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DC-CIK细胞联合化疗治疗初发多发性骨髓瘤疗效及其对Treg细胞影响的分析
目的:研究树突细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)为效应细胞的过继免疫联合化疗治疗初发多发性骨髓瘤(MM)的临床疗效和免疫机制.方法:选取22例初发MM患者并将他们分为2组:单纯化疗组12例,给予适合的化疗方案;联合治疗组10例,除接受合适的化疗外,还给予DC-CIK细胞免疫治疗.记录所有患者在治疗前后外周血中的调节性T细胞(Tregs)的比例变化,并比较治疗后两组患者的临床疗效.结果:治疗后,单纯化疗组12例MM患者的总有效率(ORR)50.00% (6/12),其中完全缓解(CR)2例(16.67%),非常好的部分缓解(VGPR)2例(16.67%),部分缓解(PR)2例(16.67%).联合治疗组MM患者ORR 70.00% (7/10),其中CR3例(30.00%),VGPR 2例(20.00%),PR 2例(20.00%).与健康者相比,治疗前单纯化疗组及联合治疗组MM患者外周血中Treg细胞比例均明显升高(P<0.05),而治疗后,单纯化疗组及联合治疗组MM患者外周血中Tregs比例均明显下降(P<0.05),且联合治疗组患者相比单纯化疗组患者Tregs比例下降更明显,差异有统计学意义(P<0.05).进一步分析发现,两组中临床无效的MM患者外周血中Tregs比例治疗前后均无明显变化(P>0.05),而临床有效(至少达PR)的MM患者Tregs明显下降(P<0.05).结论:DC-CIK细胞免疫治疗能够协同或增强化疗药物缓解MM患者免疫功能紊乱,DC-CIK细胞免疫治疗与化疗联合有望提高初发MM患者的临床疗效.
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用抗原特异性树突状细胞激活的淋巴细胞治疗复发难治性非霍奇金淋巴瘤
本研究探讨负载自身肿瘤裂解物的树突状细胞(dendritic cells,DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killers,CIK)共培养后,治疗复发难治性非霍奇金淋巴瘤患者的临床免疫学疗效、毒副反应.选择9例复发难治性非霍奇金氏淋巴瘤患者,分离外周血单个核细胞,贴壁细胞体外经GM-CSF和IL-4诱导产生DC,并负载自体肿瘤细胞裂解物,悬浮淋巴细胞经IFN-γ、IL-2、抗CD3单克隆抗体、IL-1α体外诱导产生CIK细胞.7天后将负载抗原的DC与CIK共培养,12天后回输体内.利用流式细胞术、T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白(Ag-NORs)的检测及ELISA双抗夹心法检测过继免疫生物治疗前后各项免疫指标的变化,并观察临床疗效.结果表明:经细胞治疗后患者外周淋巴细胞Ag-NOR的IS值明显增高,呈上升趋势;CIK细胞培养后可见CD3+CD8+和CD3+CD56+细胞较培养前显著增H(p<0.01),负载肿瘤抗原的DC致敏后CD3+CD8+和CD3+CD56+的表达较之单纯的CIK进一步明显提高(p<0.01);将负载自身肿瘤抗原的DC与CIK共培养后,上清液中IFN-γ、IL-12的水平显著高于单独CIK对照组(p<0.05).5例患者通过影像学复查显示肿瘤较治疗前明显缩小;除一过性发热、畏寒外未见其它不良反应.结论:负载自身抗原的DC-CIK细胞的具有特异性杀伤淋巴瘤细胞的能力;外周淋巴细胞Ag-NOR的IS值明显增高,分泌细胞因子水平高于单纯CIK细胞,临床治疗效果令人满意.
