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钒对小鼠肝微粒体代谢酶的影响
钒化合物在工业上可用作化学试剂、催干剂、催化剂、还原剂和媒染剂等,陶瓷工业广泛用作釉料,这些工业排出的"三废"造成钒对环境的污染.天然岩石的风化,煤、石油等燃料的燃烧,钒钛磁铁矿等含钒矿物的开采等都造成了钒对环境的污染[1-4].元素钒的化学迁移性很强,可以在水、大气、土壤及生物体所构成的环境圈内迁移,形成污染循环[4].
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玉米赤霉烯酮调节细胞色素P450 3A4转录表达的研究
目的研究真菌性雌激素玉米赤霉烯酮(ZEA)是否能通过活化人甾体激素和外源化学物受体(SXR)诱导细胞色素P450 3A4(CYP3A4)的转录表达.方法在人肝肿瘤细胞株细胞中,用瞬时共转染报告基因试验即共转染含人SXR序列质粒和含CYP3A4外源化学物反应元件的报告基因质粒来检测ZEA对SXR介导的CYP3A4的转录调节作用. 结果 ZEA能通过活化SXR诱导CYP3A4的转录表达,并具有剂量-效应关系和时间-效应关系.在剂量-效应关系研究中,ZEA浓度分别为0.01、0.10、1.00和10.00 μmol/L时,其诱导倍数分别为0.1%二甲基亚砜处理细胞的(1.50±0.21)倍、(1.66±0.27)倍、(3.04±0.82)倍和(3.96±1.16)倍.在时间-效应关系研究中,1.00和10.00 μmol/L的ZEA处理细胞48 h后,诱导能力分别为0.1%二甲基亚砜处理细胞的(3.69±1.34)倍和(5.18±1.50)倍.在浓度为10 μmol/L,处理时间为48 h时诱导能力大,为用0.1%二甲基亚砜处理细胞的(5.18±1.50)倍. 结论 ZEA能通过活化SXR诱导CYP3A4的转录表达.ZEA对CYP3A4的诱导可能影响其他CYP3A4底物,尤其是药物在体内的代谢.
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20-羟二十烷四烯酸在机体生理及病理调节中的作用
20多年前,国外学者就报道了机体内某些组织中存在着细胞色素P-450(cytochrome P-450,CYP).已经证实它能催化花生四烯酸(arachidonic acid,AA)的ω-羟基生成20-羟二十烷四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE).随着研究的不断深入,人们逐渐发现作为第二信使,20-HETE在调节血管平滑肌紧张度、肾功能、脑血流量和肺血管舒张过程中发挥了重要作用;外源性的20-HETE对心脏冠脉循环也有明显的调节作用;并且它与高血压和妊娠毒血症等疾病的发生和发展关系密切.但国内对于20-HETE的相关研究还鲜有报道,本文将主要就20-HETE在机体生理及病理调节中的作用作一综述.
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白血病细胞色素P4503A亚家族多肽5与耐药的相关研究
目的探讨细胞色素P450 3A亚家族多肽5(CYP3A5)与白血病耐药是否相关.方法逆转录-PCR、免疫组化、高压液相色谱法检测白血病细胞系CYP3A5基因的转录、表达及活性,四氮唑蓝法检测细胞系对柔红霉素(DNR)IC50值、流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及DNR诱导凋亡能力.结果 K562、U937、HL-60、NB4、Jurkat 5种细胞株仅K562、U937细胞转录CYP3A5基因.5种细胞株对DNR敏感性(IC50,mg/L)依次为NB4(0.068±0.036)>Jurkat(0.076±0.013)>HL-60(0.092±0.016)>K562(0.148±0.041)>U937(0.150±0.035),K562、U937细胞与NB4、Jurkat、HL-60细胞相比,对DNR显著耐受(P<0.01).K562与NB4细胞相比,前者表达CYP3A5蛋白,并具有显著高的CYP3A5活性 (3.075±0.036)×10-3、(1.635±0.196)×10-3,P<0.05.FCM显示K562与NB4细胞二者S期比例相近,经1mg/L DNR诱导6 h后NB4细胞出现明显的凋亡峰(凋亡比18.4%),而K562细胞则无(凋亡比0.8%).结论 CYP3A5基因的转录、表达及活性与白血病耐药相关.
