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自噬与2型糖尿病的关系及中药的干预作用
胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)和胰岛β细胞分泌功能缺陷是诱导2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)发生的主要机制,而线粒体受损是参与IR和胰岛β细胞损伤的重要环节,研究显示自噬作为一种细胞的自我保护机制,在维持胰岛β细胞结构和功能、改善IR等方面发挥着重要作用.近期研究表明中药可通过调节细胞自噬,进而改善胰岛β细胞和胰岛素抵抗,对2型糖尿病及其并发症起到防治作用.该文将就自噬与2型糖尿病的关系及中药的干预作用的研究进展做综述.
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自噬调控肾脏衰老的分子机制及中药的干预作用
衰老是生物体在遗传和环境等多种因素共同作用下而逐渐发生的组织、器官功能性衰退.自噬是真核细胞由溶酶体介导而降解细胞质成分的过程.肾脏是典型的衰老靶器官.自噬可以调控肾脏衰老,自噬水平降低就会加速肾脏衰老,反之,自噬水平升高就能延缓肾脏衰老.在这一肾脏衰老的调控过程中,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及其相关信号途径,包括腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)/mTOR、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)／丝氨酸-苏氨酸激酶(serine-threonine kinase,Akt)/mTOR、AMPK/沉默信息调节因子1(silent information regulation 1,Sirtl)和转化生长因子β(transforming growth factorβ3,TGF-β)等通路发挥了重要作用.在体内调控这些信号途径的关键信号分子就可以干预肾脏衰老.一些经典的补肾、活血类中药及其提取物,如冬虫夏草(Cordyceps sinensis)、姜黄素(curcumin)、白藜芦醇(resveratrol)等对肾脏衰老和／或肾脏自噬具备有益的影响.因此,基于自噬调控的分子机制揭示中药抗肾脏衰老的药理作用是今后的发展方向之一.
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自噬调控慢性粒细胞白血病干细胞功能的研究进展
白血病干细胞具有自我更新和多向分化的潜能,参与了慢性粒细胞白血病的病程发展,是导致患者耐药和复发的重要原因之一.自噬作为一种保守的溶酶体降解途径,参与细胞内降解和循环途径,在维持细胞内环境稳态和功能方面起着关键作用.研究表明,自噬参与了白血病干细胞的分化调控,与慢性粒细胞白血病的化疗敏感性密切相关.该文就自噬对慢性粒细胞白血病化疗敏感性和干细胞功能的调控进行了系统综述,为靶向自噬的抗白血病药物的开发奠定基础.
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衰老的分子调控机制及中药的干预作用
衰老(aging)是生物体组织、器官以及细胞功能随时间而逐渐丧失的渐进过程.有关衰老分子机制的学说包括经典的"端粒(telomere)学说"、"氧自由基(oxygen radical)学说"、"非酶糖基化(nonenzymatic glycosylation)学说"等,还有新近提出的"DNA甲基化(DNA methylation)学说"、"线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)学说"、"自噬(autophagy)学说"等.新的研究表明,自噬是造血干细胞对抗衰老的一种有效措施.近年来,基于衰老的分子调控机制而发现了一些很有前途的抗衰老药物,如烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)和抗衰老肽——FOXO4-DRI.此外,在植物提取物领域中也有很多新发现,其中,以姜黄素(curcumin)、白藜芦醇(resveratrol)为代表的中药提取物以及一些单味中药、经典的中药复方可以在体内外干预人类衰老的分子调控机制而发挥一定的抗衰老作用.总之,基于衰老分子调控机制而研制或发掘抗衰老药物,尤其是天然药物,这是抗衰老研究领域的主要发展方向之一.
