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补肾疏肝方对肺腺癌 A549细胞的凋亡作用及其机制研究

苗学红；王淑玲
关键词： 腺癌 细支气管肺泡 补肾疏肝方 A549细胞 细胞凋亡 survivin 肿瘤坏死因子α 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3

摘要： 目的：探讨补肾疏肝方对肺腺癌 A549细胞的凋亡作用，对肿瘤坏死因子（TNF）-α分泌、Survivin及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3 mRNA 表达的影响。方法将补肾疏肝方制成低剂量（1.25 g/ ml）、中剂量（2.50 g/ ml）和高剂量（3.75 g/ ml）药液。以随机数字表法将大鼠分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、顺铂（DDP）组、联合组（中剂量药液联合 DDP），每组10只。对照组于第1~5天给予0.9％氯化钠溶液4 ml/ d 灌胃；低剂量组、中剂量组、高剂量组于第1~5天给予相应剂量药液4 ml/ d 灌胃；DDP 组分别于第1、3、5天腹腔注射2 ml DDP（20％）；联合组于第1~5天给予中剂量灌胃药液灌胃4 ml/ d 及第1、3、5天腹腔注射2 ml DDP（20％）。末次给药2 h 后采血，分离血清。A549细胞分别加入各组血清，培养72 h，倒置荧光显微镜下观察细胞凋亡情况。A549细胞分别加入各组血清，培养24、48、72 h 后，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测 TNF -α水平。A549细胞与各组血清共培养72 h 后，采用荧光定量 PCR 检测 Survivin mRNA、Caspase -3 mRNA 的相对表达量。结果各组血清作用于 A549细胞72 h 后，凋亡细胞核固缩，且随药液浓度增加凋亡细胞增多。各组血清作用于 A549细胞24、48、72 h 后 TNF -α分泌水平比较，差异均有统计学意义（P ﹤0.05）。其中，低剂量组、中剂量组、高剂量组、DDP 组和联合组作用于 A549细胞24、48、72 h 后 TNF -α分泌水平高于对照组，差异均有统计学意义（P ﹤0.05）。各组血清作用于 A549细胞72 h 后 Survivin mRNA 相对表达量比较，差异有统计学意义（ F ＝13.238，P ﹤0.05）。其中，高剂量组、DDP 组和联合组血清作用于 A549细胞72 h 后 Survivin mRNA 相对表达量低于对照组，差异有统计学意义（ P ﹤0.05）。各组血清作用于 A549细胞72 h 后 Caspase -3 mRNA 相对表达量比较，差异有统计学意义（F ＝10.814，P ﹤0.05）。其中，中剂量组、高剂量组、DDP 组和联合组血清作用于 A549细胞72 h 后 Caspase -3 mRNA 相对表达量高于对照组，差异有统计学意义（P ﹤0.05）。结论补肾疏肝方可促进肺腺癌 A549细胞凋亡，其机制可能与抑制 Survivin基因表达、促进 TNF -α分泌和 Caspase -3基因表达有关。

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