骨髓源性间充质干细胞联合来氟米特对小鼠T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨骨髓源性间充质干细胞(BMSCs)在体外联合来氟米特(LEF)对小鼠T淋巴细胞的免疫调节作用.方法 直接贴壁筛选法分离培养小鼠BMSCs,流式细胞分析(FCM)鉴定BMSCs的纯度.用EZ-SepTMm Mouse 1X分离异体BALB/c小鼠的脾淋巴细胞,在刀豆球蛋白A(ConA)诱导的同时,先经LEF处理,洗去LEF后,脾淋巴细胞再和BMSCs共培养.分组:A组:脾淋巴细胞;B组:脾淋巴细胞+BMSCs;C组:LEF处理的脾淋巴细胞;D组:LEF处理的脾淋巴细胞+BMSCs.用四甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测各组T淋巴细胞的增殖情况,流式细胞术分析各组T淋巴细胞的活化及凋亡情况,定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组T淋巴细胞的白细胞介素(IL)-2、IL-10基因水平.结果 在体外,BM-SCs处理组(B组)T淋巴细胞的A570 nm值为0.578±0.042,LEF处理组(C组)A570 nm值为0.5024±0.040,两组A570 nm值均显著低于对照组(A组)A570 nm值为0.778±0.035(P<0.01).BMSCs联合LEF组(D组)A570 nm值为0.218±0.033,显著低于BMSCs处理组及LEF处理组(P<0.01). BMSCs联合LEF对CD3+CD69+、CD3+CD28+表达、IL-2基因表达均无明显影响.BMSCs单独或联合LEF组T淋巴细胞凋亡率分别为(2.29±0.32)%、(4.22±0.98)%,较A组T淋巴细胞凋亡率(8.08±1.20)%均明显下降.BMSCs处理组和LEF处理组T淋巴细胞IL-10基因相对表达分别为:0.098±0.039、0.054±0.022明显低于A组(IL-10基因相对表达为1.000)(P<0.01),MSCs联合LEF组IL-10基因相对表达为:0.023±0.015,显著低于BMSCs处理组及LEF处理组(P<0.01).结论 BMSCs联合LEF对小鼠T淋巴细胞有一定程度的协同免疫调节作用.

短期益赛普与甲氨蝶呤环磷酰胺联合治疗类风湿关节炎的临床研究

目的 探讨短期使用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体一抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc,益普赛)与甲氨蝶呤(MTX)、环磷酰胺(CTX)联合治疗类风湿关节炎(RA)的有效性和安全性.方法 对84例患者随机分为实验组和对照组,仅有56例患者完成了本实验.实验组给予益赛普皮下注射治疗3个月,每周2次,每次25 mg;同时给予MTX治疗,每周1次,每次7.5～15 mg;CTX每3周1次,每次200 mg,3个月后给予空白模拟益赛普,继续接受MTX和CTX维持治疗.对照组给予益赛普皮下注射治疗,剂量及方法同实验组,同时给予空白模拟MTX和CTX对照,疗程为1年,随时观察并记录治疗过程中的任何不良事件,在0、2、4、8、12、24、36、52周监测其血常规、红细胞沉降率(ESR)、肝功能、肾功能、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体.结果 实验组和对照组在ACR20,ACR70,ESR及CRP实验室指标均较入组时有明显改善,但两组问差异无统计学意义(P>0.05).治疗12周实验组停用益赛普时,两组的上述指标均进一步改善.疗程满36周时,实验组较对照组的各项指标仍持续好转,相关抗体水平浓度较对照组差异有统计学意义(P<0.05),两组间的不良反应率差异无统计学意义.结论 短期益赛普与MTX、CTX联合治疗RA,可以减少益赛普的疗程,有效地缓解RA的症状和降低抗体水平,并不增加不良反应,具有较好的安全性.

