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在模拟低氧环境下心肌细胞HIF-1与CT-1的相互作用
目的:研究低氧环境下大鼠心肌细胞系H9C2细胞中HIF-1与CT-1的相互作用.方法:氯化钴(CoC12)模拟低氧环境.采用CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率.化学合成siRNA片段,并通过lipofectamine 2 000转染大鼠心肌细胞系H9C2.采用Real-time PCR和Western-blot技术分别检测HIF-1α和CT-1的mRNA和蛋白质水平.结果:低氧处理48 h后,干扰组(转染针对HIF-1α的siRNA的H9C2)中CT-1 mRNA和蛋白水平较对照组(转染无义干扰片段的H9C2)明显减少(P＜0.05).低氧3d和4d后,加入CT-1组的心肌细胞存活率较对照组高(P＜0.05),HIF-1mRNA表达水平与对照组无显著差异(P＞0.05),HIF-1蛋白水平增加.结论:在培养心肌细胞中模拟低氧环境,HIF-1表达减少伴随着CT-1表达减少,加入CT-1后,HIF-1蛋白表达也增加,HIF-1与CT-1相互作用.
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HIF-1α、VEGF在子宫内膜癌中的表达及临床意义的研究进展
缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1, HIF-1)是缺氧条件下存在于哺乳动物或人体内的一种转录因子,是介导细胞对缺氧微环境进行适应性反应的转导调控因子.
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乙醇对胃癌细胞缺氧与抗凋亡蛋白的影响
目的 探讨乙醇对胃癌细胞缺氧诱导因子与抗凋亡蛋白Survivin的影响.方法 将人胃癌细胞BGC823分组培养,加入5%-30%终浓度的乙醇培养1-4h,并设空白对照组,提取蛋白后采用免疫印迹法检测HIF-1α蛋白及Survivin蛋白的表达.结果 在BGC823细胞中HIF-1α蛋白的表达随着乙醇浓度和时间的加大而增加;Survivin蛋白表达在乙醇处理1h后随着乙醇浓度的增加表现为先增加后减少,在乙醇处理4h后随着乙醇浓度的增加反而减少.结论 在胃癌细胞BGC823中乙醇通过HIF-1α途径引起细胞缺氧,通过抑制抗凋亡蛋白Survivin促进细胞凋亡.
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HIF-1α、VEGF及HIF-1α/VEGF轴在子宫内膜癌中的表达研究进展
缺氧诱导因子-1(Hypoxia inducible factor-1，HIF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)参与大多数恶性肿瘤的局部侵润和远处转移，它们目前已经成为了肿瘤预防和治疗的新靶点之一。子宫内膜癌作为较典型的乏氧型实体肿瘤，HIF-1和VEGF在其发生和进展中起着至关重要的作用。越来越多的实验研究表明，处于缺氧状态下的肿瘤组织中HIF-1α能够在基因水平上直接调控VEGF的表达，从而诱导新生血管的形成，肿瘤细胞能够利用新生血管的血供对抗由于肿瘤细胞快速的增殖所导致的低氧状态，这一过程不断循环，HIF-1α/VEGF轴在此过程中发挥了重要作用，使得肿瘤组织能够得以持续不断生长，侵袭和转移。本文综述了HIF-1和VEGF，及HIF-1α/VEGF轴在子宫内膜癌中的表达及研究进展，可能对子宫内膜癌的早期诊断，临床治疗及预后评价有重要意义。
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缺氧诱导因子-1α及其靶基因在人肝癌HepG2细胞中的表达和意义
缺氧诱导因子-1(HIF-1)存在于大多数实体肿瘤中,是肿瘤细胞维持氧平衡的重要的转录调节子.HIF-1包含α和β两个亚基(HIF-1α和HIF-1β),其中HIF-1α是主要的功能亚基,对HIF-1的转录活性起关键作用.
