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正中神经体感诱发电位对足月缺氧缺血性脑病新生儿运动发育的预测价值
目的：探讨足月新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)正中神经体感诱发电位(MNSEP)的主要特征及其对运动发育结局的预测价值。方法选择2012年6月至2013年6月在湖北省孝感市中心医院生后即转入新生儿科住院治疗,并且出院后在本院小儿神经科门诊完成发育随访的51例 HIE 新生儿为研究对象。分别在其生后第2周及第6周进行 MNSEP 检测并记录结果,并在患儿年龄为6个月时根据 Peabody运动发育量表(2版)(PDMS-2)评价其运动发育结局。计算持续 MNSEP 异常对运动发育落后(DM)的预测效度。本研究遵循的程序符合湖北省孝感市中心医院人体试验委员会所指定的伦理学标准,得到了该委员会批准,并征得研究对象监护人的知情同意,与之签署临床研究知情同意书。结果51例患儿年龄为6个月时的 PDMS-2评估结果示,DM 患儿为21例(41.2%),正常患儿为30例(58.8%)。2次 MNSEP (+)且运动发育结局为 DM 的患儿为18例(35.3%),MNSEP 结果对 DM 的灵敏度为85.7%,特异度为90.0%,阳性预测值为85.7%,阴性预测值为90.0%,其中,表现为单纯持续 N20波对称性缺失或波幅下降>50%患儿为12例(66.7%),单纯持续 N20波潜伏期延长患儿为4例(22.2%),其他形式持续异常患儿为2例(11.1%)。结论MNSEP 对 DM 有较好的预测能力,可以在中至重度 HIE 新生儿住院期间及早期随访中推广应用。
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缺氧缺血与脑水肿
中枢神经系统(CNS)正常生理功能的维持,以及病理疾患的发生、发展都和水代谢有密切关系.水的渗透平衡在神经元的信号传导及维持正常脑功能中发挥着重要的生理作用.
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骨髓间充质干细胞治疗缺氧缺血性脑损伤的研究现状
骨髓间充质干细胞(BMSC)是一类具有多向分化潜能的干细胞.近年研究结果显示,移植BMSC治疗缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型,具有促进HIBD动物模型脑组织结构和神经功能改善的作用.其可能的作用机制包括:①细胞替代作用;②分泌神经营养因子和调控细胞因子,发挥免疫调节作用;③趋化作用及促进新生血管形成等.笔者拟针对BMSC治疗HIBD的分子机制进行阐述.
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应用表观弥散系数定量分析缺血缺氧性脑病新生儿的脑损伤
目的 通过头颅弥散加权成像(diffusion weighted image,DWI)以及表观弥散系数(apparent diffusion coefficient,ADC),分析新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)造成的脑损伤. 方法 选取2010年6月1日至201 1年1月5日在天津医科大学第二医院新生儿科住院的足月HIE患儿38例为研究对象,排除其他神经系统疾病.根据病情分为轻度HIE组24例和中重度HIE组14例.对照组为10例无窒息史且同期出生的正常足月新生儿.3组新生儿均进行磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)扫描,DWI使用白旋平面回波序列,并测量9个感兴趣区(侧脑室体部层面的额叶脑灰质、额叶脑白质、顶叶脑灰质、顶叶脑白质和放射冠、基底节层面的尾状核、豆状核、内囊后肢和丘脑)的ADC值.比较3组的MRI表现以及DWI表现,3组间ADC值比较采用方差分析,两两比较采用Student-Newman-Keuls法.结果 对照组额叶脑灰质、额叶脑白质、顶叶脑灰质、顶叶脑白质、放射冠、尾状核、豆状核、内囊后肢和丘脑9个感兴趣区的ADC值分别为(1.37±0.07)、(1.81±0.12)、(1.35±0.10)、(1.84±0.09)、(1.23±0.11)、(1.28±0.09)、(1.18±0.08)、(1.05±0.07)和(1.15±0.08)×10-3 mm2/s;轻度HIE组分别为(1.28±0.11)、(1.60±0.15)、(1.27±0.09)、(1.59±0.20)、(1.19±0.15)、(1.19±0.13)、(1.11±0.09)、(0.97±0.11)和(1.06±0.12)×10-3 mm2/s;中重度HIE组分别为(1.18±0.14)、(1.51±0.22)、(1.19±0.09)、(1.56±0.19)、(1.03±0.16)、(1.08±0.07)、(1.02±0.07)、(0.87±0.09)和(0.96±0.12)×10-3 mm2/s.比较3组间9个感兴趣区的ADC值,差异均有统计学意义(F值分别为3.89、3.21、4.05、3.30、3.28、3.27、4.12、4.75和4.72,p均＜0.05).轻度HIE组额叶脑灰质、额叶脑白质、顶叶脑灰质、顶叶脑白质、豆状核、内囊后肢及丘脑的ADC值低于对照组,差异有统计学意义(P均＜0.05).中重度HIE组9个感兴趣区的ADC值均低于对照组(P均＜0.05).中重度HIE组额叶脑灰质、顶叶脑灰质、放射冠、尾状核、豆状核、内囊后肢及丘脑的ADC值低于轻度HIE组,差异有统计学意义(P均＜0.05). 结论 DWI及ADC值可反映新生儿HIE的脑损伤情况,且ADC值可以对缺血缺氧的程度进行定量分析.
