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新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后caspase-3蛋白表达与神经元变性的关系
目的 探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemic brain damage, HIBD)后半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cysteinyl asparate-specific proteinase-3, caspase-3)蛋白表达及其与神经元变性的关系.方法 将35只7日龄Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、HIBD后6、12、24、72和120 h组,每组5只.HIBD组按Rice法制成模型.采用免疫组化法及Fluoro-Jade B(FJB)荧光染色分别观察caspase-3蛋白表达及神经元变性情况.结果 缺氧缺血(hypoxic ischemia, HI)后12 h皮质caspase-3表达(0.405±0.021)高于正常对照组(0.367±0.023)(P＜0.05),HI后24 h皮质、纹状体及海马caspase-3表达达高峰(P＜0.05);至HI后120 h皮质、纹状体和海马caspase-3表达均与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).正常对照组大鼠各脑区内FJB阳性细胞罕见,HI后24 h各部位脑组织FJB阳性细胞明显增多(P＜0.05),72 h进一步增多(P＜0.05),120 h时FJB阳性细胞数达高峰(P＜0.05).结论 新生大鼠HIBD后脑caspase-3蛋白表达与变性神经元在空间与时间分布上存在一致性,但变性神经元分布得更广泛、更持久.提示caspase-3蛋白可能在缺氧缺血所致神经元变性中起到一定作用.
关键词： 缺氧缺血 脑 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 神经变性 大鼠 -
地塞米松干预对缺氧缺血性脑损伤脑组织髓鞘碱性蛋白的影响
目的 探讨地塞米松(dexamethasone,Dex)在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemicbrain damage,HIBD)中的作用及可能机制.方法 通过建立大鼠HIBD模型,分为Dex大剂量预处理组、Dex小剂量预处理组、Dex大剂量治疗组、Dex小剂量治疗组、生理盐水组和正常对照组,检测血清及脑组织髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)、白介素-1β(interleukin-1β IL-1β)、凋亡细胞计数和脑组织病理改变.结果 (1)与生理盐水组比较,不同剂量Dex干预组和治疗组脑组织病变均减轻,表现神经元树突复旧,尼氏体增多;(2)HIBD后3 d生理盐水组血清、脑组织MBP、IL-1β的含量(5.88±0.46,34.25±4.65;127.97±16.60,1060.33±42.22)及脑组织凋亡细胞计数(13.27±0.90,11.05±1.23)较正常对照组(2.01±0.12,10.24±1.75;41.21±4.02,221.10±30.57及0.75±0.17)显著增加,P<0.05;HIBD后7 d生理盐水组上述指标有所降低,但较正常对照组仍显著增高,P<0.05;(3)Dex干预后血清及脑组织MBP、IL-1β的含量:预处理组(4.30±0.73,24.10±3.36和59.89±6.16,393.68±31.46)、治疗组(4.48±0.49,16.98±1.32及50.81±8.32,405.15 ±29.02)较生理盐水组(5.88±0.46,34.25±4.65和127.97±16.60,1060.33±42.22)显著下降,P<0.05;预处理组与治疗组无显著性差异,P>0.05;大剂量组较小剂量组作用更明显;(4)Dex预处理组、治疗组的脑组织凋亡细胞计数(7.92±1.64和8.97±0.81)显著低于生理盐水组(13.27±0.90),P<0.05;预处理组较治疗组下降更为明显,P<0.05;大剂量组较小剂量组作用更明显.结论 血清MBP含量的变化可反映脑白质损伤的程度;Dex可能是通过抑制IL-1β的过度表达,减轻炎症级联反应从而起到脑损伤的保护作用.