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3-(5'-羟甲基-2'-呋喃基)-1苯甲基引唑靶向抑制缺氧诱导因子-1α信号对大鼠非酒精性脂肪肝进程的影响
目的 观察3-(5'-羟甲基-2'-呋喃基)-1苯甲基引唑(YC-1)靶向抑制缺氧诱导因子-1α对实验性大鼠非酒精性脂肪肝进程的影响. 方法 72只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、干预组,通过高脂饲料喂养建立大鼠脂肪肝模型.造模后干预组每2周给予腹腔内注射YC-1(剂量为2 mg/kg),观察时间点分别为4周、8周、12周、16周.干预结束后取血及肝组织,进行血脂、肝功能生物化学指标、空腹血糖、胰岛素检测,病理组织学检查,计算胰岛素抵抗指数.用Realtime-PCR法检测肝组织中缺氧诱导因子-1α、过氧化物酶体增殖物激活受体α及核因子-κB的mRNA转录水平,Western blot检测蛋白质表达水平.多组计量资料比较采用成组设计的方差分析、Kruskal-Wallis H检验,两两比较采用LSD法,P＜0.05为差异有统计学意义. 结果 与模型组相比,干预组在连续给药12周后,大鼠血清ALT、AST、甘油三酯和总胆固醇水平明显下降(P＜0.05);与模型组比较,干预组在连续YC-1注射8周后,大鼠肝脏脂肪变明显减轻(P＜0.05),炎症程度也明显好转(P＜0.05),在连续YC-1注射12周后大鼠肝脏纤维化程度较模型组也显著下降(P＜0.05);在连续给药12周及16周后,过氧化物酶体增殖物激活受体α的mRNA表达较模型组显著上升,而核因子-κB的mRNA表达则显著下降.缺氧诱导因子-1α、过氧化物酶体增殖物激活受体α、核因子-κ B在各组不同时期脂肪肝组织中的蛋白质表达,与mRNA表达结果类似.与模型组相比,干预组各时间点的胰岛素抵抗指数差异无统计学意义.结论 靶向抑制缺氧诱导因子-1α能明显延缓实验性脂肪肝大鼠的进程,并改善脂质代谢,但对胰岛素抵抗无明显影响.
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6-磷酸果糖-2-激酶在结直肠癌中的表达及临床意义
目的 检测6-磷酸果糖-2-激酶(6-phosphofructokinase-2,PFKFB)在结直肠癌及癌旁组织中的表达,并探讨其临床意义.方法 应用组织芯片结合免疫组化技术检测本院90例结直肠癌组织标本和相应90例癌旁组织中PFKFB1、PFKFB2、PFKFB3、PFKFB4及缺氧诱导因子-1(HIF1-α)的表达.结果 PFKFB1、PFKFB2、PFKFB3、PFKFB4和HIF1-α在90例结直肠癌组织中高表达例数分别为57、59、59、51和60,表达均显著高于相应癌旁组织(P＜0.05).PFKFB3在结直肠癌组织中的高表达与肿瘤的大小、临床分期、淋巴结转移及预后等密切相关(P＜0.05),高表达组比低表达组预后差(P＜0.01),临床分期高的结直肠癌患者中,PFKFB3的高表达提示了临床预后差(P＜0.01),但在临床分期低的患者中不存在这种差异(P＞0.05).PFKFB3的表达同HIF-1α的表达呈正相关(r=0.627,P＜0.01).而PFKFB1、PFKFB2和PFKFB4的表达与结直肠癌的肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移及预后等无显著相关性(P＞0.05).结论 PFKFB家族在结直肠癌中高表达,且结直肠癌患者中PFKFB3高表达者比低表达者预后差,并且其作用同HIF1-α的表达密切相关.
