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CD137-CD137L信号通路对小鼠动脉粥样斑块及血管平滑肌细胞钙化的影响

陈瑶;严金川;翁嘉懿;王中群;王翠平;邵晨

摘要: 目的 探讨CD137-CD137L信号通路对动脉粥样斑块及血管平滑肌细胞(VSMC)钙化的影响.方法 (1)体内实验:载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-小鼠)15只,8周龄,抓阄法随机分为3组,CD137刺激组(腹腔注射刺激型CD137抗体200μg),CDl37抑制组(腹腔注射抑制型CD137抗体200 μg+刺激型CD137抗体200μg)和对照组,每组5只小鼠.采用Von kossa染色法检测各组小鼠主动脉斑块钙化程度.免疫组织化学染色检测小鼠主动脉斑块中骨形成蛋白-2(BMP-2)及Runx2蛋白表达水平.(2)体外细胞实验:采用组织块贴壁法培养C57BL/6J小鼠胸主动脉VSMC.实验分为4组,对照组(DMEM+10% FBS+10 mmol/L β-甘油磷酸钠)、CD137刺激组(刺激型CD137抗体)、CD137抑制组(抑制型CD137抗体+刺激型CD137抗体)、同型对照组(IgG2b).分别采用Vonkossa染色和甲基百里香酚蓝法检测细胞钙化及细胞内钙含量.采用实时荧光定量PCR法检测BMP-2和Runx2成骨相关蛋白mRNA表达水平.采用Western blot法检测各组主动脉斑块中BMP-2和Runx2蛋白表达水平.结果 (1)体内实验:CD137刺激组ApoE-/-小鼠主动脉斑块钙化面积大于对照组[(1.75 ±0.33)×104 μm2比(0.23 ±0.07)×104 μm2,P<0.01],而CD137抑制组则小于CD137刺激组[(0.83 ±0.30)×104 μ,m2比(1.75±0.33)×104 μm2,P <0.05].CD137刺激组BMP-2和Runx2蛋白表达水平均高于对照组(P均<0.01),而CD137抑制组则均低于CD137刺激组(P均<0.05).(2)体外细胞实验:CD137刺激组VSMC钙化程度高于对照组,细胞内钙离子含量高于对照组[(0.001 3±0.000 2)mmol/mg蛋白比(0.000 7±0.000 2)mmol/mg蛋白,P<0.01],BMP-2和Runx2 mRNA和蛋白表达水平均高于对照组(P均<0.05).而CD137抑制组VSMC钙化程度较CD137刺激组弱、细胞内钙含量少[(0.0009±0.000 2)mmol/mg蛋白比(0.001 3 ±0.000 2)mmol/mg蛋白,P<0.05],BMP-2和Runx2 mRNA和蛋白表达水平亦均较CD137刺激组低(P均<0.05).结论 激活CD137-CD137L信号通路可促进小鼠动脉粥样斑块和VSMC钙化形成.

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