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改良神经行为学评分量表评估新生兔神经行为表现的效果
目的 研究改良的神经行为学评估结果量表对新生兔神经行为学评分的效果. 方法 妊娠29 d健康新西兰白兔12只,随机分为3组,每组4只.缺氧缺血25 min组、缺氧缺血28 min组分别阻断孕兔子宫血流25、28 min,对照组不阻断子宫血流.记录新生兔的一般情况.每组活产新生兔随机分为顺向评分亚组、反向评分亚组、改良评分亚组,分别按神经行为学评分量表顺向和反向顺序以及改良的神经行为学评分量表顺向顺序进行评估,记录神经行为学评分结果,比较不同评分方法对评估结果的影响.同时行病理学观察,分析存活新生兔神经行为学得分与缺氧缺血时间和脑细胞凋亡数量的相关性.采用Spearman秩相关检验、单因素方差分析、Kruskal-Wallis H检验、Wilcoxon秩和检验或x2检验进行统计学分析. 结果 对照组和缺氧缺血25、28 min组的死胎率分别为0.0％(0/28)、16.7％(6/31)与37.9％(11/29),x2=21.33,P=0.00;纹状体单位面积内脑细胞凋亡数量逐渐增多[分别为0(0～1)、7(6～10)与25(22～28)个,H=54.39,P＜0.05]；神经行为学得分依次降低[对照组、缺氧缺血25和28 min组相比,姿势:3.00(2.25～3.00)分、2.00(1.00～2.00)分与1.00(1.00～1.00)分,H=38.47;翻正次数:9.00(8.00～9.75)次、4.00(3.00～5.00)次与1.00(0.00～1.00)次,H=52.30;翻正得分:2.90(2.80～2.98)分、2.10(1.90～2.20)分与1.30(1.00～1.40)分,H=53.53;运动能力:3.00(2.00～3.00)分、1.50(1.00～2.00)分与0.00(0.00～1.00)分,H=38.97；吮吸和吞咽协调能力:3.00(2.00～3.00)分、1.50(1.00～2.00)分与1.00(0.00～1.00)分,H=42.87;嗅觉刺激:3.00(3.00～3.00)分、2.00(2.00～2.00)分与1.00(1.00～2.00)分,H=38.43;P均=0.00].反向评分亚组神经行为学得分与顺向评分亚组间存在一定的差异,顺向评分亚组姿势项得分、翻正次数高于反向评分亚组,以对照组和缺氧缺血25 min组孕兔所产新生兔姿势项得分下降明显[顺向评分亚组与反向评分亚组相比,姿势项:对照组:3.00(3.00～3.00)分与2.00(2.00～3.00)分,T=69.00,P＜0.05；缺氧缺血25 min组:2.00(1.25～2.00)分与1.00(1.00～1.75)分,T=52.00,P＜0.05.翻正次数:缺氧缺血25 min组:4.50(4.00～5.75)次与3.00(2.25～4.00)次,T=47.00,P＜0.05]；反向评分亚组嗅觉刺激项、吮吸和吞咽协调能力项得分略高于顺序评分亚组,但差异无统计学意义(P＞0.05).改良评分亚组各评估项得分与顺向评分亚组相近,表现出高度的一致性(P＞0.05).相关性分析发现,存活新生兔神经行为学评分分别与缺氧缺血时间、纹状体单位面积内脑细胞凋亡数量呈负相关关系(r均＜0,P均＜0.05),其中顺向评分亚组和改良法评分亚组新生兔神经行为学各项得分与缺氧缺血时间、纹状体区域单位面积内凋亡的脑细胞数量间相关系数接近,相关性强(｜r｜≈0.8,P均＜0.05). 结论 对新生兔反复被动运动检查可导致低估新生兔的神经行为学评估结果；经改良的神经行为学量表可准确反映缺氧缺血性脑损伤后新生兔的神经行为学损害程度.
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三日龄大鼠缺氧缺血性脑损伤对大脑MRI影像和学习记忆能力的远期影响
目的 观察缺氧缺血(HI)对3日龄大鼠脑细胞凋亡及成年后头部MRI影像和学习记忆能力的影响.方法 应用凋亡基因芯片研究3日龄大鼠缺氧缺血性脑损伤后12 h与损伤7 d凋亡基因表达的差异.42日龄时进行大脑MRI检查,并在44日龄时采用水迷宫测试其学习和记忆能力.组间比较采用t检验和秩和检验.结果 与HI脑损伤后12 h相比,损伤后7 d表达上调的基因包括TNF及其受体家族中的Tnfsf10(TRAIL)、Tnfsf13(CD30)、Tnfrsf21、Tnfrsf11b;Caspase家族中的Caspase1、2、3和6;Bcl2家族中的促凋亡基因Bak1、Becn1、Bcl10和Bid3;死亡域TRADD和Myd88.而Caspase 8和抗凋亡基因Mapk8ip表达下调.42日龄时头部MRI检查显示HI组右侧大脑皮质面积较左侧和假手术组显著减小[侧脑室层(23.5±3.6)mm2、(33.0±4.3)mm2和(34.5±3.9)mm2(F=17.09,P<0.01);海马层(18.9±4.4)mm2、(29.1±5.0)mm2和(30.8±4.5)mm2(F=14.44,P<0.01)].HI组水迷宫试验上台时间在第4天为(52.7±35.9)s,明显长于假手术组的(17.8±8.9)s(P<0.01).记忆测试中,HI组大鼠经过站台的次数显著少于假手术组(T=292.5,P<0.05).结论 3日龄SD大鼠HI脑损伤后,神经细胞凋亡基因激活持续到损伤后7 d,涉及凋亡的外源性和内源性通路.神经细胞的凋亡会导致大脑皮层萎缩,可能影响动物成年后的空间学习和记忆能力.
