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胃病变中幽门螺杆菌感染与癌基因蛋白表达及凋亡研究
目的:研究幽门螺杆菌(Hp)感染的胃癌(GC)发展中c-met蛋白表达及细胞凋亡的关系和对胃癌预后意义.方法:145例经病理证实,不同胃黏膜病变采用免疫组化检测c-met基因表达及Warthin-starry法检测Hp感染.采用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果:在浅表性胃炎(CSG)、萎缩肠化生胃炎(CAG+IM)、异型增生(DYS)、早期GC和进展期GC中,c-met基因表达率分别为25.53%、51.28%、61.54%、66.67%和68.42%,CAG+IM、DYS、GC均显著高于CSG(P＜0.05).凋亡指数(AI)分别为(4.55±2.33)%、(6.43±5.60)%、(6.45±5.12)%、(6.55±4.80)%、(8.84±5.63)%,进展期GC显著高于CSG(P＜0.05).胃黏膜凋亡指数与c-met表达强度有密切相关(P＜0.05).c-met阳性表达与胃癌组织类型、浆膜浸润和淋巴结转移密切相关,而且BorrmannⅣ明显高于早期胃癌和Borrmann Ⅰ、Ⅱ(P＜0.05).c-met阳性表达与肠型胃癌Hp感染有关.CAG+IM、DYS和GC组c-met阳性表达中Hp感染者明显高于阴性者.Hp阳性者5年存期显著短于Hp阴性者.结论:Hp感染和c-met表达与胃黏膜增殖和恶化有关,且与凋亡有相关性.Hp感染与胃癌预后有关.
关键词： 胃肿瘤 螺杆菌感染 原癌基因蛋白质c-met 凋亡 基因表达 -
乳腺癌c-Met 蛋白的表达及临床病理意义
目的 评价c-Met 蛋白在乳腺癌中的表达状况及与临床病理指标的可能关系.方法 采用免疫组织化学方法检测100 例乳腺浸润性导管癌c-Met 蛋白的表达,并评价它们与病理分级、临床分期、转移以及预后之间的关系.结果 100 例乳腺癌组织c-Met 表达阳性43 例,阴性57例.c-Met 的表达与乳腺癌淋巴结转移(P ＝0.0001)、临床分期(P ＝0.001)以及预后(P ＝0.009)密切相关;与年龄(P ＝0.784)、肿瘤大小(P ＝0.890)和肿瘤病理分级(P ＝0.456)无关.结论 c-Met的表达在乳腺癌中有统计学意义,其表达随转移和临床分期升高而增强,提示其对乳腺癌的发生及侵袭、转移起着重要作用.
关键词： 乳腺肿瘤 原癌基因蛋白质c-met 预后 -
全人源抗Met双价抗体的制备与特性分析
目的 以抗HGF受体Met特异性的全人抗体Fab基因为模板,合成并表达双价抗体Diabody.方法 以天然抗体库中筛选出的Fab基因为模板,分别扩增抗体的重链可变区与轻链可变区基因,经重叠拼接合成Diabody基因,克隆于原核表达载体pBAD/gⅢA中表达.在不同的培养条件下,阳性克隆经IPTG诱导表达,ELISA、SDS-PAGE、Western-blot和细胞免疫荧光分析.结果 培养基成分和诱导剂的浓度对目的 蛋白的表达未见有明显的影响,低温诱导能够促进可溶性蛋白的产生;但电泳与印迹分析表明,在29 kD出现预期大小蛋白条带.双价抗体经表达、变性与复性和IMAC亲和纯化后,用细胞免疫荧光分析表明,Diabody能够与S114细胞表达Met的胞外区特异性结合.结论 本研究制备的双价抗体能够与其抗原特异性结合,该抗体有望与其他抗体分子结合,制备双特异性抗体,为肿瘤临床诊断或治疗提供候选分子.
