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遗传性非息肉病性大肠癌研究进展
遗传性非息肉病性大肠癌(HNPCC))是一种常染色体显性遗传病,错配修复基因是其致病的遗传学基础,目前已克隆的基因有hMSH2、hMLH1、hPMS1、hPMS2、hMSH6及hMSH3,并检测到它们的突变,该基因的突变导致微卫星不稳定性是肿瘤发生的始动因素,而且,检测错配修复基因和微卫星不稳定性可以遴选HNPPC家族,进行长期的随访可以降低该病的发生率,提高治疗效果.
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结直肠癌发生发展的相关基因
目前,大肠癌的发生发展机制仍未清楚,一般认为是一个涉及多阶段、多步骤、多基因改变的复杂过程,包括癌基因的激活、抑癌基因的失活以及错配修复基因的突变等等.目前发现并证实多种与大肠癌的发生、发展有关的癌基因、抑癌基因.本文结合文献对APC、P53、ras、DCC、微卫星不稳定性和转移相关基因的研究情况作一简述.
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错配修复基因hMLH1、hMSH2及p53在肺癌组织中的表达及意义
目的 探讨人类错配修复基因hMLH1、hMSH2及p53在肺癌组织中的表达及意义.方法 运用免疫组织化学SP法对56例肺癌组织中hMLH1、hMSH2及p53的表达进行检测.结果 56例肺癌组织中hMLH1的阳性表达率为35%,hMSH2阳性表达率为28.6%,分化程度高者阳性率显著高于分化程度低者(P＜0.01),有淋巴结转移者hMLH1及hMSH2阳性率低于无淋巴结转移者(P＜0.05),不同病理组织学类型之间hMLH1及hMSH2表达无显著差别(P＞0.05);56例肺癌组织中,p53阳性率为51.8%,分化程度低者p53阳性率高于分化程度高者(P＜0.05),有淋巴结转移者p53阳性率高于无淋巴结转移者(P＜0.01),不同病理组织学类型之间p53阳性率无差别(P＞0.05);hMLH1及hMSH2阴性表达者的p53阳性率高于hMLH1及hMSH2阳性表达者(P＜0.05).结论 hMLH1及hMSH2基因的缺陷及p53的表达与肺癌的发生发展过程并与分化程度及有否淋巴结转移有关.
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宫颈病变中错配修复基因的表达及意义
目的 本研究探讨错配修复基因hMLH1、hMSH2及hMSH6的表达与宫颈病变的关系、在宫颈肿瘤形成及发展过程中的作用.方法 采用免疫组化SP法检测错配修复基因hMLH1、hMSH2、hMSH6在50例慢性宫颈炎～CINⅠ组,50例CINⅡ～CIN Ⅲ组,50例宫颈癌组中的表达.结果 hMLH1蛋白的缺失表达率在慢性宫颈炎～CINⅠ组、CINⅡ～CINⅢ组、宫颈癌组分别为12％(6/50)、16％(8/50)、42％(21/50),三组之间差异有统计学意义(P＜0.05).慢性宫颈炎～CINⅠ组与CINⅡ～CINⅢ组比较差异无统计学意义(P＞0.05),CINⅡ～CINⅢ组与宫颈癌组比较差异有统计学意义(P＜0.05),慢性宫颈炎～CINⅠ组与宫颈癌组比较差异有统计学意义(P＜0.05).hMLH1蛋白在宫颈癌的缺失表达显著高于癌前病变.hMSH2蛋白的缺失表达率在慢性宫颈炎～CINⅠ组、CINⅡ～CINⅢ组、宫颈癌组分别为4％(2/50)、6％(3/50)、12％(6/50),差异无统计学意义(P＞0.05).hMSH6蛋白的缺失表达率在慢性宫颈炎～CINⅠ组、CINⅡ～Ⅲ组、宫颈癌组分别为2％(1/50)、4％(2/50)、10％(5/50),差异无统计学意义(P＞0.05).在宫颈癌组织中,hMLH1、hMSH2表达存在正相关关系(P＜0.05),hMSH2、hMSH6表达存在正相关关系(P＜0.05),hMLH1、hMSH6表达无明显相关关系(P＞0.05).结论 错配修复基因hMLH1、hMSH2、hMSH6的缺失发生可能在宫颈癌的早期,联合检测三者有助于宫颈癌的早期诊断.