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亚低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤p-ERK/p38MAPK的影响
目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号转导通路p-ERK/p38部分活化在亚低温治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的作用及意义.方法 实验分模型组和对照组.采用7日龄Sprague-Dawley(SD)清洁级大鼠,建立新生大鼠HIBD标准模型,随机分为常温缺氧缺血组(10只、肛温=37℃)和亚低温缺氧缺血组(10只、肛温=33℃);对照组为假手术动物,也分为常温组和亚低温组(各8只,余同上).取背侧海马冠状平面采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)结合苏木素-伊红(HE)、神经元Nissl染色和电镜观察凋亡小体检测脑细胞凋亡情况.采用Western印迹检测MAPK成分磷酸化p42/44ERK(简称p-ERK1/2)、磷酸化p-38 MAPK(简称p-p38)的变化时程及其意义.结果 72 h亚低温缺氧缺血组脑细胞凋亡发生率(6.4±1.7)%,与常温缺氧缺血组(25.3±1.5)%比较P＜0.01,差异有统计学意义.而细胞坏死发生率无明显改善.HIBD后MAPK信号转导系统活化,p-ERK1/2水平在IN组结扎侧大脑组织逐渐降低,而p-p38水平却逐渐升高,二者作用相拮抗.亚低温治疗可逆转二者的反向变化. 结论 亚低温治疗可通过p-ERK/p38MAPK信号转导通路抑制HIBD后的细胞凋亡.
关键词： 缺氧缺血 脑 低温 细胞凋亡 有丝分裂素激活蛋白激酶类 -
促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤海马CA1区Caspase-3激活的影响
目的探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用及对海马CA1区Caspase-3激活的影响. 方法将7日龄SD大鼠分为缺氧缺血模型组(n=11)、rhEPO治疗组(n=11)和假手术对照组(n=10),模型组和治疗组建立新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型.观察模型组和治疗组缺氧后0、6、12、24 h不同时间点自发左旋、夹尾左旋、夹尾尖叫现象.用免疫组织化学方法检测活化的Caspase-3的表达,观察Caspase-3阳性细胞在脑组织内分布情况,计算各组海马CA1区单位面积内阳性细胞数(个/1 mm). 结果模型组2只、治疗组1只在缺氧过程中因持续抽搐死亡.缺氧后0 h两组动物均出现自发左旋(治疗组10/10,模型组9/9),24 h治疗组自发左旋发生率明显减少(治疗组1/10,模型组6/9,P=0.0198).免疫组化显示Caspase-3阳性细胞在对照组脑组织内散在分布,模型组和治疗组在海马、大脑皮层较为密集.模型组CA1区阳性细胞数显著高于对照组(41.38±2.09 vs 10.52±2.70,P<0.01).治疗组阳性细胞数显著低于模型组(41.38±2.09 vs 22.63±3.17,P<0.01). 结论 Caspase-3在新生鼠HIBD中活性显著增高,应用rhEPO能有效抑制Caspase-3激活,提示rhEPO通过抑制Caspase-3 激活,减轻缺氧缺血对新生鼠的脑损伤.
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选择性头部亚低温治疗对胎羊缺血性脑损伤纹状体神经元的保护作用
目的 研究选择性头部亚低温治疗对缺血性脑损伤胎羊纹状体不同表型神经元的保护作用.方法 胎羊于妊娠117～124 d(足月为147 d)时通过双侧颈动脉阻塞30 rain造成双侧脑缺血损伤,通过冷循环水进行选择性头部亚低温治疗.将胎羊随机分为:损伤组(η=10)、2 h低温组(损伤后2 h开始亚低温治疗,η=7)和6 h低温组(损伤后6 h开始亚低温治疗,η=8),另设假手术组(η=5).用免疫组化法检测胎羊纹状体胆碱乙酰化酶(choline acetyltransferase,chAT)标记的胆碱能神经元,谷氨酸脱羧酶(glutamate acid decarboxylase,GAD)、钙结合蛋白(ealbindin-28kd)、神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)标记的7氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)能神经元和神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)标记的一氧化氮神经元的变化. 结果 假手术组ChAT、GAD、NPY和nNOS阳性神经元多,阳性染色主要位于胞质和树突内.损伤组纹状体ChAT阳性神经元为(118.10±74.33)个、GAD阳性神经元为(41.80±26.94)个、calbindin-28 kd阳性神经元为(48.79±26.20)个/ram2、NPY阳性神经元为(94.00±55.29)个、nNOS阳性神经元为(76.60±33.11)个,明显少于假手术组(P＜0.01);在2 h低温组明显多于损伤组(P＜0.05);但6 h低温组与损伤组差异无统计学意义.nNOS阳性神经元在2 h低温组为(133.00±38.74)个,6 h低温组为(127.38±68.18)个,明显多于损伤组(P＜0.05).结论 亚低温对胎羊缺血性脑损伤纹状体不同表型的神经元具有保护作用,这一作用与低温治疗开始的时间有关.亚低温治疗可能有助于改善围产期缺血性脑损伤引起的运动和认知功能障碍.