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新生儿缺氧缺血性脑病血浆Th2 源细胞因子水平的研究
目的研究新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿辅助性T淋巴细胞亚群2(Th2)细胞功能变化及其与HIE间的关系. 方法采用ELISA法和单克隆抗体间接免疫荧光法,检测46例HIE患儿不同病期血浆和外周血单个核细胞(PBMC)体外分别产生白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10水平和T细胞IL-2受体(IL-2R)表达率,并与正常足月新生儿脐血(20例)进行对照. 结果 HIE病程第1天血浆及PBMC体外产生IL-6[分别为66.3、804.5 ng/L(中位数,以下同)]、IL-8(410.5、1 983.6 ng/L)和IL-10(27.9、140.1 ng/L),明显高于正常脐血对照组(分别为1.9、187.7;91.0、766.8;2.6、16.4 ng/L)(Z=4.653～5.856,P<0.01);中重度组及并发多器官功能损害(MOD)的HIE患儿血浆及PBMC体外产生IL-6(分别为86.0、1 236.4;111.3、1 746.9 ng/L)、IL-8(分别为579.5、2 812.2;532.8、2 943.3 ng/L),分别高于轻度组(分别为52.6、583.4;335.3、1 528.9 ng/L)及无MOD组(分别为56.6、713.8;352.4、1572.4 ng/L)患儿(Z=2.228～2.701,P<0.05;Z=2.877～4.187,P<0.01),而IL-10差异无显著性(Z=0.450～1.850,P>0.05);T细胞IL-2R表达率[(52.8±13.4)%]明显低于正常脐血对照组[(64.0±7.0)%](t=3.561,P<0.01),中重度HIE患儿尤著.血浆IL-6、IL-8、IL-10水平间呈显著正相关(r=0.629～0.746);血浆及PBMC体外产生IL-6、IL-8水平与血清脑型磷酸肌酶水平呈显著正相关(r=0.489～0.691),与T细胞IL-2R表达率呈显著负相关(r=-0.394～-0.451).24例患儿动态观察发现,病程第3天时血浆和PBMC体外产生IL-6 (52.7、876.2 ng/L)、IL-8 (320.7、1 904.8 ng/L)和IL-10 (21.2、183.4 ng/L)水平较第1天时(分别为56.6、888.7;352.3、1 879.4;27.7、99.1 ng/L)差异皆无显著性(Z=0.314～1.371,P>0.05);第7天(临床症状消失)时血浆IL-6(14.2 ng/L)、IL-8(238.4 ng/L)水平均明显低于第1和第3天时(Z=2.455,P<0.05;Z=2.725～3.856,P<0.01),而血浆IL-10(19.9 ng/L)虽较第1和第3天时降低,但差异无显著性(Z=1.437,1.248,P>0.05). 结论 HIE时血浆中和PBMC体外产生IL-6、IL-8和IL-10水平明显增高,提示Th2功能异常,此在HIE的发病机制中起重要作用.
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单磷酸腺苷激活的蛋白激酶在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的动态变化
目的 探讨缺氧缺血损伤后神经细胞内单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)的表达变化. 方法 以生后24 h内和7日龄新生大鼠为研究对象,采用原代培养的新生大鼠大脑皮层神经元糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation, OGD)模型及新生大鼠缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy,HIE)模型,乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)法检测神经元损伤程度,噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]检测细胞活力;于OGD及HIE损伤后不同时间点提取组织或细胞蛋白,蛋白质印迹法检测细胞中磷酸化单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,P-AMPK) /AMPK、磷酸化蛋白激酶(phosphorylated activated protein kinase,P-Akt) /Akt、Cleaved Caspase-3/Caspase-3的表达水平变化.采用Student-t检验进行统计学分析. 结果 (1)与对照组相比,OGD组LDH水平在2、4、8和24 h均明显高于对照组(P值均＜ 0.05),MTT吸光度低于对照组(P值均＜0.05).(2)与对照组比较,OGD组P-AMPK水平明显增高,OGD组P-AMPK浓度在30 min及2、4、8和24 h呈时间依赖性增加,2组上述各时间点的差异均有统计学意义(P值均＜ 0.05).HIE组脑组织P-AMPK表达水平明显高于对照组(HIE组l、3和7d分别为0.345±0.038、0.387±0.112和0.618±0.075,对照组为0.132±0.032),差异有统计学意义(P值均＜0.05).(3)OGD组P-Akt水平在损伤初期(30 min)高于对照组(分别为0.991±0.134与0.304±0.050),于2h达峰值(1.183±0.107),差异有统计学意义(p值均＜ 0.05),随后迅速下降至正常水平;OGD组Cleaved Caspase-3表达水平明显高于对照组,且呈时间依赖性增加(P值均＜ 0.05). 结论 缺氧缺血损伤后神经细胞内AMPK活性增高,这一趋势随暴露时间延长而更加明显.
