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锌离子对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响及机制
目的:研究锌离子(Zn)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)转分化(EMT)的影响及机制,从而为Zn在腹膜透析(PD)中的应用提供理论基础. 方法:胰蛋白酶消化法原代培养腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组:(1)正常对照组；(2) LPS组:100 μmol/L作用48h；(3) ZnSO4作用组:30 μmol/L ZnSO4作用24h后加100 μmol/L LPS作用48h.应用RT-PCR方法和免疫荧光方法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)基因表达.应用Western Blotting检测核因子κB (NF-κB)、NF-κB抑制蛋白(Ⅰ-κB)、磷酸化的NF-κB (p-NF-κB)、磷酸化的Ⅰ-κB (p-l-κB)蛋白表达；应用流式细胞术,采用活性氧自由基(ROS)检测试剂盒检测各组别的ROS情况. 结果:LPS培养48h后细胞形态开始发生变化,由典型的上皮逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞,而硫酸锌(ZnSO4)作用组细胞表型改变明显减轻.与对照组相比,LPS组RPMC的0-SMA、Collagen Ⅰ基因表达明显升高,而E-cadherin基因表达降低；与LPS组相比,ZnSO4作用组RPMC的α-SMA、Collagen Ⅰ表达明显降低、E-cadherin基因表达增多；LPS组ROS显著高于对照组,ZnSO4作用组ROS显著低于LPS组；与LPS组相比,ZnSO4作用组p-NF-κB、p-I-κB蛋白表达降低. 结论:ZnSO4可逆转LPS所致的RPMC的EMT,对腹膜透析过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制氧化应激反应和NF-κB信号通路转导而发挥作用.
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高糖诱导大鼠血管平滑肌细胞转分化的作用
目的:观察高糖对体外培养的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)功能以及与成骨细胞转分化相关蛋白表达的变化,探讨糖尿病血管病变的可能细胞/分子发病机制. 方法:用组织贴块法建立SD大鼠胸主动脉VSMCs的体外培养技术;高糖(葡萄糖浓度:50 mmol/L)作用该细胞,设相同浓度甘露醇为对照组,观察在不同的培养时间下(3、12h和第3、6、9、12d),采用免疫蛋白印迹法和间接免疫荧光法分别检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和成骨细胞特异性核转录因子(core-binging factor α-1,Cbfα-1/RUNX2)的表达.细胞钙沉积含量测定观察培养细胞钙盐的沉积. 结果:组织贴块法培养的大鼠原代胸主动脉VSMCs呈梭型,α-SMA表达强阳性;高糖作用12h,VSMCs的Cbfα-1表达明显上升;高糖作用9d后,VSMCs的α-SMA表达量较高糖作用前降低近90%;免疫荧光染色显示VSMC细胞呈低强度的α-SMA染色阳性;同时,高糖作用下的VSMCs能够检测到OPN蛋白的表达,与对照组相比差异显著;高糖作用下细胞钙沉积含量明显增加. 结论:持续的高糖作用能够使动脉VSMCs发生向类似成骨样细胞的转分化,提示高糖诱导的VSMCs转分化可能参与糖尿病血管病变的发生发展.
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转化生长因子-β刺激人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子的表达
目的:探讨转化生长因子-β(TGF-β)对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响. 方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术,观察TGF-β1对人近端肾小管上皮细胞 (HK-2)α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和CTGF mRNA及其蛋白质表达的影响,同时观察肾小管上皮细胞形态改变. 结果:HK-2细胞有基础量的CTGF mRNA和蛋白质分子表达,在TGF-β1刺激下,其表达量显著增加,经不同浓度TGF-β1干预24 h后,CTGF mRNA表达量明显升高,且呈剂量依赖性.1 ng/ml TGF-β1刺激时,CTGF mRNA表达量开始显著增加, 5ng/ml时达到高峰,10 ng/ml时略有下降, CTGF mRNA表达量分别为对照组的2.40倍,3.34倍和2.73倍(P<0.05). CTGF mRNA表达量呈时间依赖效应.TGF-β1 (5 ng/ml)干预30 min后,CTGF mRNA表达量开始呈现增加趋势,为对照组的1.48倍(P>0.05),2 h后出现显著差异,为对照组的2.14倍(P<0.05);CTGF mRNA表达量在24 h达到高峰,持续至36 h,分别为对照组的3.19倍和2.75倍(P<0.005);0.5 ng/ml TGF-β1刺激时,CTGF蛋白表达量略有增加,5 ng/ml时达到高峰,10 ng/ml时略有下降.在TGF-β1(5 ng/ml)干预下,HK-2细胞由立方形铺路石样逐渐转变为长梭形长条样,免疫荧光检测见梭形细胞胞浆中有大量α-SMA表达.大部分细胞转分化的时间(72 h)明显晚于CTGF mRNA和蛋白质表达开始增加和达到高峰的时间(30 min和24 h). 结论:未转分化的肾小管上皮细胞可以表达CTGF;TGF-β1 可诱导体外培养的肾小管上皮细胞CTGF高表达.
