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肿瘤标志物CEA、CK19、SCC检测在肺癌患者诊断中的临床价值
探讨肿瘤标志物CEA、CK19、SCC检测在肺癌诊断中的临床价值.选择22例肺癌患者为肺癌组,同期30例健康体检者为对照组,检测两者的CEA、CK19、SCC水平并进行分析.肺癌组肿瘤标志物CEA、CK19、SCC水平显著高于正常对照组(P＜0.05);肺癌组肿瘤标志物CEA、CK19检测结果的阳性率显著高于正常对照组(P＜0.05);肺癌组CEA与血清CK19呈正相关(r=0.510,P＜0.05).ROC曲线显示CEA、CK19、SCC曲线下面积分别为0.686、0.742、0.719,CK19的诊断价值大.肿瘤标志物CEA、CK19、SCC检测是肺癌患者临床诊断重要的血液指标.
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D2-40／CK19鸡尾酒双酶标记法在甲状腺乳头状癌淋巴管侵犯诊断中的应用
目的：分析淋巴管侵犯与甲状腺乳头状癌临床病理特征的关系。方法采用组合式单克隆抗体标记法和免疫组织化学鸡尾酒双酶标记法检测甲状腺乳头状癌标本D2-40、CK19抗原的表达情况，比较两种方法在甲状腺乳头状癌淋巴管侵犯诊断中的意义，并分析影响淋巴管生成的因素。结果甲状腺乳头状癌HE染色＋组合式单克隆抗体标记法和免疫组织化学鸡尾酒双酶标记法检测出淋巴管内癌栓的阳性率分别为37．5％（39／104）和53．8％（56／104），差异有统计学意义（P＜0．05）。淋巴管癌栓阳性组淋巴结转移率为83．9％（47／56），显著高于无癌栓组22．9％（11／48， P＜0．01）。淋巴管癌栓在年龄≥45岁组中的阳性率显著高于＜45岁组（ P＜0．05）。随着肿瘤直径的增加，淋巴管癌栓的检出率有明显增高的趋势（P＝0．063）。结论免疫组织化学鸡尾酒双酶标记法比HE染色＋组合式单克隆抗体标记法更能检测出甲状腺乳头状癌的淋巴管癌栓，有利于评估患者的淋巴结转移情况及其预后。随着年龄的增加，肿瘤直径的增大，淋巴管癌栓也有明显增多的趋势。
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桥本甲状腺炎不典型增生甲状腺上皮细胞的组织病理学研究
目的 探讨桥本甲状腺炎(HT)中不典型增生甲状腺上皮细胞(thyroid epithelial cells,TEC)的组织病理学改变及其与甲状腺乳头状癌(PTC)的关系.方法 从存档病例中选取30例HT不典型增生TEC病例和50例PTC,以甲状腺瘤旁滤泡和HT中的相对正常滤泡为对照组(各40例),进行常规形态学观察和细胞角蛋白19(CK19)、增殖细胞核抗原(PCNA)以及B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)免疫组化标记(Max-Vision法),结果用x<'2>检验进行分析.结果 HT中不典型增生TEC有一定异型性,细胞排列拥挤,核增大,出现毛玻璃样改变.HT中不典型增生TEC和PTC上皮均明显表达CK19、PCNA和Bcl-2,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),但前两组内差异无统计学意义(P>0.05).结论 HT中不典型增生TEC呈现某些PTC的形态学、免疫学表型特征,表达PTC特异的CK19,可能是HT癌变过程的中间环节,应引起高度重视.
