补体旁路激活致小鼠急性肺损伤的炎症病理机制研究

目的：研究补体旁路激活所导致的小鼠肺部急性炎症的发生发展及相关指标的变化,为药物筛选及干预研究提供理想的小鼠肺部急性炎症病理模型。方法 SPF级昆明小鼠尾静脉注射眼镜蛇毒因子( CVF)激活血清补体旁路途径,根据注射后取样时间不同,分为15 min、30 min、1 h、2 h、6 h组,同时平行设置PBS对照组。取肺组织测定肺系数、肺含水量,并行病理切片检查,肺组织匀浆测定髓过氧化物酶(MPO)活性；制备支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清,测定BALF中的细胞数和蛋白含量,采用 ELISA 法分别测定BALF和血清中的 IL-6、TNF-α、P-selectin 和 ICAM-1含量。结果小鼠尾静脉注射 CVF后可致肺部炎性细胞明显浸润,MPO活性明显上调,BALF中细胞总数和蛋白浓度明显增加。 BALF和血清中的IL-6、TNF-α、P-selectin水平及血清中ICAM-1的含量均明显升高,其中,BALF中P-selectin含量在30 min时间点出现1个小高峰,IL-6和TNF-α在1 h时间点出现1个高峰,在2h时间点均无进一步上升,但在6h时间点各指标均又明显升高；血清中IL-6和TNF-α含量在1 h时间点达到峰值,随后浓度降低, P-selectin和ICAM-1水平随着时间的延长持续上升。而肺系数、肺含水量及BALF中ICAM-1的含量与PBS组相比无明显变化。结论补体旁路激活可导致小鼠肺部急性炎症的发生,以30 min至1 h的炎症反应为明显,该实验可以为药物筛选及干预研究提供理想的动物肺部急性炎症病理模型。

基于高迁移率族蛋白B1对老鼠生物碱A抗肝纤维化作用机制的研究

目的：基于高迁移率族蛋白B1( HMGB1)探讨老鼠簕生物碱A( HBOA)抗大鼠肝纤维化的作用机制。方法采用四氯化碳( CCl4)橄榄油溶液灌胃12周，建立大鼠肝纤维化模型。第8周确定建模成功后，将其随机分为模型对照组、秋水仙碱组、HBOA 高剂量组、HBOA 低剂量组，从第9周起，相应药物干预4周后，取肝组织切片行 HE 染色及Masson染色；测定血清中 ALT、AST、T-BIL、HMGB1、IL-1β、TNF-α的含量；免疫组化法检测肝组织中HMGB1蛋白的表达；实时荧光定量PCR 法测定肝组织中HMGB1 mRNA表达量。结果与模型对照组相比， HBOA 高、低剂量均明显减轻CCl4所致肝组织病变程度，降低血清中ALT、AST、T-BIL、HMGB1、IL-1β、TNF-α含量，减少肝组织中HMGB1蛋白及mRNA 表达，且血清 HMGB1水平与 IL-1β、TNF-α、ALT、AST、T-BIL呈正相关。结论 HBOA对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有一定的改善，其作用机制可能与降低致炎因子HMGB1有关。

参麦方对于大鼠心肌损伤保护作用的代谢组学研究

目的：运用代谢组学方法研究参麦方对于由阿霉素所造成的大鼠心肌损伤的保护作用，探讨参麦方在体内发挥药效的作用机制。方法通过超高效液相色谱-飞行时间质谱( UPLC/TOF-MS)分析药物作用后大鼠尿液的代谢物图谱，采用偏小二乘法判别分析( PLS-DA)和正交偏小二乘法判别分析( OPLS-DA)寻找各组代谢物差异，变量重要性投影( VIP)及t检验筛选潜在内源性标志物。结果鉴定出琥珀酰腺苷、环磷酸腺苷、S-三甲基丁酰基二氢硫辛酰胺、4-羟基环氧乙酸、苯丁酰谷氨酰胺、丁酸甲酯、3-羟基十四烯二酸、二氢硫辛酰胺、丙酮酸等14种内源性代谢物。结论参麦方可通过调节嘌呤代谢、部分氨基酸代谢、脂肪代谢和能量代谢等来发挥保护心肌损伤的作用。该研究解释了参麦方在体内发挥药效的作用机制，为两药配伍的合理性及临床联合用药治疗疾病提供了理论依据。