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B细胞淋巴瘤-2相关x蛋白抑制肽对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经细胞凋亡的抑制作用
目的：探讨B细胞淋巴瘤-2相关x蛋白抑制肽（Bcl-2 associated x protein inhibitory peptide，BIP）对缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）新生鼠神经细胞凋亡的抑制作用及有效治疗时间窗。方法将7日龄Wistar大鼠104只分为假手术组（n=8）、对照组（n=48）和实验组（n=48）。对照组与实验组建立 HIBD 模型后在不同时间点分别向侧脑室注射生理盐水（5μl）和BIP（5μl，5 mg/ml），根据建模后注射药物的时间不同，将2组分为0、6、12、24、48、72 h共6个亚组（每组8只）。假手术组仅游离左侧颈总动脉，不注射任何药物。所有实验动物于注射药物后7 d处死，进行脑组织病理检测、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal deoxynucleoitidyl transferase dUTP nick end labeling，TUNEL）检测凋亡阳性神经细胞数目、Western印迹法检测caspase-3蛋白含量。采用单因素方差分析和LSD法进行统计学分析。结果（1）与假手术组比较，实验组和对照组左侧海马区脑组织病理损伤明显。实验组与对照组在0、6、12、24和48 h亚组比较，病理损伤程度较轻，72 h亚组无明显差异。（2）左侧海马区脑组织凋亡阳性神经细胞数目：实验组与对照组在0、6、12、24和48 h各亚组之间比较，凋亡阳性神经细胞数目明显减少[（18.17±1.72）与（35.67±3.14）、（23.00±1.73）与（36.33±0.82）、（26.33±1.75）与（35.50±2.59）、（29.17±2.32）与（36.33±2.34）、（31.54±1.69）与（35.72±1.94）个，P值均＜0.05]；而72 h亚组之间2组比较差异无统计学意义（t=0.416，P＞0.05）。实验组的各亚组之间依次比较，HIBD模型后越早注射BIP，凋亡阳性细胞数目越少，且差异有统计学意义（F=57.242，P＜0.01）。（3）左侧海马区脑组织caspase-3蛋白含量检测提示，实验组在0、6、12、24、48 h各亚组均低于对照组（0.164±0.031与0.474±0.090、0.262±0.030与0.473±0.054、0.338±0.021与0.472±0.120、0.379±0.018与0.481±0.068、0.407±0.026与0.478±0.081，P值均＜0.05），而72 h亚组之间2组比较差异无统计学意义（t=0.027，P＞0.05）。实验组各亚组之间比较，HIBD模型后越早注射BIP，脑组织内caspase-3含量越少，差异有统计学意义（F=51.053，P＜0.01）。结论 BIP可明显减少新生鼠HIBD后凋亡神经细胞数目、降低caspase-3的表达、抑制缺氧缺血后脑组织神经细胞凋亡。缺氧缺血后48 h内是BIP治疗HIBD的有效治疗时间窗，且越早治疗效果越好。
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骨髓间充质干细胞移植对缺氧缺血性脑损伤大鼠脑内肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-1β水平的影响
目的：探讨骨髓间充质干细胞移植对缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）模型大鼠脑内肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）及白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）水平的影响。方法3日龄清洁级Sprague-Dawley大鼠随机分为移植组、HIBD组和假手术组。移植组和HIBD组大鼠麻醉后结扎左侧颈总动脉，并吸入氧浓度为6%的氧氮混合气体2 h，制作HIBD模型；假手术组大鼠麻醉后仅游离左侧颈总动脉，不做缺血缺氧处理。移植组造模后经左侧脑室定位注射增强型绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞2μl（含细胞2×105个），HIBD组造模后经左侧脑室定位注射2μl磷酸盐缓冲液，假手术组不予干预。采用HE染色法观察脑组织病理改变；免疫组织化学法检测各组大鼠脑中单核巨噬细胞抗原-1阳性细胞数；免疫荧光法检测增强型绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞在脑部的定植；酶联免疫吸附试验法和实时荧光定量–聚合酶链反应技术检测各组大鼠脑组织中TNF-α和IL-1β蛋白及mRNA的表达水平。采用单因素方差分析和LSD检验进行统计学分析。结果干预7 d后，HE染色结果显示移植组脑白质区未见明显细胞水肿、变性和坏死；HIBD组脑白质区见部分细胞变性、坏死；假手术组脑部未见明显异常。免疫组织化学检测结果显示HIBD组单核巨噬细胞抗原-1阳性细胞数为（33.0±4.0）个，明显多于移植组[（26.3±2.5）个]，假手术组[（2.3±0.6）个]明显少于移植组和HIBD组（LSD检验，P值均＜0.05）。