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大黄酸调控mTOR信号通路活性抑制肾小管上皮细胞自噬蛋白表达的分子机制
目的:探讨大黄酸抑制饥饿诱导的肾小管上皮(NRK-52E)细胞自噬蛋白的作用和分子机制.方法:用Hank's平衡盐溶液(Hank's balanced salt solution,HBSS)诱导NRK-52E细胞产生饥饿状态,在干预后的各时间点(0,0.5,1,2,6 h),首先,检测细胞自噬标志性蛋白——哺乳动物同族物微管相关蛋白1轻链3 (microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)Ⅰ/Ⅱ的表达水平;其次,检测细胞哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达及其磷酸化水平(phos-phorylated-mTOR Ser2448,p-mTOR S2448);然后,以大黄酸(5 mg· L-1)、HBSS(1 mL)以及mTOR抑制剂雷帕霉素(100 nmol·L-1)单独或联合干预,分别检测其LC3 Ⅰ/Ⅱ,mTOR,p-mTOR S2448蛋白表达水平的变化.结果:HBSS诱导NRK-52E细胞LC3Ⅱ蛋白高表达、p-mTOR S2448蛋白低表达;大黄酸与HBSS联合干预可以逆转HBSS诱导的NRK-52E细胞LC3 Ⅱ和p-mTORS2448蛋白表达水平;雷帕霉素与大黄酸、HBSS联合干预可以恢复HBSS诱导的NRK-52E细胞LC3 Ⅱ蛋白表达水平.结论:HBSS抑制mTOR信号通路活性而诱导肾小管上皮细胞发生自噬;大黄酸调控mTOR信号通路活性而抑制肾小管上皮细胞白噬蛋白的表达,这可能就是其干预细胞自噬的作用和分子机制.
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健脾养正消癥方对裸鼠胃癌皮下移植瘤细胞凋亡的影响及自噬机制的实验研究
目的 观察健脾养正消癥方对人胃癌MGC-803细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤抑瘤率的影响及可能的分子机制.方法 取胃癌MGC-803细胞接种于裸鼠皮下,制备裸鼠移植性胃癌模型.32只BALB/c裸鼠按随机数字表法分为阴性对照组、阳性对照组和健脾养正消瘕方高、低剂量组,每组8只.阴性对照组给予生理盐水灌胃,阳性对照组给予5-氟尿嘧啶(5-Fu,2.5 mg/kg)灌胃,健脾养正消瘕方高、低剂量组分别以85、43 g/kg灌胃,每天1次,连续10天.观察健脾养正消瘕方对裸鼠皮下移植瘤抑瘤率的影响;采用RT-PCR法观察该复方对移植瘤中Bax、Bcl-2、Fas、Cyclin D1、Cyclin D2和Cyclin D3基因表达的影响;采用Western Blot法观察该复方对移植瘤中procaspase-3、procaspase-8和procaspase-9、cleaved-PARP、Beclin-1和LC3B蛋白表达的影响.结果 (1)与阴性对照组比较,阳性对照组和健脾养正消癥方高、低剂量组瘤重明显减轻(P＜0.05),健脾养正消瘕方高、低剂量组瘤重均高于阳性对照组(P＜0.05).(2) RT-PCR显示:与阴性对照组比较,阳性对照组和健脾养正消瘕方高、低剂量组Bax表达上调,Bcl-2、Cyclin D1、Cyclin D2和Cyclin D3表达下调(均P＜0.05),阳性对照组及健脾养正消瘕方高剂量组Fas表达上调(P＜0.05);与阳性对照组比较,健脾养正消癥方高、低剂量组Fas、Bax表达均下调,Bcl-2、Cyclin D2和Cyclin D3表达上调(均P＜0.05),健脾养正消瘕方高剂量组Cyclin D1下调,低剂量组Cyclin D1上调(均P＜0.05).(3) Western blot显示:与阴性对照组比较,健脾养正消癥方高、低剂量组procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9蛋白表达下调,cleaved-PARP、Beclin-1、LC3BⅡ蛋白表达上调(均P＜0.05);阳性对照组procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9和LC3BⅡ蛋白表达下调,cleaved-PARP、Beclin-1和LC3B Ⅰ蛋白表达上调(均P＜0.05).结论 健脾养正消瘕方对胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤有显著的抑制作用,其作用可能与其激活凋亡、自噬相关因子有关.