关键词: 非霍奇金淋巴瘤 树突状细胞 细胞因子诱导杀伤细胞 肿瘤裂解物 免疫治疗 -
人B7.1真核表达载体的构建、鉴定及其在白血病细胞上表达的实验研究
本研究构建包含人B7.1cDNA的重组真核表达戢体pDisplay-hB7.1并鉴定,实现其在白血病细胞株HL-60细胞上的表达,获得HL60-hB7.1.应用分子克隆、PCR法扩增人B7.1基因片段,采用ApaI、SalI分别双酶切PCR产物和表达载体pHook,纯化后的酶切产物由T4 DNA连接酶连接,转导大肠杆菌DH5α;应用Apal、SalI双酶切和DNA序列分析技术进一步鉴定阳性克隆pDisplay-hB7.1,应用脂质体转化技术将B7.1转染HL-60细胞,同一标本分别采用直接免疫荧光法、SABC法及FACS法鉴定hB7.1在HL-60细胞上的表达,阳性细胞命名为HL60一hB7.1.结果表明,PCR法扩增出约620 bp的基因片段;连接产物转导感受态细胞后,共筛选出5个阳性克隆,均可经ApaI、SalI双酶切出大小约620 bp的基因片段,与人B7.1基因片段大小相符,提示重组载体构建成功.进一步DNA序列分析证明人B7.1基因序列和读码框架正确,与文献报道人B7.1 cDNA序列一致,无基因突变.直接免疫荧光法鉴定表明,HL600-hB7.1阳性细胞数为70%,SABC法鉴定为65%,FACS法鉴定为92.7%.经以上鉴定证实hB7.1 cDNA已成功转染HL-60细胞株并在其膜上高效表达,获得了HL60-hB7.1.结论:应用分子克隆方法可成功构建人B7.1(CD80)重组真核表达载体,并稳定、高效表达B7.1-于HL-60细胞胞膜上,推测应用这种方案制备的瘤苗可能具有免疫治疗和免疫保护作用.
关键词: B7.1真核表达载体 白血病 基因治疗 免疫治疗 -
多发性骨髓瘤基因修饰瘤苗诱导体内抗肿瘤反应的实验研究
本研究目的是评价NOD/SCID小鼠皮下移植瘤模型对多发性骨髓瘤基因修饰瘤苗引发体内抗肿瘤反应的效果.首先给NOD/SCID小鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞以在其体内重建人的免疫系统,然后皮下接种γ-射线灭活的基因修饰骨髓瘤细胞sko-007(表达绿色荧光蛋白或者p53、GM-CSF和B7-1基因),以PBS作为对照,后植入活sko-007细胞进行攻击.结果发现,与对照组相比接种感染腺病毒Ad-p53/GM-CSF/B7-1的sko-007细胞可以明显抑制移植瘤生长,病理分析显示移植瘤纤维组织增生伴弥漫性坏死增多,血管增生显著.免疫组织化学染色显示瘤灶内有人T淋巴细胞浸润.结论:p53、GM-CSF和B7-1基因修饰的骨髓瘤细胞能够诱导产生抗肿瘤免疫反应,有可能用于人类多发性骨髓瘤的免疫治疗.
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肿瘤抗原的新概念及其在淋巴瘤和其他肿瘤免疫治疗中的重要性
人类恶性肿瘤自身抗原的表达可以激发肿瘤免疫反应,肿瘤抗原特异的免疫治疗的确可以导致肿瘤消退.目前用于肿瘤自身抗原鉴定的方法有许多,已经鉴定出了2 000余种自身肿瘤抗原.虽然已经发现了许多自身肿瘤抗原,但是肿瘤抗原特异的免疫治疗效果目前并不十分令人满意,为此需要不断完善选择这些自身肿瘤抗原的新的理论基础,获得更有效的自身肿瘤抗原进行临床治疗,改善肿瘤患者预后,使将来肿瘤的治愈成为可能.本文主要回顾了自身肿瘤抗原的发现、鉴定、临床作用及作用机理,并综述了一些关于自身肿瘤抗原的新理论新概念,以及其在未来肿瘤免疫治疗中的作用.