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散发性结直肠癌中hMLH1基因启动子区CpG岛MVPs图谱的绘制与分析
目的 绘制散发性结直肠癌患者hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化可变位点(methylation variable positions, MVPs)图谱,分析MVPs图谱与hMLH1蛋白表达的关系,寻找CpG岛中影响蛋白表达的关键CpG位点.方法 采用重亚硫酸盐测序方法检测患者hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化状态;采用免疫组化方法检测相应蛋白表达水平.结果 CpG岛1(CGI-Ⅰ)甲基化阳性率为20 %(6/30);CpG岛2(CGI-Ⅱ)甲基化阳性率为13.33 %(4/30).hMLH1蛋白表达阳性率为50 %(15/30).经χ2检验,CGI-Ⅰ甲基化与hMLH1蛋白表达缺失存在显著性差异(P＜0.05)、CGI-Ⅱ甲基化与hMLH1蛋白表达缺失无差异(P＞0.05).结论 CGI-Ⅰ甲基化可能导致hMLH1蛋白不表达,其中1～28 CpG位点为导致hMLH1蛋白表达缺失的关键区域.
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大肠腺瘤及其癌变错配修复基因hMLH1和hMSH2表达与细胞增殖的关系
目的探讨错配修复基因hMLH1和hMSH2表达在大肠癌发生中的作用及其与细胞增殖间的关系.方法采用免疫组织化学染色法对63例大肠腺瘤、20例腺瘤癌变和20例大肠癌的hMLH1和hMSH2、PCNA和Ki-67表达进行检测.结果大肠腺瘤、癌变和大肠癌中hMLH1、hMSH2阳性表达率逐渐降低,与正常大肠粘膜相比相差显著(P＜0.01),腺瘤不典型增生分级增加其阳性率亦逐渐降低.腺瘤不典型增生Ⅱ、Ⅲ级、腺瘤癌变和大肠癌中hMSH2-者,其PCNA LI显著低于hMSH2+者(P＜0.05);hMSH2表达缺失的大肠癌,其Ki-67 LI较阳性者显著降低(P＜0.05).3组大肠病变hMLH1阳性与阴性表达组间,其PCNA LI和Ki-67 LI无差异显著性.结论提示错配修复基因突变或功能缺失与大肠癌的发生有关,可能系大肠癌发生过程中的早期事件,并对大肠肿瘤细胞增殖活性有所影响.
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燃煤污染型地方性氟中毒患者血细胞hMLH1与MGMT mRNA表达改变
目的 探讨燃煤污染型地方性氟中毒(简称燃煤型地氟病)对血液中错配修复基因(hMLH1)及O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因(MGMT) mRNA表达水平的影响.方法 在贵州省毕节地区燃煤型地氟病区抽取45例患者,按其氟斑牙和氟骨症严重程度分为轻、中、重度组各15例.在毕节地区非病区抽取15名村民作为对照组.实时荧光定量PCR技术检测各组血样本MGMT、hMLH1 mRNA水平.结果 燃煤型氟中毒轻、中、重度3个组中hMLH1及MGMT mRNA水平与对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05),且随着氟中毒程度的加重,其降低程度更加明显.组间两两比较,随着中毒程度加重,表达水平明显降低(P＜0.05).结论 MGMT与hMLH1 mRNA水平在燃煤型氟中毒所造成的DNA损伤及修复机制中可能有负面作用.
