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痰瘀同治方对缺氧复氧诱导心肌细胞AMPK-mTOR自噬信号通路的影响及机制
目的 研究痰瘀同治方对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞自噬的影响及AMPK-mTOR信号通路在其中可能发挥的作用.方法 体外培养H9C2心肌细胞,随机分为空白对照组、H/R模型组(缺氧10h后复氧2h)、痰瘀同治方组、血府逐瘀汤组及栝蒌薤白半夏汤组,各组给予相应方剂肠吸收液18 mg/mL孵育2h后H/R处理.电镜下观察细胞自噬体结构,检测细胞上清液中LDH释放量和SOD活性,蛋白免疫印迹测定细胞内LC3、Beclin-1、P-AMPK和P-mTOR蛋白表达.结果 心肌细胞缺氧复氧后自噬体形成并增多.与空白对照组比较,H/R模型组心肌细胞LDH含量、LC3及Beclin-1蛋白表达量增加,p-AMPK表达增强,SOD活性下降且p-mTOR表达减弱(P ＜0.05,P＜0.01).与H/R模型组比较,各中药组干预后均能降低LDH、Beclin-1表达,痰瘀同治方组与血府逐瘀汤组可同时提高SOD活性,抑制LC3高表达(P ＜0.05,P＜0.01).同时痰瘀同治方组与血府逐瘀汤组可下调p-AMPK水平,并上调p-mTOR蛋白表达(P ＜0.05,P＜0.01).结论 缺氧复氧可激活心肌细胞AMPK-mTOR信号通路,从而诱导自噬过度表达加重心肌损伤,痰瘀同治方可通过调控AMPK-mTOR信号通路、抑制自噬而起到心肌保护作用.
关键词： 痰瘀同治方 缺氧复氧 自噬 腺苷单磷酸活化蛋白激酶 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 -
水飞蓟宾通过调控AMPK活性抑制自由脂肪酸诱导的肝细胞炎症因子分泌
目的 研究水飞蓟宾对自由脂肪酸(FFA)诱导肝细胞炎症因子分泌的抑制作用,并探讨其是否通过调节腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路实现.方法 将HepG2细胞分为对照组、模型组和水飞蓟宾组.水飞蓟宾组(80和160μm01·L-1)预孵育HepG2细胞4h后,用500 μmol·L-1的FFA处理HepG2细胞24 h.Real-time PCR和Elisa法测定炎症因子IL-1β扣TNF-α的mRNA及蛋白表达,油红O染色检测脂质生成情况,Western Blot测定AMPK和p-AMPK的蛋白相对表达量.用AMPK抑制剂或水飞蓟宾孵育细胞后用FFA处理,Elisa法测定炎症因子的生成情况.结果 水飞蓟宾组可降低FFA诱导炎症因子生成增加,降低肝细胞中脂质含量的积累.Western Blot测定结果发现,水飞蓟宾可增加AMPK的磷酸化,AMPK抑制剂可逆转水飞蓟宾对炎症因子生成的抑制作用.结论 水飞蓟宾组可通过AMPK信号通路抑制FFA诱导肝细胞炎症因子的表达.
关键词： 水飞蓟宾 非酒精性脂肪肝 炎症因子 腺苷单磷酸活化蛋白激酶