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树突状细胞介导的抗白血病效应的临床研究
肿瘤的免疫治疗作为恶性肿瘤综合治疗的重要组成部分,近年来受到了广泛的关注.树突状细胞(DC)是已知的功能强的抗原呈递细胞,不仅能够激活自体的抗肿瘤免疫,同样能够提高异体免疫组织的抗肿瘤效应.为了探讨外周血来源的DC体外培养扩增和临床治疗的可行性和安全性,分析DC免疫治疗对于急性非淋巴细胞白血病自体骨髓移植患者长期生存的影响,利用CS3000Plus采集13例急性非淋巴细胞白血病自体骨髓移植后的病人的外周血单个核细胞,经过2周的体外培养后行DC免疫治疗,治疗后长期随访观察其无病生存时间.结果表明,无一例发现有与DC免疫治疗相关的严重不良反应;Kaplan-Meier生存分析结果为:DC组5年生存率为75.52%,非DC组5年生存率为45.71%,DC组在累计生存率上明显优于非DC组.结论:外周血来源的DC体外培养和临床治疗是安全可行的,急性非淋巴细胞白血病病人在自体骨髓移植术后应用DC免疫治疗延长了其无病生存时间,提高了长期生存率.
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共激活分子及相关因子对机体抗肿瘤免疫的调节作用
肿瘤在生长过程中,由于细胞转化产生的基因毒性应激和微环境的破坏,可激活具有抗肿瘤能力的效应细胞刺激专职抗原提呈细胞,触发T细胞和B细胞的特异性免疫反应.机体尽管存在免疫监视机制,但肿瘤的存在提示了瘤细胞逃避免疫反应的能力,其中包括各种逃避免疫识别的策略,例如表达死亡配体排除病灶的免疫细胞[1],通过降低主要组织相容性复合物(MHC)或共激活分子削弱免疫原性,以及干扰自然杀伤细胞(NK)和NKT细胞的识别能力.尽管面临诸如此类的问题,现代免疫治疗在治疗恶性疾病方面仍然显示出发展的前景.
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上皮性卵巢癌免疫治疗的研究进展
卵巢恶性肿瘤的发病率近40年来增加了2~3倍并有逐步上升的趋势,根据美国癌症协会2007年的报道,22 430例新诊断的卵巢癌病例中约有15 280例死亡.
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第七届全国生物治疗大会在上海圆满落幕
由中国医药生物技术协会主办,医药生物技术临床应用专业委员会、上海东方肝胆外科医院、上海细胞治疗工程技术研究中心承办的第七届全国生物治疗大会于10月25日在上海圆满落幕,国内外300余代表参加了会议。来自康奈尔大学、美国 Moffitt 癌症中心、澳门大学、法国 Txcell 公司、英国 GE 公司、复旦大学、中国医学科学院肿瘤研究所、上海交通大学、第二军医大学、中山大学肿瘤医院、天津医科大学肿瘤医院、北京大学人民医院等国内、外专家作了大会发言,介绍了国内外免疫细胞治疗、肿瘤疫苗、干细胞治疗、靶向治疗的进展、经验与展望,对肿瘤免疫治疗等问题进行了探讨。我会刘海林顾问和吴朝晖秘书长出席会议。
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趋化因子及其受体在肿瘤免疫中调节作用的新进展
趋化因子是一类趋化粒细胞、单核细胞和巨噬细胞等炎症细胞定向迁移的细胞因子,其表达与某些免疫细胞相关,如自然杀伤细胞、淋巴细胞和树突状细胞等,并在肿瘤免疫中发挥重要作用.本文主要阐述趋化因子及其受体在肿瘤免疫中的双向调节作用,并探讨其在肿瘤免疫治疗中的意义.
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叶酸修饰的纳米材料在肿瘤靶向治疗中的应用研究进展
随着肿瘤诊断及治疗技术的日益发展,据相关统计显示,近二十年来美国肿瘤的总死亡率已经逐渐下降,但2011年仍高达23%[1].由此可见,肿瘤依然是威胁人类生命健康的重要疾病.早发现、早诊断、早治疗仍然是提高肿瘤患者生存率的关键.目前,肿瘤治疗手段主要有手术、放疗、化疗、免疫治疗、基因治疗、热疗等,其中靶向治疗是当前肿瘤研究的一个热点.