关键词： O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶 错配修复基因 氟中毒 -
中国人家族性结直肠癌错配修复基因大片段变异分析
目的分析中国人家族性结直肠癌错配修复基因大片段变异的特点.方法采用多重连接探针扩增技术,分析32例具有家族史结直肠癌、20例散发性结直肠癌患者错配修复基因MSH2的16个外显子、MLH1的19个外显子及7个其它基因外显子的拷贝数.研究工作包括:(1)双盲法分析阴性和阳性对照样本,完成方法学可靠性检验;(2)分析结直肠癌患者外周血细胞DNA,筛查MSH2和MLH1基因大片段变异.结果多重连接探针扩增技术分析系统稳定检出阳性对照样本的DNA大片段缺失;在3/32(9.4%)具有家族聚集性结直癌患者中检出遗传性MSH2基因DNA大片段缺失.而在20例散发性结直肠癌患者未检出这类突变.结论中国人家族性结直肠癌患者中错配修复基因的大片段变异是频发事件,对此类患者的遗传检测应包含错配修复基因大片段变异的筛查.
关键词： 结直肠癌 错配修复基因 大片段变异 多重连接探针扩增技术 -
中国人遗传性非息肉病性结直肠癌错配修复基因大片段缺失研究
目的了解中国人遗传性非息肉病性结直肠癌(hereditary nonpolyposis colorectal cancer, HNPCC)家系中 MSH2和MLH1基因大片段缺失情况及特点,以进一步完善中国人HNPCC家系遗传检测内容. 方法取14个符合中国人HNPCC诊断标准的HNPCC家系肿瘤先证者外周血DNA,用荧光标记多重PCR 技术结合GeneScan分析系统检测 MSH2和 MLH1基因大片段缺失.结果 14例患者中有1例检测到 MSH2基因第1～ 7外显子缺失,该家系另1例大肠癌患者和3个家系成员有同样的基因片段缺失. 结论中国人HNPCC家系错配修复基因大片段缺失可能以 MSH2比较常见.建议在中国人HNPCC家系遗传检测中常规包含错配修复基因大片段缺失检测.
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定量多重PCR-高效液相色谱分析错配修复基因大片段缺失
目的建立一种以多重PCR-高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)分析为基础的错配修复基因DNA大片段缺失检测技术. 方法设计合成35对引物,分8个多重PCR反应扩增 MSH2 和 MLH1 基因的35个外显子,PCR产物经高效液相色谱半定量分析,确定各外显子拷贝数.(1)双盲法分析阴性和阳性对照样本,完成方法学可靠性检验.(2)分析14例遗传性非息肉性大肠癌患者外周血细胞DNA和13例散发性大肠癌患者癌组织细胞DNA样本,筛查 MSH2 和 MLH1 基因DNA大片段缺失. 结果 (1)稳定检出阳性对照样本的DNA大片段缺失;(2)在筛查样本检出2例新的 MSH2 基因DNA大片段缺失,分别为 MSH2 基因外显子7遗传性缺失和 MSH2 基因外显子1～6体细胞性缺失. 结论多重PCR-HPLC分析系统可以作为突变基因分析系统的一个重要补充,在基因DNA大片段缺失检测中发挥作用.
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SV40T基因转染黑素细胞遗传稳定性研究
目的 探讨SV40T抗原基因转染构建的永生化黑素细胞的遗传稳定性.方法 体外培养黑素细胞,对第20代的永生化黑素细胞进行四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析细胞增殖情况,同时分析染色体核型,流式细胞仪分析细胞周期和DNA倍体;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量分析第20代细胞hMLH1、hMSH2错配修复基因表达,并提取细胞基因组,微卫星位点PCR产物进行变性聚丙烯酰胺电泳分析微卫星不稳定性.结果 经过连续培养的第20代转染的黑素细胞左旋多巴染色阳性,增殖速度较原代培养黑素细胞明显增快,细胞周期S+G2期细胞比例较原代黑素细胞增多,同时未见异常DNA倍体,染色体仍为2倍体,转染细胞的hMLH1、hMSH2错配修复基因表达较正常黑素细胞上调;在1p22(DIS187)、5q14(D5S107)、18q12.2-12.3(D18S34)3个位点未出现微卫星不稳定性(microsatellite instability, MI).结论 SV40T抗原基因转染的黑素细胞体外培养不出现遗传稳定性的异常改变.