关键词： 健脾养正消癥方 胃癌MGC-803细胞 皮下移植瘤 凋亡 自噬 -
疏肝健脾方对肝纤维化大鼠自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的影响
目的 观察疏肝健脾方对肝纤维化大鼠自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的影响.方法 将60只SD大鼠,随机分为正常组、模型组、疏肝健脾方(1.5、3.0、6.0 g/kg)组和阳性药秋水仙碱(0.1×10-3 g/kg)组,每组10只.除正常组外,其余各组采用50％四氯化碳(CCl4)每周2次,连续12周皮下注射的方法,诱导肝纤维化大鼠模型.造模后第7周,灌胃给予不同剂量的疏肝健脾方和秋水仙碱,正常组和模型组给予等量溶媒,每天1次,连续6周.HE和Masson染色观察肝脏病理组织学损伤程度,免疫组化法检测肝组织中Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠肝脏病理组织学损伤程度明显加重,肝组织中Collagen Ⅰ、α-SMA、Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P＜0.01);与模型组比较,疏肝健脾方(3.0、6.0 g/kg)组和秋水仙碱组肝组织损伤减轻,胶原纤维沉积减少(P ＜0.05,P＜0.01),Collagen Ⅰ、α-SMA、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 疏肝健脾方具有抗肝纤维化作用,其机制与减少细胞自噬,降低能量的生成,从而抑制肝星状细胞活化有关.
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灵猫方抑制饥饿诱导HepG 2.2.15细胞自噬研究
目的 研究灵猫方对饥饿诱导HepG2.2.15细胞自噬的作用.方法 选取15只SD大鼠制备灵猫方药物血清,设立厄尔平衡盐缓冲液(Earle's balanced salt solution,EBSS)组、EBSS+空白血清组、EBSS+5倍药物血清组、EBSS+10倍药物血清组及DMEM组,每组3个样本.培养HepG2.2.15细胞1、2、4及6 h,构建pEGFP-N1-LC3B表达载体,转染HepG2.2.15细胞,在荧光显微镜下观察细胞浆中GFP-LC3B分布表达变化,计算点状样GFP-LC3B的细胞数与GFP-LC3B转染HepG2.2.15细胞数比值.透射电镜观察各组HepG2.2.15细胞浆内自噬体.Western Blot检测各组HepG2.2.15细胞LC3BⅡ/Ⅰ比值(microtubule-associated protein 1 light chain 3 betaⅡ/Ⅰ).结果 培养2h时,与EBSS+空白血清组比较,EBSS+5倍药物血清、EBSS+ 10倍药物血清明显抑制GFP-LC3B由散在分布向点状分布改变(P＜0.01),电子透射电镜显示EBSS+5倍药物血清组、EBSS+ 10倍药物血清组抑制自噬体形成,Western Blot检测显示EBSS+ 10倍药物血清组LC3BⅡ/Ⅰ比值较EBSS+空白血清组明显下降(P＜0.01).结论 灵猫方药物血清抑制饥饿诱导HepG2.2.15的自噬.
关键词： 灵猫方 HepG2.2. 15细胞 自噬 -
痰瘀同治方对缺氧复氧诱导心肌细胞AMPK-mTOR自噬信号通路的影响及机制
目的 研究痰瘀同治方对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞自噬的影响及AMPK-mTOR信号通路在其中可能发挥的作用.方法 体外培养H9C2心肌细胞,随机分为空白对照组、H/R模型组(缺氧10h后复氧2h)、痰瘀同治方组、血府逐瘀汤组及栝蒌薤白半夏汤组,各组给予相应方剂肠吸收液18 mg/mL孵育2h后H/R处理.电镜下观察细胞自噬体结构,检测细胞上清液中LDH释放量和SOD活性,蛋白免疫印迹测定细胞内LC3、Beclin-1、P-AMPK和P-mTOR蛋白表达.结果 心肌细胞缺氧复氧后自噬体形成并增多.与空白对照组比较,H/R模型组心肌细胞LDH含量、LC3及Beclin-1蛋白表达量增加,p-AMPK表达增强,SOD活性下降且p-mTOR表达减弱(P ＜0.05,P＜0.01).与H/R模型组比较,各中药组干预后均能降低LDH、Beclin-1表达,痰瘀同治方组与血府逐瘀汤组可同时提高SOD活性,抑制LC3高表达(P ＜0.05,P＜0.01).同时痰瘀同治方组与血府逐瘀汤组可下调p-AMPK水平,并上调p-mTOR蛋白表达(P ＜0.05,P＜0.01).结论 缺氧复氧可激活心肌细胞AMPK-mTOR信号通路,从而诱导自噬过度表达加重心肌损伤,痰瘀同治方可通过调控AMPK-mTOR信号通路、抑制自噬而起到心肌保护作用.