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利尿剂对高血压大鼠细胞色素P450表氧化酶及血管紧张素Ⅱ1型受体基因表达的影响
目的噻嗪类利尿剂是广泛使用的降血压药物,然而其降血压机理仍然不完全清楚.本研究观察了氢氯噻嗪和吲哒帕胺对自发性高血压大鼠(SHR)细胞色素P450(CYP)表氧化酶2C11及血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1)基因表达的影响,以探讨其降低血压的分子机制. 方法成年雄性SHR随机分为三组,分别每日经胃管给予氢氯噻嗪(10 mg/kg)、吲哒帕胺(0.625 mg/kg)和等量去离子水灌胃,并测量血压和24 h尿量.4周后,检测主要脏器的CYP表氧化酶2C11和AT1表达情况及形态学变化.结果氢氯噻嗪和吲哒帕胺用药1周后动物血压降低,4周时降压幅度达到非常显著水平,与对照组比较P< 0.01.同时在mRNA和蛋白质水平上调肾脏、心脏和主动脉中CYP表氧化酶2C11和下调AT1基因表达;胶原染色显示,两种药物均能显著减少心肌胶原沉积,减轻高血压所致的肾脏损害.结论噻嗪类利尿剂氢氯噻嗪和吲哒帕胺可能通过上调CYP表氧化酶及下调AT1降低血压和保护器官.
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CYP和MDR1的单核苷酸多态性对肿瘤化疗疗效的影响
恶性肿瘤的发病率逐年上升,已成为威胁人类健康的重要疾病之一.在恶性肿瘤的治疗中,不同个体对治疗的反应程度不一样,导致疗效不一,药物毒副作用大小不等.造成这种现象的原因很多,包括基因、生理、病理以及环境等因素.
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地塞米松对大鼠肝脏微粒体细胞色素P-450的诱导效应
目的:观察地塞米松(dexamethasone,DEX)对细胞色素P-450(cytochrome P450,CYP450)的诱导效应,并探讨其诱导机制.方法:雄性Wistar大鼠分别以DEX 0,25,50和100mg·kg-1·d-1诱导处理(ip)4d后,测定大鼠肝脏总CYP450含量,CYP3A1,CYP3A2和CYP2B 1/2的mRNA及蛋白的表达水平,肝脏ERD(CYP3A活性),PROD(CYP2B活性)和BROD(总CYP450活性).结果:CYP450含量、ERD、PROD和BROD活性在DEX多次诱导后都有升高.CYP3A1 mRNA表达水平、蛋白含量和酶活性有明显的升高,剂量效应关系明显;CYP3A2蛋白明显升高,但mRNA表达水平却无明显变化.PROD和CYP2B1/2的mRNA表达水平以及总CYP450含量均在50mg·kg-1·d-1剂量组达到高值.结论:DEX对雄性大鼠主要诱导CYP3A1和CYP3A2两个CYP450成员表达上调,对CYP2B1/2也有一定的诱导作用,其诱导作用主要表现在酶活性、酶蛋白含量和mRNA表达水平的升高.CYP3A1和CYP3A2的诱导方式可能不同.
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CYP3A4高表达肝细胞株建立及其对三氯乙烯毒性的影响
目的 建立CYP3A4高表达肝细胞株并观察其对三氯乙烯毒性的影响.方法 PCR扩增CYP3A4基因并将其克隆到慢病毒高表达载体中,将已经构建的慢病毒载体进行转染后,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞.用嘌罗霉素进行筛选得到CYP3A4高表达肝细胞株,通过荧光定量PCR和Western蛋白质印迹法鉴定细胞株.用三氯乙烯0,0.25,0.5,1.0,2.0和4.0 mmol· L-1对正常肝肝细胞和CYP3A4高表达肝细胞进行染毒12h,实时定量PCR检测凋亡基因bcl-2,胱天蛋白酶3,胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9以及癌基因c-fos,c-myc,K-ras和p53的表达.结果 测序证明重组慢病毒高表达载体CYP3A4基因序列正确,荧光定量PCR检测CYP3A4高表达肝细胞株比正常肝细胞CYP3A4基因表达提高94倍. Western蛋白质印迹结果显示,CYP3A4高表达肝细胞株CYP3A4蛋白表达水平是正常肝细胞的2.36倍.CYP3A4高表达肝细胞bcl-2 mRNA表达水平随三氯乙烯浓度增加呈下降趋势,与正常细胞相比,三氯乙烯0.25和0.5 mmol·L-1使CYP3A4高表达肝细胞中的bcl-2 mRNA明显升高(P＜0.01);三氯乙烯0.5,1.0,2.0和4.0 mmol· L-1处理使CYP3A4高表达肝细胞组的凋亡基因胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9的mRNA表达水平明显升高(P＜0.05);三氯乙烯0.5,1.0,2.0和4.0 mmol·L-1处理的CYP3A4高表达肝细胞c-fos、c-myc和k-ras基因的表达显著升高(P＜0.01),p53表达水平明显下降(P＜0.01).结论 三氯乙烯对CYP3A4高表达肝细胞株中的凋亡基因和癌基因表达具有明显促进作用,说明CYP3A4是三氯乙烯在体内代谢的重要因素.