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人HIF1α基因重组逆转录病毒载体构建及鉴定
目的构建人缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因重组逆转录病毒载体,并观察其对NIH3T3细胞感染效率.方法采用基因工程技术,经过2次亚克隆将HIF-1α基因片段克隆至含IRES-EGFP逆转录病毒载体上,鉴定后用脂质体法转染PT67细胞进行包装、扩增,后用重组逆转录病毒感染NIH3T3细胞.其中采用PCR方法对重组载体进行鉴定,利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对病毒滴度和感染效率进行检测.结果酶切鉴定及PCR结果与HIF-1α基因重组逆转录病毒载体的预期结果一致,病毒滴度达(1.4×106 pfu/ml),并对NIH3T3细胞有强感染能力.结论应用基因工程技术,成功构建了含人HIF-1α基因重组逆转录病毒载体,为应用于治疗性血管生成创造了条件.
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缺氧诱导因子-1与急性呼吸窘迫综合征的研究进展
急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是临床上常见的急危重症之一,主要由严重感染、创伤、休克和误吸等多种原因引起,以肺泡毛细血管膜损伤导致的肺水肿、肺内微血栓形成和炎性细胞浸润为主要病理改变,以呼吸窘迫和顽固低氧血症为主要临床表现特征的综合征.
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肾积水后缺氧诱导因子-1、血管内皮生长因子、微小RNA-210的动态表达
目的：观察小鼠肾积水后缺氧诱导因子‐1（HIF‐1）、血管内皮生长因子（VEGF）、微小RNA（miRNA）‐210在不同时间点的表达变化并探讨其调控机制。方法采用丝线结扎单侧输尿管的方法制备急性完全性单侧肾积水模型（UUO模型），分为假手术对照组和单侧肾积水组，于单侧肾积水后2、5、9、14 d分别颈椎脱臼处死。采用实时荧光定量 PCR检测肾积水后患肾各时间点HIF‐1 mRNA 、VEGF mRNA及miRNA‐210的表达变化，采用Western blot方法检测肾积水后各时间点HIF‐1蛋白的表达变化。结果 HIF‐1 mRNA表达水平在肾积水后表达量逐渐上调（P＜0．05）。VEGF mRNA及miRNA‐210表达水平在肾积水后2 d升高并达到高峰，于UUO后5、9、14 d表达量逐渐下调（P＜0．05）。HIF‐1蛋白表达量逐渐上调。结论肾积水后HIF‐1 mRNA及蛋白表达逐步上调，VEGF mRNA及miRNA‐210表达一过性上调，可能与肾积水后肾皮质被压迫机体对缺氧、缺血产生适应性反应有关。
关键词： 缺氧诱导因子-1 血管内皮生长因子 微小RN A-210 单侧肾积水 -
解偶联蛋白-2及缺氧诱导因子-1在肿瘤细胞中表达的意义
解偶联蛋白-2(uncoupling protein-2,UCP-2)是线粒体内膜上的一种蛋白,能降低线粒体膜电位,限制三磷酸腺苷(ATP)合成,参与转运丙酮酸,与能量代谢关系密切；同时,UCP-2能控制线粒体内活性氧簇(ROS)生成,与氧化应激、凋亡、肿瘤发生等过程也有密切联系.恶性肿瘤由于组织增生过快造成局部组织严重缺氧,但处于缺氧状态的肿瘤细胞仍能不断增殖和浸润,主要原因之一是缺氧引起肿瘤细胞一些基因和蛋白的表达发生改变,其中既有UCP-2的参与.有关研究结果证明,UCP-2在人结肠癌细胞中表达明显增加,且癌细胞的恶化程度与UCP-2的含量有正相关性.
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Caspase-3和缺氧诱导因子-1在缺血性脑损伤中的作用
脑卒中、癫痫、颅脑外伤、颅内肿瘤及一些少见脑血管病变(如烟雾病、脑型Buerger病)会导致中枢神经系统缺血性事件,严重影响人类健康,具有发病率、死亡率、致残率、复发率高等特点.神经元凋亡是缺血性脑损伤的重要形式,脑组织面对缺血低氧状态会相应的启动一些应答机制来减轻低氧缺血带来的不良后果,其中Caspase-3、缺氧诱导因子-1( hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)具代表性.干预上述两因子可能为缺血性脑损伤治疗提供新的途径.