M3受体蛋白多肽在干燥综合征发病中作用的实验研究

目的 应用M3受体蛋白多肽213-228(M3RP)免疫BALB/c小鼠.建立干燥综合征(SS)动物模型,以探讨M3RP在SS发病机制中的作用.方法 应用M3RP 100 μg配合等体积佐剂,于0,14,35,51 d进行尾根部皮下注射给药免疫4周龄的BALB/c小鼠,以颌下腺匀浆作为阳性对照,谷胱甘肽转移酶(GST)及磷酸盐缓冲液(PBS)作为阴性对照.观察小鼠饮水量的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测不同时间点小鼠血清中的M3RP抗体、α-胞衬蛋白(α-fodrin)抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体,类风湿因子(RF)及抗核抗体(ANA)等自身抗体,并测定血清中自细胞介素(IL)-2,IL-10和干扰素(IFN)-γ.应用苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学方法检测小鼠的颌下腺及腮腺的病理改变及α-胞衬蛋白的抗原分布.结果 ①M3RP免疫可诱导BALB/c小鼠血清自身抗体的产生.免疫前小鼠血清中的抗体均为阴性,而自初次免疫后第35天开始,在给予颌下腺匀浆及M3RP免疫的BALB/c小鼠中的M3RP抗体、α-胞衬蛋白抗体和ANA为阳性,而上述抗体在PBS和GST组为阴性.② M3RP免疫可导致BALB/c小鼠颌下腺淋巴细胞浸润和α-胞衬蛋白的表达.自初次免疫后第56天开始,予颌下腺匀浆及M3RP免疫的BALB/c小鼠的腺体中出现少量淋巴细胞浸润,且随时间的延长,淋巴细胞浸润逐渐加重;而应用PBS和GST免疫的小鼠腺体无明显的病理改变.应用α-胞衬蛋白多抗免疫组织化学的方法检测颌下腺匀浆及M3RP免疫的BALB/c小鼠的颌下腺组织有α-胞衬蛋白表达,而PBS和GST组为阴性.③M3RP免疫可使BALB/c小鼠血清IFN-γ和IL-2水平升高.IFN-γ和IL-2在给予颌下腺匀浆及M3RP免疫后较对照组明显升高(P<0.05),而IL-10在各实验组差异无统计学意义.结论 M3RP可诱导BALB/c小鼠出现类似SS的表现,提示M3RP可能作为自身抗原参与了SS的发病过程.

原发性胆汁性肝硬化T淋巴细胞亚群分析

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者的T淋巴细胞亚群及共刺激信号表达的特点及临床意义.方法 以未经治疗的98例PBC患者为研究组,性别、年龄匹配的健康人30名作为对照组.以流式细胞仪技术检测外周血淋巴细胞亚群以及T淋巴细胞表面的共刺激信号CD28.结果 PBC与对照组T细胞亚群差异有统计学意义:PBC组CD4+T淋巴细胞升高,CD8+T淋巴细胞下降,CD4+/CD8+比值上升(P<0.05);CD4+CD28-T细胞和CD8+CD28-T细胞明显增加(P<0.05).结论 PBC存在免疫调节功能的异常,其中CD28的表达明显减少;CD8+CD28-的细胞群可能在PBC中有一定的免疫调节作用.

Sox9基因转染对骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响

目的 探讨Sox9基因转染对骨髓间充质干细胞(MSCs)成软骨分化的影响.方法 采用密度梯度离心和贴壁培养法分离兔骨髓MSCs,体外培养扩增.阳离子脂质体介导重组真核表达Sox9质粒转染骨髓MSCs,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹实验(Westem blot)的方法检测基因产物的表达,荧光显微镜和流式细胞术测定细胞转染效率;四甲基噻唑蓝(MTT)法测定基因转染对细胞增殖能力的影响,流式细胞术对转基因细胞进行细胞周期分析;通过Westem blot,RT-PCR和免疫组织化学染色的方法检测Sox9基因转染对MSCs成软骨分化的影响.结果 脂质体介导Sox9基因可以成功地转染兔骨髓MSCs;Sox9基因转染对细胞增殖能力无明显影响;基因转染后的细胞表达软骨分化特异性分子Ⅱ型胶原,Sox9,aggrecan等明显增加.结论 Sox9基因转染骨髓MSCs可以获得稳定表达,基因表达产物可以促进骨髓MSCs向软骨方向的分化.

