酮酸激酶(M2-PK)、乳酸联合检测对结核性及恶性胸腔积液的鉴别诊断价值.方法 收集60例胸腔积液标本,其中30例为结核性胸腔积液(结核性胸腔积液组)标本、30例为恶性胸腔积液(恶性胸腔积液组).分别对2个组胸腔积液标本进行上述相关项目检测.结果 恶性胸腔积液组TE、M2-PK及乳酸水平分别为(2.55±1.72)ng/mL、(29.12±3.71)U/mL、(9.45±3.31)mol/ L,阳性率分别为86.7%、76.7%和66.7%,均明显高于结核性胸腔积液组[(0.58±0.41)ng/mL、(7.78±4.15) U/ mL、(2.25±1.71)mol/L,6.7%、13.3%、16.7%](P<0.05).TE、M2-PK、乳酸联合检测鉴别结核性及恶性胸腔积液的敏感性为90.0%,特异性为96.9%.结论 TE、M2-PK、乳酸联合检测可用于鉴别诊断结核性胸腔积液与恶性胸腔积液.
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siRNA沉默PKM2抑制人胃腺癌SGC-7901细胞增殖能力和糖酵解水平
背景：M2型丙酮酸激酶（ PKM2）在肿瘤组织中呈特异性高表达，与肿瘤的生长和糖酵解水平密切相关，是潜在的治疗靶点。目的：探讨siRNA沉默PKM2对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭以及糖酵解水平的影响。方法：选择未转染SGC-7901细胞、转染空质粒pU6 SGC-7901细胞以及转染PKM2 siRNA的SGC-7901细胞，采用蛋白质印迹法和Real-time PCR检测PKM2 mRNA和蛋白表达；免疫荧光法检测PKM2在细胞内的表达和分布；CCK-8法、流式细胞分析、细胞迁移和细胞侵袭实验检测细胞增殖、凋亡、迁移以及侵袭能力；蛋白质印迹法、分光光度法分别检测葡萄糖转运蛋白-1（Glut-1）、乳酸脱氢酶A（LDHA）蛋白表达以及葡萄糖、乳酸浓度、乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果：与其余两组相比，PKM2 siRNA转染组细胞PKM2 mRNA和蛋白表达明显下降（ P<0.05），胞内表达明显减弱，细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降，细胞凋亡明显增加（ P<0.05），Glut-1、LDHA蛋白表达明显下降（ P<0.05），葡萄糖摄取率、乳酸产量、LDH活性明显减低（P<0.05）。结论：RNA干扰能抑制胃癌SGC-7901细胞PKM2 mRNA和蛋白表达，进而抑制胃癌细胞的增殖能力和糖酵解水平。
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LY294002对人胃腺癌细胞株BGC-823糖酵解水平的影响及其机制探讨
背景:有氧糖酵解是肿瘤细胞的特征性表型之一,靶向糖酵解有望成为一种有效的肿瘤治疗策略.M2型丙酮酸激酶(PKM2)在肿瘤组织中呈高表达,参与肿瘤细胞的有氧糖酵解.缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是调控肿瘤细胞糖酵解相关基因表达的重要转录因子,而PI3K信号在肿瘤细胞中可上调HIF-1α表达.目的:探讨PI3K特异性抑制剂LY294002对人胃腺癌细胞增殖和糖酵解水平的影响及其可能机制.方法:以不同浓度LY294002(10~100 μmol/L)在不同条件下(常氧或缺氧)处理人胃腺癌细胞株BGC-823,CCK-8实验和流式细胞分析检测细胞增殖和细胞凋亡,蛋白质印迹法检测p-Akt、p-mTOR、HIF-1α、PKM2表达,比色法检测反映糖酵解水平的胞内乳酸脱氢酶活性和胞外乳酸浓度.结果:LY294002可呈浓度和时间依赖性地抑制BGC-823细胞增殖,在较高浓度时可诱导细胞早期凋亡.LY294002可呈浓度依赖性地抑制p-Akt、p-mTOR、HIF-1α表达,在较高浓度时可抑制PKM2表达,同时降低糖酵解水平.缺氧诱导可消除LY294002对HIF-1α、PKM2表达和糖酵解水平的抑制作用.结论:LY294002可通过阻断PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制人胃腺癌细胞增殖及其糖酵解水平,而HIF-1α介导了糖酵解的抑制过程.
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PKM2基因沉默对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及侵袭的影响
目的:探讨M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)下调对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及侵袭的影响.方法:采用免疫荧光技术检测MCF-7细胞中PKM2蛋白的表达.通过脂质体法将构建有PKM2-shRNA的重组质粒转入MCF-7细胞;分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测PKM2 mRNA和蛋白的表达水平;CCK-8法、FCM法和Transwell侵袭实验分别检测PKM2基因沉默后对MCF-7细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响;蛋白质印迹法检测对增殖相关蛋白c-myc和cyclin D1以及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.结果:乳腺癌MCF-7细胞的细胞质及细胞核中均有PKM2的表达;PKM2-shRNA质粒转染MCF-7细胞48 h后,可明显下调MCF-7细胞中PKM2 mRNA及蛋白的表达水平(P值均＜0.01),并且明显抑制MCF-7细胞的增殖及侵袭能力,促进其凋亡(P值均＜ 0.05).沉默PKM2基因的表达,可下调c-myc、cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达水平(P值均＜0.05),而上调Bax蛋白的表达(P＜0.05).结论:转染PKM2-shRNA特异性干扰PKM2基因的表达后,能通过下调c-myc和cyclin D1的表达抑制细胞的增殖,通过下调Bcl-2的表达以及上调Bax的表达促进细胞的凋亡.
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肿瘤中M2型丙酮酸激酶的表达、功能及调节
高水平的糖酵解是癌细胞的重要特征之一,而其中一个重要的调节因子即M2型丙酮酸激酶(M2 typeof pyruvate kinase,PKM2).除此之外,PKM2还具有调控基因转录以及细胞周期进展、促进肿瘤形成和侵袭迁移等蛋白激酶活性.同时,PKM2受多种转录因子、癌基因蛋白和中间代谢产物等复杂因素的调控.大量研究表明,PKM2在肿瘤的发生进展过程中起着至关重要的作用,针对PKM2展开相应临床诊断和治疗研究有着良好的应用前景.