关键词： 脑缺血 脑损伤 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 缺氧诱导因子-1 -
缺氧诱导因子-1与炎症微环境
缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,H1F-1)是细胞在低氧条件下产生的具有转录活性的核蛋白,在机体缺氧代偿性反应过程中能发挥重要的作用.近年来,发现炎性因子对缺氧诱导因子-1表达和调控的作用也越来越突出.
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乌司他丁对心肺复苏后患者的脑保护作用研究进展
乌司他丁为精制糖蛋白，提取自人的尿液，由143个氨基酸构成，其相对分子质量约为67000 da，包括2个活性功能区，作为代表性的 Kuniz 型蛋白酶抑制剂，其2个活性功能区的抑酶谱都非常广泛，而且并不完全重叠。乌司他丁不仅能够显著抑制多种水解酶如胰蛋白酶等，对于细胞膜及溶酶体也具有稳定作用。近几年，人们开始对其展开深入的研究，发现其作用还表现在以下几个方面：对炎症介质释放的抑制，促进氧自由基生成的减少，促进组织灌注及微循环的改善及调节机体免疫等，进而能够明显减轻人体器官组织受损，保护人体各个组织器官，如脑、心、肾、肝、肺等[1-2]。目前在很多临床疾病的治疗中开始运用乌司他丁，其中常见的应用范围有多器官功能障碍综合征、弥散性血管内凝血、全身炎症反应综合征、急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征、重症急性胰腺炎、多发伤、脓毒症、休克、体外循环、烧伤、器官移植等，疗效确切。
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缺氧诱导因子－1α在正常孕妇和前置胎盘患者胎盘组织中的表达情况及其比较
目的：比较缺氧诱导因子－1α（ hypoxia inducible factor，HIF－1α）在前置胎盘患者和正常孕妇胎盘组织中的表达及其临床意义。方法选取西安市长安医院2012年5月至2014年5月诊治的130例前置胎盘患者的胎盘组织为观察组，以同期诊治的110例正常孕妇的胎盘组织为对照组，分别利用免疫组织化学技术（ SP法）检测两组胎盘组织中HIF－1α的表达情况，观察计数并计算阳性细胞的百分率，分别测定积分光密度（integral optical density，IOD）值，比较并分析相关结果。结果对照组HIF－1α阳性表达率（40.9％）低于观察组（64.6％）（P＜0.05），对照组的IOD均值（29.9823±14.2743）低于观察组（41.3417±27.5373）（ P＜0.05）。结论 HIF－1α可能参与前置胎盘发生的过程。
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缺氧诱导血管内皮细胞中长链非编码RNA LINC01116的表达及其功能的初步研究
目的 探讨缺氧条件下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA) LINC01116的表达及其在炎症分子表达调控中的作用.方法 采用三气培养箱模拟缺氧环境(1％O2),常氧对照组细胞于普通培养箱(21％O2)中常规培养.采用实时荧光定量PCR检测LINC01116及各炎症分子的mRNA水平.Western blot检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1 alpha,HIF-1α)蛋白水平,并用葡萄糖转运体-1 (glucosetransporter 1,GLUT-1)的转录表达水平反映HIF-1的转录活性.免疫荧光法检测核转录因子NF-κB(nuclear factor of kappa B,NF-κB)活性亚基p65在细胞中的分布,并计算p65入核的细胞比例.结果 qRT-PCR的结果显示,缺氧条件下,LINC01116在HUVEC中持续高表达,与常氧对照组相比,差异均具有统计学意义(P＜0.01).经脯氨酸羟化酶抑制剂(DMOG)和去铁酰胺(DFX)处理后,常氧培养HUVEC中HIF-1α蛋白表达和GLUT-1的转录表达增加,LINC01116表达增高,与溶剂对照组相比,差异均具有统计学意义(P＜0.01).经YC-1和小干扰RNA处理后,缺氧培养HUVEC中HIF-1α蛋白表达和GLUT-1的转录表达下降,LINC01116的表达显著下降,与各对照组相比,差异均具有统计学意义(P＜0.01).缺氧24 h时,HUVEC中炎症分TNF-α、IL-1β、ICAM、E-SELECTIN的mRNA水平增加,干扰LINC011 16表达后,上述炎症分子的mRNA水平显著降低(P＜0.01).免疫荧光的实验显示,缺氧24 h后,细胞核内p65的分布增加,而干扰LINC01116表达后,p65入核的细胞比例下降,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 缺氧通过HIF-1途径诱导血管内皮细胞LINC011 16的表达增加;LINC01116可以通过调控p65入核,调节内皮细胞炎症分子的表达,参与介导缺氧血管内皮细胞炎症反应.