STAT1/SOCS1在高迁移率族蛋白1诱导的大鼠滑膜细胞中的表达

目的 探讨高迁移率族蛋白(HMGB)1对滑膜细胞增殖的影响及机制.方法 ①常规培养的滑膜细胞,随机分为正常对照组和肿瘤坏死因子(TNF)-α组,培养6、12 h和24 h,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)免疫细胞化学法(ICC)检测HMGBI mRNA及蛋白在滑膜细胞中的表达变化;②常规培养的滑膜细胞,随机分为正常对照组、HMGB1组,分别培养6、12 h和24 h,RT-PCR检测磷酸化信号转导和转录激活因子(p-STAT1)mRNA表达;ICC和流式细胞术(FCM)检测p-STAT1、细胞激酶信号抑制剂(SOCSl)蛋白的表达;ICC检测PCNA蛋白的表达.结果 ①TNF-α刺激6、12、24 h显著上调HMGB1mRNA的表达[0.86,0.92,1.06 vs 0.70,P<0.01];其蛋白表达亦增强,HMGB1蛋白不仅表达于细胞核,而且出现于胞质中;② HMGB1作用6、12、24 h显著增强STAT1 mRNA及蛋白的表达量[0.30,0.69,1.05 vs 0.24,P<0.01]及[1.34±0.09,1.55±0.16,1.74±0.13 vs 1.00±0.15,P<0.01];SOCS1蛋白量分别为1.43±0.10、1.58±0.05和1.24±0.15,呈先升高后下降.③ p-STAT1与SOCS1蛋白表达呈负相关(r=-0.484,P=0.04).结论 HMGB1是滑膜细胞增殖过程中的重要细胞因子,其可能通过上调STAT1的表达和活性,促进细胞增殖.

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞蛋白质组学研究

目的 运用蛋白质组学的方法,比较正常人及早期活动性类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)蛋白质的差异表达,寻找RA疾病相关致病蛋白质.方法 选取9例早期活动期RA患者以及9名健康成年志愿者,用淋巴细胞分离液分离PBMCs,抽提PBMCs中的蛋白,采用同相pH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)分离正常人及RA患者PBMCs总蛋白质.凝胶经考马斯亮蓝染色显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法验证部分差异蛋白质.结果 获得RA患者及正常人PBMCs蛋白质双向凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为556和579,匹配率分别为89.4%和 88.5%,通过比较分析,差异表达蛋白质点数为23,选取18个点进行质谱鉴定,成功鉴定14个蛋白质,其中a-肌动蛋白、纤维蛋白素原a-链、载脂蛋白A-I(ApoA-I)等9个蛋白质点在RA中表达上调,硫氧还蛋白-2、谷胱甘肽S-转移酶等6个蛋白质点在RA中表达下调,这些差异蛋白质的功能涉及物质代谢、抗氧化、信号传导、能量产生及细胞骨架.并用RT-PCR方法验证差异蛋白质ApoA-I.其结果与上述蛋白质差异表达结果相符.结论 在RA患者PBMCs中存在着差异表达蛋白质,这些差异蛋白质可能是RA发病的内在因素.其RT-PCR结果与蛋白质差异表达相符,证明蛋白质组研究的可靠性.

重组腺病毒程序性死亡配体-1治疗BXSB狼疮鼠的实验研究

目的 观察增强程序性死亡-1(PD-1)信号通路的功能对BXSB狼疮鼠病变的影响.方法 重组腺病毒程序性死亡配体-1(AdPD-L1,2.2×109 PFU/ml×0.5ml,一次量)尾静脉注射8周龄雄性BXSB狼疮鼠.结果 AdPD-L1经尾静脉注入BXSB狼疮鼠体内后,PD-L1可有效转染80%近端肾小管上皮细胞;12周时AdPD-L1组狼疮鼠的蛋白尿发生率为20%,对照组为100%,AdPD-L1组IgG型dsD-NA抗体光密度值为0.38,肾小球IgG荧光表达强度1.16.均较对照组明显下降(P<0.01),肾组织病理损伤也减轻.结论 增强PD-1信号通路的功能可减轻BXSB狼疮鼠的病变.

抗中性粒细胞胞质抗体对中性粒细胞表面FcγⅡ/Ⅲ受体表达的影响及其意义

目的 探讨抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)对中性粒细胞表面FcγⅡ/Ⅲ(CD32/CD16)受体表达的影响及临床意义.方法 提纯活动期ANCA相关性小血管炎(AASV)患者的ANCA IgG,分离健康人新鲜中性粒细胞,以ANCA刺激粒细胞1 h后,流式细胞仪检测CD32/CD16的表达.流式细胞仪检测18例系统性小血管炎患者CD32/CD16的表达,以35名健康人为对照.同时对18例患者临床表现及血管炎活动情况进行评分,与CD32/CDl6表达进行相关分析.结果 ANCA IgG与正常人IgG相比显著上调中性粒细胞表面CD16的表达(Mnx 67±23 vs 54±21,P<0.01),但对CD32的表达无影响(Mnx 21±8vs 16±8,P>0.05).系统性小血管炎患者CD16表达的平均荧光强度显著高于正常人(Mnx 62±12 vs 53±10.P<0.01),而CD32的表达与正常人差异无统计学意义.CD16表达与伯明翰小血管炎呈显著正相关(P<0.01).结论 ANCA相关性小血管炎患者高表达Fcγ受体,ANCA可以干预CD32/CD16受体的表达,调控FCγ受体表达可能是系统性小血管炎的发病机制之一,监测CD16的表达水平对于判断疾病活动具参考价值.