免疫荧光显微镜观察到增强型绿色荧光蛋白转基因大鼠骨髓间充质干细胞存活并定植于脑组织。干预6、12、24、48 h和7 d后，HIBD组TNF-α、IL-1β蛋白水平均在24 h达到峰值，随后呈下降趋势，至7 d时仍未降至假手术组水平；HIBD组各时间点TNF-α、IL-1β蛋白表达水平[TNF-α：（3.03±0.10）、（5.57±0.19）、（7.78±0.19）、（4.39±0.20）、（2.70±0.19）μg/L；IL-1β：（293.1±7.9）、（369.8±17.5）、（303.6±23.9）、（226.7±21.6）、（183.9±33.4）ng/L]分别显著高于移植组[TNF-α：（2.84±0.20）、（3.80±0.14）、（4.63±0.17）、（3.56±0.03）、（1.99±0.17）μg/L；IL-1β：（267.6±14.5）、（323.5±26.9）、（211.2±24.9）、（140.8±7.4）、（100.2±8.3） ng/L]，假手术组TNF-α和IL-1β蛋白表达水平低[TNF-α：（1.03±0.02）、（1.13±0.03）、（1.05±0.02）、（1.09±0.02）、（1.07±0.02）μg/L；IL-1β：（63.6±13.0）、（64.0±11.3）、（60.8±10.0）、（67.9±13.5）、（66.2±11.7） ng/L]，差异均有统计学意义（LSD检验，P值均＜0.05）。干预24 h后， HIBD组TNF-α和IL-1β mRNA表达水平分别为2.69±0.43和3.07±0.38，高于移植组（分别为1.61±0.29和1.08±0.11），假手术组表达水平（分别为0.94±0.16和1.08±0.11）明显低于移植组和HIBD组，差异均有统计学意义（LSD检验，P值均＜0.05）。结论骨髓间充质干细胞修复HIBD可能与其抑制小胶质细胞激活，下调炎症因子表达从而减轻炎症反应有关。
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围产儿宫内窘迫的临床病理分析(附210例尸检资料)
目的明确围产儿宫内窘迫死亡的主要致病因素及其所引起的并发症等对预后的影响,为降低病死率提供依据.方法对围产儿宫内窘迫的210例尸检资料进行全面复查,主要观察肺和脑病变,并结合临床重点分析了宫内窘迫的主要致病因素、并发症等.结果在宫内窘迫的致病因素中以综合因素为多见;若以单一因素统计,脐带因素居首位,其次为胎盘和母体因素.形态学上计有:胎粪吸入综合征170例(81.0%),羊水吸入36例(17.1%),缺氧综合征仅4例(1.9%).210例中59例伴吸入性肺炎(胎粪吸入性肺炎48例,羊水吸入性肺炎11例).在宫内窘迫致死的患儿中,常见的并发症依次为缺氧缺血性脑病、弥漫性肺出血及致死性畸形等.结论宫内窘迫并发缺氧缺血性脑病、弥漫性肺出血、肺部感染和致死性畸形是导致围产儿死亡的重要因素.
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胰岛素样生长因子1对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤保护机制的研究
目的建立单侧缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型,研究胰岛素样生长因子1(IGF 1)对HIBD的影响和可能机制. 方法选择健康7日龄Wistar大鼠120只,建立HIBD模型,随机分成假手术组、HIBD组、HIBD后0.2 mg/kg人基因重组IGF-1干预组(RH-IGF-1组)、0.066mg/kg人基因重组IGF-1干预组(SRH-IGF-1组)及盐水对照组(对照组).各组按观察时段进一步分为24、48、72 h组,每组8只.各组于规定时刻观测脑形态学改变、谷氨酸(Glu)含量、凋亡细胞计数、Bcl-2蛋白表达. 结果(1)HIBD 48 h组Glu(1162.2±108.1)mg/kg,较假手术组(750.9±53.4)mg/kg明显升高(P＜0.05);HIBD组凋亡细胞计数[24 h:(7.6±1.9)%,48 h(12.6±1.2)%,72 h:(1 3.8±0.9)%],较假手术组[24 h(2.0±0.2)%,48 h(2.0±0.3)%,72 h(2.0±0.2)%]明显增加(P均＜0.05).(2)与对照组相比,RH-IGF-1组脑组织病变减轻;干预48 h组Glu[SRH-IGF-1组(781.4±54.2)mg/kg,RH-IGF-1组(740.5±46.6)mg/kg],较对照组(1126.6±48.0)mg/kg明显降低(P均＜0.05);RH-IGF-1组凋亡细胞计数[24 h:(3.6±0.9)%,48 h(8.2±2.2)%,72 h(9.4±1.4)%],较对照组[24 h(7.6±1.9)%,48 h(12.6±1.6)%,72 h(13.9±0.4)%]明显降低(P均＜0.05),RH IGF-1 48 h、72 h组Bcl-2蛋白表达阳性率分别为71.4%,71.4%,较对照组14.2%,14.2%明显升高(P均＜0.05). 结论(1)IGF 1可明显降低损伤脑中Glu含量,阻断Glu的脑损伤途径.(2)IGF-1通过降低细胞凋亡、提高保护性Bcl-2蛋白表达以避免和改善HIBD,并呈剂量依赖效应.