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转化生长因子-β1对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子表达的影响
目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,同时观察TGF-β1对肾小管上皮细胞合成细胞外基质(ECM)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察TGF-β1诱导人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)合成CTGF、ECM、TIMP-1及α-SMA的情况.结果:在无TGF-β1刺激的情况下,HK-2细胞中有基础量的CTGF mRNA表达,TGF-β1以剂量和时间依赖的方式诱导HK-2细胞合成CTGF mRNA,其表达在24h时达高峰,同时TGF-β1可使HK-2细胞合成ECM、α-SMA增多,但在时相上均晚于CTGF.随着TGF-β1浓度的增加,HK-2细胞合成TIMP-1也随之增加,但较大剂量的TGF-β1(15ng/ml)方可使TIMP-1 mRNA的表达明显增加(P＜0.05).结论:TGF-β1可直接诱导体外培养的人近端肾小管上皮细胞表达CTGF,其表达转录水平要早于ECM、α-SMA的表达,提示CTGF可能介导了TGF-β1的促肾小管上皮细胞ECM合成和转分化的作用.
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他克莫司对转化生长因子-β诱导的肾小管上皮细胞转分化的抑制作用及对核因子-κB活性的影响
目的:探讨他克莫司(FK506)对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用,及其与核因子-κB(NF-κB)活性变化的关系.方法:以人类肾脏近曲小管上皮细胞株(Human kidney cell,HKC)为研究对象,分为以下4组:①阴性对照组;②TGF-β(8 ng/ml)组:③FK506(0.1、1、10、50 ng/ml)组:④TGF-β(8 ng/ml)+FK506(0.1、1、10、50 ng/ml)组.应用形态学、间接免疫荧光法,免疫组化技术和酶联免疫吸附法观察FK506对TGF-β诱导的HKC细胞转分化的作用、细胞培养上清液纤连蛋白、Ⅰ型胶原的变化及FK506对HKC细胞NF-κB活性的影响.结果:FK506(1,10,50 ng/ml)+TGF-β组比TGF-β组诱导的HKC细胞E-钙粘蛋白和细胞角蛋白表达有所增强,波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达比TGF-β组减弱(P＜0.05),同时HKC细胞NF-κB的活性比TGF-β组减弱(P＜0.05),培养上清液纤连蛋白及Ⅰ型胶原的浓度比TGF-β组降低(P＜0.05);FK506(1、10、50 ng/ml)使基础状态下HKC细胞NF-κB的活性明显下降(P＜0.05)和上清液中纤连蛋白及Ⅰ型胶原的水平明显降低(P＜0.05).结论:①FK506剂量依赖性地抑制TGF-β诱导的肾小管上皮细胞转分化和纤连蛋白及Ⅰ型胶原的形成及基础状态下和TGF-β诱导的HKC细胞NF-κB的表达.②FK506抑制TGF-β诱导的HKC细胞转分化很可能与NF-κB的表达下调有关,需要进一步研究.
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结缔组织生长因子对人肾小管上皮细胞株生物学特性的影响
目的:观察重组人结缔组织生长因子(rhCTGF)对人肾小管上皮细胞株(HK-2)的作用.方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞分为三组:对照组、rhCTGF 5.0 ng/ml, rhCTGF 10.0 ng/ml.应用MTT法检测CTGF对HK-2增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态学的变化;间接酶标免疫组织化学方法检测E-钙粘蛋白(E-Cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;流式细胞术检测α-SMA阳性的HK-2细胞百分数.结果:在一定的浓度范围内,CTGF能促进HK-2细胞的增殖, CTGF促使HK-2细胞由椭圆形转变为梭形状,可下调E-Cadherin,上调α-SMA, 流式细胞测得三组细胞阳性百分率依次为1.54%,10.24%,25.8%(P＜0.05).结论:CTGF在体外促进HK-2转分化的同时促进HK-2的生长.