关键词： 痰瘀同治方 缺氧复氧 自噬 腺苷单磷酸活化蛋白激酶 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 -
姜黄素对帕金森病小鼠运动障碍和多巴胺能神经元存活的影响及机制研究
目的 观察姜黄素对帕金森病小鼠运动障碍的影响以及对多巴胺能(DA)神经元的保护作用并探讨其作用机制.方法 50只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组、姜黄素组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组和姜黄素+3-MA组,每组10只.模型组采用1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射建立帕金森病模型,姜黄素组、3-MA组、姜黄素+3-MA组在MPTP腹腔注射的同时分别予姜黄素、3-MA以及姜黄素联合3-MA腹腔注射,正常对照组腹腔注射无菌生理盐水.各组小鼠在后一次药物注射后1、7、14d进行爬杆、悬挂、旷场实验等行为学测试,14d时处死取中脑黑质脑组织行酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色观察DA神经元存活数目,Western blot检测α-突触核蛋白(α-Syn)和自噬特异蛋白LC3-Ⅱ的表达.结果 与正常对照组比较,1、7、14d时模型组小鼠爬杆时间均延长(P＜0.01),悬挂实验分值均降低(P＜0.01),旷场实验总距离及平均速度均减少(P＜0.01),小鼠黑质DA神经元存活数目减少(P＜0.01),α-Syn和LC3-Ⅱ蛋白表达均增加(P＜0.01).与模型组比较,7、14 d时姜黄素组爬杆时间缩短(P ＜0.05,P＜0.01),悬挂实验分值、旷场实验总距离及平均速度均增加(P ＜0.05,P＜0.01),黑质DA神经元存活数目增加(P＜0.01),α-Syn蛋白表达下调(P＜0.01),LC3-Ⅱ蛋白表达增加(P＜0.01).与模型组比较,14d时3-MA组小鼠爬杆时间延长(P＜0.01),旷场实验总距离及平均速度均减少(P＜0.05),黑质DA神经元存活数目减少(P＜0.05),α-Syn蛋白表达增加(P＜0.05),LC3-Ⅱ蛋白表达下调(P＜0.05).姜黄素+3-MA组上述结果与模型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 姜黄素可改善帕金森病小鼠的运动障碍,保护DA神经元,通过增加细胞自噬功能从而促进α-Syn的自噬性清除可能是其主要作用机制.