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穿刺细胞学结合免疫组化诊断甲状腺癌
目的:探讨术前运用细针穿刺甲状腺结节行细胞学检查,结合穿刺细胞液相关免疫组化分析,进一步提高对甲状腺癌的术前诊断的准确率.方法:回顾分析本院2006年10月至2007年3月收治的甲状腺结节43例.术前均穿刺有疑问之甲状腺结节,作细胞学检查,同时结合免疫组化半乳凝集素-3、CK19、TPO进行分析,与手术后石蜡病理结果作比较.①在细胞学检查确诊的良、恶性病例中,细胞免疫组化指标仅作为参考.②而在细胞学诊断为可疑恶性时,免疫组化表达为半乳凝集素-3、CK19均阳性、TPO阴性者,作恶性诊断论;当表达为半乳凝集素-3、CK19均阴性、TPO阳性时,则作良性诊断论:其他种类表达归为可疑诊断.所有病例均接受手术治疗并经病理学检查证实.结果:术前细胞学诊断为乳头状癌者21例,可疑恶性14例,良性病变8例;14例细胞学诊断为可疑恶性的病例,结合免疫组化,10例诊断为乳头状癌.1例髓样癌,3例腺瘤.术后病理确定为乳头状癌31例,滤泡状癌2例,髓样癌1例,腺瘤8例,结节性甲状腺肿1例.43例细胞学诊断与术后病理符合率达62.8%.细胞学结合免疫组化诊断与术后病理符合率达90.7%,敏感性82.4%,特异性100%,阳性预测值100%,阴性预测值均为60%.结论:半乳凝集素-3、TPO和CK19检查有助于判断甲状腺结节的良、恶性;联合检查可提高诊断的准确性.甲状腺细针穿刺细胞学结合穿刺液的免疫组化分析,有助于提高甲状腺癌尤其是乳头状癌的检出率,减少漏诊和误诊.
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宫颈癌患者外周血中CK19 mRNA和HPV16 mRNA基因的检测及其意义
目的:检测宫颈癌患者外周血标本中的组织特异性标志物(CK19 mRNA)与宫颈癌相对特异性标志物(HPV16 mRNA)的表达.方法:采用RT-PCR技术检测了Ⅰb～Ⅱb期宫颈癌患者的外周血标本30例,远处转移宫颈癌患者8例,妇科良性疾病患者16例, 健康人9例.结果:30例外周血标本中3例扩增出CK19的特异性条带,检出率为10.0%(3/30).远处转移患者CK19检出率为8/8,良性病变患者为0/16,健康者为0/9.30例宫颈癌患者中有10例患者术后宫颈癌标本的免疫组化HPV E6和(或)原位杂交为阳性,均未检测到HPV16 mRNA(0/10);8例远处转移患者的检出率为12.5%(1/8),妇科良性病变患者和健康者的检出率分别为0/16和0/9.结论:CK19 mRNA作为宫颈癌患者外周血的检测标志物显示了较好的敏感性和特异性.HPV16 mRNA的检出率较低,临床价值有待进一步研究.
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CK19,S-100和EMA在鉴别甲状腺乳头状癌与乳头状增生中的作用
目的:评估检测CK19、S-100蛋白和EMA在诊断甲状腺乳头状癌、滤泡性癌及乳头状增生中的作用.方法:65例甲状腺病变组织分别用CK19、S-100、EMA进行免疫组化染色.结果:在乳头状增生中,CK19、S-100和EMA均不表达.CK19在乳头状癌包括滤泡型乳头状癌中100%表达,在滤泡性癌中有22%的表达.S-100和EMA在经典型乳头状癌分别为61%、100%;滤泡型乳头状癌38%、54%和滤泡性癌44%,11%.结论:CK19结合S-100和EMA检查在诊断甲状腺病变中是有用的辅助手段.CK19在区分甲状腺乳头状癌和乳头状增生中是一个很好的标志物.