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微粒体谷胱甘肽S-转移酶与药物代谢
目的阐明微粒体谷胱甘肽S-转移酶(mGST)的研究新进展及其在药物代谢中的作用.方法综述了近年来对mGST的生物学特性及在肝脏药物代谢中的研究进展.结果膜结合型mGST超基因家族在药物经肝微粒体解毒代谢、防止脂质过氧化以及抗癌药物耐药性中起到重要的作用.结论 mGST具有重要的药理与毒理学意义,具有深入研究的广阔前景.
关键词： 微粒体谷胱甘肽S-转移酶 细胞色素P-450 药物代谢 毒理学 -
丙烯酰胺对人角质形成细胞DNA损伤的研究
目的研究丙烯酰胺(AA)对人角质形成细胞的细胞毒性和对DNA的损伤及其可能机制.方法(1)人角质形成细胞株HaCaT细胞经AA浓度梯度染毒44h后,以四氮唑盐(MTI)法检测细胞存活率.(2)细胞经AA浓度梯度染毒,以彗星试验检测细胞DNA损伤.(3)细胞经2.00 mmol/LAA和0.50 mmol/L的细胞色素P-450(CYP-450)抑制剂1-ABT共处理4 h后,以彗星试验探索DNA损伤与CYP-450的关系.结果(1)细胞毒性试验显示,AA染毒44h后细胞存活率显著下降.(2)AA染毒4 h未观察到细胞毒性,但各组细胞的DNA较对照组均检测到显著损伤,且损伤程度随染毒剂量增大而加重,彗尾长度在处理剂量范围内有明显的剂量效应关系;细胞经1-ABT和2.00 mmol/L AA共同处理后,拖尾率和尾长为15.4%和(8.2±2.0)μm,较2.00mmol/L AA组[80.6%和(44.3±4.0)μm]明显降低,差异有显著性(P＜0.01).结论AA对HaCaT细胞具有细胞毒性和基因毒性,AA诱导的DNA损伤可能与其经CYP-450作用产生的氧化代谢物有关.
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三氯乙烯对CYP2E1基因高表达细胞和正常肝细胞的毒性作用
目的 应用分子克隆技术建立CYP2E1基因高表达细胞株,观察三氯乙烯(TCE)对CYP2E1基因高表达细胞和正常肝细胞的毒性,探讨CYP2E1基因在TCE毒性中的作用.方法 用不同剂量三氯乙烯(0、0.25、0.5、1.0、2.0和4.0 mmol/L)对CYP2E1高表达细胞和正常人肝细胞(L02细胞)进行染毒12h,观察凋亡基因(Bcl-2、caspase-3、caspase-8、caspase-9)和癌基因(c-fos、c-myc、k-ras、p53)表达变化.结果 TCE染毒引起L02肝细胞和CYP2E1高表达细胞Bcl-2表达水平下降,0.25～2.0 mmol/L TCE剂量时L02肝细胞Bcl-2表达下降50％～60％,但相同剂量组的CYP2E1高表达细胞Bcl-2表达水平明显高于正常肝细胞20％～50％; 0.5～4.0 mmol/L TCE剂量时CYP2E1高表达细胞中凋亡基因caspase-3、caspase-8、caspase-9表达水平比正常肝细胞高30％～600％,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).TCE染毒后对L02肝细胞和CYP2E1高表达细胞的癌基因表达水平有明显差异,在0.5 ～4.0 mmol/L TCE染毒时,CYP2E1高表达细胞的c-fos、k-ras和c-myc基因表达水平明显高于L02肝细胞,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),升高幅度达25％～120％; CYP2E1高表达细胞的p53表达水平比正常肝细胞表达下降10％～50％,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 TCE对正常肝细胞和CYP2E1高表达细胞凋亡基因和癌基因表达存在明显差异,提示CYP2E1是TCE在体内代谢的重要因素,与TCE毒性存在一定关系.