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缺氧缺血性脑病动物模型建立新方法:气管夹闭术
目的 建立一种简便、可靠、重复性好、与新生儿期临床表现及病理生理过程相似的缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)的动物模型.方法 7日龄Sprague-Dawley大鼠180只,随机分为空白对照组、实验对照组、缺氧8 min组、缺氧10 min组、缺氧12 min组、缺氧14 min组,每组30只.缺氧8 min组、缺氧10 min组、缺氧12 min组及缺氧14 min组大鼠采用5％利多卡因局部麻醉后,钝性分离气管,分别用血管夹夹闭8、10、12、14 min.实验对照组仅钝性分离气管,术毕创面消毒,缝合.空白对照组不给予任何处理.缺氧达14 min后,存活率明显降低,故缺氧14 min组大鼠未进一步行组织形态学及行为学检测.建模后12 h行脑组织切片苏木精-伊红染色观察.建模后3 d,测量脑重,进行脑组织末端脱氧核苷转移酶介导的dUTP缺口末端标记染色检测神经细胞凋亡情况.2月龄时行Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能损害情况.采用单因素方差分析对数据进行方差分析后,方差齐两两比较用SNK检验,方差不齐两两比较用Dunnett's T3检验.结果 缺氧后大鼠出现全身肤色青紫,意识丧失,进而全身苍白,大小便失禁,四肢、尾巴抽搐等行为学表现.缺氧8 min组、缺氧10 min组及缺氧12 min组均可见到缺血坏死、组织出血、大量神经元细胞胞核皱缩及深染等缺氧后表现.建模后3 d,缺氧8 min组、缺氧10 min组及缺氧12 min组大鼠脑重均低于空白对照组及实验对照组[分别为(1.16±0.07)、(1.04±0.06)、(0.97±0.12)、(1.31±0.06)及(1.28±0.09)g,F=36.437,P<0.001],颞叶皮层[分别为(22.83±4.52)、(30.25±3.02)、(39.18±5.04)、(7.96±2.24)及(8.86±2.49)个/400倍视野,F=164.532,P<0.001]及海马CA3区神经细胞凋亡数量[分别为(14.63±2.26)、(20.25±3.02)、(24.81±1.98)、(4.75±2.66)及(6.67±1.78)个/400倍视野,F=141.026,P<0.001]均高于空白对照组及实验对照组.2月龄时,缺氧8 min组、缺氧10 min组及缺氧12 min组大鼠寻台潜伏期长于空白对照组及实验对照组[分别为(17.99±6.48)、(23.07±9.90)、(38.94±32.46)、(14.37±6.06)及(12.78±7.21)s,F=26.912,P<0.001],穿越平台次数均低于空白对照组及实验对照组[分别为(5.00±1.41)、(4.90±1.29)、(3.75±1.83)、(7.57±1.16)及(7.14±1.15)次,F=14.336,P<0.001].结论 造模后大鼠行为、脑组织病理变化都符合HIE动物模型特点,与HIE临床病理生理类似,是一种新的、简便、可靠、重复性好、可以精确控制缺氧时间的HIE动物模型.