关键词： 抗肿瘤药 原癌基因蛋白质c-met 抗体 基因表达 -
胰腺星状细胞通过HGF/c-Met信号通路调控胰腺癌的侵袭转移
目的 探讨胰腺星状细胞(PSCs)调控胰腺癌的迁移和侵袭转移机制.方法 检测PSCs培养上清液中肝细胞生长因子(HGF)蛋白的含量.应用PSCs上清液、PSCs上清液加HGF中和抗体或加c-Met特异性抑制剂PHA-665752分别处理人胰腺癌细胞株AsPC-1细胞,以不加PSCs上清液细胞作为对照组,采用MTT法检测AsPC-1细胞的增殖,Transwell小室检测细胞迁移能力,体外侵袭实验观察细胞侵袭能力.结果 PSCs上清液中HGF蛋白含量为(4 213 ±543) ng/L.PSCs上清液组、PSCs上清液+ HGF中和抗体组、PSCs上清液+c-Met抑制剂组及对照组细胞增殖的A490值分别为0.628±0.030、0.324±0.021、0.347±0.054及0.405±0.008,穿膜细胞数分别为(123.3±6.8)、(62.4±6.9)、(58.1±2.2)、(36.6±4.8)/400倍视野,侵袭细胞数分别为(70.0±2.3)、(42.5±4.6)、(42.7±2.8)、(36.4±3.5)/400倍视野.PSCs上清液组细胞增殖、穿膜及侵袭能力较对照组显著升高,PSCs上清液+HGF中和抗体组及PSCs上清液+c-Met抑制剂组细胞增殖、穿膜及侵袭能力较PSCs上清液组显著下降,差异均有统计学意义(P值均＜0.01),而PSCs上清液+HGF中和抗体组与PSCs上清液+c-Met抑制剂组之间的细胞增殖、穿膜及侵袭能力差异无统计学意义(P值均＞0.05).结论 PSCs可能是通过HGF/c-Met信号通路从而调控胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭.
关键词： 胰腺肿瘤 星形细胞 肝细胞生长因子 原癌基因蛋白质c-met -
胃癌幽门螺杆菌感染中c-met基因表达与增殖的关系及其预后
目的研究c-met基因蛋白及增殖细胞核抗原(PCNA)在幽门螺杆菌（Hp）感染的胃黏膜病变演进中的表达及关系，探讨Hp感染对胃癌预后的意义。方法采用免疫组织化学法检测145例经病理证实不同胃黏膜病变的c-met和PCNA基因表达，Warthin-Starry法检测Hp感染。结果在浅表性胃炎(CSG)、萎缩肠化性胃炎、异型增生(DYS)、早期胃癌和进展期胃癌中，c-met和PCNA 2种基因在萎缩肠化性胃炎、DYS、胃癌均显著高于CSG（P＜0.05）。对胃黏膜增殖程度与c-met和PCNA阳性表达强度的密切关系分析，表明两者有显著关联(P＜0.01)。c-met和PCNA阳性表达与胃癌组织类型、浆膜浸润和淋巴结转移密切相关，而且Borrmann IV明显高于早期胃癌(P＜0.05)。c-met-LI和PCNA-LI在胃癌中等级相关表达有极其显著的相关性(P＜0.001)。c-met阳性表达与肠型胃癌Hp感染有关。萎缩肠化性胃炎、DYS和胃癌组c-met阳性表达中Hp感染者明显高于阴性者。Hp阳性者5年生存期显著短于Hp 阴性者。结论 c-met和PCNA基因表达与胃黏膜增殖和恶化有关，c-met基因可能成为评估胃癌恶化和预后的1项新的重要指标。Hp感染和c-met表达与胃黏膜增殖和恶化有关，Hp感染与胃癌预后有关。
关键词： 原癌基因蛋白质c-met 增殖细胞核抗原 螺杆菌感染 胃肿瘤 -
肝细胞生长因子及其受体在血管外膜成纤维细胞中的表达
目的检测肝细胞生长因子(HGF)及其受体c-met在血管外膜2种表型成纤维细胞中的表达,探索其在血管外膜重塑中的作用.方法用转化生长因子-β1建立大鼠主动脉外膜成纤维细胞和肌成纤维细胞2种细胞表型,以实时定量逆转录聚合酶链反应技术和蛋白免疫印迹方法分析HGF及c-met在2种不同表型细胞中的表达,酶联免疫吸附试验检测2种细胞无血清培养上清液中HGF的含量.结果 HGFmRNA及HGF蛋白、c-metmRNA及c-met蛋白在主动脉外膜成纤维细胞、肌成纤维细胞中均有表达,在主动脉外膜成纤维细胞转变为肌成纤维细胞后表达明显上调.随转化生长因子-β1刺激浓度和时间的增加,在主动脉外膜成纤维细胞逐渐表达α-平滑肌肌动蛋白转变为肌成纤维细胞的过程中HGF表达逐渐上调.结论血管外膜成纤维细胞存在局部HGF系统,HGF可能在血管外膜细胞表型转化中有一定作用.