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侧群细胞相关分子标志物在口腔鳞癌中的表达及临床意义
目的:口腔鳞癌中的侧群细胞(side population,SP)具有干细胞样生物学特性,且有一些特定的细胞表面标志物表达,本研究旨在探讨SP细胞相关分子在口腔鳞癌中的表达及临床意义.方法:将101例口腔鳞状细胞癌和10例正常口腔上皮制备成组织芯片.利用免疫组化方法检测SP相关分子CD44、CK19、ABCG2和MDR1的表达,对染色结果的阳性率和阳性强度进行评分,采用SPSS 15.0软件包分析其表达水平与临床病理参数的关系.结果:CD44、CK19、ABCG2和MDR1在大部分口腔鳞癌组织中表达升高.CK19表达升高与口腔鳞癌病理分级显著相关.ABCG2表达升高与口腔鳞癌TNM分期、病理分级和肿瘤体积相关.MDR1表达升高与口腔鳞癌病理分级密切相关.结论:SP相关分子CD44、CK19、ABCG2和MDR1表达与口腔鳞癌的临床关系密切.
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口腔鳞癌组织CK19蛋白质与mRNA水平的关系及其临床意义
目的:探讨口腔鳞癌组织中细胞角蛋白19(CK19)的蛋白质表达与基因转录之间的关系及其临床意义.方法:采用免疫组织化学和荧光实时定量RT-PCR方法,对33例口腔鳞癌患者的癌组织及癌旁组织中CK19的蛋白质表达和mRNA水平进行检测,采用SPSS10.0软件包对数据进行配对t检验和相关分析.结果:口腔鳞癌组织中,CK19蛋白质和mRNA表达呈正相关,且均显著高于癌旁组织.癌组织CK19蛋白质表达阳性率为90.91%(30/33),mRNA水平是癌旁组织的2.21倍.CK19蛋白质和mRNA表达均与肿瘤的恶性程度显著相关.恶性程度越高,两者的表达水平也越高.结论:口腔鳞癌组织中CK19蛋白质和mRNA表达上升,并且与肿瘤恶性程度相关,CK19免疫组织化学和荧光实时定量RT-PCR技术在鉴别组织恶性程度上具有潜在的临床价值.
关键词： 口腔鳞状细胞癌 CK19 mRNA 实时定量RT-PCR 免疫组织化学 -
口腔鳞癌患者唾液cyfra 21-1含量与癌组织CK19表达的相关性研究
目的:检测口腔鳞癌患者唾液中cyfra 21-1含量、组织中CK19蛋白质表达和基因转录水平,探讨其相互关系.方法:对30例口腔鳞癌患者和30例正常人的唾液采用ELISA法检测cyfra 21-1含量,其中6例口腔鳞癌患者的癌组织和癌旁组织分别采用免疫组织化学和实时定量RT-PCR法检测CK19蛋白质表达强度和CK19mRNA水平,采用SPSS10.0软件包进行统计学分析.结果:口腔鳞癌患者唾液cyfra 21-1含量为(85.95±78.00)μg/L,显著高于对照组的(42.27±40.84)μg/L;口腔鳞癌癌组织CK19蛋白质表达强度和CK19mRNA水平显著高于癌旁组织.CK19mRNA水平与CK19蛋白质表达强度呈显著正相关,癌组织CK19蛋白质与唾液cyfra 21-1含量也显著相关.结论:口腔鳞癌患者唾液cyfra 21-1含量和组织CK19蛋白表达及基因转录水平显著升高,组织CK19表达升高,对唾液cyfra 21-1含量的上升起着重要作用.