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盘状结构域受体1促进微管相关蛋白Tau磷酸化在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用
目的 研究盘状结构域受体1(discoidin domain receptor 1,DDR1)调控微管相关蛋白Tau(简称Tau蛋白)表达及其磷酸化在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的作用及其机制.方法 将64只7日龄无特定病原体级雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、HIBD组、生理盐水(normal saline,NS)治疗组(HIBD+NS组)及DDR1抑制剂(DDR1 inhibitor,DI)治疗组(HIBD+DI组),每组16只.通过结扎左侧颈动脉后置于低氧箱内2 h,复制新生大鼠HIBD模型.HIBD+DI组造模后,立即给予DDR1抑制剂侧脑室注射治疗.造模后48 h收集左侧皮层组织,HE染色观察大脑皮层的组织病理学改变;蛋白质印迹法检测皮层组织中DDR1及Tau蛋白的磷酸化水平;酶联免疫吸附试剂盒法检测乙酰胆碱含量.用方差分析和t检验对数据进行统计学分析.结果 (1)皮层损伤情况:与Sham组相比,HIBD组异常神经元所占比例明显增多[(80.28±4.51)%与(10.40±2.17)%,t=39.491,P<0.01].HIBD+DI组动物大脑皮质区核固缩及坏死细胞比例较和HIBD+NS组显著降低[(31.91±3.05)%和(82.01±7.20)%,t=18.123,P<0.01)].(2)DDR1和Tau蛋白磷酸化水平比较:DDR1磷酸化水平方面,HIBD组高于Sham组(0.922±0.199与0.095±0.023,t=10.379,P<0.01),HIBD+NS组高于HIBD+DI组(1.200±0.171与0.255±0.111,t=11.901,P<0.01).Tau磷酸化方面也显示相似的趋势(HIBD组和Sham组分别为,0.194±0.224与0.919±0.228,t=7.347;HIBD+DI组和HIBD+NS组分别为1.100±0.167与0.291±0.210,t=9.447,P值均<0.01).(3)乙酰胆碱含量:HIBD组低于Sham组[(3.685±0.472)与(7.429±0.861)ng/g蛋白,t=10.781,P<0.01].而HIBD+DI组高于HIBD+NS组[(7.058±0.915)与(2.521±0.723)ng/g蛋白,t=10.989,P<0.01].结论 DDR1激活引起HIBD新生大鼠皮层组织中Tau过度磷酸化,进而导致神经递质乙酰胆碱释放减少.抑制DDR1活化能够降低HIBD新生鼠皮层组织中Tau的磷酸化水平,增加乙酰胆碱的释放.DDR1抑制剂对HIBD新生鼠脑损伤具有保护作用.
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缺氧性心肌损伤对新生儿脑血流动力学和脑组织氧饱和度的影响
目的 了解新生儿缺氧性心肌损伤和心动过缓对脑血流动力学和脑组织氧饱和度(regional oxygen saturation,rSO2)的影响,为新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)急性期的治疗提供病理生理学依据. 方法 研究对象为2005年12月至2008年1 2月期间,北京大学第一医院新生儿科收治的49例足月HIE患儿,其中18例合并心肌损伤,31例未合并心肌损伤；对照组为同期住院的50例黄疸新生儿(总胆红素＜256 μmol/L).出生后3～7d,采用多普勒超声检测大脑前动脉的收缩期流速(systolic velocity,Vs)、舒张期流速(diastolic velocity,Vd)和阻力指数(resistance index,RI),采用近红外光谱测定技术检测脑rSO2,3组间数据比较采用方差分析,两两比较采用LSD法.另纳入20例不同原因导致心动过缓的患儿,采用配对t检验比较心动过缓治疗前后脑rSO2的变化. 结果 (1)HIE合并心肌损伤组、未合并心肌损伤组和对照组平均Vs分别为(19.35±5.13)、(29.35±4.28)和(32.62±7.47) cm/s,平均Vd分别为(6.43±2.98)、(11.21±3.16)和(11.50±3.03) cm/s,平均RI分别为0.68±0.10、0.62±0.03和0.64±0.06,平均脑rSO2分别为(52.4±2.8)％、(54.6±3.1)％和(62.1±1.9)％,各指标3组间比较差异均有统计学意义(F分别为29.999、19.393、5.283、137.952,P＜0.01).与对照组和HIE未合并心肌损伤组比较,HIE合并心肌损伤组患儿Vs和Vd均降低,RI增高,脑rSO2降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).HIE未合并心肌损伤组患儿Vs和脑rSO2均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),但Vd和RI与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).(2)心动过缓患儿治疗后平均脑rSO2高于治疗前[(58.7±4.6)％与(50.9±3.2)％,t=6.239,P＜0.01]. 结论 缺氧性心肌损伤加重HIE患儿的脑血流动力学紊乱和脑组织氧合状态异常.维持稳定的心率对HIE的早期治疗有重要意义.
