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灵猫方抑制饥饿诱导HepG 2.2.15细胞自噬研究
目的 研究灵猫方对饥饿诱导HepG2.2.15细胞自噬的作用.方法 选取15只SD大鼠制备灵猫方药物血清,设立厄尔平衡盐缓冲液(Earle's balanced salt solution,EBSS)组、EBSS+空白血清组、EBSS+5倍药物血清组、EBSS+10倍药物血清组及DMEM组,每组3个样本.培养HepG2.2.15细胞1、2、4及6 h,构建pEGFP-N1-LC3B表达载体,转染HepG2.2.15细胞,在荧光显微镜下观察细胞浆中GFP-LC3B分布表达变化,计算点状样GFP-LC3B的细胞数与GFP-LC3B转染HepG2.2.15细胞数比值.透射电镜观察各组HepG2.2.15细胞浆内自噬体.Western Blot检测各组HepG2.2.15细胞LC3BⅡ/Ⅰ比值(microtubule-associated protein 1 light chain 3 betaⅡ/Ⅰ).结果 培养2h时,与EBSS+空白血清组比较,EBSS+5倍药物血清、EBSS+ 10倍药物血清明显抑制GFP-LC3B由散在分布向点状分布改变(P＜0.01),电子透射电镜显示EBSS+5倍药物血清组、EBSS+ 10倍药物血清组抑制自噬体形成,Western Blot检测显示EBSS+ 10倍药物血清组LC3BⅡ/Ⅰ比值较EBSS+空白血清组明显下降(P＜0.01).结论 灵猫方药物血清抑制饥饿诱导HepG2.2.15的自噬.
关键词： 灵猫方 HepG2.2. 15细胞 自噬 -
中药灵猫方的抗肝纤维化作用及其机制
目的 研究灵猫方抗肝纤维化的作用及其机制.方法 55只BALB/c小鼠随机分为4组:正常组、模型组、秋水仙碱组、灵猫方组.ConA(15mg/kg)尾静脉注射制作肝纤维化模型,每周两次,共10周.正常组给予双蒸水灌胃,其余组分别给予秋水仙碱(0.2 mg/kg)、灵猫方(7.5g/kg).末次灌胃24h后处死小鼠,检测肝脏病理变化以及血清ALT、AST、ALB、DBIL表达水平、肝组织羟脯氨酸(HYP)含量变化、肝组织纤维化蛋白(FBRS)的表达水平.结果 (1)与模型组相比,灵猫方组血清ALB水平明显增加,DBIL水平明显降低(P均<0.01),HYP的含量明显降低(P<0.05).(2)肝脏病理学检测,灵猫方组肝纤维化的程度和胶原显色指数较模型组明显减轻(P<0.05,P<0.01).(3)与正常组相比,模型组的FBRS表达水平明显增加(P<0.05),与模型组相比,灵猫方组肝组织中FBRS的表达水平明显降低(P<0.05).结论 中药灵猫方通过降低肝组织纤维化蛋白的表达发挥抗肝纤维化的作用.
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灵猫方及其单味药醇提物对HepG2.2.15细胞乙型肝炎表面抗原和乙型肝炎e抗原表达的影响
目的 研究灵猫方及其单味药(牡丹皮、青皮、胡黄连、猫人参、淫羊藿、猫爪草、生黄芪)醇提物对HepG2.2.15细胞乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)表达的影响.方法 制备灵猫方及其7种单味药的醇提物,分别配制成50、100、200、400 μg/mL 4个浓度,作用于HepG2.2.15细胞72 h,四甲基噻唑蓝(MTT)法检测药物的细胞毒性;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg和HBeAg水平.结果 灵猫方醇提物对HepG2.2.15细胞HBsAg的分泌有抑制作用,且抑制率随药物浓度的递增而增加(P<0.05).牡丹皮醇提物、青皮醇提物、胡黄连醇提物对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的分泌有抑制作用,且抑制率随药物浓度的递增而增加(P<0.05).猫人参醇提物、淫羊藿醇提物对HepG2.2.15细胞HBsAg的分泌有抑制作用,且抑制率随药物浓度的递增而增加(P<0.05).结论 灵猫方醇提取物及组分的牡丹皮、青皮、胡黄连、猫人参、淫羊藿醇提取物能抑制HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的表达.
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灵猫方对HepG2.2.15和HepAD38细胞La蛋白表达的影响
目的 研究灵猫方对HepG2.2.15和HepAD38细胞cccDNA、pgRNA、sRNA和La-mRNA抑制作用,探讨灵猫方抗乙肝病毒(HBV)的作用机制.方法 制备灵猫方水提物,500 mg/L和1 000 mg/L灵猫方水提物分别干预HepG2.2.15和HepAD38细胞,以0.9％ NaCl溶液作为空白对照组,6d后收集培养液上清,ELISA法检测HBsAg和HBeAg水平;收集细胞提取总RNA,RT-PCR法检测细胞内cccDNA、pgRNA、sRNA和La mRNA表达水平.结果 与空白对照组比较,灵猫方组的HepG2.2.15和HepAD38细胞的HBsAg和HBeAg分泌水平明显降低,细胞内cccDNA、pgRNA、sRNA和La mRNA表达水平明显降低(P≤ 0.01).结论 灵猫方可能通过抑制HepG2.2.15和HepAD38细胞内La蛋白的表达而促进pgRNA、sRNA和cccDNA的降解,从而抑制HBV的复制.