关键词： 肝细胞生长因子 原癌基因蛋白质c-met 血管 成纤维细胞 -
c-Met抑制剂SU11274对基底样乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响
目的 研究c-Met抑制剂SU11274对c-Met阳性基底样乳腺癌细胞系MDA-MB-231凋亡和运动的影响.方法 荧光染料Hoechst33342、MitroTrackerRed和Yo-pro-1染色,观察SU 11274诱导细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测不同处理组的细胞早期凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达变化和c-Met及Akt磷酸化水平的改变;划痕试验及趋化试验观察SU 11274对细胞迁移、趋化能力的影响.结果 SU11274(10 μmol/L)处理MDA-MB-231细胞48 h后,与对照组比较,荧光染色可见处理组细胞核绿染,胞核碎裂;各加药组MDA-MB-231的早期凋亡率分别为(7.3±0.9)％、(14.1±0.6)％、(35.5±4.4)％、(48.2±5.3)％,与对照组相比明显升高(P＜0.05).同时,抗凋亡蛋白Bcl-XL表达减少,凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP蛋白剪切增加,量效关系明显.SU11274可显著延长划痕愈合时间以及减少趋化穿膜细胞个数(P＜0.05),并有效抑制c-Met及Akt的磷酸化水平,呈剂量依赖性关系. 结论 SU11274可通过抑制c-Met/PI3 K/Akt的磷酸化水平而诱导c -Met阳性基底样乳腺癌细胞系MDA-MB-231凋亡,并抑制其运动.
关键词： 乳腺肿瘤 癌 基底细胞 原癌基因蛋白质c-met 凋亡 -
Met抑制剂XL-880对乳腺癌MDA-MB-231细胞的放疗增敏作用
目的 研究Met抑制剂XL-880对Met阳性乳腺癌MDA-MB-231细胞系放疗增敏作用.方法 依照对细胞不同处理设立对照组、单纯放疗组、XL-880单药组和XL-880联合放疗组.流式细胞术检测不同处理组的细胞早期凋亡率及周期变化,克隆形成试验研究不同处理对肿瘤细胞增殖的影响；Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白的表达变化和Met通路相关蛋白表达水平的改变.结果 对照组、单纯放疗组、XL-880单药组和XL-880联合放疗组各组克隆数目分别为(41.3±8.2)个、(18.6±2.4)个,(10.6±2.9)个和(0.8±0.2)个,联合组与对照组、单纯放疗组及单药组比较差异有统计学意义(P＜0.05).XL-880处理的MDA-MB-231细胞放疗后48 h,各组G2/M期细胞所占比例分别为(17.3±1.3)％,(20.0±4.0)％,(28.5±3.1)％,(57.0±3.3)％,G2/M期阻滞增加的差异均有统计学意义(均P ＜0.05),Annexin V/PI双染试验中各组细胞的早期凋亡率分别为(7.3±0.9)％、(14.1±0.6)％、(35.5±4.4)％、(48.2±5.3)％,凋亡率明显升高(均P＜0.05).XL-880抑制了放疗后细胞Met磷酸化水平,同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP蛋白剪切增加.结论 XL-880可通过抑制Met通路进而影响下游Cyclin B1水平而对Met阳性乳腺癌细胞系MDA-MB-231产生放疗增敏作用.