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生后6小时床旁视频脑电图诊断围产期缺氧缺血性脑病及其与近期神经行为发育相关性的研究
目的 探讨新生儿生后6 h床旁视频脑电图(video electroencephalogram,VEEG)对缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)的诊断价值以及与早期神经行为发育结局的相关性.方法 采用前瞻性研究方法,连续纳入2009年3月至9月间我院收治的重度窒息新生儿,记录生后6 h床旁VEEG并分度;以HIE标准诊断方案作为临床诊断HIE和分度的金标准.分析生后6 h不同程度VEEG预测相应程度HIE的敏感性和特异性;在观察者盲法的基础上,比较生后6 h、3和7 d异常VEEG预测HIE的敏感性和特异性.生后7～14 d行新生儿行为神经评分(neonatal behavior neurological assessment,NBNA),出院后3月龄门诊随访行脑电图(electroencephalogram,EEG)、全身运动(general movements,GMs)质量评估和0～6岁发育筛查测验(developmental screening test for child under six,DST)评估;6月龄行EEG、贝利婴幼儿发展量表(Bayley scales of infant development,BSID)评估,分析6 h VEEG与近期神经发育结局的相关性.结果 重度窒息新生儿48例纳入分析.诊断为单纯重度窒息12例;HIE 36例,其中轻、中和重度分别为14、12和10例.生后6 h VEEG正常9例;异常39例(81.3%),其中轻、中、重和极重度异常分别为16、11、5和7例.36例HIE新生儿生后6 h VEEG异常32例.异常率88.9%.生后6 h VEEG异常程度与脑损伤程度的等级相关系数为0.849,P<0.01,生后6 h VEEG重度与极重度异常预测重度HIE敏感性为100%,特异性94.7%;生后6 h、3和7 d VEEG预测HIE的敏感性分别为88.9%、83.9%和28.6%,特异性分别为41.7%、91.7%和100.0%.生后6 h VEEG异常并持续异常于院内死亡9例,生后6 h VEEG中、重度异常者NBNA评分显著低于VEEG正常患儿(P均<0.01);VEEG重度异常者NBNA评分显著低于中度异常患儿(P<0.05).3月龄时35例患儿来院随访,32例DST>85分,3例DST 70～84分且伴有EEG异常,其中1例GMs质量评估示不安运动缺乏,提示脑性瘫痪可能性大.6月龄时14例患儿来院随访,7例EEG异常,4例BSID异常且均伴有EEG异常.结论 生后6 h VEEG预测HIE及其严重程度的敏感性和特异性较高,与早期神经发育结局有较好的相关性.
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选择性头部亚低温治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤对脑血流和氧合代谢的影响
目的探讨新生儿缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)选择性头部亚低温治疗期间脑血流和脑氧合代谢的变化.方法38例中、重度HIBD新生儿随机分为常温组和低温组;7例相对正常的新生儿作为对照组.生后6 h以内开始治疗,常温组维持体温在36℃,低温组维持鼻咽温度在34℃,低温持续72 h,然后自然复温,其它治疗方法两组相同.三组均持续观察84 h.三组患儿分别在生后6、12、24、48、72和84 h,采用经颅多普勒血流诊断仪测定大脑中动脉的血流速率的变化,采用近红外光谱分析技术测定细胞色素aa3(cytochrome aa3,Cytaa3)的变化.结果低温组新生儿生后6h内收缩期血流速率(Vs)[(250.5±7.69)cm/s],平均血流速率(Vs)[(15.67±5.97)cm/s]、舒张末期血流速率(Vd)[(7.27±5.06)cm/s]和△Cytaa3均较对照组降低,阻力指数(RI)(0.81±0.15)较对照组(0.67±0.09)增加(P均＜0.05);低温组Vs和Vm在生后12～48 h较常温组增加(P均＜0.05),RI降低(P＜0.05),且与对照组无差别.与常温组比较,低温组△Cytaa3在生后36～60 h显著增加(P＜0.05或0.01).结论中重度新生儿HIBD脑血速率明显降低,存在明显的脑氧合障碍;选择性头部亚低温治疗新生儿HIBD可以改善脑血流动力学和脑氧合代谢状态.
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近红外光谱技术产时监测宫内缺氧性脑损伤的价值
目的 探讨近红外光谱技术产时监测宫内缺氧性脑损伤的价值,为临床评价脑损伤提供客观、量化依据.方法 63例宫内窘迫胎儿根据出生后是否合并新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)分为HIE组(34例)及无HIE组(29例);35例无宫内窘迫的正常新生儿为对照组.应用近红外光谱技术测定3组新生儿胎头拨露时和生后5 min时脑组织氧饱和度(regional oxygen saturation,rSO2),受试者工作特性曲线评价脑rSO2对HIE的诊断价值.结果 HIE组患儿产程中胎头拨露及生后5 min时脑rSO2分别为(36.6±5.0)%和(52.0±4.2)%,均明显低于对照组[分别为(45.9±4.6)%和(59.6±4.4)%]及宫内窘迫但无HIE组[分别为(44.1±3.1)%和(57.6±3.5)%](P<0.01).对照组、宫内窘迫但无HIE组、HIE组产程中胎头拨露时脑rSO2与脐动脉血气pH值间均呈正相关性(r=0.463,P<0.01;r=0.619,P<0.01;r=0.688,P<0.01),与脐动脉血气血氧饱和度间亦呈正相关性(r=0.709,P<0.01;r=0.736,P<0.01;r=0.516,P<0.01).以胎头拨露时脑rSO2<39.5%为界值,rSO2评判宫内窘迫新生儿发生HIE的敏感性及特异性分别为67%及93%;以生后5 min脑rSO2<53.5%为界值,rSO2评判宫内窘迫新生儿发生HIE的敏感性及特异性分别为70%及86%.结论 近红外光谱技术测定脑rSO2能客观评价宫内窘迫新生儿脑氧合状态,可提示新生儿HIE的存在.