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小鼠肝脏中细胞角蛋白19阳性细胞的肝向分化特性
目的 明确小鼠肝脏中的细胞角蛋白19 (cytokeratin 19,CK19)阳性(CK19+)细胞是否可分化为成熟肝细胞.方法 利用CK19CreERT小鼠和Rosa26-GFP小鼠杂交得到CK19CreERT/Rosa26-GFP双转基因小鼠,注射他莫昔芬(tamoxifen,TM)后检测小鼠肝脏中CK19+细胞的GFP标记情况.在此基础上分别构建3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶和四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)肝脏损伤模型,采用肝脏组织冰冻切片结合免疫荧光染色检测肝脏中GFP标记的CK19+细胞的分化情况.结果 获得CK 19CreERT/Rosa26-GFP双转基因小鼠,免疫荧光染色结果显示CK19+细胞可被GFP标记.在DDC肝脏损伤模型小鼠中检测到增生性小胆管内有GFP+细胞,这些GFP+细胞表达胆管上皮细胞标志物CK19,且DDC肝损伤模型小鼠中GFP+胆管细胞比例高于未损伤对照组[(63.5±6.3)％ vs (53.6±4.8)％,P＜0.05];在CCl4肝损伤模型组小鼠中检测到肝脏实质细胞中有GFP+细胞,这些GFP+细胞表达成熟肝细胞标志物白蛋白(ALB),且CCl4肝损伤模型组小鼠肝脏中GFP+细胞比例高于未损伤对照组[(0.15±0.02)％vs (0.008±0.003)％,P＜0.01].结论 小鼠肝脏内的CK19+细胞群体中存在具有肝向分化潜能的前体细胞,可能为真正的肝干细胞的识别鉴定提供一个新线索.
关键词： 肝干细胞 CK19 转基因小鼠 CK19CreERT Rosa26-GFP -
TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测外周血CK19 mRNA
目的:应用TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术,建立定量检测CK19 mRNA的方法. 方法:采用RT-PCR从胃癌细胞中克隆CK19片段(230 bp),装入pMD 18-T Simple载体.纯化质粒,制备荧光定量PCR标准品.应用LightCycle荧光定量PCR仪检测标准品、30例正常人外周血和5例肿瘤组织CK19 mRNA. 结果:PCR扩增及测序均证实CK19 cDNA片段重组到pMD 18-T载体上,建立了稳定的检测CK19 mRNA的标准,即设定CT值在35个循环之内,检测结果低于100个拷贝数量级为阴性标本.结论:采用TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术检测外周血CK19 mRNA是一种稳定可靠的方法.
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CK19和PCNA在甲状腺良恶性乳头状增生上皮中的表达
目的探讨细胞角蛋白19(CK19)和增殖细胞核抗原(PCNA)在甲状腺良恶性乳头状增生上皮中的表达与鉴别诊断中的作用.方法应用免疫组化En Vision二步法对15例甲状腺恶性乳头状上皮及15例甲状腺良性乳头状上皮组织进行CK19及PCNA表达,以阳性细胞所占百分比作半定量计分的依据.结果良恶性乳头状增生上皮AB项和的平均值经t检验显示差异具有显著性(P＜0.01).结论联合应用CK19和PCNA,在区别甲状腺良恶性增生乳头上皮中的表达,准确率达95%以上,在鉴别诊断中有很大帮助.
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胃癌术中腹腔冲洗液CK19检测临床意义的探讨
目的 探讨胃癌根治术中腹腔冲洗液CK19的检测与胃腺癌分化程度、TNM分期的关系以及腹腔镜胃癌根治术后对肿瘤细胞腹膜微转移的影响.方法 应用流式细胞术法检测50例胃癌患者(分开腹组及腹腔镜组)及同期10例胃良性病变患者腹腔冲洗液的CK19表达,比较腹腔镜辅助下胃癌根治术与传统开腹根治术患者腹腔灌洗液的CK19表达,分析腹腔冲洗液CK19的表达与肿瘤组织分化程度、TNM分期的关系.结果 胃良性病变患者腹腔冲洗液CK19阳性表达率为0,低分化腺癌组CK19阳性表达率明显高于高中分化腺癌组(P<0.05).TNM分期Ⅲ期胃癌组腹腔冲洗液CK19阳性表达率显著高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05).腹腔镜辅助下胃癌根治术患者CK19阳性表达率术后较术前检出率虽有所增加但差异无统计学意义,与开腹组相比较差异亦无统计学意义.结论 胃癌患者腹腔冲洗液CK19表达水平与肿瘤分化程度、TNM分期有关,腹腔镜辅助下胃癌根治术与传统开腹手术一样,并不增加腹腔冲洗液的CK19阳性表达率和术后肿瘤腹膜微转移的危险性.
