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替米沙坦对急性心肌梗死大鼠心肌缝隙连接蛋白43的影响
目的:观察替米沙坦对大鼠急性心肌梗死心肌缝隙连接蛋白43(CX43)的影响,探讨其防治急性心肌梗死时心律失常的可能机制.方法:将27只大鼠随机分为三组(每组9只):假手术组、急性心肌梗死组(模型组)、替米沙坦+急性心肌梗死组(替米沙坦组).采用免疫细胞化学法显示急性心肌梗死区、边缘带及非缺血区CX43表达的分布;半定量分析不同部位CX43的分布密度.结果:模型组、替米沙坦组CX43排列紊乱,CX43表达的平均光密度值、阳性表达面积和积分光密度较假手术组显著降低.替米沙坦组平均光密度值和积分光密度均显著高于模型组.结论:急性心肌梗死时心室肌CX43的数量和分布呈现高度不均一性.替米沙坦能有效减轻急性心肌梗死所致CX43的重构,增加正常大鼠的心室肌CX43的含量.
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敲除缝隙连接蛋白Cx43基因对针刺抑制小鼠内脏痛反应的影响
目的:探讨缝隙连接蛋白43(Cx 43)影响针刺镇痛作用的可能中枢和外周机制.方法:将野生型(WT)和Cx 43基因敲除杂合子(HT)小鼠随机分为6组:WT空白对照组、WT模型组、WT针刺组、HT空白对照组、HT模型组和HT针刺组,每组18只,腹腔注射0.6%醋酸(0.1 mL/10 g)制造内脏痛模型.针刺"中脘"、双侧"足三里"穴,每5 min捻针30 s,共30 min.比较各组小鼠首次扭体潜伏期、20 min扭体反应次数.放射免疫法检测下丘脑β-内啡肽(β-EP)和血清前列腺素E2(PGE2)含量.结果:HT与WT空白对照组小鼠首次扭体潜伏期、20 min扭体反应次数、下丘脑组织α-EP和血清PGE2含量差异均无显著性意义(P＞0.05).与对照组比较,HT和WT内脏痛模型组小鼠首次扭体潜伏期明显缩短(P＜0.01),20 min扭体反应次数显著增加(P＜0.01),下丘脑β-EP和血清PGE2含量明显升高(P＜0.05);两模型组间上述各指标差异均无显著性意义(P＞0.05).与模型组比较,WT针刺组小鼠首次扭体潜伏期明显延长(P＜0.01),扭体反应次数明显减少(P＜0.01),下丘脑组织β-EP含量显著升高(P＜0.05),血清PGE2含量显著降低(P＜0.05).HT针刺组小鼠各项指标与模型组比较差异无显著性意义(P＞0.05).HT针刺组首次扭体潜伏期、下丘脑β-EP含量明显低于WT针刺组(P＜0.05),而HT针刺组扭体反应次数和血清PGE2含量明显高于WT针刺组(P＜0.05).结论:针刺缓解腹腔内脏痛的作用可能是通过促使中枢和外周镇痛物质β-EP增加、致痛物质PGE2减少而实现的.Cx43与针刺镇痛效应有着密切联系.
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敲除缝隙连接蛋白Cx 43对针刺抑制内脏痛小鼠脊髓背角c-fos表达的影响
目的:探讨缝隙连接蛋白43(Cx 43)影响针刺镇痛作用的可能机制.方法:将野生型(WT)和Cx43基因敲除杂合子(HT)小鼠随机分为6组:WT对照组、WT模型组、WT针刺组、HT对照组、HT模型组、HT针刺组,每组12只,腹腔注射0.6%醋酸(0.1 ml/10 g)制造内脏痛模型.针刺"中脘"、双侧"足三里"穴,每5 min捻针30 S,共30 min.采用瞬时基因c-fos表达作为神经元活动的标志,用RT-PCR、免疫印迹法检测脊髓背角c-fos基因的表达.结果:HT和WT对照组小鼠脊髓背角c-fos mRNA和蛋白很少表达,两组间差异无显著性意义(P＞0.05).HT和WT内脏痛模型组小鼠脊髓背角c-fos mRNA和蛋白表达水平较对照组明显升高(P＜0.01);两模型组间上述指标差异无显著性意义(P＞0.05).与模型组比较,WT针刺组小鼠脊髓背角c-fos mRNA和蛋白表达水平明显降低(P＜0.01);HT针刺组小鼠c-fos mRNA和蛋白水平虽然亦有下降趋势,但与模型组比较差异无显著性意义(P＞0.05).HT和WT针刺组两组间差异分别有显著性(P＜0.05)和极显著性(P＜0.01)意义.结论:针刺可缓解腹腔内脏痛,同时抑制伤害性痛反应诱发的脊髓c-fos表达;敲除Cx43基因可减弱针刺镇痛的作用,同时减弱针刺下调脊髓背角c-fos表达的作用;提示Cx43与针刺镇痛效应有着密切联系.