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hMLH1、hMSH2、hMSH6在散发性结直肠癌中的表达状态与其临床病理特征的关系
目的 探讨错配修复蛋白hMLH1、hMSH2和hMSH6在散发性结直肠癌(SCRC)中的表达情况及其与SCRC临床病理参数之间的关系.方法 选取空军总医院普通外科和北京大学肿瘤医院结直肠外科2008年3月至2012年3月期间收治的SCRC患者263例,所有病例均经组织学证实且术前均未接受放化疗.采用免疫组织化学SP法检测263例SCRC患者肿瘤组织中hMLH1、hMSH2、hMSH6蛋白表达缺失情况,并分析其表达缺失与患者临床病理参数的关系.结果 263例SCRC患者肿瘤组织中hMLH1蛋白表达缺失率为13.3％(35/263),hMSH2蛋白表达缺失率为12.2％ (32/263),hMSH6蛋白表达缺失率为28.9％(76/263),hMLH1/hMSH2表达共同缺失率为3.4％(9/263),hMLH1/hMSH6表达共同缺失率为10.2％ (27/263),hMSH2/hMSH6表达共同缺失率为6.8％(18/263),hMLH1/hMSH2/hMSH6表达共同缺失率为3.4％ (9/263).hMSH1蛋白表达缺失率在高分化腺癌组织中明显高于中分化腺癌和低分化、黏液腺癌(P＜0.01);hMSH2蛋白表达缺失率在直径＞5 cm的肿瘤组织中明显高于直径≤5 cm的肿瘤组织(P＜0.05);hMSH6蛋白表达缺失率在男性患者中明显高于女性患者(P＜0.01),且在淋巴结转移少的肿瘤组织中明显高于淋巴结转移较多的肿瘤组织(P＜0.01).结论 hMLH1、hMSH2、hMSH6在SCRC中的表达缺失并不少见,且其表达缺失与SCRC患者临床病理参数的关系也明显不同于林奇综合征.因此,hMLH1、hMSH2、hMSH6在SCRC发生、发展中的作用可能也有别于林奇综合征.
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遗传性非息肉病性结直肠癌hMLH1和hMSH2蛋白表达与其临床病理特征及预后的关系
目的 探讨错配修复(MMR)基因hMLH1和hMSH2的蛋白表达与遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)临床病理特征及预后的关系.方法 应用免疫组化方法(Elivision-两步法)检测48例符合修订后的《Bethesda指南》的HNPCC患者中hMLH1和hMSH2蛋白的表达情况,并定义两者同时表达阳性为MMR蛋白表达,分析其表达与HNPCC临床病理特征及预后的关系.结果 hMLH1蛋白的表达缺失率为20.83 (10/48),高于hMSH2蛋白的表达缺失率(8.33％,4/48),P＜0.05；MMR蛋白的表达阳性率为70.83％(34/48).MMR蛋白表达与肿瘤的浸润深度相关(P＜0.05).MMR蛋白表达缺失与表达正常者的总生存率分别为85.71％(12/14)和85.29％ (29/34),两者生存曲线比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 hMLH1蛋白的表达缺失率高于hMSH2蛋白,hMLH1和hMSH2蛋白表达缺失与肿瘤的浸润深度相关,与患者的预后无关.
关键词： 遗传性非息肉病性结直肠癌 错配修复基因 免疫组织化学 -
胃癌基因诊断和治疗的研究进展
目的 回顾胃癌基因诊断和治疗的研究进展.方法 复习相关资料,就近年来胃癌基因诊断和治疗方面的研究进展作一综述.结果 使用基因技术检测肿瘤标志物对胃癌的早期发现、预后监测、疗效判断等都具有较大的临床意义.胃癌的基因治疗还有许多问题需进一步解决.结论 基因检测及治疗将成为胃癌诊治的重要辅助手段.