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细胞角蛋白19基因的克隆构建与重组表达
目的:构建肿瘤标志物细胞角蛋白19(CK19)基因的原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达,以获取低成本、高产量、高纯度的CK19蛋白.方法:根据基因库CK19的基因序列,设计多条用于基因拼接的DNA引物,利用PCR技术扩增CK19基因,用基因重组技术将该片段克隆到质粒pET28a中,PCR和DNA测序鉴定.将重组质粒CK19-pET28a转化大肠埃希菌BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,使用镍柱亲和层析纯化蛋白,并用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹鉴定.结果:成功扩增出CK19基因片段,克隆到表达载体后经菌落PCR和DNA测序鉴定正确.重组质粒CK19-pET28a在大肠埃希菌中经诱导和纯化后获得纯度较高目的条带,蛋白质印迹结果证明目的蛋白有反应性.结论:成功构建了肿瘤标志物CK19原核表达载体,经过诱导表达和蛋白纯化获得了高纯度有活性的目的蛋白.
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食管癌患者外周血CK20、CK19、CEA mRNA的表达及其临床病理意义
目的:研究89例食管癌患者外周血中CK20、CK19及CEA mRNA的表达,并探讨其临床病理意义.方法:巢式RT-PCR技术检测89例食管癌患者术前外周血中CK20、CK19、CEA mRNA的表达.结果:89例食管癌患者外周血中CK20、CK19及CEA的阳性表达率分别为49.44%、34.83%及52.81%;三基因同时检测时,至少1个基因检测结果为阳性的表达率为71.91%,与食管癌的淋巴结转移和(或)远处转移具有相关性.结论:CK20、CEA可作为检测食管癌患者外周血微转移的生物学标志,RT-PCR联合检测多种标志物可为了解肿瘤的恶性生物学行为、指导临床治疗方案的选择、判断预后及监测疗效提供依据.
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HBME-1和CK19、Galectin-3在甲状腺乳头状癌中表达及诊断价值
目的:了解HBME-1、CK19和Galectin-3在甲状腺乳头状癌中的表达状态,并探讨这3种抗体所构成的不同组合的诊断价值.方法:采用免疫组化检测55例甲状腺乳头状癌、24例甲状腺腺瘤、20例结节性甲状腺肿和10例桥本甲状腺炎中HBME-1、CK19和Galectin-3的表达.结果:HBME-1、CK19和Galectin-3在甲状腺乳头状癌中的阳性表达率分别为96.4%、98.2%、94.5%;在甲状腺良性病变中的阳性表达率分别为20.4%、20.4%、22.2%;3种抗体在甲状腺乳头状癌和良性病变中的阳性表达均存在统计学差异.HBME-1联合CK19、Galectin-3检测在鉴别甲状腺乳头状癌与良性病变时的敏感性、特异性、诊断正确率、阳性预测值和阴性预测值分别为100%、96.9%、98.8%、98%、100%.结论:HBME-1联合CK19、Galectin-3所构成的免疫组化组合在甲状腺乳头状癌与良性病变的鉴别诊断中具有重要的诊断价值.