姜黄素烟酸酯对血管平滑肌细胞增殖及ERK1/2信号通路的影响

目的探讨姜黄素烟酸酯( curcumin trinicotinate, CurTn)对血管平滑肌细胞( vascular smooth muscle cell, VSMC)增殖的影响及其可能机制。方法体外培养VSMC,体积分数为0.1的 FBS 刺激 VSMC 生长。 MTT 法观察CurTn对VSMC 活力的影响；流式细胞术分析细胞周期；Western blot 检测 PCNA、p-ERK1/2、CyclinD1蛋白的表达。结果 CurTn抑制VSMC增殖并呈现一定量效、时效关系,并且使G1期的细胞比例增加,S期细胞比例下降,PCNA蛋白表达下调。同时发现 CurTn 能明显抑制 p-ERK1/2、Cy-clinD1蛋白表达。结论 CurTn能明显抑制VSMC增殖,其作用机制可能与p-ERK1/2、CyclinD1蛋白表达下调有关。

无创性延迟肢体缺血预适应对心脏性猝死的预防作用研究

目的研究无创性延迟肢体缺血预适应( NDLIP)对心脏猝死的预防作用。方法取健康,体质量(250±10) g的SD ♂大鼠30只,随机分为3组,①心肌梗死( MI)组：手术结扎动物冠状动脉左前降支( left anterior descending artery, LAD),2周后成模；② MI+NDLIP组：动物心肌梗死模型成功后,每隔1d进行1次远端肢体缺血预适应,直至第4周；③假手术( Sham)组：作为阴性对照组,心脏LAD只穿线不结扎,不实施NDLIP。各组动物常规饲养,于4周末静脉输注间羟胺(0．2 mg·min-1)进行猝死,记录致猝死过程中的ECG、猝死药物累积量、猝死时间,于猝死末期腹主动脉取血,ELISA法测定血清caspase-3、HSP70、SOD含量。结果间羟胺致动物心脏猝死时,随着给药量的增加,动物的心率呈下降趋势,记录给药0、5、10、30、50、70、90 min时动物的心率。与MI组相比, MI+NDLIP组给药0、5、10、30、50 min时动物心率[(479±8) vs (416±19) beat·min-1,(446±32) vs (370±20) beat·min-1,(376±53) vs (305±29) beat· min-1,(307±63) vs (244±33) beat·min-1,(283±45) vs (121±35) beat·min-1,P <0．01]明显较高。与 MI 组相比,MI + NDLIP 组动物的致猝死药物累积量、猝死时间[(14．58±3．03) vs (10．76±2．73) mg,(72．9±15．2) vs (53．8±13．6) min,P<0．01]都明显增加。与 MI组相比, MI+NDLIP 组血清 caspase-3[(2．01±0．52) vs (2．34±0．38)μg·L-1,P<0．01]表达量明显降低；HSP70[(3．01±0．58) vs (2．70±0．43)μg·L-1,P<0．05]水平明显升高；SOD [(1．99±0．65) vs (1．70±0．58) mg·L-1,P<0．01]水平明显升高。结论无创性延迟肢体缺血预适应能有效预防大鼠心梗后心脏性猝死,其机制可能与降低心肌细胞凋亡、增加保护性蛋白的表达以及增强心肌抗氧化能力有关。

胞外酸化对大鼠关节软骨细胞焦亡的影响及可能机制

目的：观察胞外酸化对大鼠关节软骨细胞焦亡的影响,研究该过程中可能机制。方法利用酶消化法获得原代大鼠关节软骨细胞。软骨细胞分为不同 pH 处理组( pH 7．4、pH 7．0、pH 6．5和pH 6．0)以及pH6.0酸化不同时间组(0、6、12、24、48 h),经ROS还原剂NAC预处理的酸化组和正常组,Real-time PCR和Western blot观察各组促炎细胞因子IL-1β、IL-18和炎症小体组成成分ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达情况, ELISA检测各组细胞培养基中的IL-1β、IL-18含量,AO/ EB染色和 LDH细胞毒性检测试剂盒分析细胞的死亡情况, ROS测定试剂盒观察细胞内 ROS荧光强弱。结果与pH 7．4组比较,酸化组的促炎细胞因子IL-1β、IL-18和炎症小体组成成分ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达明显增加,荧光显微镜观察到ROS荧光明显增强,AO/ EB染色和LDH检测实验发现酸化可以诱导软骨细胞死亡,且pH 6．0酸化处理组效果明显；ROS还原剂NAC 预处理可以明显下调 IL-1β、IL-18、ASC、NLRP3、caspase-1基因和蛋白的表达,并且明显减弱软骨细胞内ROS荧光,同时明显下调细胞死亡率。结论胞外酸化可能通过上调细胞内ROS的含量,促使软骨细胞发生焦亡。