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亚低温对新生儿缺氧缺血性脑损伤的保护作用——随机对照试验Meta分析
目的 评价亚低温对新生儿缺氧缺血性脑损伤的保护作用.方法 计算机检索Medline/PubMed(1977～2006年)医学数据库、荷兰医学文摘(Embase,1989～2006年)和OVID全文数据库、Cochrane系统评价数据库(2006年)、中国学术期刊网全文数据库(CNKI,1994～2006年)、中国生物医学文献数据库(CBMdisc,1978～2006年)和国家科技图书文献中心等文献数据库,收集亚低温治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的临床研究和系统评价,进行质量评价,并对符合纳入标准的临床研究进行Meta分析. 结果 共查阅到国内外相关临床研究18篇,纳入随机对照研究4篇,其中国外3篇,国内1篇,均为高质量研究(Jadad评分均为3分).纳入研究均描述了随机化方法,但均未使用盲法.各组研究随访12～18个月,报道了病死率和严重伤残的发生率,均描述了失访情况.合并分析表明,与普通治疗组比较,亚低温组病死率OR=0.64,95%CI为0.46～0.90,P=0.01;严重伤残发生率OR=0.57,95% CJ为0.37～0.86,P=0.008;严重伤残和病死的合并发生率OR=0.50,95% CI为0.36～0.69,P<0.01,差异均有统计学意义. 结论 从现有临床证据看,亚低温可降低新生儿缺氧缺血性脑损伤后严重伤残发生率和病死率,但仍需大规模、高质量、随访结局统一的临床试验进一步验证.
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胎儿窘迫致胎儿心率变异性研究进展
胎儿窘迫是围产期威胁胎儿安全的重要并发症.临床统计资料表明,分娩期胎儿窘迫发生率为2%,其中1‰出现明显的脑损伤症状[1].新生儿窒息约2/3是胎儿窘迫的延续,而缺氧缺血是导致围产儿死亡的首要原因,也是导致儿童时期智力低下的主要原因.
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血小板生长因子对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑细胞凋亡率和血清神经元特异性烯醇化酶的影响
目的 研究血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的新生鼠神经细胞凋亡率及血清神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)浓度的影响,进而探讨其对HIBD的神经保护作用. 方法 7日龄新生Wistar大鼠48只制备HIBD模型,并分为PDGF治疗组和生理盐水对照组,每组各24只.另取24只为假手术组.治疗组在缺氧缺血后即刻给PDGF-BB 50 ng/kg腹腔注射.对照组和假手术组腹腔注射等体积的生理盐水.每组于处置后12、24和72 h随机取8只处死,留血清标本,酶联免疫吸附法检测大鼠血清标本NSE浓度；取右侧大脑组织制备脑细胞悬液,双染法流式细胞仪检测脑细胞凋亡率.采用单因素方差分析及q检验进行统计学分析. 结果 (1)脑细胞凋亡率:治疗组[(6.09±0.70)％、(9.67±1.52)％和(14.15±1.52)％]和对照组[(8.00±1.10)％、(11.45±2.42)％和(22.90±2.03)％]3个时点的脑细胞凋亡率均较假手术组(2.11±0.54)％、(2.34±0.46)％和(2.21±0.49)％]显著增加(P均＜0.01或＜0.05),治疗组较对照组各时点脑细胞凋亡率均明显降低(P均＜0.01或＜0.05),3组大鼠在12、24、72 h时的组间比较差异均有统计学意义(F=39.01、66.60、194.20,P均＜0.01).(2)血清NSE浓度:各时点对照组[(10.04±0.19) μg/L、(9.33±0.15)μg/L和(8.36±0.16)μg/L]和治疗组[(8.43±0.17)μg/L、(6.73±0.16) μg/L和(6.12±0.13)μg/L]较假手术组[(4.22±0.53)μg/L、(3.96±0.60) μg/L和(3.59±0.55) μg/L]NSE浓度增加(P均＜0.01),治疗组较对照组各时点NSE浓度降低(P均＜0.01),3组大鼠在12、24、72h组间比较差异均有统计学意义(F=371.25、245.61、236.22,P均＜0.01). 结论 PDGF能抑制新生大鼠HIBD后神经细胞凋亡及降低血清NSE浓度,对HIBD新生大鼠有神经保护作用.