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电针对帕金森病大鼠纹状体缝隙连接蛋白43的表达及谷氨酸含量的影响
目的:观察电针对帕金森病(PD)大鼠纹状体缝隙连接蛋白(Cx)43及谷氨酸(Glu)的影响,探讨电针治疗PD的作用机制.方法:雄性SD大鼠,随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组,每组10只.用立体定向微量注射法向大鼠右侧纹状体注射6-羟基多巴胺制备偏侧PD大鼠旋转模型.电针组电针"风府""太冲"穴,每次30 min,每日1次,7d为1个疗程,共治疗2个疗程.行为学测试观察PD大鼠旋转行为的改变,运用HPLC荧光法检测纹状体Glu含量,采用Western blot法检测纹状体Cx 43蛋白活性表达的变化.结果:电针组大鼠治疗后旋转行为较治疗前及模型组改善明显(P＜0.01,P＜0.05).模型组大鼠Cx43表达较正常组和假手术组显著升高(P＜0.01),Glu含量显著升高(P＜0.01).电针组大鼠Cx 43表达较模型组显著降低(P＜0.01),Glu含量降低(P＜0.05).结论:电针防治帕金森病的机制可能与针刺能够抑制纹状体Cx 43的表达,减少星形胶质细胞释放Glu有关.
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复方黄芪养心合剂对大鼠缺血再灌注心肌缝隙连接蛋白43的影响
目的:观察复方黄芪养心合剂对SD大鼠缺血再灌注心肌细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)分布的改变和表达的影响.方法:应用复方黄芪养心合剂按每天14g/kg剂量、琥珀酸美托洛尔缓释片按每天(MSSRT) 9.5mg/kg剂量灌胃2周后,对SD大鼠行冠状动脉左前降支结扎30min后再灌注60min造成心肌缺血再灌注(I/R)损伤模型,记录Ⅱ导联心电图,采用免疫组织化学法(IHC)观察心肌细胞Cx43分布的改变;运用Image Pro Plus 6.0图像分析软件对Cx43的表达进行半定量分析.结果:Cx43平均光密度(AOD)I/R组心肌内膜下缺血区Cx43的AOD显著低于假手术组(P＜0.01),且MSSRT组、复方组较1/R组升高(P＜0.05).结论:对冠状动脉左前降支结扎术后再灌注SD大鼠,复方黄芪养心合剂对心肌细胞Cx43分布的改变有改善作用,有促进心肌内膜下缺血区域Cx43表达的作用,其作用与MSSRT相近.