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中草药对细胞色素P-450酶调控研究进展
对近5年国内外关于中草药对细胞色素P-450酶调控的文献进行检索、整理分析和归纳总结,综述了有关中草药及其单体化合物对细胞色素P-450酶调控方面的研究进展并评述了对P-450酶调控的研究策略.提出加强中草药对P-450酶作用的研究有重要意义,有助于指导中药的安全合理应用和发现新药.
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细胞色素P-450与电离辐射的关系
电离辐射可以改变细胞色素P-450(主要有CYP1B1、CYP1A1、CYP4A11、CYP2E1等)的活性和(或)mRNA、蛋白含量,从而影响药物代谢和有毒化学物的生物转化过程及其生物学作用.细胞色素P-450参与了生物还原活性物TMQ、AQ4N在机体内的还原.动物实验和已有的临床研究表明,调节P-450可以提高生物还原活性物的辐射增敏作用和抗肿瘤作用.
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CYP和GST基因的遗传多态性与化疗个体化研究进展
化疗极大地改变了白血病等恶性肿瘤患者的预后,但仍有部分患者不能获得缓解或缓解后复发.近年研究发现,药物代谢酶的遗传多态性可导致患者对药物出现不同的治疗效应.细胞色素P450和谷胱甘肽S-转移酶是两类重要的药物代谢酶,参与体内多种药物代谢,在人群中具有广泛的遗传多态性,它们与化疗个体化的关系已引起人们的关注.
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耐氟康唑白念珠菌ERG11的基因突变
目的研究国内临床耐氟康唑白念珠菌的吡咯类药物作用靶酶--细胞色素P-450羊毛固醇14-α脱甲基酶的基因ERG11突变. 方法用酶消化和碱裂解法抽提基因组DNA,PCR扩增ERG11基因的读码框片段,将目的片段与PBS载体(Bluscript M13)连接,重组体转入DH5α中,从而测定序列. 结果在15株耐药菌中共发现了12个有义点突变、17个无义点突变和一个菌株的部分移码.12个有义点突变的氨基酸变异是F72L、D81G、D116E、K128T、Y132H、E266D、D294G、S361P、M374V、P386L、H400R和Q474K,突变主要靠近羧基端;而敏感株的氨基酸变异为F72L、K128T和E266D,靠近氨基端.耐药株的D294G、S361P、M374V、P386L、H400R和Q474K氨基酸变异与文献报道不同.结论耐药株和敏感株的点突变不同, D294G、S361P、M374V、P386L、H400R和Q474K变异位点可能与耐药性有关,做整段编码基因的功能表达,有助于明确变异与耐药的关系.
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一个三姐妹同患P450c 17α缺陷家系的分子遗传学研究
目的 研究1个三姐妹同患P450c 17α缺陷家系的分子遗传学机制.方法 采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)、限制性内切酶酶切及自动测序等方法检测患者家系中CYP17基因的突变情况.结果 3例患者CYP 17基因中一等位基因的第6号外显子有杂合点突变His373→Leu,用等位基因特异性扩增的方法证明此点突变来自父方;另一等位基因第8号外显子另有9个碱基缺失的突变,使位于羧基端487-489位的Asp-Ser-Phe缺失,并用限制性内切酶酶切的方法证实患者的母亲和一个胞弟是该缺失突变的携带者.结论 1个三姐妹同时患病的中国人P450c 17α缺陷的家系是由于CYP 17基因的复合杂合突变所致.