CYP3 A5基因型对中国肾移植术后患者体内他克莫司缓释剂型药动学参数的影响

目的：研究CYP3A5基因型对中国肾移植术后患者体内他克莫司缓释剂型药动学参数的影响。方法采用化学发光免疫法检测20例肾移植术后患者在服用缓释(10例)和普通剂型(10例)他克莫司后的全血浓度；采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态法检测服用缓释剂型他克莫司患者的CYP3A5基因型；缓释剂型组检测0~24 h的11个时间点的血药浓度，而普通剂型检测0~12 h内的10个时间点的血药浓度。结果无剂量校正的缓释剂型组的AUC0~24 h为普通剂型组AUC0~12 h的1．78倍，有剂量校正的缓释剂型组的C0为普通剂型的60%，其余药动学参数差异无显著性；缓释剂型中慢代谢型组的Cmax、AUC0~24 h和C0分别为快代谢型组的1．75、1．96、2．49倍(无剂量校正)以及1．80、2．34和2．64倍(有剂量校正)；缓释剂型组的 C0与AUC0~24 h的相关性良好。结论他克莫司普通剂型转换至缓释剂型时应该注意上调给药剂量，同时缓释剂型应结合CYP3A5的基因型检测，确保C0值在治疗窗范围内。

1-磷酸鞘氨醇促进胰岛素分泌及可能机制研究

目的研究1-磷酸鞘氨醇( sphingosine-1-phosphate, S1P)促进葡萄糖刺激的胰岛素分泌效应及其分子机制,探索糖尿病治疗药物的作用靶点。方法使用胶原酶P消化SD大鼠胰腺,Histopaque 1077梯度离心获得胰岛,Dispase II消化得到胰岛细胞。不同浓度 S1P(0~20μmol·L-1)干预,观察低糖(2．8 mmol·L-1)和高糖(16．7 mmol·L-1)条件下胰岛素分泌的变化。膜片钳技术记录β细胞电压依赖性钾通道电流(Kv电流),观察S1P干预后Kv电流的变化。钙成像技术记录β细胞内Ca2+浓度,观察不同浓度S1P(0~20μmol·L-1)干预后细胞内的Ca2+浓度变化。结果与低糖组相比,高糖组明显刺激了胰岛素的分泌(P <0．01)。低糖条件下, S1P 没有改变胰岛素分泌量( P >0．05)。高糖条件下,S1P浓度依赖性增加了胰岛素分泌量(P<0．01)。与对照组相比,S1P明显抑制了β细胞Kv电流(P<0．01)。高糖条件下,S1P浓度依赖性升高了胰岛细胞内Ca2+浓度(P<0．01)。结论 S1P可能通过抑制β细胞Kv电流、升高细胞内Ca2+浓度,终促进葡萄糖刺激的胰岛素分泌。

柚皮苷对高糖引起血管内皮损伤的保护作用与CX3 CL1及抗氧化有关

目的：研究柚皮苷(naringin,Nar)对趋化因子CX3CL1参与的慢性高糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞( HUVEC)损伤机制的保护作用。方法 MTS法测定不同浓度的柚皮苷对正常HUVEC的活性影响,及不同葡萄糖浓度下对HUVEC的损伤程度。实验分为对照组( Ctrl)、柚皮苷组( Nar)、高糖组( HG)和高糖加柚皮苷组( HG+Nar)4组。细胞经各种条件处理5d后,硝酸还原酶法测定细胞上清液中一氧化氮(NO)含量,多功能酶标仪测定细胞内活性氧(ROS)含量, RT-PCR和Western blot检测CX3CL1 mRNA和蛋白的表达。结果高糖组与正常对照组相比NO水平明显降低,ROS含量则明显升高,高糖处理后加入柚皮苷能增加NO的产生,同时降低细胞内ROS含量,柚皮苷组与对照组之间差异无显著性。 RT-PCR和Western blot结果显示柚皮苷可以降低高糖组CX3CL1 mRNA和蛋白的表达,柚皮苷组与对照组相比无显著性差异。结论柚皮苷对趋化因子CX3CL1参与的慢性高糖引起的HUVEC损害具有保护作用,且其保护作用可能与其抗氧化应激及抗炎作用有关。