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苦参碱诱导人白血病耐药细胞K562/IM自噬和凋亡的研究
目的 观察苦参碱对人白血病耐药细胞K562/IM自噬和凋亡的影响.方法 (1)苦参碱及伊马替尼对细胞增殖及自噬情况检测:分别设空白对照组、不同浓度(0.25、0.50、1.00、2.00、5.00 mg/mL)苦参碱组和(0.05、0.25、0.50、5.00、20.00 μmol/L)伊马替尼组,MTF检测K562细胞和K562/IM细胞抑制率.分别设置空白对照组、0.4 mg/mL苦参碱组和0.5 μmol/L伊马替尼组,免疫荧光激光共聚焦检测K562细胞和K562/IM细胞自噬现象,Western Blot检测细胞中自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62的表达.(2)苦参碱联合3-甲基腺嘌呤(3-MA)或雷帕霉素(rapamycin,Rapa)诱导K562/IM细胞自噬及凋亡情况变化的检测:实验分6组,空白对照组、苦参碱组(0.4 mg/mL苦参碱处理)、3-MA组(5 mmol/L3-MA处理)、Rapa组(0.5 μmol/L Rapa处理)、苦参碱+3-MA组(0.4 mg/mL苦参碱+5 mmol/L3-MA处理)、苦参碱+ Rapa组(0.4 mg/mL苦参碱+0.5 iμmol/L Rapa处理),采用MTT检测细胞的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Western Blot检测细胞自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62及凋亡相关蛋白Caspase-3表达.结果 (1)苦参碱和伊马替尼作用K562、K562/IM细胞,细胞增殖受抑制明显(P＜0.05),LC3-Ⅱ/Ⅰ的聚集明显增加,Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达升高,P62蛋白表达减少(P＜0.05),以K562/IM细胞更明显(P＜0.05).(2)苦参碱组K562/IM细胞增殖抑制率(36.32±2.21)％,凋亡率(15.35±0.39)％.苦参碱+3-MA组K562/IM细胞增殖抑制率升高[(65.25±2.06)％,P＜0.01)],凋亡率升高[(21.70±0.48)％,P ＜0.05],同时Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达下降,P62蛋白表达增强,Caspase-3表达增强(P＜0.05);而苦参碱+Rapa组作用则相反.结论 苦参碱和伊马替尼均可抑制K562、K562/IM细胞增殖的同时可诱导自噬,以耐药K562/IM细胞株自噬明显.通过3-MA抑制自噬可增强苦参碱对细胞K562/IM作用的敏感性,而雷帕霉素减弱苦参碱作用.
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蝎毒多肽提取物联合雷帕霉素增强H22肝癌细胞自噬作用的机制研究
目的 观察蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)联合雷帕霉素(Rapamycin)对H22肝癌肿瘤细胞自噬的增强作用并探讨其作用机制.方法 40只昆明小鼠,采用皮下接种H22肝癌肿瘤细胞悬液法建立荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组、PESV高剂量组、PESV低剂量组及联合组(PESV高剂量加雷帕霉素),每组10只.PESV高、低剂量组分别予20 mg/kg、10 mg/kg的PESV灌胃,联合组予雷帕霉素(2 mg/kg)及PESV(20 mg/kg)灌胃,连续给药干预14天,隔日测量肿瘤体积,记录肿瘤生长曲线,计算抑瘤率.HE染色观察各组肿瘤组织病理变化.免疫组织化学法检测各组肿瘤组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammal target of rapamycin,mTOR)、UNC51样激酶1(UNC-51-like kinase-1,ULK1)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1 LC3A)及B淋巴细胞瘤蛋白质-2-相互作用蛋白质-1(Bec1in1)蛋白表达水平.结果 与荷瘤对照组比较,PESV高、低剂量组及联合组肿瘤生长受到明显抑制(P＜0.05);与PESV高、低剂量组比较,联合组瘤重及体积明显减小(P＜0.05),PESV高、低剂量组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).免疫组织化学法显示,与荷瘤对照组比较,PESV高、低剂量组及联合组mTOR表达水平降低(P＜0.05),ULK1、MAP1LC3A及Beclin1蛋白表达水平升高(P ＜0.05,P＜0.01).与PESV高剂量组比较,联合组ULK1、MAP1 LC3A及Beclin1蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).结论 蝎毒多肽提取物联合化疗可能是通过抑制mTOR的活性,增强自噬相关蛋白ULK1、MAP1 LC3A及Beclin1的表达,促进细胞自噬从而抑制肿瘤的发展.
关键词： 自噬 蝎毒多肽提取物 雷帕霉素 H22肝癌细胞移植瘤 -
心血管疾病中医药调节的“新靶点”:自噬——由2016年诺贝尔医学奖引发的思考
心血管疾病是我国居民首要死亡原因.目前,基于“病证结合”的中西医结合治疗已经成为心血管疾病的主要治疗模式,中医药干预能够延缓心血管疾病的进程,改善生活质量和降低心血管事件的发生率.然而,中医药治疗心血管疾病的靶点与机制还不够明确.研究表明,自噬对心血管疾病如心肌梗死、心力衰竭等的发生、发展有重要作用,是调节心血管疾病的“新靶点”.本文对中医药通过自噬调节心血管疾病的研究进行述评,为中医药治疗心血管疾病提供依据.