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缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织细胞红蛋白的表达
目的 探讨细胞红蛋白(eytoglobin,CYGB)在7日龄新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-isehemie brain damage,HIBD)脑内的表达变化.方法 健康7日龄SD大鼠70只,按简单随机抽样法随机取50只制备HIBD模型作为HIBD组,再随机分为HIBD后0、4、12、24和48 h组,每组10只;假手术组10只,只分离左颈总动脉,不结扎,也不放入缺氧箱;另10只不做任何处理作为对照组.假手术组术后即断头取脑,对照组同时取脑,HIBD组在相应时间点取脑.采用免疫组织化学法和Western印迹法从蛋白水平分析CYGB在脑组织中的分布及表达特点. 结果 (1)免疫组织化学染色显示CYGB主要表达于大脑皮质、丘脑和海马神经元的胞浆,HIBD组CYGB表达数量及染色强度均高于对照组,其中缺氧24、48 h组表达强.(2)Western印迹结果显示,HIBD后0、4、12、24和48 h CYGB平均吸光度分别为261.5土5.0,263.0土5.4,464.3±6.8,522.8±11.2,512.9±7.9,明显高于假手术组(117.6±7.0)及对照组(116.6±9.0),P<0.01.其中缺氧0和4 h组明显高于对照组(P<0.01);缺氧12 h组的表达明显高于缺氧0、4 h组(P<0.01);缺氧24、48 h组明显高于缺氧12 h组(P<0.01);缺氧0、4 h组间,缺氧24、48 h组间差异无统计学意义(P>0.05). 结论 7日龄新生大鼠HIBD后脑内CYGB表达明显增强,并且随着缺氧缺血发展呈现时相性变化,提示其可能在脑缺氧缺血的适应性调节过程中起重要作用.
关键词： 珠蛋白类 缺氧缺血 脑 大鼠 Sprague-Dawley -
7硝基吲唑在缺氧缺血性脑损伤中的作用机制
目的研究神经元型一氧化氮合酶(NOS)抑制剂7硝基吲唑(7-nitroindazole,7-NI)在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的作用机制.方法将54只新生7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组、HIBD组和7-NI治疗组;其中后两组各再分为四个时点(1、2、6、8 h),检测不同时点结扎侧脑组织中NOS、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平的变化.另18只新生大鼠随机分为假手术组、HIBD组和7-NI组,每组6只,应用TUNEL法观察7-NI对HIBD后24 h神经细胞凋亡的影响.结果假手术组NOS(1.555±0.223)U/mg;NO(0.749±0.135)μmol/g;SOD(24.184±1.446)nU/mg;MDA(1.319±0.282)nmol/mg;HIBD组NOS1 h(3.345±0.367)U/mg,8 h(4.469±0.275)U/mg;NO 1 h(2.419±0.254)μmol/g,8 h(3.556±0.309)μmol/g;SOD 1 h(22.052±1.179)nU/mg,8 h(17.124±1.541)nU/mg;MDA 1 h(2.449±0.418)nmol/mg,8 h(4.576±0.294)nmol/mg 7-NI组NOS 1 h(1.606±0.149)U/mg,8 h(2.917±0.426)U/mg;NO 1 h(0.879±0.169)μmol/g,8 h(1.803±0.275)μmol/g;SOD 1 h(24.045±1.219)nU/mg,8 h(20.688±1.696)nU/mg;MDA 1 h(1.569±0.349)nmol/mg,8 h(2.778±0.412)nmol/mg.与假手术组比较,HIBD组各时相点NOS、NO值均明显升高(P＜0.01),SOD值明显降低(P＜0.05),MDA值明显升高(P＜0.05).与HIBD组比较,7-NI治疗组NOS、NO均明显下降(P＜0.05),SOD值升高(P＜0.05),MDA降低(P＜0.05).TUNEL法检测结果显示7-NI治疗组神经细胞凋亡数明显低于HIBD组[HIBD组(76.333±6.646)个;7-NI组(32.667±6.850)个(P＜0.001)].结论7-NI减少了HIBD后NO的产生,降低了氧自由基的损伤程度,抑制了神经细胞凋亡,具有脑保护作用.
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脑红蛋白基因在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤脑中的表达
目的探讨缺氧缺血性脑损伤脑中脑红蛋白基因的表达及变化. 方法随机将出生7 d的Wistar大鼠48只分成6组,其中实验组在手术后制成脑损伤模型,并且在血流阻断1、5、15、30、60 min取脑;对照组为假手术组,术后即取脑.设计脑红蛋白基因引物,提取脑组织总RNA,合成RT-单链cDNA做PCR反应.以Stata统计软件包的One-way单因素方差分析进行数据统计处理. 结果设计的新生大鼠脑红蛋白 cDNA序列引物及扩增脑红蛋白编码区部分序列,其所得引物可靠、扩增产物与设计相符.检测中可见:实验组脑红蛋白mRNA的表达在缺血1 min时(A值:1.236)即快速增加达高峰,与对照组(A值:0.641)相比,差异有非常显著性(P<0.01);5 min时(A值:1.170)仍然保持在高水平(P<0.01);15 min时(A值:0.498)迅速降低,与对照组相比,差异无显著性(P>0.05);此后脑红蛋白mRNA又见缓慢增高(30 min时脑红蛋白mRNA A值:0.642; 60 min时A值:0.617),与对照组相比,差异均无显著性(P>0.05). 结论新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑红蛋白mRNA表达增强,提示脑红蛋白可能在脑缺氧的适应性调节过程中起了重要作用.