小檗碱联合骨髓间充质干细胞对高糖损伤下血管内皮细胞能量代谢的影响

目的研究黄连的主要有效成分小檗碱联合骨髓间充质干细胞对于高糖作用下血管内皮细胞能量代谢的影响。方法① MTT法检测细胞增殖以及活性情况；②流式细胞术检测细胞周期；③彗尾法检测细胞 DNA 损伤情况；④HPLC测定细胞中ATP、ADP、AMP含量,能荷EC值；⑤ RT-PCR法测定CCR、COX mRNA表达；⑥ Western blot法检测COX、CCR的蛋白表达。结果①高糖干预损伤后的血管内皮细胞活性明显降低、增殖能力减弱,S+G2期的细胞数量明显减少,出现一定程度的DNA损伤,而小檗碱、骨髓间充质干细胞及其联合使用均能不同程度提高细胞活性和增殖能力,增加S+G2期的细胞数量,促进DNA的修复( P<0．01),且小檗碱联合干细胞组的效应优于单用组；②血管内皮细胞经高糖干预损伤后ATP和ADP含量减低、AMP含量增多、EC值明显降低,小檗碱、骨髓间充质干细胞及其联合使用均能提高ATP和ADP含量( P<0．01)；且小檗碱联合干细胞的效应优于单用组；③血管内皮细胞经高糖干预损伤后,COX、CCR mRNA和蛋白表达明显降低,经小檗碱、骨髓间充质干细胞及其联合使用干预后,CCR 、COX mRNA和蛋白表达明显升高( P<0．01或P<0．05),且小檗碱联合干细胞的上调作用为明显。结论小檗碱、骨髓间充质干细胞以及两者联合使用对于高糖损伤后血管内皮细胞能量代谢的改善具有促进作用,其机制可能是小檗碱、骨髓间充质干细胞可上调COX和CCR mRNA和蛋白的表达,从而介导葡萄糖类氧化物的水解,改善血液环境,增加血管内皮细胞的葡萄糖供应和摄取,从而改善高糖损伤后血管内皮细胞的能量代谢。

基于转基因细胞模型研究通络醒脑泡腾片对Aβ代谢的影响

目的：采用转基因细胞模型,考察通络醒脑泡腾片对Aβ生成和降解关键靶点的影响,探索其抗阿尔茨海默病的作用机制。方法体外培养SH-SY5Y-APP和SH-SY5Y-C99细胞,不同浓度的含药血清的培养液(含通络醒脑泡腾片血清0%~40%)干预48 h,采用 MTT法确定无毒浓度, LDH法检测细胞活性,ELISA法检测Aβ1-40和Aβ1-42分泌量；采用RT-PCR和Western blot检测APP基因和蛋白表达,West-ern blot法检测 APP 剪切片段 sAPPα和 sAPPβ蛋白表达；qRT-PCR、Western blot及荧光检测试剂盒分别测定 BACE1基因、蛋白水平和酶活性；Western blot检测Aβ降解酶IDE和NEP蛋白表达；体外培养SH-SY5Y,通络醒脑泡腾片不同浓度的含药血清培养液孵育48 h,MTT法检测Aβ25-35诱导后细胞存活率。结果通络醒脑泡腾片含药血清对 SH-SY5Y-APP和 SH-SY5Y-C99细胞均无明显毒性作用( P >0．05)；通络醒脑泡腾片含药血清可明显抑制SH-SY5Y-APP细胞Aβ的分泌(P<0．05),对SH-SY5Y-C99细胞Aβ分泌量无影响；对 SH-SY5Y-APP 细胞 APP 基因及蛋白水平、sAPPα及Aβ降解酶NEP和IDE蛋白表达均无明显影响( P>0．05),但对sAPPβ蛋白有明显抑制作用(P<0．05),且呈剂量依赖关系,对BACE1基因、蛋白水平、活性均有明显抑制作用(P<0．01)。此外,研究发现通络醒脑泡腾片含药血清对 Aβ25-35诱导的SH-SY5Y 细胞凋亡具有保护作用( P<0．01)。结论通络醒脑泡腾片对β-分泌酶具有明显的抑制作用,并能对抗Aβ神经细胞毒性作用,提示抑制β-分泌酶和拮抗Aβ神经细胞毒性是通络醒脑泡腾片发挥抗阿尔茨海默病的主要作用机制。

头顶一颗珠醇提物对新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤的保护作用

目的探讨头顶一颗珠醇提物对新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤( HIBD )的保护作用及可能机制。方法50只7日龄SD大鼠随机分为假手术组( n=10)、模型组( n=20)、头顶一颗珠治疗组(n=20),各组分别予以3 d相应的生理盐水及头顶一颗珠醇提物腹腔注射。分别通过氯化三苯基四氮唑( TTC)和尼氏染色检测脑缺血及神经细胞死亡情况,通过Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 HIBD模型组可见脑组织稍有肿大,且右侧脑部可见缺血的白色坏死区；治疗组可见大脑形态完好,未见明显肿胀及坏死,TTC染色后,模型组可见右侧脑部出现明显缺血区,经治疗后缺血区域减少。尼氏染色结果提示模型组可见神经元细胞减少,而治疗后神经元细胞增加。 Western blot 显示 HIBD 后Bcl-2表达减少(P<0．01),Bax表达增加(P<0．01),而经过头顶一颗珠治疗后,Bcl-2表达增加(P<0．01),Bax表达降低( P<0．01)。结论头顶一颗珠对HIBD具有保护作用,其机制可能与降低神经元细胞凋亡有关。

