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肺结核患者髓源性抑制细胞水平变化及其对T淋巴细胞增殖的影响研究

张涛;葛成群

摘要: 目的:探讨治疗前后肺结核(PTB)患者髓源性抑制细胞(MDSC)水平变化,分析 MDSC 对 T 淋巴细胞增殖的影响及其作用机制。方法选取2011年1月—2014年1月于临沂市人民医院诊断为活动性 PTB 患者30例,痰液涂片镜检结核分枝杆菌(MTB)阳性和结核菌素皮肤试验阳性( TST +)的活动性 PTB 患者家属(接触 PTB 患者)12例,同期经本院结核内科检查为非结核病的健康对照者15例,同期本院痰液涂片镜检 MTB 阴性的肺部感染疾病患者7例。活动性 PTB 患者和接触 PTB 患者给予6个月的抗 PTB 治疗。取活动性 PTB 患者、接触 PTB 患者和健康对照者外周血制备单核细胞( PBMC),取活动性 PTB 患者和肺部感染疾病患者肺部灌洗液制备支气管肺泡细胞(BALC),采用流式细胞仪进行流式分选,记录 MDSC 在 PBMC 和 BALC 中的比例。同样方法对治疗结束的活动性 PTB患者、治愈 PTB 患者和康复 PTB 患者检测 MDSC 在 PBMC 中的比例。从健康对照者分离的 PBMC 用 CFSE 活细胞荧光染色剂染色(CFSE - PBMC),从活动性 PTB 患者的 PBMC 中分离 CD +11b CD -14 MDSC,将不含 MDSC 的 PBMC 经丝裂霉素C 作用后培养。以2×105个 CFSE - PBMC 为反应细胞,2×105个不含 MDSC 的 PBMC 和 MDSC 以不同比例(1:0、1:2、1:4、1:8)混合作为刺激细胞共培养,测定 CD +3 T 淋巴细胞的 CFSE 信号强度。检测活动性 PTB 患者和健康对照者血清 L -精氨酸、一氧化氮( NO)、鸟氨酸水平。结果活动性 PTB 患者、接触 PTB 患者、健康对照者 PBMC 中MDSC 比例分别为0.338(0.274,0.399)、0.115(0.073,0.201)和0.042(0.031,0.103),差异有统计学意义(H=16.450,P <0.001);其中活动性 PTB 患者 PBMC 中 MDSC 比例高于接触 PTB 患者、健康对照者(P <0.001)。活动性 PTB 患者 BALC 中 MDSC 比例为0.425(0.219,0.483),高于肺部感染疾病患者的0.031(0.011,0.100)( Z=9.675,P =0.004)。PBMC 与 MDSC 分别以1:0、1:2、1:4、1:8混合后,CD +3 T 淋巴细胞增殖率分别为0.874(0.761,0.953)、0.668(0.588,0.818)、0.510(0.477,0.614)、0.186(0.112,0.290),差异有统计学意义(H=9.995,P =0.006)。活动性 PTB 患者血清 L -精氨酸水平为31.72(18.37,59.58)μmol/ L,低于健康对照者的57.88(35.11,77.93)μmol/ L(Z =9.030,P =0.008)。活动性 PTB 患者血清 NO 水平为63.54(51.83,81.33)μmol/ L,高于健康对照者的30.31(28.19,40.28)μmol/ L( Z =10.033,P =0.004)。治疗结束时治愈 PTB 患者PBMC 中 MDSC 比例为0.024(0.008,0.0389),低于活动性 PTB 患者治疗期间 PBMC 中 MDSC 的比例0.323(0.264,0.388)(Z =18.880,P <0.001)。康复 PTB 患者 PBMC 中 MDSC 比例为0.034(0.018,0.039),低于其治疗结束时PBMC 中 MDSC 的比例0.053(0.017,0.084)(Z =11.125,P =0.004)。结论活动性 PTB 患者 PBMC 和 BALC 中MDSC 比例增加,治愈及康复者 MDSC 比例下降;MDSC 可抑制 T 淋巴细胞增殖,其机制可能与激活 NO 信号通路有关。

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