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口腔鳞癌组织hMSH2外显子突变筛选的初步研究
目的:探讨错配修复基因hMSH2在口腔鳞癌发生发展中的作用.方法:应用PCR-SSCP法检测30例口腔粘膜鳞状细胞癌组织标本中hMSH2外显子5、 6、7、8、9、12的突变情况.结果:在30例口腔鳞癌中,hMSH2六个外显子PCR均扩增到目的DNA片段;SSCP检测未检出hMSH2六个外显子发生突变.结论:口腔鳞癌hMSH2外显子结构改变模式与遗传性肿瘤不同;错配修复基因在口腔鳞癌发生发展中的作用值得探讨.
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CDC6与hMSH2在宫颈癌中的表达及临床意义
降(P<0.05),与组织分级无关(P=0.826);③宫颈癌组织中CDC6及hMSH2表达呈正相关(rs=0.338,P=0.004);19例发生淋巴结转移的宫颈癌中CDC6和hMSH2表达无相关(rs=-0.136,P=0.579).结论 CDC6及hMSH2参与了宫颈癌浸润和转移过程,两者结合有可能作为宫颈癌预后判断的指标.
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慢性氟中毒大鼠血细胞MGMT与hMLH1基因mRNA的表达
目的:研究慢性氟中毒大鼠血细胞中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(MGMT)及错配修复基因(hMLH1) mRNA表达水平.方法:采用饮水加氟法复制20只慢性氟中毒大鼠模型为染氟毒组,另取20只大鼠饮用含氟量＜0.5 mg/L自来水为对照组,两组大鼠饲养6月时,观察大鼠氟斑牙的形成,鉴定染氟是否成功,同时采取股动脉放血处死大鼠,提取大鼠血细胞总RNA,实时荧光定量PCR法检测染氟毒组及对照组大鼠MGMT、hMLH1基因mRNA水平.结果:染氟组20只大鼠全出现氟斑牙,表明染氟成功;氟中毒大鼠血液MG-MT、hMLH1基因mRNA表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MGMT和hMLH1 mRNA水平降低可能是氟中毒引起DNA损伤的机制之一.
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微卫星不稳定性在恶性肿瘤研究中的进展
微卫星不稳定性(microsatell iteinstability,MSI)现在已经被公认为是恶性肿瘤形成的一个新机制,人们越来越关注MSI在恶性肿瘤中的临床应用价值.自1993年[1]在遗传性非息肉样结直肠癌(hereditary non-polyposis colorectal cancer,HNPCC)中发现有较高比例的MSI以来,在许多肿瘤如肺癌、肝癌、食管癌、淋巴瘤、头颈部肿瘤、泌尿系肿瘤、生殖系统肿瘤、儿童胚胎性肿瘤中都报道了存在MSI.MSI已经成为近年来分子生物学研究的热点之一,对MSI的产生机制及其在肿瘤发生发展、早期诊断、个体化治疗、监测预后及复发等方面的研究已经取得了较大的进展.1微卫星不稳定性的简介在20世纪70年代,研究者就已经发现真核生物基因组中存在微卫星(microsatellite,MS)DNA,直到80年代初期,人们对微卫星DNA才有了深入的了解.
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胃癌错配修复基因的研究进展
错配修复基因(Mismatch Repair genes,MMR genes)是细胞内负责对碱基错配进行修复的基因,它们的缺陷导致癌相关基因突变不能及时有效纠正,从而使人体易感肿瘤.
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口腔扁平苔藓癌变机制的研究进展
口腔扁平苔藓(oral lichen planus OLP)是一种口腔黏膜的慢性炎症,此病与口腔癌前病变有关[1].尽管病变机制尚不清楚,随着基因研究的发展和多聚酶链技术的应用.研究显示:错配修复基因(hMSH2)、p63基因、人乳头状瘤病毒(HPV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)等在OLP癌变机制中发挥一定的作用.