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肾小管上皮细胞间充质转分化分子机制的研究进展
肾间质纤维化是多种肾脏疾病发展到一定阶段常见的病理改变,其严重程度不仅影响肾功能,而且与肾病的预后有着密切联系.肾间质的基质成分由成纤维细胞合成分泌,研究表明,肾间质成纤维细胞主要有3个来源:(1)肾脏固有的间质成纤维细胞;(2)循环而来的间充质细胞;(3)肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial mesenchymal transition,EMT).其中EMT在肾小管间质纤维化中的作用正越来越受到重视,作者对EMT分子机制的研究进展进行综述.
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脂氧素A4拮抗CTGF所致的人肾小管上皮细胞转分化
目的:探讨脂氧素A4(LXA4)对结缔组织生长因子(CTGF)诱导的肾小管上皮细胞HK2转分化的影响.方法:在体外培养的人肾小管上皮细胞(HK2细胞)中,加入CTGF和LXA4刺激48 h后,用倒置显微镜观察细胞形态学变化,应用RT-PCR、Western blot方法测定上皮细胞E钙黏蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA与蛋白的表达.结果:CTGF刺激使HK2细胞形态由椭圆形转为梭形,下调E钙黏蛋白mRNA与蛋白表达,上调α-SMA的mRNA与蛋白表达.LXAc能够抑制CTGF所致的上述变化,E钙黏蛋白mRNA与蛋白的相对表达值分别为0.270±0.082和0.827±0.177,分别高于CTGF刺激组的0.067±0.015(P<0.05)和0.257±0.221(P<0.05);α-SMA的mRNA与蛋白表达的相对表达值分别为0.070±0.046和0.023±0.023,分别低于CTGF刺激组的0.653±0.256(P<0.05)和0.167±0.050(P<0.05).结论:外源性CTGF能导致HK2细胞转分化为肌成纤维细胞.LXA4可抑制CTGF对HK2细胞的转分化,这为治疗肾间质纤维化提供了一条新途径.
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血管紧张素Ⅱ参与肾小管上皮细胞转分化的实验研究
目的:本文通过观察血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)影响肾小管上皮细胞转分化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)的作用,以及和转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)作用的关系,探讨Ang Ⅱ参与肾小管间质纤维化的作用机制.方法:以人肾小管上皮细胞株(human kidney cell)HKC细胞为研究对象,采用蛋白印迹等方法,观察Ang Ⅱ(10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L),及其与TGF-β1共同作用对该细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响.明胶酶谱法检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9(MMP-2和MMP-9)的变化,Boyden小室检测HKC细胞的迁移能力.结果:①单独应用Ang Ⅱ不能够造成HKC细胞E-cadherin表达的变化,也不能诱导α-SMA表达,但是却能上调FN的表达;②与TGF-β1共同作用时能够加强TGF-β1影响E-cadherin,α-SMA和FN表达的作用;③Ang Ⅱ能够增加HKC生成MMP-2和MMP-9;④Ang Ⅱ能够(10-7和10-6 mol/L)增加HKC细胞迁移至Boyden小室膜下侧面的数目.结论:①Ang Ⅱ可以参与EMT过程,但不是导致EMT的关键因素;②Ang Ⅱ能够以协同的方式参与TGF-β1导致的EMT,可能以此方式加重肾小管间质的纤维化.