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缺氧诱导因子-1在淋巴瘤的研究进展
肿瘤细胞增殖需要大量耗氧,缺氧是许多肿瘤组织的重要特征.缺氧诱导因子(HIF)-1是人肿瘤和哺乳动物在缺氧条件下广泛存在的一种核转录因子,可激活多种与肿瘤生长相关的靶基因,参与调节细胞增殖和凋亡、能量代谢、血管生成、侵袭转移及放疗和化疗耐受等过程.笔者拟就HIF 1的基本生物学特征及其在淋巴瘤的研究进展进行综述.
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缺氧诱导血管新生机制的研究进展
目前对血管新生机制的研究已经上升至分子生物学水平,研究发现缺氧条件下的血管新生与缺氧诱导因子密切相关,炎症反应、骨髓干细胞也参与其中.血管新生机制的研究为治疗性的血管新生和治疗性的抑制血管新生提供了理论基础.
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缺氧诱导因子-1与心肌对缺氧的适应
缺氧诱导因子-1是在体内广泛存在的核内转录因子,有两个亚基 .HIF-1是细胞在缺氧条件下产生的核蛋白,它与靶基因结合后可调节多种基因如内皮素、血管内皮生长因子、诱导型一氧化氮合酶等的表达,促进机体对缺氧产生一系列的适应反应.其活性的维持对心脏的发育以及对心肌在缺血缺氧性疾病中的代偿起着重要作用.对HIF-1与心脏缺氧代偿关系的研究可为治疗心脏疾病提供新的途径.
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缺氧诱导因子-1在宫颈鳞癌及其新辅助化疗前后的表达及临床意义
目的:检测宫颈鳞癌及其新辅助化疗(NACT)前后宫颈鳞癌组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达变化,探讨其与宫颈鳞癌临床病理因素和NACT疗效的相关性,及其作为NACT疗效的预测指标的可行性.方法:采用免疫组化SP法检测宫颈鳞癌直接手术组、新辅助化疗前后、宫颈上皮内瘤变(CIN)及对照组的宫颈组织标本中HIF-1α的表达.结果:宫颈鳞癌组织中HIF-1α的表达明显升高;HIF-1α在宫颈鳞癌组织中的表达与深肌层浸润及局部病灶大小有关.NACT后,临床完全缓解3例(10%),部分缓解21例(70%),总有效率为80%.NACT后宫颈鳞癌组织中HIF-1α的表达显著下降(P＜0.05).HIF-1α的表达在临床有效组NACT后显著下降(P＜0.01),而临床无效组NACT前后的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论:宫颈鳞癌组织HIF-1α的表达与新辅助化疗疗效相关,说明宫颈鳞癌组织缺氧诱导因子-1(HIF-1)的表达可能成为NACT化疗疗效的预测指标.