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免疫细胞制剂制备质量管理自律规范
近年来,随着我国细胞免疫治疗的发展,业内要求规范细胞免疫治疗的呼声日渐增多。细胞免疫治疗是否安全、有效,一方面取决于细胞本身,这需要科学家对不同细胞进行深入细致的研究来确定;另一方面还取决于细胞制备环节,是否能保证制备出符合质量标准、未受污染的细胞制剂。因此加强免疫细胞制剂质量管理,对细胞免疫治疗的临床研究和应用尤其重要。由于免疫细胞制剂基本上都是小批量,绝大多数情况下都是个体制剂,制备机构也多为中小型单位,如何将 GMP 的基本原则与免疫细胞制剂制备有机结合是当前的重要课题。2015年4月,中国医药生物技术协会启动了《免疫细胞制剂制备质量管理自律规范》的起草工作,期间几易其稿,组织大小研讨会十余次,经反复修改后形成了终的规范文本。规范的颁布,旨在对业内开展免疫细胞制剂制备给予指导,并为对机构开展免疫细胞制剂制备的能力进行评价提供依据。该规范提出了免疫细胞制剂制备应该遵守的基本原则,由于各个机构采用的工艺和制备细胞不同,机构应该采取相应的措施达到规范的要求并对机构所制备的制剂负全部责任;机构符合和达到该规范的要求,并不表示机构所制备的免疫细胞制剂就可以自行开展临床研究或应用,机构应自觉遵守国家的有关法律法规。该规范在起草过程中,中国医药生物技术协会医药生物技术临床应用专业委员会、英普乐孚生物技术(上海)有限公司、南京得康生物科技有限公司、北京希波医学生物技术有限责任公司、上海市《临床细胞治疗技术平台研究与应用示范》课题组等单位提供了大力支持,并得到了中国食品药品检定研究院孟淑芳研究员、中国医学科学院肿瘤医院张叔人研究员的悉心指导,在此一并致谢。
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山东赛乐中德生物科技有限公司招标公告
1.招标人:山东赛乐中德生物科技有限公司 2.招标工程名称:山东赛乐中德生物科技有限公司 3.工程建设地点:山东省青岛市经济技术开发区中德生态园区 4.供应商须知:我公司从事免疫细胞冻存和细胞免疫治疗业务,土建工程目前已完成,现进入GMP实验室、细胞冻存库装修及设备采购阶段,欢迎各供应商参与工厂建设.
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长链非编码RNA在肿瘤转移及肿瘤耐药性形成中的作用研究进展
进入21世纪后,肿瘤发病率不断升高,严重威胁着人类的生存及健康[1]。随着新的诊疗设备及技术的出现,虽然肿瘤患者因早期就诊,生存时间延长,生存质量有了很大的提高,但是近30年间,恶性肿瘤的总体病死率并没有明显的下降,肿瘤转移仍是恶性肿瘤患者死亡的首要原因。目前,肿瘤治疗的主要方法有手术、化疗、放疗、免疫治疗、分子靶向治疗等。我国的许多患者确诊时多为中晚期,且已发生全身多处转移,丧失了早期手术机会[2],化学药物治疗成为治疗的主要手段。肿瘤耐药性的产生是临床治疗各种肿瘤时面临的一个主要挑战,也是进一步延长患者生存期的瓶颈之一[3]。肿瘤转移以及耐药性的形成极大延缓了治愈率的进一步提高。
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胶质瘤干细胞研究的新进展及展望
胶质瘤是常见的原发性脑肿瘤,多数呈浸润性生长,手术不易全切,对放化疗不敏感,故复发率高,预后普遍较差[1-2].基因干预技术、分子靶向治疗、免疫治疗等新技术有可能成为未来治疗胶质瘤的有效手段[2-4],而阐明胶质瘤发病机制,是确定关键治疗靶点及发现诊断、鉴别诊断和确定预后评估分子标志物必须解决的关键问题.胶质瘤干细胞(glioma stem cells)的发现及研究新进展为揭示胶质瘤发生、发展的分子机制及研发诊疗新技术打开了新视野,已成为当今胶质瘤研究的热点领域[2-3,5].
