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应用中国仓鼠卵巢细胞法检测百日咳毒素毒性方法的建立及初步验证

潘海龙;刘杰;罗世东;吴杰;刘少祥;秦敏;李炯

摘要: 目的 建立用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞检测百日咳毒素(pertussis toxin,PT)毒性的方法,并对其适用性进行初步验证.方法 根据PT能特异地使CHO细胞簇集的特性,以国家PT标准品为参考品,取多批脱毒后PT进行检测,摸索适宜的孵育时间、细胞悬液浓度等实验条件,建立PT毒性的体外检测方法.对PT参考品进行倍比系列稀释,确定本法的检测限.对5批脱毒后PT进行重复检测,验证本法的重复性.结果 利用不同浓度CHO细胞对脱毒PT进行测定,确定佳细胞浓度为5×104/ml,并通过佳浓度细胞确定簇集结果的佳判定时间为PT接种后48 h.本法对PT标准品的检测限定为125.0~ 500.0 pg/ml.用本法重复测定5批脱毒PT的残余毒性,变异系数为0.0%~34.6%,说明该法重复性良好.结论 建立的CHO细胞检测法快捷、简便,能灵敏、准确地检测脱毒PT的残余毒性,可用于相关疫苗产品的质量控制.

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