何首乌中大黄素对L02肝细胞CYP亚酶表达及细胞毒性的影响

目的：研究何首乌中大黄素( emodin )对 L02肝细胞CYP450酶主要亚型表达的影响,探讨其对L02肝细胞的细胞毒性机制。方法不同浓度的Emodin处理L02细胞,通过MTS法检测细胞的存活率,测定LDH释放率评价细胞损伤程度, Real time PCR法检测Emodin各给药组CYP450酶亚型mRNA表达的变化。结果 MTS结果显示,随着Emod-in浓度的增加,呈现明显的细胞损伤效应,细胞的存活率逐渐降低并呈现浓度和时间依赖性；同时,LDH释放率在给药48 h时相比于空白组均明显增高。在基因水平上,与空白组相比,Emodin能明显提高CYP450各亚型mRNA表达,并可剂量依赖性诱导CYP1A1、CYP1B1的表达。结论何首乌中大黄素对人正常肝细胞具有明显损伤作用,并能诱导CYP450酶mRNA表达。

低氧与常氧状态下罗红霉素在大鼠体内的药代动力学比较

目的：研究比较在低氧和常氧条件下，常用抗生素罗红霉素在大鼠体内的药代动力学特征。方法建立快速高效的超高效液相质谱联用法，测定大鼠血浆中罗红霉素的浓度。 SD大鼠灌胃给予罗红霉素(10 mg·kg-1)，测定不同时间点的大鼠血浆药物浓度，分别计算低氧与常氧大鼠的主要药代动力学参数，并进行统计分析。结果在1~1000μg ·L-1浓度间，罗红霉素在血浆中有良好的线性关系，定量下限为1μg·L-1。罗红霉素在常氧和低氧大鼠体内主要药动学参数分别为：AUC(0-t)7576μg·h· L-1和3761μg· h·L-1；MRT(0-t)5．6 h和7．7 h；T1/23．4 h和3．9 h；tmax 3．1 h和3．4 h； Cmax 1116μg·L-1和372μg·L-1；CL 1．5和3．0 L·h-1·kg-2。与常氧大鼠药动学参数比较，低氧状态下罗红霉素在大鼠体内的药动学参数Cmax和AUC均有明显降低。结论低氧条件下，罗红霉素在大鼠体内的体内暴露量明显降低，结果为罗红霉素在低氧状态下的给药方案优化和调整提供了重要的实验依据。

甲基莲心碱体外抑制人肝癌细胞增殖和侵袭的作用机制研究

目的：探讨甲基莲心碱( neferine, Nef )对人肝癌HepG2和Bel-7402细胞侵袭的影响和作用机制。方法人肝癌HepG2和Bel-7402细胞体外培养,经不同浓度的甲基莲心碱处理后,CCK-8法检测细胞的增殖,Transwell细胞体外侵袭实验观察Nef对细胞侵袭能力的影响；免疫印迹检测Rho相关蛋白的表达。结果 CCK-8结果显示,与对照组比较,甲基莲心碱干预组抑制人肝癌HepG2和Bel-7402细胞增殖,并呈剂量-效应关系( P<0．05)；Transwell细胞体外侵袭实验显示,3μmol·L-1甲基莲心碱明显抑制HepG2和Bel-7402细胞的侵袭；免疫印迹结果显示,3μmol·L-1甲基莲心碱作用HepG2和Bel-7402细胞12 h后,RhoA、RhoC和ROCK表达明显降低。结论甲基莲心碱可体外抑制HepG2和Bel-7402细胞的增殖和侵袭,其抑制肝癌细胞的侵袭可能与抑制RhoA、RhoC和ROCK蛋白的表达有关。

二去水卫矛醇对肺癌NCI-H460细胞DNA拓扑异构酶Ⅱ的抑制作用

目的评价二去水卫矛醇( dianhydrogalactitol, DAG)在肺癌NCI-H460细胞上的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用机制。方法采用CCK-8法、细胞克隆形成实验,评价DAG对NCI-H460细胞的增殖抑制作用。显微拍照观察细胞形态改变；Hoechst 33342检测细胞核染色质的变化。 Real time PCR法检测拓扑异构酶Ⅱ( Topo Ⅱ) mRNA 的表达水平。Western blot法检测Topo Ⅱ蛋白表达水平。另外,应用计算机模拟分子对接技术来预测 DAG与 Topo Ⅱ的相互作用。结果 CCK-8法检测结果显示,DAG对NCI-H460细胞的体外抗肿瘤活性明显。细胞克隆形成实验结果表明, DAG能持续抑制肿瘤细胞的增殖。 Hoechst 33342检测细胞凋亡发现细胞核染色质发生明显改变。 Real time PCR和 Western blot检测结果显示Topo Ⅱ mRNA和蛋白表达量降低。计算机模拟分子对接显示DAG与Topo Ⅱ有相互结合作用。结论 DAG能明显抑制NCI-H460细胞的增值,作用机制研究表明DAG能降低Topo Ⅱ mRNA和蛋白水平,并与Topo Ⅱ结合,终可能导致DNA双链断裂,引起细胞死亡。