关键词： 乳腺肿瘤 放射疗法 原癌基因蛋白质c-met -
MACC1和C-MET蛋白在肝细胞癌组织中的表达研究
目的 探讨MACC1和C-MET蛋白在肝细胞癌组织中的表达及意义.方法 采用免疫组化和Western blot检测51例肝细胞癌组织、相应癌旁组织和13例正常肝脏组织中MACC1和C-MET蛋白的表达情况,同时对患者进行随访,并分析患者生存率与临床病理资料间的关系.结果 MACC1和C-MET蛋白在肝细胞癌组织中总的阳性表达率分别为80.4％和76.5％,相对表达量分别为0.645±0.047和0.504±0.023,均明显高于相应癌旁组织及正常肝脏组织(分别F=173.308,252.817,均P=0.000),且两者表达呈正相关(r=0.870,P=0.001);MACC1和C-MET蛋白表达阳性患者的3年生存率明显低于阴性患者(分别x2 =3.934,4.439,均P＜0.05),两者的阳性率及表达量均与肝细胞癌的TNM分期、门脉癌栓、病理分型及包膜侵犯显著相关(P＜0.05). 结论 MACC1和C-MET的异常表达与肝细胞癌的恶性进展相关,MACC1有作为进展期肝癌预后的独立分子指标和肝癌治疗新靶点的潜在价值.
关键词： 癌 肝细胞 原癌基因蛋白质c-met 结肠癌转移相关基因1 -
肝细胞生长因子及其受体c-met在肝细胞癌中的表达与预后价值
目的研究肝癌切除前、后血清肝细胞生长因子(HGF)的动态变化及其受体c-met在癌组织中的表达,探讨HGF/c-met对手术切除后肝癌患者的预后价值.方法收集手术切除的25例肝细胞癌患者血清及组织标本,用酶联免疫法(ELISA)测定术前1 d、术后第3、7、10天血清HGF浓度,分别用免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肝癌及癌旁组织中c-met蛋白及mRNA的表达.分析术前血清HGF水平及癌组织中c-met表达程度与不同临床病理因素之间的关系及影响手术后血清HGF水平变化的因素.以20例健康献血员为正常对照组,22例慢性乙型肝炎患者及22例乙型肝炎肝硬化肝功能失代偿(Child B或C级)患者作为慢性乙肝组和肝硬化失代偿组.结果肝癌患者血清HGF浓度高于正常对照组及慢性乙肝组[(1.03±0.09)ng/ml比(0.69±O.02)、(O.74±0.09)ng/ml,P＜0.05],但与肝硬化失代偿组[(1.04±0.11)ng/ml]比较差异无统计学意义.术后HGF浓度上升高峰出现在术后第3天,术后第7、10天逐渐下降,但仍高于正常水平.术前、术后各组的血清HGF组间比较,仅术后第3天组差异有统计学意义.影响术前血清HGF水平的主要因素有:肿瘤直径＞Scm、伴有结节肝硬化、门静脉癌栓、术前血清甲胎蛋白(AFP)≥400μg/L.从术前到术后第3天,大区段切除比小区段切除者的血清HGF浓度上升更明显(P=0.047).中度和强阳性c-met蛋白表达在肝癌组织中(21/25)明显高于癌旁组织(5/25).高表达的c-met mRNA见于所有肝癌组织中,在癌旁组织中仅6例有高表达.癌组织中c-met蛋白表达的强度与有无合并门静脉癌栓有关,与肿瘤大小、血清AFP水平、血清HGF水平、有无肝硬化及肝癌的分化程度无相关性.但在癌旁组织,合并肝硬化组c-met蛋白表达高于无肝硬化组.术后有肿瘤复发或转移的病例,其术前血清HGF水平及肿瘤组织中c-met蛋白表达显著高于无复发或转移的病例.HGF水平与肿瘤组织中c-met表达无相关性.结论肝癌患者有血清HGF及癌组织中c-met的高表达,术后血清HGF的持续升高可能与肝癌的早期复发和转移有关.
关键词： 癌 肝细胞 肝细胞生长因子 原癌基因蛋白质c-met 肝切除术 -
Mithramycin A对肝癌Huh-7细胞增殖和基因表达的影响
目的:研究光辉霉素A(mithramy-tin A,MIT)对人肝癌细胞Huh-7的作用.方法:CCK-8法观察MIT对Huh-7细胞的生长抑制作用;Real time-PCR法和蛋白质印迹法检测MlT作用后Huh-7细胞中Spl、VEGF和c-Met表达情况.结果:MIT作用Huh-7细胞48 h时细胞生长抑制作用与浓度成正相关.5×10-4μmol/L时细胞增殖的抑制率为2.9%,5μmol/L时达92.4%.随时间延长抑制率逐渐增高.作用24 h时抑制率为6.15%,60 h达72.65%.半数抑制浓度(IC50)为60.12 nmol/L.与对照组Spl mRNA表达量(1.459 9±0.269 6)相比,其表达量与浓度有关,500 nmol/L时其表达量(0.274 3±0.104 3)下降约为81.21%,P=0.002 7.且其表达量与时间有关,与表达量(1.459 856±0.269 603)相比,加药72 h时其表达量(0.430 778±0.125 143)明显下降,P=0.003 4.VEGF和c-Met的mRNA表达量变化有一个相同的趋势,随浓度和时间增加表达逐渐下调.MIT对Spl、VEGF和c-Met在蛋白水平的表达有抑制作用.结论:MIT对Huh-7细胞有明显的生长抑制作用.MIT能抑制人肝癌Huh-7细胞Spl及其下游基因表达.