白塞病外周血白细胞差异表达基因谱的发现和验证

目的 建立白塞病(BD)外周血白细胞差异表达基因谱,探讨BD致病基因.方法 应用Affymetrix寡核苷酸基因芯片研究3对未经治BD和健康人外周血白细胞,建立差异表达基因谱;从中选取B细胞淋巴瘤6(BCL6)、白细胞来源的精氨酸氨基肽酶(LRAP)、可诱导的T细胞共刺激分子配体(ICOSLG)和膜表面金属蛋白内切酶(MME)4个基因,设立BD组、健康组、系统性红斑狼疮(SLE)组和类风湿关节炎(RA)组,采用实时定量一聚合酶链反应验证其表达水平.结果 ①在国际上首次建立了BD外周血白细胞差异表达基因谱,包含差异表达基因146个,其中上调基因89个,下调基因57个.②上述4个基因表达水平在BD活动期均显著高于健康对照组,在缓解期下降;其中BCL6、MME表达水平也显著高于SLE组和RA组.结论 ①本研究为在基因水平上进一步揭示BD的发病机制提供了线索;②首次证实了上述4个基因的表达水平与BD的活动性有关;分析表明肿瘤坏死因子(TNF)-α和干扰素(IFN)-γ调控BCL6、ICOSLG和LRAP表达水平,可能是一个新发现的致病环节;MME基因可能成为利于BD诊断的检测标记.

氧化应激异前列腺素与系统性硬化症

系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)是一种累及皮肤和内脏,终导致组织纤维化的多系统损害的疾病.虽然SSc的发病机制还未完全阐明,但皮肤和内脏器官细胞外基质的过度积聚,血管内皮细胞功能紊乱及免疫异常已经作为其特征性改变而被认识.近年很多研究发现氧化应激在SSc的发生发展中起重要作用,而目前认为体内适用的氧化应激标志是异前列腺素(isoprostanes,iso-PGs).其具有多种潜在的生物学活性.与SSc组织损伤密切相关.本文就近年来氧化应激及iso-PGs在SSc中的研究进展作一综述.

特发性炎性肌病与肿瘤的关联性研究进展

特发性炎性肌病(idiopathic inflammatory myopathy,IIM)是一种横纹肌非化脓性自身免疫性疾病,主要包括多发性肌炎(polymyositis,PM)、皮肌炎(dermatomyositis,DM)、儿童DM、包涵体肌炎(inclusion body myositis,IBM)和重叠综合征.自从1916年IIM与肿瘤的相关性被首次报道以来,它们的关联性一直成为争论的话题.随着IIM研究的不断进展,它们之间的相关性已得到证实,但IIM中肿瘤的发生率以及相关的危险因素、发生机制、早期诊断和治疗方法等并不十分清楚.本文就近年来国内外该领域的研究进展作一综述.

强直性脊柱炎的脊柱外科治疗

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是一种累及中轴骨的炎性风湿病,多见于年轻患者,15～35岁高发,男女比例约5:1,不同种族发病率约为0.1%～2%.可以引发特征性的腰背痛,并造成脊柱的结构和功能障碍.降低患者生活质量[1].畸形严重时,可合并胸椎的后凸畸形和腰椎的前凸丧失,导致平视障碍,还可以压迫腹腔内脏,引起腹部并发症[2].脊柱外科治疗目的主要是恢复脊柱的正常曲度和躯干平衡,改善患者的平视能力,治疗脊柱畸形相关并发症[3].本文就AS脊柱外科治疗简要介绍如下.

死于弥漫性肺泡出血的韦格纳肉芽肿病一例

韦格纳肉芽肿病(Wegener's granulomatosis,WG)是一种坏死性肉芽肿性血管炎.本文介绍1例WG并发弥漫性肺泡出血(diffuse alveolar hemorrhage,DAH)并迅速死亡的病例,以提高医师对本病的认识.