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宫内缺氧所致Apgar评分正常的新生儿缺氧缺血性脑病
目的分析宫内缺氧所致Apgar评分正常的新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的临床特点及随访结果.方法2002年1月～12月我院收治的足月新生儿HIE 88例中,选择诊断为宫内缺氧所致HIE 30例进行分析.其诊断符合以下条件:(1)有宫内缺氧史,出生Apgar评分8～10分;(2)生后早期出现神经症状;(3)排除感染、遗传代谢及畸形等神经系统疾病;(4)头颅B超或CT有HIE特征性改变.结果本组病例生后第1天起均表现有轻度抑制症状,其中22例间歇出现兴奋症状.临床症状属轻度者17例(57%),中度13例(43%),无一例重度,与出生时有窒息的58例HIE比较差异无显著性.本组有不足40%病例有血尿素氮(BUN)增高,低钠、低钙、低糖血症,代谢性酸中毒等并发症,与出生有窒息的HIE比较也基本一致.分别分析了单纯急性及慢性缺氧病例的B超改变,发现两者有所不同.本组随访28例,出院后平均(11.7±3.8)个月,除一例脑瘫外,余体格、智能发育正常.B超复查20例,出生时侧脑室扩大4例、第3脑室扩大1例均恢复正常;出生时脑室不大,随访中出现脑室扩大者6例,其中1例为脑瘫,余者均恢复正常.结论胎儿有宫内缺氧史,新生儿出生时虽无窒息,但仍可发生HIE,头颅B超可见有胎儿期脑损害,个别病例可发生脑瘫.因此对生后无窒息但有宫内缺氧的患儿应加强监护,防止宫内缺氧,以减少HIE的发生.
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全身亚低温治疗中、重度新生儿缺氧缺血性脑病的效果及安全性
目的 探讨全身亚低温治疗中、重度新生儿缺氧缺血性脑病的临床疗效及安全性.方法 采取回顾性对照研究方法.选择2011年1月1日至201 5年5月31日福建省泉州市儿童医院收治并完成随访的75例中、重度缺氧缺血性脑病患儿,根据治疗措施分为常规治疗组33例和亚低温治疗组42例,分别在治疗前描记振幅整合脑电图,7日龄时行振幅整合脑电图和头颅MRI,14日龄时行新生儿行为神经评分,18月龄时采用标准化贝利婴幼儿发展量表测定智力发育指数和心理运动发育指数.同时,观察治疗期间的不良反应.采用两独立样本t检验和x2检验比较组间治疗效果及不良反应发生率的差异. 结果 亚低温治疗组无死亡病例,常规治疗组死亡6例.7日龄时亚低温治疗组头颅MRI正常的比例高于常规治疗组[43％(18/42)与18％(6/33),x2=4.814].存活患儿7日龄时亚低温治疗组振幅整合脑电图高电压和低电压分别为(31.3±2.4)和(13.5±2.1)μV,均高于治疗前[分别为(18.1±2.2)和(6.1±1.5) μV,t值分别为8.591和5.314],也均高于常规治疗组患儿7日龄时[分别为(25.2±3.1)和(9.3±3.1)μV,t值分别为6.376和4.725],差异均有统计学意义(P值均≤ 0.05).与常规治疗组相比,亚低温治疗组严重伤残发生率[21％ (9/42)与45％(15/33),x2=4.902]及病死率明显下降[0％(0/42)与18％(6/33),x2=6.098],14日龄时新生儿行为神经评分[(39.4±2.6)与(35.3±2.4)分,t=3.316]、1 8月龄时智力发育指数(96.3±13.2与84.3±10.6,t=7.893)和心理运动发育指数明显提高(98.2±16.8与85.4±13.2,t=8.753),差异均有统计学意义(P值均≤ 0.05).亚低温治疗过程中未发生寒冷损伤综合征,其他不良反应包括12例电解质紊乱,8例血糖异常,7例肝肾功能异常,6例感染和4例心动过缓,与常规治疗组差异均无统计学意义(P值均＞ 0.05). 结论 全身亚低温治疗可显著降低中、重度HIE患儿的病死率和严重伤残发生率,明显改善0～18月龄时的神经运动发育结局.