缝隙连接蛋白43对人非小细胞肺癌HCC827细胞吉非替尼获得性耐药机制的初步研究

目的：探讨缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)与非小细胞肺癌( NSCLC)细胞产生吉非替尼( Gefitinib)获得性耐药的关系。方法在Gefitinib敏感细胞株HCC827上,通过逐步递增 Gefitinib 浓度诱导获得 Gefitinib 耐药细胞株HCC827 GR；MTT 法检测 Gefitinib 对 HCC827/GR 细胞的IC50；RT-PCR 检测 Cx43的 mRNA 水平；Western blot 检测Cx43和磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白水平；parachute荧光示踪法检测细胞缝隙连接功能( gap junction intercellular communi-cation, GJIC)；免疫荧光技术检测 Cx43的细胞定位。结果Gefitinib 作用于 HCC827和 HCC827 GR 的 IC50分别为(0．07±0．019)μmol·L-1、(10．84±0．021)μmol·L-1( P<0．01)；HCC827 GR 中 Cx43的 mRNA 和蛋白水平较HCC827明显降低( P<0．05),但 p-Akt蛋白水平明显升高(P<0．05)。在HCC827 GR细胞上加PI3K的特异性抑制剂LY294002(25μmol·L-1,24 h)后,p-Akt蛋白水平明显下降(P<0．01),且Cx43的蛋白水平明显升高(P<0．01)。HCC827及HCC827 GR均未检测到GJIC,用GJIC增强剂RA (retinoic acid)处理(10μmol·L-1,24 h)上述细胞,亦未检测到荧光传递,免疫荧光结果显示 Cx43表达在细胞胞质。结论胞质中Cx43的下调可能促进NSCLC细胞对Gefitinib的获得性耐药,其机制可能与Cx43非GJIC依赖的PI3K/Akt信号通路激活有关。

雷公藤红素抑制LDL及HAEC细胞氧化损伤作用

目的考察雷公藤红素( celastrol)体外对低密度脂蛋白( LDL)氧化过程及动脉血管内皮细胞氧化损伤的抑制作用。方法采用体外Cu2+诱导LDL氧化修饰的体外化学反应模型,设置阴性对照、模型对照及雷公藤各剂量组,测定Cu2+诱导氧化LDL的动力学曲线,分析比较各实验组的曲线下面积(AUC)、延滞期持续时间(lag time)及脂质过氧化物产生量( TBARS值)；MTT法测定细胞活性,以确定雷公藤红素对正常细胞的安全剂量；建立AAPH诱导的人主动脉内皮细胞HAEC氧化损伤的细胞模型,设置阴性对照、模型对照及雷公藤各剂量组,测定细胞的乳酸脱氢酶( LDH)漏出量、超氧化物岐化酶( SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶( GPX)活性,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核受损伤情况, RT-qPCR法分析Nrf2、HO-1 mRNA表达水平。结果体外实验结果显示, celastrol 在体外较低的剂量条件下(100 nmol · L-1~1μmol·L-1)即能有效延长LDL氧化过程中的迟滞期,降低反应动力学曲线的AUC以及脂质过氧化物的生成,表明celastrol在体外能有效抑制Cu2+诱导的LDL氧化。细胞实验结果显示,在100~400 nmol·L-1剂量范围内,celas-trol能有效降低AAPH所致HAEC细胞的LDH漏出量,维护细胞膜和细胞核的完整性；提高受损细胞的 Nrf2和 HO-1mRNA表达,提高受损细胞的SOD、GPX酶活,从而提升内皮细胞的抵抗氧化应激的能力。结论 celastrol可在体外有效抑制Cu2+诱导人LDL氧化损伤,在无细胞毒安全剂量下(100~400 nmol·L-1)可抑制AAPH所致的HAEC细胞氧化应激损伤。