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人乳头瘤病毒18型融合蛋白和重组痘苗病毒联合免疫的效果评价
目的 研究人乳头状瘤病毒18型(HPV18)融合蛋白和重组痘苗病毒联合免疫诱发小鼠产生的细胞免疫和体液免疫反应水平.方法 原核表达系统表达并纯化的HPV18L231-600E7E6融合蛋白与表达HPVI8E7E6融合蛋白的重组痘苗病毒(rVV18E7E6)联合免疫C57BL/6小鼠,通过酶联免疫斑点法(ELISPOT)、ELISA和假病毒中和实验分别对不同免疫程序的免疫组诱发机体产生的细胞免疫和体液免疫应答进行评价.结果 HPV18L231-600E7E6融合蛋白/CpG佐剂初免、重组痘苗病毒rVV18E7E6加强免疫的联合免疫方式可以诱发小鼠产生强水平的T细胞免疫反应,同时可产生较高水平的结合抗体,并能检测到低水平中和抗体.结论 以HPV18L231-600E7E6/CpG初免、重组痘苗病毒rVV18E7E6加强免疫的联合免疫策略诱导了较强的细胞免疫和体液免疫应答,可作为治疗HPV18型慢性感染和宫颈癌手术后辅助治疗的候选疫苗.
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广西地区三类人群EB病毒潜伏膜蛋白2特异性细胞免疫状态的研究
目的 初步探讨广西地区鼻咽癌患者、血清VCA/IgA阳性高危人群及血清VCA/IgA阴性健康人群EB病毒LMP2特异性细胞免疫状态的差异.方法 选择广西苍梧地区经血清学筛查VCA/IgA阳性高危人群志愿者60例,对照为血清VCA/IgA筛查阴性的健康志愿者20例,同时选取广西壮族自治区人民医院经病理确诊鼻咽癌患者134例,分离外周血单个核细胞(PBMC),采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测外周血中LMP2特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫水平.比较鼻咽癌患者与健康志愿者、高危人群外周血LMP2特异性CTL免疫状态的差异.结果 鼻咽癌患者LMP2特异性CTL免疫水平明显低于健康志愿者及血清EB病毒抗体阳性人群,差异有统计学意义(P<0.01);血清EB病毒抗体阳性三种不同滴度人群间LMP2特异性T细胞免疫反应差异有统计学意义(P=0.002);鼻咽癌Ⅰ、Ⅱ期患者同Ⅲ期及Ⅳ期患者的LMP2特异性T细胞免疫反应存在差异(P<0.01).结论 三类人群间LMP2特异性CTL水平的差异可能是导致EB病毒长期潜伏感染并导致鼻咽癌发生的重要原因,针对LMP2的特异性免疫治疗有望降低鼻咽癌的发生率.
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DNA疫苗及其在流感病毒疫苗研究中的应用
DNA疫苗能够诱导广谱免疫反应,已被广泛应用于预防性疫苗和针对各种感染性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病和过敏性疾病的免疫治疗的临床试验.
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免疫治疗EBV相关肿瘤的研究进展
Epstein-Barr病毒(EBV)属于疱疹病毒科γ亚科,具有噬B淋巴细胞的特性,能够在B淋巴细胞中建立起潜伏感染,刺激细胞的增生和转化.人群中有大于90%的感染率.
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几种细胞因子对人脐血CD34+干细胞在体外诱导扩增为树突状细胞的研究
多种疾病用树突状细胞(dendritic cell, DC)作免疫治疗具有一定的疗效.由于DC在人体组织中含量甚微,限制了DC的研究及临床应用.因此如何获得足够的成熟DC便成为DC广泛应用的关键技术问题.我们比较了不同细胞因子组合对脐血CD34+造血干细胞在体外诱导扩增为DC的效率及功能的影响,提供一种体外获得大量成熟DC的有效途径.