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苦参碱诱导人白血病耐药细胞K562/IM自噬和凋亡的研究
目的 观察苦参碱对人白血病耐药细胞K562/IM自噬和凋亡的影响.方法 (1)苦参碱及伊马替尼对细胞增殖及自噬情况检测:分别设空白对照组、不同浓度(0.25、0.50、1.00、2.00、5.00 mg/mL)苦参碱组和(0.05、0.25、0.50、5.00、20.00 μmol/L)伊马替尼组,MTF检测K562细胞和K562/IM细胞抑制率.分别设置空白对照组、0.4 mg/mL苦参碱组和0.5 μmol/L伊马替尼组,免疫荧光激光共聚焦检测K562细胞和K562/IM细胞自噬现象,Western Blot检测细胞中自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62的表达.(2)苦参碱联合3-甲基腺嘌呤(3-MA)或雷帕霉素(rapamycin,Rapa)诱导K562/IM细胞自噬及凋亡情况变化的检测:实验分6组,空白对照组、苦参碱组(0.4 mg/mL苦参碱处理)、3-MA组(5 mmol/L3-MA处理)、Rapa组(0.5 μmol/L Rapa处理)、苦参碱+3-MA组(0.4 mg/mL苦参碱+5 mmol/L3-MA处理)、苦参碱+ Rapa组(0.4 mg/mL苦参碱+0.5 iμmol/L Rapa处理),采用MTT检测细胞的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Western Blot检测细胞自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62及凋亡相关蛋白Caspase-3表达.结果 (1)苦参碱和伊马替尼作用K562、K562/IM细胞,细胞增殖受抑制明显(P＜0.05),LC3-Ⅱ/Ⅰ的聚集明显增加,Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达升高,P62蛋白表达减少(P＜0.05),以K562/IM细胞更明显(P＜0.05).(2)苦参碱组K562/IM细胞增殖抑制率(36.32±2.21)％,凋亡率(15.35±0.39)％.苦参碱+3-MA组K562/IM细胞增殖抑制率升高[(65.25±2.06)％,P＜0.01)],凋亡率升高[(21.70±0.48)％,P ＜0.05],同时Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达下降,P62蛋白表达增强,Caspase-3表达增强(P＜0.05);而苦参碱+Rapa组作用则相反.结论 苦参碱和伊马替尼均可抑制K562、K562/IM细胞增殖的同时可诱导自噬,以耐药K562/IM细胞株自噬明显.通过3-MA抑制自噬可增强苦参碱对细胞K562/IM作用的敏感性,而雷帕霉素减弱苦参碱作用.