瞬时感受器电位通道在肿瘤增殖与迁移中的作用

瞬时感受器电位( transient receptor potential, TRP)超家族成员是位于细胞膜上的一类广泛分布的非选择性阳离子通道,激活TRP通道多可引起胞质游离Ca2+浓度升高,调节细胞增殖、迁移和转移。目前研究表明, TRP通道与多种肿瘤的发生和发展密切相关。该文对目前 TRPC、TRPV和TRPM通道在肿瘤增殖与迁移中的作用进行综述。

鸦胆子苦木内酯类成分及其药理活性研究进展

鸦胆子( Fructus Bruceae)为苦木科植物鸦胆子( Brucea javanica L. Merr.)的干燥成熟果实，常用于痢疾、肿瘤、疟疾以及疔毒等的治疗，外用可治赘疣、鸡眼。苦木内酯类化学成分是鸦胆子主要活性成分，具有抗肿瘤、抗炎、抗寄生虫、抗病毒、抗菌和降血糖等多种药理活性。鉴于鸦胆子的广泛药理活性，为更好地开发利用其药用价值，该文就鸦胆子的有效成分———苦木内酯类成分及其相关药理活性的研究进展作一简要综述。

衰老相关分泌表型的研究进展

细胞衰老的同时常伴随着衰老相关分泌表型( senes-cence-associated secretory phenotype, SASP )的产生。 SASP 由促炎细胞因子、生长因子、趋化因子和基质重塑酶等一系列细胞因子组成,它们可以导致机体慢性低度炎症和疾病,并可以反作用于衰老细胞及其邻近细胞加速它们的衰老进程,并可作为新的细胞衰老效应机制。该文通过对SASP生物学功效、分泌调节、机制、以及与相关疾病关联的探讨,提高我们对SASP的认知,引发我们对SASP相关疾病疗法的思考。

NOXs在肝纤维化中的作用机制研究

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶( nicotinam-ide adenine dinucleotide phosphate oxidase, NOXs)在肝纤维化中,有助于活性氧簇( reactive oxygen species, ROS)的产生,进而介导内质网应激( endoplasmic reticulum stress, ERS)的发生及 IRE1α-XBP1( inositol-requiring enzyme 1 alpha, IRE1α；X-box binding protein 1, XBP1)信号通路的激活。ROS是指分子氧( O2)单电子还原后生成的化学性质更为活跃的一类氧代谢产物及其衍生物,包括超氧阴离子( O2-)、羟自由基(· OH )、过氧化氢( H2 O2)以及次氯酸根离子( OCl-)等。它们可以与生物体内大量分子,包括无机分子、蛋白、脂质、碳水化合物和核酸广泛互作,介导氧化还原修饰,引起脂质过氧化,进而引起肝细胞损伤。另可作为第二信使影响包括肝星状细胞( hepatic stellate cells, HSC)在内的各种细胞的信号转导,导致HSC的异常活化和增殖,分泌大量胞外基质(extracellular matrix, ECM),进而促使肝细胞凋亡并诱发肝纤维化。该文将对近年来NOXs 在肝纤维化中的作用机制研究作一综述,旨在为抗肝纤维化的研究提供新的视角和治疗靶标。

肝癌治疗新靶点GPC3研究进展

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican 3, GPC3)在调控细胞生长和分化方面起重要作用,与肝癌的发生、发展密切相关。GPC3在肝癌组织中特异性高表达,从而提示GPC3对肝癌诊断具有明显的灵敏性和特异性,可作为肝癌治疗的新靶点。该文综述GPC3的结构功能及基于GPC3靶点的肝癌免疫治疗进展,并讨论其作为未来肝癌治疗靶点的前景。

急性肾损伤的分子机制及中药干预研究进展

急性肾损伤( acute kidney injury, AKI)是一种临床急症,由各种病因导致肾脏细胞损伤而发生,是一个复杂的病理生理过程。该文对缺血/再灌注、大手术、横纹肌溶解症、脓毒症、肾毒性药物等与AKI的关系及相关发病机制进行综述,并对近年来中药及其有效成分预防和治疗AKI的研究进展进行总结,旨在为AKI的预防与治疗及创新药物的研发提供有价值的研究信息和资料。

编委会（Editorial Board）

丙泊酚影响感觉刺激诱发分子层场电位变化的机制

目前，丙泊酚全麻机制的研究主要集中在其对海马、丘脑、脊髓等部位的影响，而丙泊酚影响小脑功能的研究文献非常少。因此，我们拟应用在体膜片钳及药理学手段，在活体动物上观察丙泊酚的摄入对小脑皮层分子层场电位振幅及波形动力学的影响，研究它的剂量依赖性，明确半数有效浓度，探讨其对分子层群体神经元活动的影响。