关键词： 肝肿瘤 普卡霉素 原癌基因蛋白质c-met 受体 血管内皮生长因子 -
c-met基因表达与大肠腺瘤演化与癌变过程相关性的研究
目的:评价大肠腺瘤演化与恶变过程中c-met基因的表达及其临床意义.方法:利用组织微阵列技术检测41例不同阶段的不典型增生的大肠腺瘤、16例早期癌变的大肠腺瘤和56例进展期大肠癌标本中的c-met基因.结果:在大肠腺瘤非不典型增生、轻度不典型增生、中重度不典型增生、早期癌变和进展期癌的演变中,c-met基因的阳性率分别为43.75%、50.0%、66.7%、75.O%和82.1%;过表达率分别为18.8%、10.0%、46.7%、50.0%和66.1%.而且进展期癌c-met基因的阳性率和过表达率均显著高于大肠腺瘤非不典型增生,P<0.01.大肠腺瘤演变程度与c-met阳性表达强度之间的密切关系分析显示,两者显著相关,P=0.011.结论:c-met基因表达与大肠腺瘤演化的程度及恶变相关;大肠腺瘤不典型增生级别越高,c-met基因表达越强.大肠腺瘤早期癌变时c-met基因已呈过表达状态.
关键词： 结直肠肿瘤 腺瘤 原癌基因蛋白质c-met -
曲古霉素A抑制SD大鼠胰腺癌的发生及其分子机制的探讨
目的:建立SD大鼠胰腺癌模型,观察曲古霉素A(TSA)对二甲基苯茾蒽(DMBA)诱癌的抑制作用,探讨Ezrin、HGF和C-met表达与胰腺癌发生发展的相关性.方法:90只SD大鼠随机分为3组,DMBA置入胰腺实质内(A组+B组),B组每周腹腔注射TSA1μg;A组和B组于3～5个月内处死,对照组(C组)于第5个月处死.Ezrin、HGF和C-met染色方法均为石蜡切片EnVisionTM>免疫组化法.结果:1)A组癌发生率为48.7%;B组癌发生率为33.3%;A组胰腺癌大径均值>B组,P<0.05;C组胰腺和A、B两组胰腺外主要脏器均未见明显病理改变;2)A组+B组胰腺导管癌Ezrin、HGF和C-met阳性表达率明显高于A组+B组非癌胰腺组织,P<0.01;A组胰腺导管癌Ezrin、HGF和C-met阳性表达率明显高于A组非癌胰腺组织(P<0.05),C组胰腺和2例纤维肉瘤Ezrin、HGF和C-met均为阴性表达;Ezrin、HGF和C-met在胰腺导管癌中表达呈一致性,P<0.05.结论:较大剂量DMBA置入胰腺实质内可获得较高胰腺癌发生率;Ezrin、HGF和C-met在DMBA诱癌过程中可能有重要促癌发生作用;TSA能抑制胰腺癌发生和生长,其机制可能与抑制Ezrin、HGF和C-met表达有关.
关键词： 胰腺肿瘤 模型 动物 肝细胞生长因子 原癌基因蛋白质c-met -
肝细胞生长因子/肝细胞生长因子受体通路在肿瘤中的研究现状
20世纪80年代中期,肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)及其受体(c-Met)相继被发现.c-Met基因早在人骨肉瘤细胞中克隆,其编码产物c-Met具有受体酪氨酸激酶(RTK)活性,常因基因重排(即在其5'端加上易位启动区tpr)而被激活,并在恶性肿瘤远处转移中发挥重要作用.1991年,基因打靶技术证实,HGF为c-Met的配体.进一步的研究显示,HGF和c-Met基因所编码的蛋白在不同细胞与组织的生存、生长和迁移中具有重要生理作用.