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电针传统针刺助产处方对孕晚期大鼠子宫平滑肌协调收缩的影响
目的:通过观察电针传统针刺助产处方(合谷-三阴交穴)对孕晚期大鼠子宫平滑肌协调收缩的影响,进而部分阐释传统针灸助产处方的科学内涵.方法:选用健康成年初孕Wistar雌鼠22只,随机分为电针治疗组和妊娠模型对照组;健康成年未孕Wistar雌鼠11只做为空白对照组.电针治疗组孕鼠均在妊娠第20天上午进行电针,以先电针双侧合谷穴20min,再加刺双侧三阴交穴5min,共针刺25min,电流强度0.2-0.3mA,2/50Hz疏密波为干预方法.同一时间段,模型对照组与空白对照组大鼠布袋束缚25min.采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)及子宫组织中前列腺素F2α(PGF2α)的含量,并采用蛋白免疫印记(Western Blotting)法检测大鼠子宫组织中缝隙连接蛋白-43(Cx-43)的表达.结果:与空白对照组比较,模型对照组和电针治疗组血清E2、P、E2/P含量均显著升高(P＜0.05,P＜0.01),子宫PGF2α含量和Cx-43表达均显著升高(P＜0.01);与模型对照组比较,电针治疗组血清E2含量显著升高(P＜0.05),P含量下降但无显著差异,E2/P升高但无显著差异,子宫PGF2α含量和Cx-43表达显著升高(P＜0.05).结论:电针刺激优化传统针灸助产处方通过改变孕晚期大鼠血清及子宫组织中相关激素水平而促进孕晚期大鼠子宫向活跃期转变,并通过增加子宫缝隙连接蛋白的表达而发挥其促进子宫协调收缩的作用.可认为是该处方发挥促分娩作用的主要途径之一.部分阐释传统针灸助产处方的分子生物学机制,为针灸在产科中的应用提供科学依据.
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电针对心肌缺血模型大鼠氧化应激与缝隙连接蛋白43的影响
目的:观察“标本配穴”电针对慢性心肌缺血大鼠缺血心肌缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨“标本配穴”电针防治心肌缺血的作用机制.方法:采用SPF级雄性Wistar大鼠60只,随机分为4组:正常组、模型组、内关治疗组、标本配穴治疗组,每组15只.除正常组连续14d皮下注射0.9％氯化钠溶液外(2mg·kg-1·d-1),其他3组均每日给予盐酸异丙肾上腺素(2mg·kg-1·d-1)皮下注射,每日1次,连续14d.两个治疗组在造模开始当天即给予电针针刺治疗,正常组和模型组相同时间抓取固定,每日1次,共21d.采用ELISA检测各组大鼠MDA、SOD、VCAM-1,Western blot及免疫组化法检测Cx43表达及分布.结果:与正常组比较,模型组MDA、VCAM-1含量升高,总SOD活力、心肌Cx43蛋白表达降低(P＜0.05);与模型组比较,内关治疗组、标本配穴组MDA、VCAM-1含量降低,总SOD活力、心肌Cx43蛋白表达升高(P＜0.05);标本配穴组总SOD活力、VCAM-1含量均低于内关治疗组,Cx43蛋白表达高于内关治疗组(P＜0.05).结论:电针可通过促进Cx43的表达,改善其分布,保护或者修复缝隙连接使其发挥保护心肌的作用;“标本配穴”电针可更好的通过促进Cx43的表达和改善心肌Cx43的分布,起到保护慢性心肌缺血模型大鼠心肌的作用.
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佐木阿汤对缺氧大鼠心肌细胞Ca2+浓度及Cx43表达的影响
目的:探究佐木阿汤对缺氧大鼠H9C2心肌细胞Ca2+及缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响与机制.方法:将H9C2心肌细胞株分为正常组,模型组,5％、10％、15％佐木阿汤组,依那普利组和生理盐水组.通过含药血清干预与建立缺氧模型,应用CCK-8比色法检测细胞存活率,荧光酶标仪法检测心肌细胞内Ca“浓度变化,Western Blot法测定心肌细胞中Cx43与p-Cx43表达.结果:①细胞存活率:15％佐木阿汤组、依那普利组显著高于模型组(P＜0.05);②C a2+浓度:5％、10％、15％佐木阿汤组、依那普利组显著低于模型组(P＜0.05);③Cx43与p-Cx43:15％佐木阿汤组、依那普利组表达显著高于模型组(P＜0.01).结论:佐木阿汤可能通过降低细胞内Ca2+浓度,提高Cx43与p-Cx43表达,改善细胞间隙通讯,对缺氧心肌细胞具有一定的预防和保护作用.