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灵猫方联合替比夫定治疗慢性乙型肝炎患者的疗效及对NK细胞功能的影响
目的:观察灵猫方联合替比夫定治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者的临床疗效及其对患者外周血自然杀伤细胞(NK)数量、功能的影响,探讨灵猫方治疗CHB的免疫调节机制.方法:纳入54例符合标准的CHB患者,随机分为单用组27例和联合组27例,同时纳入10例健康志愿者作为健康对照组.两组均给予口服替比夫定治疗,联合组加服灵猫方,疗程为24周.治疗3个月、6个月时,评价两组患者的中医证候积分,检测两组患者的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、HBV-DNA定量、HbeAg、外周血NK细胞数量及细胞表面和胞内Toll样受体(TLRs)的表达水平,比较两组患者的ALT、AST复常率,HBV-DNA阴转率和HBeAg血清转换率.结果:治疗3个月、6个月后,两组患者的中医证候积分较治疗前均显著降低(P＜0.05,P＜0.01),且联合组患者的中医证候积分明显低于单用组(P＜0.01).治疗3个月、6个月后,两组患者的ALT、AST水平均显著降低(P＜0.01),且治疗3个月时,联合组患者的ALT、AST水平低于单用组(P＜0.05),ALT、AST复常率明显高于单用组(P＜0.05).治疗3个月、6个月后,两组患者的HBV-DNA、HBeAg水平均明显降低(P＜0.01),但两组患者的HBV-DNA转阴率、HBeAg血清转换率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与健康对照组比较,CHB患者的外周血NK细胞数量明显减少(P＜0.05),NK细胞胞内TLR3、TLR9表达水平显著降低(P＜0.05);治疗3个月、6个月后,两组患者的NK细胞数量及胞内、胞外TLR3、TLR9表达水平较治疗前均明显提高(P＜0.05),且联合组患者NK细胞数量及其胞内TLR3表达水平明显高于单用组(P＜0.05).结论:灵猫方联合替比夫定可显著改善CHB患者的中医证候和肝功能,灵猫方的作用机制可能与提高患者的NK细胞数量及其胞内外TLR3的表达水平,从而调节机体的免疫功能有关.
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灵猫方联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎临床研究
目的:探讨灵猫方联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎(1×ULN≤ALT≤2×ULN)的临床疗效.方法:采用随机、双盲、安慰剂对照的方法,将56例患者分为治疗组28例和对照组28例.治疗组给予灵猫方联合恩替卡韦治疗,对照组给予安慰剂联合恩替卡韦治疗,疗程为12个月.观察两组患者的临床疗效及血清HBV-DNA、HBeAg、HBsAg水平的变化.结果:治疗后,治疗组和对照组的总有效率分别为92.86％和89.29％,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；治疗组患者的HBV-DNA、HBsAg、HBeAg下降幅度明显大于对照组(P＜0.05).结论:灵猫方联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎(1 ×ULN≤ALT≤2×ULN),在抑制乙肝病毒复制,降低HBsAg、HBeAg的表达方面优于单用恩替卡韦.
关键词： 灵猫方 慢性乙型肝炎(轻度) 随机对照试验 -
灵猫方通过增强天然免疫功能抑制乙型肝炎病毒复制的研究
目的:研究灵猫方对pHBV1.3转染HepG2细胞的天然免疫功能的影响,探讨灵猫方抗乙肝病毒(HBV)的作用机制.方法:制备0.25mg/ml和0.5mg/ml灵猫方水提物干预HBV质粒转染HepG2细胞,以0.9％ NaC1溶液作为空白对照组,72h后收集培养上清液,ELISA法检测HBsAg和HBeAg水平;收集细胞提取总RNA,RT-PCR法检测细胞内IFN-α、IFN-β、IFN-λ1及干扰素效应蛋白OAS1、MxA、PRKmRNA表达水平,RIG-Ⅰ mRNA表达水平.结果:与空白对照组比较,0.5mg/ml灵猫方干预pHBV1.3转染HepG2细胞分泌的HBsAg和HBeAg水平明显降低,细胞内IFN-α、IFN-β、IFN-λ1 mRNA及OAS1、MxA、PRKmRNA表达水平表明显升高(P＜0.01),RIG-Ⅰ mRNA表达水平明显升高(P＜0.01).结论:灵猫方通过促进pHBV1.3质粒转染HepG2细胞的Ⅰ、Ⅲ型干扰素产生,增强天然免疫功能,从而抑制HBV复制,可能是通过RIG-Ⅰ通路诱导干扰素产生,增加干扰素的形成.