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细胞红蛋白对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用
目的 探讨细胞红蛋白(cytoglobin,CYGB)在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的神经保护作用. 方法 健康7日龄新生Sprague-Dawlay大鼠随机分为假手术组、HIBD组、HIBD+氯化高铁血红素(Hemin)组和HIBD+锌原卟啉(zinc protoporphyrin,ZnPP)组.HIBD组、HIBD+ Hemin组及HIBD+ ZnPP组大鼠分别腹腔注射0.5 ml生理盐水、Hemin(50 mg/kg)及ZnPP(50 mg/kg),12h后结扎并剪断左侧颈总动脉,缺氧2h,制成HIBD动物模型.建立模型后0、24、48 h免疫组织化学法检测各组大鼠海马及皮质中CYGB的表达情况,每组10只.HE染色观察建立模型后48 h的大鼠脑组织病理变化,每组8只.称重法检测建立模型后72h新生大鼠脑含水量,每组8只.建立模型后28 d采用Morris水迷宫实验检测海马学习记忆功能变化,每组10只.组间差异比较采用方差分析,组间两两比较使用Bonferroni法. 结果 (1)大鼠脑组织CYGB的表达水平:用平均灰度值(与蛋白表达水平成反比)表示.在0h,HIBD+ Hemin组和HIBD组皮质CYGB的平均灰度值分别为166.7±5.1和207.1±5.1,低于假手术组(232.3±3.4),而HIBD+ ZnPP组(234.9±4.5)高于假手术组(P＜0.05).随时间的增加,各HIBD组CYGB的平均灰度值递减,至48 h时,CYGB的平均灰度值HIBD+Hemin组低(126.0±2.6),其次是HIBD组(150.9±4.5)和HIBD+ ZnPP组(163.7=6.3),高是假手术组(232.1±5.8),差异均有统计学意义(P均＜0.01).CYGB在海马组织的表达变化与皮质一致.(2)各组脑组织病理变化:建立模型后48 h,HIBD组、HIBD+ Hemin组和HIBD+ ZnPP组新生大鼠脑组织可见典型的脑梗死和出血,HIBD+Hemin组梗死灶明显较HIBD+ZnPP组小,出血减轻.(3)脑组织含水量变化:建立模型后72 h,HIBD组和HIBD+ZnPP组左侧脑组织含水量分别为(86.5±0.4)％和(87.3±0.3)％,明显高于右脑[(85.6±0.2)％和(85.9±0.2)％],差异有统计学意义(t分别为12.57和11.32,P均＜0.01).(4)海马学习记忆功能变化:水迷宫实验中,5d总平均逃逸潜伏期HIBD+ ZnPP组长[(76.7±29.8)s],其次是HIBD组[(71.0±30.5)s]和HIBD+ Hemin组[(46.7±34.0)s],短为假手术组[(38.3±30.3)s],差异均有统计学意义(P均＜0.05).(5)远期脑组织病理变化:建立模型后34 d,脑组织萎缩率HIBD+ ZnPP组高[(34.07±6.75)％],其次是HIBD组[(29.73±6.53)％],再次是HIBD+Hemin组[(18.33±4.52)％],均高于假手术组[(1.55±1.32)％],差异均有统计学意义(P均＜0.01).HIBD组及HIBD+ZnPP组大鼠脑组织可见锥体细胞层变薄,大片神经元缺失,HIBD+Hemin组仅见少量神经元缺失. 结论 CYGB的高表达可减轻HIBD脑组织近期及远期的病理损伤,保护远期的海马学习记忆功能.
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Nogo-A mRNA在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织中的表达
目的 研究神经生长抑制因子Nogo-A mRNA在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)新生大鼠脑组织的动态变化,探讨Nogo-A基因对HIBD新生大鼠中枢神经再生的影响.方法 将180只SD新生大鼠随机分为对照组(n=90)和实验组(n=90),实验组制成HIBD模型,根据处死动物的时间不同随机分为HIBD后3、7、14、21和28 d共5个亚组,每组18只;对照组也在相应时间点取材;采用原位杂交法检测新生大鼠脑组织Nogo-A mRNA在不同时间的表达量.结果 原位杂交法显示Nogo-A mRNA在实验组新生大鼠的皮层呈强阳性表达,阳性细胞分布密集,对照组阳性细胞分布较实验组稀疏;实验组新生大鼠脑组织Nogo-A mRNA阳性细胞数量在缺血缺氧后7 d(34.73±3.34)比14 d(36.67±5.33)和21 d(42.33±2.21)均较对照组7 d(28.67±2.91)、14 d(32.17±5.06)和21 d(36.83±4.90)明显增高(P＜0.05或0.01).结论 脑组织Nogo-A mRNA表达在脑损伤急性期(3 d)变化不明显,而在1周后较为明显,提示缺氧缺血性脑损伤后期Nogo-A mRNA表达明显升高,它可能是造成新生大鼠脑损伤后神经再生障碍的重要原因之一.