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内源性结缔组织生长因子介导转化生长因子β1对肾小管上皮细胞的转分化效应
目的:探讨内源性结缔组织生长因子(CTGF)在人肾小管上皮细胞(HK2)转分化过程中的作用.方法:将HK2细胞分为4组:对照组;转化生长因子β1(TGF-β1)5 ng/ml刺激组;TGF-β15 ng/ml刺激+CTGF反义ODN 3 mmol/L干预组;TGF-β15 ng/ml刺激+CTGF正义ODN 3 mmol/L对照组.用倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化,用RT-PCR检测各组细胞中CTGF、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)mRNA表达变化.结果:TGF-β1刺激使HK2细胞形态由椭圆形转为梭形;下调E-cadherin mRNA表达,上调CTGF、α-SMA和FN mRNA表达,且CTGF mRNA表达变化在时间上早于E-cadherin、α-SMA和FN mRNA表达变化;CTGF反义ODN可对抗TGF-β1引起的细胞形态学改变和E-cadherin、CTGF、α-SMA、FN mRNA表达变化效应.结论:内源性CTGF介导了TGF-β1对HK2细胞的转分化效应.
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IGF-Ⅰ对人肾小管上皮细胞转分化相关基因表达的影响
目的:探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)在人肾小管上皮细胞转分化中的作用.方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK2)分为对照组和IGF-Ⅰ组:培养液中加入IGF-Ⅰ,终浓度分别为25、50、100、200 ng/ml.倒置显微镜观察细胞形态变化.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定HK2细胞E-钙黏蛋白、角蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白和纤连蛋白(FN)mRNA水平的变化.结果:IGF-Ⅰ刺激使HK2细胞形态由椭圆变为梭形.不同浓度的IGF-Ⅰ作用于HK2细胞48 h后E-钙黏蛋白和角蛋白mRNA的表达显著下降(P＜0.05),α-SMA、波形蛋白和FN mRNA水平显著升高(P＜0.01),且呈剂量依赖性.结论:IGF-Ⅰ在体外能刺激人肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞(MyoF)转分化,并促进其合成细胞外基质(ECM).
关键词： 胰岛素样生长因子-Ⅰ 肾小管上皮细胞 转分化 -
血管紧张素Ⅱ对高糖诱导NRK-52E细胞转分化作用研究
目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E转分化的干预作用.方法 细胞培养72 h后,Western blot检测对照组(0 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、血管紧张素Ⅱ干预组(10 nmol/L AngⅡ)、高糖血管紧张素Ⅱ干预组(10 nmol/L AngⅡ+25 mmol/L葡萄糖)中转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶2(MMP2)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及甲状旁腺素相关肽(PTHrP)在NRK-52E细胞中的表达.活性氧(ROS)含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测.结果 高浓度葡萄糖上调TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA以及PTHrP表达.AngⅡ明显上调高浓度葡萄糖状态下TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA和PTHrP的表达,并提高ROS含量.结论 AngⅡ可以促进高浓度葡萄糖诱导肾小管导管上皮细胞转分化.
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宽叶缬草在抑制高胆固醇血症大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用
目的探讨宽叶缬草在脂质肾损害肾小管上皮细胞转分化中的作用.方法用含4%胆固醇和1%胆酸钠的高脂饲料饲喂大鼠建立高脂模型,观察宽叶缬草对大鼠血脂、尿蛋白和肌酐清除率的影响,以及对肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白、角蛋白表达的影响.结果宽叶缬草有降低总胆固醇、低密度脂蛋白和尿蛋白的作用(P<0.01),免疫组织化学法证实宽叶缬草在降脂和降尿蛋白的同时能降低肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白的表达(P<0.01),抑制肾小管上皮细胞转分化.结论宽叶缬草在脂质肾损害中的肾保护作用可能与在降脂基础上对肾小管上皮细胞表型转化的抑制有关.
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磷脂酰肌醇3激酶/Akt通路参与TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞间质转分化过程
目的:探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt通路在转化生长因子β1(TGF-β1)体外诱导的人肾小管上皮细胞(HKC)间质转分化(EMT)过程中的作用及意义.方法:将HKC细胞株细胞分成正常对照组、TGF-β1组及TGF-β1+PI3K特异性抑制剂Wortmannin组,选取不同时相,免疫印迹(Western blot)测定总Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的变化;Akt磷酸化水平用磷酸化Akt和总Akt水平的比值表示.结果:正常体外培养的HKC有微量的p-Akt、α-SMA表达,加入10 ng/ml TGF-β1刺激0.5 h后p-Akt水平显著升高,1 h升至顶峰后逐渐减弱;α-SMA在10 ng/ml TGF-β1诱导48 h后表达显著升高.同时加用Wortmannin 10 nmol/L组p-Akt、α-SMA表达明显抑制.结论:PI3K/Akt信号系统参与TGF-β1介导的EMT过程,PI3K特异性抑制剂Wortmannin可有效抑制TGF-β1介导的HKC的EMT过程.