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高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠不同时期的影响
目的观察不同时期高压氧(HBO)对大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型的治疗疗效,分析其机制.方法32只7日龄Wistar大鼠制成HIBD模型,随机分为HIBD组(n=12)、HBO早治组(n=12)、HBO晚治组(n=8),并设假手术组(n=12).HBO早治组与晚治组分别于造模后4 h、14d应用HBO.各组动物(除HBO晚治组)于14日龄治疗结束后各处死6只,余同HBO晚治组喂养至28日龄,避暗法测试学习记忆能力后于30日龄处死.以脑组织海马CA1区形态学及学习记忆能力来判断干预效果.结果(1)HE染色:HIBD组各时间点左侧大脑海马CA1区锥体细胞排列紊乱、疏松,层次不清,与假手术组及HBO早治组差异明显;HBO晚治组与HIBD组相似,但神经元数目较之多.(2)微管相关蛋白(MAP-2)灰度值免疫组化定量:HIBD组不同时间点MAP-2阳性表达不同程度下降,与假手术组及HBO早治组差异显著(P＜0.01);HBO晚治组也较假手术组及早治组下降(P＜0.01),但较HIBD组表达多(P＜0.05).(3)学习记忆能力测试:HIBD组较假手术组明显下降(P＜0.05),而HBO早治组与晚治组均高于HIBD组.结论不论早期或晚期应用HBO治疗均能不同程度地减轻HIBD所致的海马CA1区组织学损伤,改善由HIBD引起的学习记忆能力下降,但早期治疗明显优于晚期治疗.
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新生儿缺氧缺血性脑病血浆肾上腺髓质素水平及其临床意义
目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)血浆肾上腺髓质素(ADM)水平的变化及临床意义.方法应用放射免疫法对60例HIE患儿和28例正常足月新生儿的血浆ADM水平进行动态观察.结果HIE患儿急性期血浆ADM水平较恢复期及正常对照组显著升高(P均＜0.05);HIE恢复期与对照组无显著性差异(P＞0.05);急性期重度HIE组明显高于对照组、轻度组及中度组,差异有显著性(P均＜0.05);轻、中度HIE组与对照组无显著性差异(P均＞0.05).结论ADM参与了新生儿HIE的发病过程;ADM可作为重度HIE的早期标志物;ADM在HIE中可能具有一定的神经保护作用.
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新生儿缺氧缺血性脑病血清白介素-1β和白介素-18测定及意义
目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)血清白介素(IL)-1β和IL-18的变化以及二者与HIE临床分度之间的关系.方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了70例HIE患儿(按临床分度分轻、中、重三组)及22例正常对照组足月新生儿第三天血清IL-1β和IL-18的水平.结果(1)HIE组新生儿血清IL-1β和IL-18均明显高于对照组(P＜0.05);(2)与正常对照组比较,中、重度HIE组血清IL-1β和IL-18水平明显增高(P＜0.01);轻度HIE组血清IL-1β、IL-18水平则与正常对照组无显著性差异(P＞0.05).HIE组间血清IL-1β及IL-18两两比较,中度与轻度组比较有显著性差异(P＜0.05);重度组与其他两组比较均明显升高(P＜0.01).结论急性期HIE患儿血清IL-1β和IL-18水平与HIE临床分度基本一致.因此,血清IL-1β和IL-18水平可作为辅助诊断HIE的指标,对协助HIE临床分度具有重要价值.
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新生期缺氧缺血性脑白质损伤大鼠模型比较研究
目的 探讨3种不同方式建立的新生期缺氧缺血性脑白质损伤大鼠模型的异同,为深入研究早产儿脑白质损伤选择理想的动物模型提供理论基础.方法 对3日龄Wistar大鼠采用3种不同的缺氧缺血方法建立脑白质损伤模型,分别为:左侧颈总动脉结扎伴低氧(6％O2) 30 min、左侧颈总动脉结扎伴低氧(6％O2)4 h和双侧颈总动脉结扎伴低氧(8％O2)30min.比较各组大鼠脑病理形态学变化、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫组织化学染色以及眼部变化.结果 左侧颈总动脉结扎伴低氧(6％O2)30min侧脑室周围白质组织结构稀疏模糊但无坏死灶；左侧脑室周围白质区GFAP免疫染色强度[(5 021.63 ±358.92) OD]增加程度低(P ＜0.000 1),MBP免疫染色强度[(18488.63 ±1 822.62) OD]降低程度低(P＜0.000 1)；左侧睁眼时间延迟.左侧颈总动脉结扎伴低氧(6％O2)4 h侧脑室周围白质区可见坏死灶；GFAP免疫染色强度为[(6 069.13 ±458.61) OD],MBP免疫染色强度为[(15003.38 ±1 559.11) OD];左侧睁眼时间延迟.双侧颈总动脉结扎伴低氧(8％O2)30 min双侧脑室周围白质区见囊性坏死灶；左侧GFAP 免疫染色强度[(6 194.50 ±432.69) OD]增加程度高(P ＜0.000 1),MBP免疫染色强度[(10119.35±735.16) OD]降低程度显著(P＜0.000 1)；双侧睁眼时间延迟且双眼出现白内障改变.结论 左侧颈总动脉结扎伴低氧30 min方法更适宜轻型脑白质损伤研究；左侧颈总动脉结扎伴低氧(6％O2)4 h及 双侧颈总动脉结扎伴低氧(8％O2) 30 min更适于严重的脑室周围白质软化病例研究.