关键词： 肿瘤 肝细胞生长因子 原癌基因蛋白质c-met 分子作用机制 -
肺腺癌中C-met表达与表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂耐药的相关性
目的 检测肺腺癌中C-met蛋白表达和基因扩增情况,分析其与表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)耐药和患者预后的关系.方法 选取2011年1月至2013年5月山西省肿瘤医院120例肺腺癌患者肿瘤组织,应用免疫组织化学(IHC)染色和荧光原位杂交(FISH)技术检测C-met蛋白表达和基因扩增情况,并对所有患者进行随访.分析C-met表达与临床病理特征、EGFR-TKI耐药和预后的关系.结果 120例肺腺癌组织中C-met蛋白高表达与基因扩增发生率分别为17.50％(21/120)、10.83％(13/120).80例接受EGFR-TKI治疗的患者中,耐药患者C-met蛋白高表达发生率为30.43％(14/46),高于未耐药患者的11.76％(4/34),差异有统计学意义(χ2=3.908,P=0.048);耐药患者C-met基因扩增率为19.57％(9/46),高于未耐药患者的2.94％(1/34),差异有统计学意义(P=0.038).46例耐药患者中,C-met蛋白表达与基因扩增呈正相关(r=0.388,P=0.008),但未接受EGFR-TKI治疗的40例患者中,C-met蛋白表达与基因扩增无相关性(r=0.279,P=0.081).C-met蛋白高表达与患者年龄、病理分级、临床分期有关(均P<0.05);C-met基因扩增与临床分期有关(P=0.036).Cox多因素回归分析结果表明C-met基因扩增是影响预后的独立因素(P=0.034).结论 C-met蛋白表达和基因扩增是EGFR-TKI耐药的危险因素,基因扩增提示预后不良,可作为预后评估的一个指标.
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bcl-2及c-Met基因在表皮生长因子受体基因不同突变肺癌细胞株中的表达
目的 通过检测bcl-2及c-Met基因在表皮生长因子受体(EGFR)基因不同突变类型的肺癌细胞株中的表达,初步探讨bcl-2及c-Met基因与非小细胞肺癌(NSCLC)耐药的相关性.方法 采用直接测序法验证A549、HCC827和H1975细胞中EGFR基因突变情况;免疫细胞化学法检测bcl-2及c-Met的蛋白表达水平;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2 mRNA水平;突变扩增阻滞系统(ARMS)法检测人恶性胸腔积液中EGFR基因突变情况.结果 直接测序法证实A549细胞为EGFR野生型,HCC827细胞为EGFR外显子19del突变,H1975细胞为EGFR 21外显子L858R与20外显子T790M双突变.免疫细胞化学染色结果显示c-Met及bcl-2蛋白均定位在细胞质,其阳性表达强度从高到低依次为HCC827、A549和H1975细胞.RT-PCR结果显示bcl-2 mRNA在HCC827和A549细胞中高表达(10.93±1.90、7.13±1.33),与H1975细胞(0.83±0.15)相比,差异均有统计学意义(P=0.013,P=0.000);然而bcl-2 mRNA表达水平与恶性胸腔积液脱落细胞中EGFR基因突变类型无关.结论 HCC827细胞(EGFR 19del)中bcl-2与c-Met基因和蛋白表达水平明显高于H1975细胞(EGFR L858R/T790M),EGFR不同的突变类型可能与不同的信号通路相关.