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百会透曲鬓针刺法对脑出血大鼠自噬相关蛋白LC3A/B的影响研究
目的:观察"百会透曲鬓"针刺法对脑出血大鼠自噬相关蛋白LC3A/B表达的影响.方法:采用自体血注射的方法制作脑出血Wistar大鼠模型,将大鼠随机分为5组(空白对照组、模型对照组、抑制剂组、针刺组、抑制剂+针刺组),每组12只,再将各组随机分为4个时间亚组(造模后12h、24h、72h、7d),每亚组3只.空白对照组、模型对照组和抑制剂组分别在相应时间节点取材;抑制剂组于造模前15min注射3-甲基腺嘌呤(3-MA)自噬抑制剂,针刺组和抑制剂+针刺组于造模成功后6h开始以"百会透曲鬓"针刺法针刺,1次/24 h,并于相应时间节点取材.分别于造模前和造模后6h及处死前对大鼠神经功能进行评分,并用免疫组化的方法分析自噬相关蛋白LC3A/B的表达变化.结果:神经功能评分:造模前大鼠神经功能均为正常,造模后出现神经功能缺损症状,针刺组于处死前有改善且与干预时间成正相关,免疫组化结果显示:LC3A/B的病理变化表达在细胞质中,而在相同时间点,其程度高低依次为针刺组、模型组、抑制剂+针刺组,空白对照组和抑制剂组程度相似且明显低于前三组.结论:"百会透曲鬓"针刺法对脑出血后大鼠的神经功能缺损有改善作用且对自噬相关蛋白LC3A/B的表达有一定影响.
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浅谈“以补开塞”防治动脉粥样硬化与线粒体自噬的关系
自噬是指细胞在外界环境的作用下,在溶酶体内降解受损的细胞器及生物大分子以维持细胞稳定性的过程,细胞自噬参与多种心血管疾病的发生发展过程.动脉粥样硬化作为心血管疾病的主要病因,其发病过程十分复杂,病因病机也尚不完全明确.以脾-线粒体相关性理论为基础,从塞因塞用、以补开塞角度浅谈动脉粥样硬化与自噬的关系,认为自噬可双向干预动脉粥样硬化.
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左归丸、右归丸与骨髓间充质干细胞自噬
对自噬产生的生理病理机制及中医学阴阳理论进行相关理论分析,探讨细胞自噬的阴阳关系,认为细胞自噬的平衡与阴阳平衡相似.浅析左归丸与右归丸治疗骨质疏松症的中医相关理论,并将其可能的机制与骨髓间充质干细胞自噬相联系,为中医药防治骨质疏松症提供细胞层面的新研究方向.
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从中医阴阳理论探讨神经细胞自噬现象对阿尔茨海默病的影响
自噬是普遍存在于真核细胞中的一种生命现象,是其特有的一种自我保护机制.细胞自噬以其特异的清除和代谢途径与中医阴阳理论的相互为用、相互制约有着相似的内涵.自噬也可能诱导细胞的主动死亡,在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发病机制和多个病理环节中均有参与的迹象,我们试从中医阴阳理论探讨细胞自噬与AD之间的相互关系.