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红细胞生成素对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响及其可能机制
目的：肾间质纤维化（ renal interstital fibrosia ， RIF）的核心是肾小管上皮细胞转分化。探讨促红细胞生成素（Erythropoietin， EPO）对高糖诱导的正常人肾小管上皮细胞（human kidney cells， HK-2）转分化的影响及其可能机制。方法体外培养HK-2细胞，按随机数字表法分为空白对照组、高糖诱导组（高糖终浓度30 mmol/L）、甘露醇对照组（甘露醇浓度24．5 mmol/L）、EPO对照组（ EPO终浓度为20 U/mL）、5 U/mL EPO干预组、10 U/mL EPO干预组、20 U/mL EPO干预组及ROCK抑制剂（ Y27632）组（ Y27632终浓度为30μmol/L，加入Y2763230 min后加高糖，高糖终浓度为30 mmol/L），各组均刺激24 h。应用RT-PCR法检测细胞 RhoA mRNA、ROCK1 mRNA 的水平；细胞免疫荧光法检测细胞 E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白（αsmoothmuscleactin，α-SMA）的表达；ELISA法检测上清液纤维连接蛋白（fibronectin， FN）的表达。结果 RT-PCR结果显示高糖诱导组RhoA mRNA及ROCK1 mRNA表达较空白对照组显著升高（1．400±0．022 vs 0．945±0．132，1．913±0．011 vs 1．007±0．002，P＜0．05）；5、10、20 U/mL EPO干预组，RhoA mRNA的表达水平（0．278±0．006、0．770±0．005、0．334±0．009）均较空白对照组（0．945±0．131）减少（P＜0．05），ROCK1 mRNA的表达水平（1．418±0．006、0．919±0．004、0．477±0．002）较空白对照组（51．007±0．002）减少（P＜0．05）；ELISA及细胞免疫荧光结果显示高糖诱导组FN、α-SMA蛋白的表达较空白对照组明显增加[（14545．53±317．27）ng/mL vs （2582．50±87．20）ng/mL，0．335±0．006 vs 0．224±0．006，P＜0．05]；直线相关性分析，高糖诱导组，5、10、20 U/mL EPO干预组RhoA mRNA与ROCK1 mRNA表达均呈正相关（P＜0．05）。高糖诱导组α-SMA较空白对照组上升，E-钙黏蛋白较空白对照组下降（P＜0．05）；EPO干预组及ROCK抑制剂组E-钙黏蛋白表达较高糖诱导组增加，而α-SMA表达下降（P＜0．05）；ELISA结果显示，EPO干预组ROCK抑制剂组FN表达较高糖诱导组下降（P＜0．05），且下降程度与EPO浓度相关。结论 EPO可抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化，从而延缓肾间质纤维化，其机制可能与RhoA/ROCK信号通路有关。
关键词： 红细胞生成素 高糖 转分化 RhoA/ROCK信号通路 -
复方积雪草对UUO小鼠肾组织细胞转分化与肾纤维化的影响
[目的]研究复方积雪草对单侧输尿管梗阻后小鼠肾纤维化的防治作用.[方法]40只清洁级昆明种小鼠随机分为假手术组(A组)、单侧输尿管结扎组(B组)、复方积雪草治疗组(C组)、蒙诺对照组(D组).于术后21天股动脉取血,检测血清肌酐、血白蛋白;留取梗阻侧肾脏制备病理切片,HE染色观察肾间质炎细胞浸润情况,Masson染色观察肾间质纤维化程度,并用RTPCR技术检测肾组织α-SMA、Vimentin mRNA表达.[结果]术后21d四组小鼠血清肌酐无显著性差异;与A组相比,B组肾组织α-SMA、Vimentin mRNA表达增强;肾纤维化面积及程度加重;与B组相比,C组与D组α-SMA、Vimentin mRNA表达明显减弱,肾纤维化程度减轻.[结论]复方积雪草能够下调肾组织α-SMA、Vimentin mRNA表达水平,对肾纤维化有一定的防治作用.