间歇小剂量环磷酰胺治疗12例狼疮肾炎慢性肾功能不全的临床分析

目的 探讨间歇小剂量环磷酰胺(CTX)治疗狼疮肾炎(LN)慢性肾功能不全的有效性及安全性.方法 给予12例LN慢性肾功能不全氮质血症期患者间歇小剂量CTX治疗,用量为200-400mg每2～4周,随访2个月～5年,观察12例患者治疗前后的临床转归及实验室改变.结果 12例患者疾病活动度(SLEDAI)明显下降.肾功能得到不同程度的改善,9例患者肾功能不全逆转,肌酐降至正常水平,3例仍处于氮质血症期,但较治疗前有所改善.无明显不良反应发生.结论 间歇小剂量CTX治疗LN是有效、安全、可行的.但肾功能能否长期改善尚有待大样本的临床观察及长期随访.

韦格纳肉芽肿病合并肥厚性颅内硬脑膜炎三例并文献复习

目的 分析以肥厚性颅内硬脑膜炎(HCP)为主要表现的韦格纳肉芽肿病(WG)的临床表现、磁共振成像(MRI)和硬脑膜病理特征.方法 报道3例WG合并HCP,并复习国外文献.结果 HCP多见于局限型WG,常在发病半年内出现,表现为头痛和颅神经病,伴有呼吸道/眶部受累.半数以上患者抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)阳性.脑脊液改变示约1/3有轻度白细胞数增高和2/3有蛋白增高.MRI均显示硬脑膜增厚并强化.硬脑膜活检病理显示肉芽肿炎症(100%)、组织坏死(94%)和血管炎(56%).绝大多数患者对糖皮质激素和(或)免疫抑制剂治疗反应良好.结论 HCP在WG中较罕见.多见于局限型WG,表现为头痛和颅神经病,ANCA、MRI及脑膜活检有助于诊断;糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗有效.

重视痛风患者降尿酸目标治疗新策略

痛风(gout)是嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排泄障碍所致血尿酸增高的一组异质性疾病.目前由于人口老龄化,肥胖、高血压、糖尿病和代谢综合征的增加,小剂量阿司匹林及噻嗪类利尿剂的使用,肾功能不全等原因,全球痛风的发生率正在逐年上升.

从循证医学角度谈吗替麦考酚酯抗风湿作用的定位

吗替麦考酚酯(MMF)作为免疫抑制剂,近十余年来逐渐被用于治疗风湿免疫疾病,尤其是治疗狼疮肾炎(LN).从近年的国际红斑狼疮学术会议、美国风湿病学会(ACR)年会、欧洲风湿病学会联合会(EULAR)年会、亚太区风湿病学会联合会(APLAR)年会等的交流中,以及在一些迁移到美国、加拿大、欧洲等国继续治疗的LN患者中,均可得知世界各国的风湿科和肾科医生,均普遍在运用MMF治疗红斑狼疮.

误诊为结缔组织病的左心房黏液瘤七例临床分析

左心房黏液瘤是少见的心脏原发肿瘤,本文报告2001年7月至2007年3月在我科就诊前曾误诊为结缔组织病的左心房黏液瘤7例.

本刊加入"万方数据——数字化期刊群"的声明

第13届全国风湿病学术年会会议纪要

由中华医学会风湿病学分会主办,浙江医学会承办的第13届全国风湿病学学术年会于2007年5月14日至17日在杭州召开.大会共收到论文700余篇,来自全国各地的到会代表共1000余人.本次会议以类风湿关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)以及生物制剂治疗风湿病为重点专题,同时还涵盖了其他常见风湿病的发病机制和诊疗进展的研究.

2008年欧洲抗风湿病联盟年会热点荟萃

第9届欧洲抗风湿病联盟年会(EUIAR 2008)于6月11日至14日在法国巴黎召开.来自全球近13 000名代表参加了此次大会,其中包括中国的70余名代表,会议就风湿性疾病基础和临床的新研究进展进行了讨论和交流,大会共收到3000余篇论文摘要,召开了102场专题会议,并邀请了21位特邀讲者作专题报告和大会发言,并有1362篇论文作为壁报交流.并从上述论文中选出800余篇刊登于EULAR杂志Ann Rheum Dis.

周期联合免疫抑制剂治疗类风湿关节炎的新思路

类风湿关节炎(rheumtoid arthritis,RA)是一种高度致残性自身免疫性疾病.我国每年直接用于RA治疗的药费和因劳动力丧失带来的间接经济损失十分巨大.研究及推广对RA疗效好、副作用少和价格低的治疗方案,不仅能提高RA患者的生活质量,而且能减轻社会的经济负担,具有良好的社会效益和经济效益.