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稳斑汤含药血清对巨噬细胞泡沫化自噬相关蛋白LC3B和Beclin1表达的影响
目的 探讨稳斑汤防治动脉粥样硬化的可能作用机制.方法 20只SD大鼠随机分为空白组及稳斑汤低、中、高浓度组各5只.稳斑汤低、中、高浓度组分别给予稳斑汤4.275、8.55、17.1 g/(kg·d)灌胃,空白组给予4 ml蒸馏水灌胃,每天1次,连续灌胃7天.灌胃第8天腹主动脉取血,离心后分离血清.体外培养小鼠巨噬细胞,分为空白对照组、模型组、雷帕霉素组及稳斑汤低、中、高浓度组,每组6孔.除空白对照组外其余各组均进行巨噬细胞泡沫化.空白对照组及模型组予10％大鼠空白血清培养;雷帕霉素组用雷帕霉素10μl/孔(终浓度10 nmol/L)培养;稳斑汤低、中、高浓度组分别用10％稳斑汤低、中、高浓度含药血清200μl/孔培养.48h后收集细胞,在透射电镜下观察各组细胞自噬体的变化,Western Blot法检测各组细胞LC3B和Beclin 1蛋白表达水平.结果 透射电镜下观察到,空白对照组无明显自噬体出现,模型组可见少量自噬体出现;与模型组比较,稳斑汤各浓度组与雷帕霉素组的自噬体数量均明显增加,雷帕霉素组数量更多.与空白对照组比较,其余各组LC3B和Beclin 1蛋白表达水平均升高(P＜0.05);与模型组比较,稳斑汤各浓度组及雷帕霉素组LC3B和Beclin 1蛋白表达水平均升高(P＜0.05);与雷帕霉素组比较,稳斑汤高浓度组LC3B和Beclin 1蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 稳斑汤含药血清能够上调巨噬细胞泡沫化自噬相关蛋白LC3B和Beclin 1表达,促进泡沫化的巨噬细胞的自噬,从而抑制巨噬细胞泡沫化的进展,这可能是稳斑汤防治动脉粥样硬化的分子机制之一.
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蒙药额尔敦-乌日勒预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织自噬相关蛋白表达的影响
目的 探讨蒙药额尔敦-乌日勒预处理抗心肌缺血再灌注损伤的可能作用机制.方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、复方丹参滴丸组和蒙药高、中、低剂量组,每组10只.蒙药高、中、低剂量组分别给予蒙药混悬液每次1.2、0.6、0.3 g/kg灌胃,复方丹参滴丸组给予复方丹参滴丸溶液每次0.5 g/kg灌胃,假手术组和模型组给予等体积蒸馏水,均每日2次,连续给药2周.末次给药12h后,除假手术组只穿线不结扎外,其余各组均采用左冠状动脉前降支结扎法制备心肌缺血再灌注损伤模型.造模成功后HE染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化,免疫组化检测心肌组织中自噬相关蛋白Beclin1和微管相关蛋白轻链3蛋白Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白表达,Western blot法检测心肌组织中Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白及PI3K-Akt-mTOR信号通路相关蛋白的表达. 结果 与模型组比较,各给药组能够不同程度改善大鼠心肌组织的病理形态;蒙药中、高剂量组大鼠心肌组织中LC3-Ⅱ及Beclin1蛋白表达均较模型组下降(P＜0.05);蒙药中、高剂量组大鼠心肌组织中PI3K-Akt-mTOR信号通路相关蛋白相对表达量较模型组均升高(P＜0.05).结论 蒙药额尔敦-乌日勒可减轻心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织损伤程度,可能与其下调自噬相关蛋白LC3-Ⅱ及Beclin1的表达,从而激活PI3 K-Akt-mTOR信号通路有关.
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人参三七川芎醇提物对衰老人心脏微血管内皮细胞自噬的影响
目的 观察人参三七川芎醇提物延缓内皮细胞衰老的可能作用机制.方法 实验分为衰老细胞组、自噬模型组、白藜芦醇组、人参三七川芎醇提物组,除衰老细胞组外,其余各组的衰老人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)通过饥饿方法建立自噬模型.白藜芦醇组用10μmol/L白藜芦醇溶液培养,人参三七川芎醇提物组用100 mg/L人参三七川芎提取物溶液培养48 h.采用电子显微镜观察细胞中自噬小体的形态学改变,western blot法检测自噬蛋白Beelin1、LC3B表达情况.结果 与自噬模型组比较,人参三七川芎醇提物组和白藜芦醇组细胞质中出现较多的独立双层及多层膜结构的自噬体.与自噬模型组比较,人参三七川芎醇提物组和白藜芦醇组Beclin1、LC3B蛋白表达明显增多(P＜0.01),且白藜芦醇组Beclin1、LC3B蛋白的表达明显多于人参三七川芎醇提物组(P＜0.01).结论 人参三七川芎醇提物可促进衰老内皮细胞自噬体的产生及自噬蛋白的表达,这可能是其延缓内皮衰老的重要机制之一.