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稳心颗粒对缺血性心律失常大鼠微小RNA-1及其调控蛋白表达的影响
目的:观察稳心颗粒对缺血性心律失常大鼠心肌组织微小RNA-1(miRNA-1)、缝隙连接蛋白43(Cx43)的影响,以进一步探讨稳心颗粒抗心律失常的作用机制.方法:30只SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和治疗组.结扎大鼠左冠状动脉前降支制作缺血性心律失常模型,稳心颗粒治疗组在术前7d灌胃给药.假手术组大鼠仅开胸,不施行冠脉结扎.取大鼠心肌组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应、免疫组织化学法及WesternBlotting等方法,检测大鼠心肌组织中miRNA-1及Cx43蛋白表达.结果:模型组左室心肌组织miRNA-1表达水平明显升高(P＜0.01),为假手术组的(4.67±1.21)倍,治疗组miRNA-1表达水平明显降低(P＜0.01),仅为模型组的(0.39±0.12)倍.模型组左室心肌组织Cx43蛋白相对含量显著低于假手术组(P＜0.01);稳心颗粒治疗后,Cx43蛋白相对含量明显升高(P＜0.01).结论:稳心颗粒可能通过抑制miRNA-1的表达,减轻对Cx43的转录后抑制,使表达分布异常的Cx43得以恢复,终发挥防治缺血性心律失常的作用.
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补肾调冲方对卵巢早衰大鼠卵泡发育的影响
目的 从卵泡发育调控的旁分泌途径研究补肾调冲方的作用机制.方法 将60只SD大鼠随机分为正常组,模型组,补肾调冲方高、中、低剂量组及西药组,每组10只,采用雷公藤多苷灌胃(50mg/kg,14天)建立卵巢早衰模型,分别使用高(1ml/100g)、中(0.5m1/100g)、低(0.25ml/100g)剂量补肾调冲方及倍美力(0.075ml/100g)进行干预,时间为35天,观察各组大鼠各级卵泡及黄体计数和卵巢超微结构改变,检测卵巢卵泡刺激素受体(FSHR)、表皮生长因子(EGF)及缝隙连接蛋白43(Cx43)的mRNA表达.结果 模型组各级卵泡数、黄体数明显减少,卵巢超微结构受损,EGF,Cx43 mRNA表达显著降低(P<0.05或P<0.01),补肾调冲方中、低剂量组及西药组大、中卵泡数及黄体数明显增加,卵巢超微结构明显改善,EGF及Cx43的mRNA表达显著增高(P<0.05或P<0.01).结论 补肾调冲方可改善雷公藤多苷所致的卵泡发育障碍,其作用机制可能是通过促进卵巢EGF,Cx43 mRNA表达这一旁分泌调控途径实现.
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同种异体骨髓间充质干细胞移植上调急性心肌梗死大鼠Cx43的表达
目的 研究同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)移植心肌梗死(MI)大鼠后缝隙连接蛋白43(Cx43)在不同时期的动态变化.方法 建立大鼠MI模型.将同种异体MSCs用5-氮胞苷诱导成心肌样细胞并行荧光标记,经二次开胸注射入MI大鼠梗死区和梗死边缘区.各亚组分别于移植后4、8和12周在荧光显微镜下跟踪MSCs移植情况.同时用免疫组化分析Cx43表达与缝隙连接(GJ)分布.结果 MSCs体外诱导可分化为自发搏动的心肌样细胞,表达心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)和形成肌丝结构.MSCs移植后可长期存活并在4、8和12周,并有效上调缺血区Cx43的表达,改善GJ分布紊乱状态.在梗死区Cx43无特殊改变.结论 MSCs具有分化为心肌样细胞的可塑性,移植后上调MI后缺血区Cx43表达,改善GJ分布紊乱.
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黄芪甲苷减轻镉致TM3细胞Cx43表达下降及缝隙连接细胞间通讯功能减退
目的 探讨黄芪甲苷(As)对镉(Cd)致TM3细胞连接蛋白43(Cx43)表达改变及由Cx43介导的缝隙连接细胞间通讯(GJIC)功能改变的保护作用.方法 用TM3细胞系作为研究对象,设对照组、As(20 mg/L)组、Cd(10 μmol/L)组、Cd加As组,免疫组织化学方法分析Cx43阳性产物表达,荧光定量PCR检测Cx43 mRNA表达,Western blot检测Cx43蛋白表达,划痕标记染料示踪技术(SLDT)检测GJIC功能.结果 与对照组相比,Cd组TM3细胞Cx43阳性产物表达的平均吸光度值(AOD)显著降低(P＜0.01),Cx43 mRNA和蛋白表达下降(P＜0.01),TM3细胞GJIC功能降低(P＜0.01);Cd+As组TM3细胞Cx43阳性产物表达虽较对照组减弱但明显高于相应Cd组(P＜0.01),Cx43 mRNA、蛋白表达及GJIC功能虽比对照组降低,但较Cd组高(P＜0.01).结论 黄芪甲苷对镉致TM3细胞Cx43表达下降及GJIC功能减退有明显的拮抗作用.