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肝细胞生长因子及其受体c-met在非小细胞肺癌中的表达及其与淋巴管生成的关系
目的 检测肝细胞生长因子(HGF)及其受体c-met在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨其与NSCLC淋巴管生成的关系.方法 采用免疫组织化学法检测HGF及其受体c-met在113例NSCLC癌组织中的表达水平;应用D2-40进行淋巴管染色,计数微淋巴管密度(LMVD);分析HGF及其受体c-met与LMVD之间的关系.结果 HGF及c-met阳性染色主要位于NSCLC癌细胞的胞膜和胞质中,阳性表达率明显高于正常肺组织(67.3%、74.3%与20.0%、25.0%)(u值分别为4.008、4.342,均P＜0.05).HGF、c-met的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、分化程度均无关,而与TNM分期、淋巴结转移有关.HGF和c-met阳性表达的NSCLC患者较阴性者有更高的LMVD(HGF:16.3051±5.3753比10.9934±4.9668,t=4.58,P＜0.05;c-met:15.6692±5.5386比11.3700±5.3875,t=3.97,P＜0.05).结论 HGF及其受体c-met在NSCLC中高表达并与LMVD及淋巴结转移密切相关,提示HGF及其受体c-met在NSCLC淋巴管生成及淋巴转移方面起重要作用,为临床肺癌的诊断、防治和新药开发提供了新的靶向目标.
关键词： 癌 非小细胞肺 肝细胞生长因子 原癌基因蛋白质c-met 淋巴管 -
c-Met和TIMP-2在喉癌中的表达及其意义
目的 检测c-Met、TIMP-2蛋白在喉鳞状细胞癌(简称喉癌)及癌旁组织中的表达水平,研究两者表达与临床、病理参数的关系,探讨两者在喉癌侵袭、转移过程中的作用及其两者的相互关系.方法 选取喉癌患者41例,另选癌旁组织15例作为对照,采用免疫组织化学方法 (SP法)检测c-Met、TIMP-2的表达.结果 c-Met、TIMP-2蛋白在喉癌组织中的阳性率分别为56.1%(23/41)及63.4%(26/41).c-Met蛋自在癌旁组织中的阳性率为13.3%(2/15),TIMP-2蛋白在癌旁组织为阴性.结论 c-Met与喉癌颈淋巴结转移及病理分级有关;TIMP-2与喉癌的颈淋巴结转移有关;c-Met与TIMP-2在喉癌中的表达无相关性.
关键词： 原癌基因蛋白质c-met 金属蛋白酶类组织抑制剂 喉肿瘤 癌 鳞状细胞 免疫组织化学 -
靶向c-Met的shRNA重组质粒的构建及生物活性鉴定
目的 设计以人c-Met基因为靶向的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),构建携带此shRNA的重组质粒,检测其抑制c-Met mRNA及蛋白表达的效应,筛选RNAi作用强的shRNA片段.方法 设计3对针对c-Met基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA的重组质粒pSilencer 2.0/c-Met-shRNA,通过脂质体介导的方法将其转染到喉癌Hep-2细胞株中.采用RT-PCR及Western-Blot法检测c-Met mRNA及蛋白表达情况,比较转染前后其表达的变化,判断各shRNA的干扰效应.结果 经测序,模板序列与设计序列完全正确,经过RT-PCR及Western-Blot法检测,转染干扰质粒后,c-Met基因的mRNA水平及蛋白表达水平均下调,以重组质粒pSilencer 2.0/c-Met-shRNA2效应显著.结论 成功构建了针对c-Met基因的重组RNAi质粒,为下一步探讨c-Met基因对喉癌Hep-2细胞的生物学行为的作用奠定了基础.
关键词： 喉肿瘤 RNA干扰 原癌基因蛋白质c-met -
肝细胞生长因子受体c-met在甲状腺乳头状癌中的表达
目的 探讨肝细胞生长因子受体c-met在甲状腺乳头状癌中的表达及其形成中的作用.方法 采用免疫组化EnVision法检测35倒甲状腺乳头状癌切除标本中c-met的表达,并分析表达情况与临床病理指标之间的关系.构建c-met-siRNA慢病毒载体感染甲状腺乳头状癌K1细胞,裸鼠移植瘤实验观察肿瘤生长情况.结果 c-met在甲状腺乳头状癌中的阳性表达率为97.1％,与甲状腺腺瘤和结节性甲状腺肿组织中的表达差别有统计学意义(x2=20.4044,P＜ 0.05).c-met在甲状腺乳头状癌组织中的表达与患者年龄有关.裸鼠移植瘤实验显示c-met-siRNA组肿瘤体积较对照组显著缩小.结论 c-met可能在甲状腺乳头状癌的发生、发展中发挥作用,抑制其基因表达可以抑制裸鼠K1细胞移植瘤的生长.
关键词： 甲状腺肿瘤 原癌基因蛋白质c-met 慢病毒感染 免疫组织化学 裸鼠