醌茜素对人肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及初步机制研究

醌茜素是一种具有高效性、高选择性和细胞能透性的药物。虽然醌茜素能够有效抑制前列腺癌细胞的增殖[1]，但醌茜素对肺癌细胞的作用机制尚不清楚。本文研究了醌茜素对人肺癌A549细胞周期及细胞凋亡的影响，并初步探讨其机制。

胸腺素β4对离体脑缺血模型神经细胞凋亡和自噬的影响

缺血性脑血管病(脑缺血)是以脑循环血流量减少为特征的脑血管疾病，具有高发病率和死亡率，严重威胁人类健康。对于脑缺血防治药物的研究至今尚无突破，寻找新型脑缺血防治药物一直是国内外研究热点。脑缺血发生后，神经细胞发生程序性死亡，包括凋亡和自噬( autophagy)[1]。近年来，自噬作用逐渐引起关注。

Neu-P11对急性高眼压大鼠视网膜AQP4表达及眼内压的影响

水通道蛋白4(aquaporin4, AQP4)是视网膜上重要的水通道蛋白之一,参与房水的分泌和排出,有调节眼内水、电解质运输平衡的功能[1]。褪黑素( melatonin, Mel)是松果体合成分泌的一种吲哚类神经内分泌激素,可以作为黄斑变性、青光眼以及心血管疾病的一种辅助治疗药物,具有降低眼内压( intraocular pressure , IOP)的作用[2-3]。然而,褪黑素药物化学合成提取相当困难复杂,且又有半衰期短、个体差异大等不足。以色列研制出的Neu-P11,是能够克服以上缺陷的新型褪黑素非选择性受体激动剂,具有抗抑郁、抗氧化和镇痛等作用,对糖尿病和高血压等疾病有一定治疗效果[4-5],能降低正常新西兰大白兔眼内压[6]。本文旨在研究Neu-P11对AQP4表达和高眼压状态下IOP的影响。

小鼠异种皮肤移植模型的建立及对免疫抑制药物的药效评价

目的建立小鼠异种皮肤移植模型,以期为免疫抑制药物提供研究模型。方法将C57BL/6小鼠耳部皮肤移植到BALB/c小鼠背部,同时设立同种移植对照( BALB/c小鼠耳部皮肤移植到BALB/c小鼠背部)。选用环孢素A作为抑制异种移植引起的免疫排斥反应的免疫抑制剂,利用该模型评价环孢素A免疫抑制效果。在移植和给药后,对移植排斥评分和移植皮肤的存活率进行统计。移植手术4d和9d后,ELISA法对血清中 IL-4、IL-12和 IFN-γ的水平进行测定。12 d后,计算胸腺和脾脏系数,对脾脏T细胞中CD4+和CD8+的比例进行分析,同时将移植皮肤进行病理观察。结果皮肤移植后,排斥评分逐渐增加,移植皮肤的存活率逐渐下降,有明显的水肿、炎症细胞浸润等炎症反应。环孢素A可明显降低移植排斥评分,提高移植皮肤的存活率,使小鼠胸腺和脾脏系数明显降低,高剂量可明显降低脾脏T细胞中CD4+和CD8+细胞的比例。同时,环孢素A处理可明显降低移植皮肤的炎症反应。结论小鼠经异种皮肤移植后会出现急性移植排斥反应,环孢素A可有效抑制移植排斥反应,并呈现出明显的剂量依赖性。

利用C6胶质瘤干细胞建立小鼠脑胶质瘤模型及评价

目的：利用C6胶质瘤干细胞建立ICR小鼠动物模型，为深入研究胶质瘤干细胞在脑胶质瘤中的作用提供理想的模型。方法采用悬浮生长法体外培养C6胶质瘤干细胞，用Nestin巢蛋白抗体进行鉴别；利用C6干细胞建立ICR小鼠脑胶质瘤模型，考察小鼠术后的生存状态和肿瘤体积变化；通过HE染色及CD133免疫组化考察小鼠术后的病理学变化。结果 C6胶质瘤干细胞中Nestin表达量为96．01%， Nestin在所培养的C6胶质瘤干细胞球中高表达；小鼠接种肿瘤后食欲不振，体质量偏轻，且行为缓慢，反应呆滞；建模21 d时肿瘤体积为(9．77±6．58) mm3；模型经HE染色后可见脑组织呈浸润性生长，肿瘤细胞核皱缩，排列紊乱；免疫组化CD133染色显示肿瘤细胞胞质显棕色，肿瘤组织中存在大量的脑胶质瘤干细胞。结论利用胶质瘤干细胞建立的脑胶质瘤模型成瘤率高，成瘤周期短，可作为后期脑胶质瘤模型的理想模型。

《2015中国科技期刊引证报告》出炉,《中国药理学通报》4项第一