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枝叶油联合维甲酸对SD胎鼠脑组织Pax3和缝隙连接蛋白43表达的影响
目的 探讨桉叶油联合维甲酸(RA)对SD胎鼠脑组织转录因子Pax3、缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响.方法SD孕鼠42只,随机分为6组,每组7只,正常对照组,RA组,溶剂对照组(花生油+RA),3个实验组(桉叶油高、中、低剂量+RA).正常对照组自由摄食饮水,溶剂对照组于孕第7～14天每只花生油2ml灌胃,每天1次,孕第10天40mg/kg RA灌胃1次.桉叶油3个剂量组于孕第7～14天分别桉叶油300、200和100mg/kg灌胃,每天1次,孕第10天40mg/kg RA灌胃1次.RA组于孕第10天40mg/kg RA灌胃1次.各组于孕21天处死孕鼠取胚胎,Western blotting、免疫组织化学技术检测胎鼠脑组织的Pax3、Cx43蛋白的表达.Real-time PCR检测脑组织Pax3、Cx43 mRNA表达.阿利新蓝和茜素红进行骨骼染色,体视显微镜下观测椎骨发育,脊柱间隙.结果 维甲酸灌胃各组胎鼠椎骨数量异常的胎鼠数与正常对照组比较差异无显著性,但在维甲酸灌胃各组中,胎鼠椎骨形态异常的异常率和胎鼠椎骨分裂的百分率低值分别为55％(桉叶油高剂量+RA组)和45.8％(桉叶油低剂量+RA组),较正常对照组高(0)(P＜0.05).在维甲酸灌胃各组中,桉叶油各组胎鼠椎骨形态异常的异常率和胎鼠椎骨分裂的百分率高值分别为62.5％(桉叶油低剂量+RA组)和55.0％(桉叶油高剂量+RA组),较维甲酸组(73.7％,73.7％)和溶剂对照组低(68.2％,63.6％,P＜0.05).与正常组胎鼠比较,维甲酸灌胃各组大脑组织的Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表达较正常组高(P＜0.05),在维甲酸灌胃各组中,桉叶油灌胃各组胎鼠脑组织Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表达较单纯RA灌胃组低,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 桉叶油对维甲酸引起胎鼠神经管缺陷有一定的拮抗作用.其机制可能与桉叶油拮抗维甲酸上调胎鼠神经组织的Pax3、Cx43蛋白过度表达有关.
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缝隙连接蛋白43和黄体生成素受体在小鼠卵巢中的表达
目的 观察小鼠卵泡发育过程中缝隙连接蛋白43(Cx43)和黄体生成素受体(LHR)在小鼠卵巢中的表达以及黄体生成素(LH)对卵巢Cx43表达的影响,为这两种分子与卵泡发育的关系提供实验依据.方法 选择出生后1d、4d、7d、2周、3周、4周、6周、8周龄雌性C57小鼠共8组,每组10只,取卵巢.HE染色观察卵巢形态、卵泡发育并测量颗粒细胞体积分数.免疫组织化学和Western blotting观察卵巢组织中Cx43及LHR的表达,Westernblotting检测不同浓度黄体生成素(LH)孵育后对卵巢Cx43表达的影响.结果 HE染色显示,出生1d小鼠卵巢中见原始卵泡,出生7d卵巢内出现初级卵泡,2周时出现窦前卵泡和少量窦卵泡,3周、4周时,出现较多大的窦卵泡,6～8周时出现黄体.卵泡颗粒细胞体积分数在2周后的卵巢中明显增加.Cx43表达在各阶段卵泡的颗粒细胞胞膜上,LHR表达在卵泡膜细胞、颗粒细胞及卵母细胞胞质中.Cx43和LHR出生后2周卵巢中的表达开始明显增加,并随卵泡发育表达逐渐增强,在3周、4周、6周和8周维持相对较高水平.LH体外干预可增加卵巢组织Cx43的表达.结论 Cx43和LHR在卵泡发育中发挥重要作用,LH可能通过LHR促进卵巢卵泡颗粒细胞Cx43的表达.