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缺氧缺血性脑损伤新生大鼠基质金属蛋白酶-9和紧密连接蛋白occludin的表达变化
目的 研究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)mRNA及紧密连接(tightjunction,TJ)蛋白occludin mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中的作用和意义.方法 36只新生7日龄SD大鼠按照完全随机化方法分为对照组及HIBD 3h、6h、24h、48h、72h组,每组6只.观察HIBD后结扎侧大脑半球的大体形态变化,同时采用Real-time Q-PCR方法测定脑皮层组织MMP-9 mRNA和occludin mRNA的表达水平.结果 (1)新生大鼠HIBD后24～48 h结扎侧大脑半球脑水肿明显.(2)对照组大鼠MMP-9 mRNA表达水平极低(0.793 3±0.0859),在HIBD 3h组其表达开始增高(1.153 3±0.1291),24h达高峰(3.488 3±0.1759),72h仍维持较高的水平(1.6250±0.1157),与对照组比较,HIBD各时间点MMP-9 mRNA的表达均明显升高,差异有显著性(P＜0.05).(3)对照组大鼠occludin mRNA表达水平较高(21780±0.0773),在HIBD 3h组其表达开始降低(1.718 6±0.1168),24h降至低(0.9066±0.0602),72h仍维持较低水平(1.5966±0.0799),与对照组比较,HIBD各时间点occludin mRNA的表达均明显降低,差异有显著性(P＜0.05);(4)缺氧缺血后各时间点MMP-9mRNA的表达与occludin mRNA的表达呈负相关(γ=-0.815,P＜0.05).结论 脑缺氧缺血后MMP-9表达升高,TJ蛋白occludin表达减少,提示它们可能参与了HIBD的发病过程.
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新生儿尿8-异前列腺素F2α水平及其在缺氧缺血性脑病病情评估中的意义
目的测定正常新生儿尿8-异前列腺素F2 α(8-iso-PGF 2 α)水平,分析其在缺氧缺血性脑病(HIE)患儿病情评估中的意义.方法生后1、3、7 d天收集正常新生儿(126例)和HIE患儿(151例)尿液,应用EIA法检测8-iso-PGF 2 α含量.结果(1)正常新生儿生后1周内尿8-iso-PGF2 α水平为(28.3±9.5)ng/mmol·Cr.(2)病程第1天,轻、中、重度HIE患儿尿8-iso-PGF2α水平分别为(65.3±13.2)、(154.6±31.6)和(241.7±41.0)ng/mmol·Cr,差异有统计学意义(P＜0.01),且均高于正常新生儿水平(P＜0.01);病程第3天,轻度HIE患儿下降至正常新生儿水平(P＞0.05),而中、重度HIE患儿仍高于正常新生儿水平(P＜0.01);病程第7天,HIE患儿及正常新生儿之间无明显差异(P＞0.05).(3)以尿8-iso-PGF2α45.5、91.7和217.5 ng/mmol·Cr作为区分正常与轻度HIE、轻度与中度HIE、中度与重度HIE的界限,其敏感性和特异性分别为95.2%和99.2%、100%和95.2%、65.8%和100%.结论生后1周内正常新生儿尿8-iso-PGF2 α水平相对稳定;HIE患儿尿8-iso-PGF 2α峰值于病程第1天出现,升高程度与病情严重性相关,是一项评估患儿病情可靠的生化指标.
关键词： 8-异前列腺素F2α 脑病 缺氧缺血 婴儿 新生 -
新生大鼠缺氧缺血性脑损伤血管内皮生长因子表达与新生血管形成关系的研究
目的 观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后不同时间脑组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达以及血管新生情况,探讨HIBD时脑组织VEGF蛋白表达与血管新生之间的相互关系.方法 7日龄Wistar大鼠176只随机分成实验组(n=88)和对照组(n=88),两组分别在缺氧缺血(HI)后0、4、8、12、24、48、72 h及7、14、21、28 d(每个时间点8只)应用免疫组织化学染色方法检测VEGF蛋白的表达及血管新生情况.结果 正常7日龄Wistar大鼠于脑组织多种细胞的胞浆中可见VEGF表达,9日龄时达高峰;HIBD后VEGF蛋白于HI后4 h表达逐渐增加,于48 h达高峰后逐渐下降,并且于HI后4 h～14 d VEGF表达明显高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).正常新生大鼠脑皮质中新生毛细血管数各时间点平均为3～8条/HP;而实验组于HI后3～28 d的新生血管数为10～12条/HP,显著多于对照组(P＜0.01),并于HI后4～72 h VEGF表达程度与新血管形成之间呈显著正相关(r=0.928,P＜0.05).结论 正常7～35日龄新生大鼠脑组织内有不同程度的VEGF蛋白表达,HI可诱导VEGF表达增加;VEGF参与了HIBD后脑组织新生血管的形成.