关键词： 甲状腺乳头状癌 HBME-1 CK19 Galectin-3 免疫组化 -
CK19 CK20和MMP-9mRNA外周血表达与中晚期肺癌临床相关性
目的：检测肺癌外周血中细胞角蛋白19（CK19）mRNA、细胞角蛋白20（CK20）mRNA和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA，探讨其作为判断晚期肺癌外周血检测其转移及判断预后的指标可行性。方法采用RT-PCR技术检测肺癌患者外周血中CK19mRNA、CK20mRNA、MMP-9mRNA的表达量，按表达阴阳性作为标准对其临床资料及短期疗效进行评估。结果 CK19、MMP-9及CK20表达阳性率化疗3疗程后均下降，其中CK19、MMP-9差异有统计学意义（P值0.003、0.007）；CK19mRNA、CK20mRNA和MMP-9mRNA表达阳性率化疗前后与性别，分化等均无相关性（P>0.05）；其中化疗前CK19mRNA表达Ⅳ期阳性率高于Ⅲ期患者（P=0.01）；腺癌患者CK19mRNA与MMP-9mRNA表达，化疗前表达阳性率明显高于鳞癌差异有统计学意义（P值为0.01、0.04）；化疗后腺癌CK19mRNA、CK20mRNA、MMP-9mRNA表达较鳞癌表达下降明显（P值为0.04、0.03、0.02）；治疗前CK20mRNA和MMP-9mRNA表达与有无疗效存在相关性，差异有统计学意义（P值为0.04、0.0.02），CK19mRNA表达无相关性。化疗后CK19mRNA、CK20mRNA表达与有无疗效存在相关性，差异有统计学意义（P值为0.01、0.02），MMP-9mRNA表达无相关性。结论通过CK19、CK20、MMMP-9mRNA表达检测，判断晚期肺癌患者化疗疗效，指导用药，提高晚期患者的生活质量及预后的监测的重要意义。
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荧光定量PCR检测上皮性恶性肿瘤患者外周血CK19、CK20mRNA
[目的]探讨荧光定量PCR技术检测外周血CK19、CK20mRNA对上皮性恶性肿瘤微转移的临床意义.[方法]采用荧光定量PCR技术检测41例上皮性恶性肿瘤患者术前外周血CK19、CK20mRNA的表达情况.[结果]41例肿瘤患者中CK19mRNA阳性率26.82%,CK20mRNA阳性率21.95%,两者均阳性5例(12.19%).CK19、CK20mRNA阳性率与患者的性别、年龄、肿瘤发生部位、肿瘤细胞分化程度无关(P＞0.05),而与肿瘤分期相关,其差异有显著性.[结论]CK19、CK20mRNA可作为一个检测上皮性恶性肿瘤患者外周血微转移标志物,两者联合检测可提高外周血癌细胞的检出率.
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CK19在乳腺癌外周血中表达的意义
[目的]研究外周血中CK19与原发性乳腺癌病理特征和分期的相关性.[方法]用RT_PCR法检测32例乳腺癌患者外周血中CK19的表达.常规病理检查32例患者的脉管瘤栓状况、分期,用Fish精确检验法检验其差异.[结果]CK19与脉管瘤栓形成或软组织浸润具有明显相关性(P<0.05),与分期呈正相关.[结论]采用RT_PCR检测乳腺癌患者外周血中肿瘤细胞具有高灵敏度,对乳腺癌的治疗具有重要应用价值.对乳腺癌血道微转移灵敏,可作为临床判断预后的参考指标.
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实时荧光定量RT-PCR检测NSCLC患者外周血CK19mRNA和LUNXmRNA实验研究
[目的]应用实时荧光定量RT-PCR检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血CK19mRNA和LUNXmRNA,探讨其诊断NSCLC外周血微转移的临床意义.[方法]选取初治NSCLC患者40例及健康志愿者50例,用实时荧光定量RT-PCR检测外周血CK19mRNA和LUNxmRNA相对定量分析结果.[结果](1)肺癌组与健康对照组的CK19mRNA阳性表达率及相对表达量均有显著差异;肺癌组阳性表达率与原发肿瘤部位、原发肿瘤大小、临床分期、分化程度及病理类型无相关性,其相对表达量鳞癌患者高于腺癌患者(P<0.05).(2)肺癌组与健康对照组的LUNXmRNA阳性表达率有显著差异,其表达与临床病理特征无相关性. [结论]CK19mRNA和LUNXmRNA作为实时荧光定量RT-PCR法检测NSCLC外周血微转移的分子标志物,具有一定临床应用价值.