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核纤层蛋白A、转录因子TBX3、缝隙连接蛋白43表达与小鼠胚胎心发育
目的 探讨小鼠胚胎心脏工作心肌和传导系心肌在形态发生和分化过程中核纤层蛋白A(lamin A)、转录因子TBX3、缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达特点.方法 用抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)、抗胰岛因子1(ISL-1)、抗Cx43、抗lamin A和抗转录因子TBX3,对46只胚龄8 ～ 15d小鼠胚胎心脏连续石蜡切片进行免疫组织化学及免疫荧光染色.结果 胚龄9d,TBX3在原始心管的表达集中在房室管壁.10d始,TBX3阳性的表达逐渐从房室管壁沿着静脉瓣延续至窦房结、右心房背侧壁和房间隔.胚龄12 ～ 13d,TBX3阳性表达结构构成了中枢传导系雏形,包括窦房结、左右静脉瓣、房间隔、房室管、房室结和房室束.Cx43首先在胚龄9d的左心室腹侧壁和部分小梁心肌出现弱阳性表达,随着发育,Cx43逐渐在TBX3阴性的心房、心室工作心肌表达.Lamin A首先出现在10d房室管心内膜垫间充质细胞和左心室部分小梁心肌,随后在右心室小梁心肌出现,至胚龄15d,心室和心房小梁心肌及房室瓣均可见lamin A阳性表达,但致密心肌和中枢传导系心肌持续呈阴性表达.结论 中枢传导系统雏形在小鼠胚龄13d形成,呈TBX3阳性,Cx43阴性的互补性表达.致密心肌和中枢传导系心肌在15d仍为lamin A表达阴性,说明此部分心肌分化成熟较晚.
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大鼠骨骼肌成肌细胞与乳鼠心肌细胞共培养对缝隙连接蛋白43表达的影响
目的 观察体外共培养的乳鼠心肌细胞与大鼠骨骼肌成肌细胞(简称L6细胞)以及乳鼠心肌细胞与转染外源性缝隙连接蛋白43(Cx43)基因的L6细胞(简称L6-Cx43细胞)间Cx43蛋白的表达情况,从而探讨共培养时心肌环境对成肌细胞的作用.方法 将乳鼠心肌细胞与4′,6-二脒基-2-苯基吲哚标记的大鼠骨骼肌成肌细胞进行共培养,用免疫荧光双标方法检测共培养后两种细胞中Cx43的表达定位;用Western blotting方法检测共培养对成肌细胞中Cx43蛋白表达量的影响及共培养时间对成肌细胞Cx43蛋白表达水平的影响.结果 免疫荧光双标结果显示,共培养后两种细胞接触的细胞膜上均有Cx43的表达;Western blotting结果进一步证实,共培养后成肌细胞中Cx43蛋白的表达增多,L6-Cx43细胞中Cx43增多更明显.结论 心肌环境能够促进成肌细胞Cx43蛋白的表达,且两种细胞接触是必需的,转染外源性Cx43可以提高这种作用.