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雷公藤内酯醇干预高糖诱导足细胞转分化作用机制的研究
目的 观察不同浓度雷公藤内酯醇(TP)体外干预高糖环境下小鼠足细胞上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)及TGF-β/Smad信号通路的调节作用,探讨其保护足细胞损伤的可能机制.方法 将培养成熟的小鼠足细胞随机分为25mmol/L葡萄糖培养液干预组(高糖组),5mmol/L葡萄糖培养液干预组(对照组)和在25mmol/L葡萄糖培养液中分别加入浓度为8、16、32ng/ml的TP干预组(低、中、高TP组).体外培养48h后,倒置显微镜下观察足细胞形态变化,采用RT-PCR和Western-blot技术分别检测各组足细胞NEPH1、desmin、TGF-β1和Smad7的mRNA和蛋白表达变化.结果 高糖组和高、中、低TP组的小鼠足细胞NEPH1和Smad7 mRNA和蛋白的表达水平均较对照组低,desmin和TGF-β1的mRNA和蛋白的表达水平均较对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05或0.01).高、中、低TP组足细胞NEPH1和Smad7的mRNA和蛋白的表达水平均高于高糖组,desmin和TGF-β1的mRNA和蛋白的表达水平均低于高糖组,差异均有统计学意义(P＜0.05或0.01);中TP组NEPH1和Smad7的mRNA和蛋白的表达水平均高于低TP组和高TP组,desmin和TGF-β1的mRNA和蛋白的表达水平均低于低TP组和高TP组(均P＜0.01).结论 TP可能通过抑制TGF-β/Smad信号通路缓解高糖诱导的足细胞转分化.
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转化生长因子-β1在大鼠腹膜间皮细胞转分化中的作用及机制
目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)在大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)转分化中的作用及机制.方法 体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞,静止24h后,随机分为正常对照组(不加TGF-β1处理)及TGF-β1(10ng/ml)刺激组.采用RT-PCR法及Western blotting检测TGF-β1处理后不同时点NADPH氧化酶亚单位p67phox、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘素(E-cadherin)及Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)mRNA和蛋白的表达情况.结果 TGF-β1刺激RPMCs能导致E-cadherin mRNA和蛋白表达下调,p67phox、α-SMA、CollagenⅠmRNA和蛋白表达上调,呈现一定的时间依赖性.结论 TGF-β1诱导了大鼠腹膜间皮细胞转分化,NADPH氧化酶可能在其转分化过程中发挥重要作用.
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后发障中晶状体上皮细胞转分化机制研究进展
晶状体上皮细胞发生转分化是后发性白内障等囊下白内障的主要病理改变,可引起晶状体囊膜皱缩、混浊,终造成严重的视力下降乃至失明.多种因素在此过程中发挥调控作用,其中转移生长因子β、碱性成纤维细胞生长因子等生长因子的作用为关键,细胞外基质等其它因素也与之密切相关.本文拟对近年来晶状体上皮细胞转分化机制研究做一综述.
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干细胞样U87胶质瘤细胞向内皮细胞转分化及VEGFR2人源化单克隆抗体的干预作用
目的建立干细胞样U87胶质瘤细胞向内皮细胞的转分化模型,初步评价抗VEGFR2人源化单克隆抗体对转分化的影响。方法体外诱导培养获得干细胞样U87胶质瘤
细胞；流式细胞仪检测 CD133+细胞含量；定量 PCR 检测CD133、Nestin以及VEGFR2表达；观察干细胞样U87细胞的致瘤能力、肿瘤生长速度和CD31表达情况；观察干细胞样U87细胞在Matrigel上血管状结构形成和CD31、CD34、vWF表达情况；建立干细胞样U87细胞向内皮细胞的转分化模型,评价抗VEGFR2人源单抗对转分化的抑制作用。结果获得干细胞球样的 U87细胞,其肿瘤生长更快,且血管增多,接种在Matrigel上形成血管状结构,CD31、CD34、vWF表达增加；抗VEGFR2人源单抗使血管状结构和CD31、CD34、vWF表达均减少。结论成功建立干细胞样U8细胞向内皮细胞转分化模型,VEGFR2人源化单抗对转分化有抑制作用。