关键词： 醛裂解酶类 细胞色素P-450 杂合子 突变 甾类17α-单加氧酶 -
细胞色素CYP2E1和GST M1与肺癌易感性的病例对照研究
目的探讨谷胱甘肽转硫酶(GST)和细胞色素CYP2E1多态性与肺癌易感性的关系.方法选取广州市广东籍新发肺癌病人91例及同期非肺部疾患及相同性别的病人91例作匹配,调查他们的吸烟、饮酒等因素的暴露情况.用聚合酶链式反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测CYP2E1和GST的基因多态性.结果CYP2E1 C1C1基因型与C1C2基因型比较,其OR为1.82(95%CI=0.95～3.40),GSTM1基因缺失型的OR值为1.26(0.69～2.30),而两者联合分析时,则可增加患肺癌的危险,其OR值为2.13(0.82～5.56),但无统计学意义(P＞0.05).吸烟与肺癌关系密切,其OR值为2.82(1.56～5.12),当吸烟与这两种基因型协同作用时,可明显提高患肺癌的危险性,携带CYP2E1 C1C1基因型的吸烟者的OR值为5.42(2.05～14.32),GSTM1基因缺失型的吸烟者的OR值为4.38(1.81～10.61).多因素logistic回归分析结果表明:文化程度(OR为0.63,0.45～0.86)、吸烟量(OR为1.56,1.14～2.14)、元抽油烟机(OR为3.77,1.48～9.56)、食用动物油(OR为1.67,1.25～2.24)、胡萝卜(OR为0.47,0.22～0.98)、饮酒(OR为6.58,1.53～28.3)、直系亲属肺癌史(OR为3.75,1.64～8.58)等因素与肺癌有关,而上述两种基因均未进入模型.结论CYP2E1和GSTM1在单因素分析中未显示出与肺癌风险的联系.这两种基因分别与吸烟协同作用时明显提高肺癌的危险性.然而在多因素分析中均未进入logistic模型,说明它们均不是肺癌个体易感性的主效基因,而是次效基因.
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氟喹诺酮类药对人肝药酶活性的影响
目的:观察氟喹诺酮类(FQs)药物对人肝微粒体药物代谢酶(细胞色素P-450)活性影响的差异.方法:反应体系中微粒体蛋白终浓度为0.33～2.0 g*L-1,药物终浓度为400 mg*L-1,测定药物代谢酶的活性.对照不加药.并测定不同底物浓度和不同环丙沙星浓度时乙基吗啡N-脱甲基酶的Vm和Km值,求抑制常数Ki.结果:FQs对酶活性的抑制强度为:培氟沙星(PFLX)>环丙沙星(CPLX)>氧氟沙星(OFLX)>左氧氟沙星(LVLX).FQs对戊巴比妥侧链羟化酶(PSCH)、苯并芘羟化酶(BPH)、氨基比林N-脱甲基酶(ADM)、乙基吗啡N-脱甲基酶(EDM)和NADPH-细胞色素C还原酶的平均被抑制率分别为:29 %,26 %,19 %,17 %和2.3 %.CPLX对EDM的抑制为竞争性抑制为主的混合性抑制,抑制常数Ki=250 mg*L-1.结论:4种FQs对多种肝药酶活性均有不同程度的抑制,LVLX的抑制作用相对较弱.5种肝药酶对药物的敏感性也各不相同.CPLX对EDM的抑制是竞争性抑制为主的混合性抑制.
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罗格列酮对大鼠肝细胞色素P-450 2E1活性的影响
目的:探讨罗格列酮对细胞色素P-450 2E1活性的影响.方法:在正常大鼠肝细胞微粒体中加入浓度为0,0.10,0.25,0.50,1.00 mmol·L-1罗格列酮,以N-二甲基亚硝胺为底物,测定细胞色素P-450 2E1活性.另外用0,0.2,2,20 mg·kg-1剂量的罗格列酮分别对用乙醇诱导和未用乙醇诱导的大鼠灌胃,然后取大鼠肝细胞微粒体,以N-二甲基亚硝胺为底物,测定细胞色素P-450 2E1活性. 结果:在体外试验中,加入不同浓度罗格列酮的大鼠肝微粒体中细胞色素P-450 2E1活性差异无显著意义.在体内试验中,给予不同剂量罗格列酮的大鼠的肝细胞色素P-450 2E1活性差异也无显著意义;结论:罗格列酮对大鼠的肝细胞色素P-450 2E1活性无明显影响.
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CYP2D6基因与药物代谢
细胞色素P-450(CYP)中的CYP2D6酶在抗抑郁药、安定药及某些抗心律失常药的代谢中起重要作用,CYP2D6基因位于22号常染色体上为隐性遗传,CYP2D6基因呈多态性约有70余种等位基因变异型,也存在特异人群差别,因而导致所编码的酶活性不同,这些数据有助于理解药物代谢的个体差异、有助于预测药物之间的相互作用.