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Cx43及GLT-1对三叉神经痛大鼠疼痛行为学变化的调控作用
目的:研究大鼠三叉神经痛模型中缝隙连接蛋白43 (connexin-43, Cx43)和谷氨酸转运体-1 (glutamate transporter-1, GLT-1)表达的变化,探讨Cx43和GLT-1与三叉神经痛大鼠疼痛行为的关系.方法:将42只SD大鼠随机分为正常组(N)、假手术组(S)、模型组(ION-CCI)、ION-CCI +生理盐水1组(NS1)、ION-CCI + Gap26组(Gap26)、ION-CCI +生理盐水2组(NS2)、ION-CCI +头孢曲松组(Cef),每组6只.用铬肠线疏松结扎大鼠眶下神经建立三叉神经痛动物模型;造模成功后,相应组于术后第8天分别腹腔注射Gap26、头孢曲松或生理盐水;假手术组仅暴露神经,不结扎.于术前1天,术后1、3、5、7、9、11、14天行机械痛阈值及视频行为学检测.术后第15天取三叉神经脊束核,应用蛋白质印迹检测Cx43和GLT-1蛋白表达水平.结果:腹腔注射Gap26或头孢曲松可提高三叉神经痛大鼠的机械痛阈值(P < 0.001),减少其抓脸次数(P < 0.001).术后第15天,ION-CCI、NS1及NS2组大鼠较N组及S组大鼠相比,Cx43表达明显增加(P < 0.01),GLT-1表达明显减少(P < 0.001);Gap26组大鼠较ION-CCI、NS1组大鼠相比,Cx43表达减少(P < 0.05),GLT-1表达增加(P < 0.01);Cef组大鼠较ION-CCI、NS2组大鼠相比,GLT-1表达增加(P < 0.001),Cx43表达无明显差异.结论:腹腔注射Gap26或头孢曲松可改变三叉神经痛大鼠疼痛行为并改变三叉神经脊束核中Cx43和GLT-1的表达,提示Cx43和GLT-1参与了三叉神经痛大鼠疼痛行为的变化.
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慢性神经痛大鼠脊髓缝隙连接蛋白43基因表达变化的实验研究
目的:研究慢性神经痛大鼠脊髓缝隙连接蛋白43(Connexin43,Cx43)基因表达的变化.方法:18只成年SD大鼠随机分为两组(n=9),分别接受右侧坐骨神经结扎手术(CCI组)和假手术(Sham组).手术前、后观察大鼠疼痛行为学并测定右后肢热刺激抬脚潜伏期(PWTL)、电刺激抬脚阈值(PWET)的变化,于术后14天取大鼠L4/5右侧脊髓,以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照基因,采用RT-PCR半定量分析CCI组和Sham组Cx43表达的差异.结果:CCI组大鼠表现为行走步态异常,与Sham组相比CCI组术后5～14天疼痛阈值明显降低(P＜0.01).Sham组Cx43扩增产物量极少,而CCI组L4/5 Cx43扩增产物量约为Sham组的3倍.结论:慢性神经痛大鼠脊髓Cx43基因表达显著增加,提示脊髓缝隙连接可能在慢性病理性痛过程中发挥重要的作用.
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心力衰竭时缝隙连接蛋白43重构及其对心律失常的影响
根据2013年ACCF/AHA心力衰竭管理指南,心力衰竭被定义为,因心室充盈或射血的任何结构或功能受损所致的一种复杂的临床综合征.主要的电生理变化以及心力衰竭时心律失常的机制取决于心力衰竭发生的原因[1].电生理改变的基本物质不同,心律失常发生的机制也不同,这使得心力衰竭时心律失常的治疗十分困难,且治疗途径的选择并不明确.心力衰竭时的电生理改变是多样的,包括离子通道的重构,钙调蛋白的改变,细胞外基质的改变,瘢痕的产生,交感神经、肾素-血管紧张素-醛固酮系统的激活等[1],而缝隙连接蛋白(connexin,Cx)的重构则是细胞内一项重要的改变,近年来已经引起足够的重视,对其改变的研究也为治疗心律失常提供了新的靶点.
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基因重组质粒pBudCE4.1_Cx43转染骨髓间充质干细胞及其表达和功能的测定
目的 用重组质粒pBudCE4.1_Cx43转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)的mRNA和蛋白的表达及细胞间隙连接通讯功能的变化.方法 用脂质体转染的方法将重组表达质粒pBudCE4.1_Cx43转染细胞;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Cx43mRNA表达,免疫细胞化学法检测Cx43蛋白的表达,划痕染料示踪法检测细胞间通讯功能.结果 转染Cx43基因后的细胞在形态学、生长能力等方面的特征与未转染的细胞比较没有明显变化;Cx43mRNA与蛋白的相对表达量和对照组相比差异显著(P<0.01);转染组细胞传递的荧光强度与对照组相比亦差异显著(P<0.01).结论 转染Cx43基因的BMSCs能表达有生物学活性的基因产物,改善细胞间通讯功能,能为细胞性心肌成形术提供较理想的基因工程细胞.
