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肿瘤炎症微环境与免疫的关系及中医药干预策略
免疫抑制是构成肿瘤炎症微环境的核心特征,通过改善肿瘤炎症微环境,解除免疫细胞向抑制性表型转化的压力,重塑肿瘤免疫是提高临床疗效的有效途径.肿瘤炎症微环境属中医微观辨证的范畴,结合现代医学对肿瘤炎症和免疫的认识,认为其与中医“癌毒”所属“阴毒”的致病特征类似,存在“寒凝痰瘀”的病机特点,应在中医传统辨证理论的指导下,注重“温补、化痰、通滞”治法对肿瘤炎症微环境的免疫调节作用.
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慢性阻塞性肺疾病合并肺癌临床特征及新理念
慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种全身性的疾病,以不可逆的持续气流受限为主要临床特征,患病人数多,社会经济负担沉重,病死率高[1].且COPD是肺癌发生发展的独立首位危险因素之一[2-3].COPD是呼吸系统常见的慢性炎症性疾病(chronic inflammation disease),在临床上也经常见到COPD合并肺癌的患者,以及大量的文献报道[2,4-16].
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炎症微环境下线粒体融合蛋白2及其介导的内质网-线粒体偶联对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响
目的 探讨内质网与线粒体偶联及线粒体融合蛋白(mitofusion 2,Mfn2)对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSC)成骨分化能力的影响,为促进牙周炎患者牙周组织再生提供理论基础和治疗靶点.方法 刮取正常及牙周炎牙齿(由第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科门诊收集)的牙周膜组织,用原代和有限稀释法单克隆化培养健康来源的(health,H)PDLSC (H-PDLSC)及炎症来源的(periodontitis,P)PDLSC(P-PDLSC),透射电镜及细胞器特异性荧光染色检测内质网-线粒体偶联水平;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测两种来源PDLSC中Mfn2的表达差异;用肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)模拟炎症微环境,分别应用正常培养基及含5、10 mg/L TNF-α的培养基培养H-PDLSC,设为H-PDLSC组、H-PDLSC+TNF-α (5 mg/L)组和H-PDLSC+TNF-α(10 mg/L)组,培养7 d后qPCR检测Mfn2表达水平;通过小干扰RNA Mfn2(siMfn2)下调P-PDLSC中Mfn2的表达,成骨诱导液培养7 d后qPCR检测成骨因子的表达差异,培养28 d后茜素红染色及氯化十六烷基吡啶定量检测各组矿化结节形成差异.结果 透射电镜下观察内质网与线粒体偶联结构,与H-PDLSC组(偶联长度/线粒体周长为0.23±0.07、偶联长度/内质网周长为0.18±0.05)相比,P-PDLSC组中内质网线粒体偶联水平显著增加(偶联长度/线粒体周长为0.55± 0.10、偶联长度/内质网周长为0.44±0.08)(P<0.01);特异性荧光染色检测内质网与线粒体共定位显示,P-PDLSC组内质网与线粒体共定位系数(0.71±0.09)显著高于H-PDLSC组(0.40±0.10)(P<0.01).P-PDLSC组Mfn2表达量(1.46±0.10)显著高于H-PDLSC组(0.99±0.08)(P<0.01);H-PDLSC+TNF-α (5 mg/L)组及H-PDLSC+TNF-α(10 mg/L)组Mfn2表达量均显著高于H-PDLSC组(P<0.01).成骨诱导7 d qPCR结果显示,P-PDLSC+siMfn2组碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2及骨钙蛋白mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.01),28 d茜素红染色及氯化十六烷基吡啶定量结果与qPCR结果一致.结论 炎症微环境下PDLSC的内质网-线粒体偶联增加,线粒体融合蛋白Mfn2表达量升高导致PDLSC成骨分化能力下降,其具体机制还需进一步研究.
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脂多糖诱导的内质网应激在牙周膜干细胞中的表达及其对成骨分化的影响
目的 探讨使用脂多糖模拟炎症微环境下牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSC)中内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的表达差异及对成骨分化的影响,初步证明ERS可以调控炎症微环境下的PDLSC,使其与正常来源的PDLSC相比成骨分化能力产生差异.方法 原代和有限稀释法克隆化培养正常来源的PDLSC,使用ERS激动剂毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)观察是否可以诱导PDLSC发生ERS;实时定量PCR检测使用炎性因子脂多糖刺激是否可以诱导PDLSC发生ERS;使用含有成骨诱导培养基的TG和ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyrate,4-PBA)刺激PDLSC,实验组分为PDLSC+ TG组、PDLSC+脂多糖组及PDLSC+脂多糖+4-PBA组,对照组为单纯成骨诱导培养基诱导的PDLSC组,实时定量PCR、茜素红染色及氯化十六烷基吡啶检测其成骨分化能力的差异.结果 炎性因子体外模拟炎症环境可观察到ERS被激活,PDLSC+TG组6h时PERK、GRP78、ATF4及CHOP mRNA表达量均显著高于PDLSC组(分别为1.49±0.24、2.77±0.60、1.75±0.16、2.16±0.32),P＜0.05;PDLSC+脂多糖组PERK、CHOP mRNA表达量均在6h时达峰值(分别为1.76±0.08、2.31±0.17),且与PDLSC组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).模拟牙周炎症微环境下的ERS状态可抑制PDLSC的成骨分化,PCR结果显示PDLSC+ TG组RUNX2、ALP、OCN mRNA表达量为0.73±0.06、0.01 ±0.00、0.20±0.06,均显著低于PDLSC组(P＜0.05);PDLSC+脂多糖组RUNX2、ALP、OCN mRNA表达量分别为0.80±0.06、0.48±0.05、0.29±0.04,均显著低于PDLSC组(P＜0.05);PDLSC+脂多糖+4-PBA组RUNX2、ALP、OCN mRNA表达量分别为1.10±0.09、0.74±0.05、0.67±0.13,均显著高于PDLSC+脂多糖组(P＜0.05).茜素红染色及氯化十六烷基吡啶定量结果和PCR结果相符.结论 体外使用脂多糖模拟炎症微环境,可具有同ERS激活剂TG相同的作用,刺激PDLSC,使其ERS被激活,进而成骨分化受到抑制;加入ERS抑制剂4-PBA后可使脂多糖抑制成骨分化的作用得到恢复.
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脂磷壁酸诱导人成牙本质样细胞炎症微环境的机制研究
目的 研究脂磷壁酸(LTA)诱导的体外培养人成牙本质样细胞(hOB)炎症反应及其上游信号通路的作用机制.方法 从人牙髓组织中分离并培养hOB,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测成牙本质细胞标志物,对hOB进行鉴定,结果采用独立样本t检验;采用Western blot和免疫荧光法检测hOB中TLR2的表达,结果采用t检验;以10 μg/ml LTA刺激hOB,炎性因子蛋白芯片检测42种炎性因子蛋白的表达,实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附法(ELISA)对白细胞介素6(IL-6)和IL-8的表达进行验证,Western blot检测不同时间点LTA刺激下TLR2的表达情况,结果采用单因素方差分析;Western blot检测LTA对核转录因子(NF-κB)和活化的丝裂酶原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路关键蛋白IKKα/β、IκBα、p65、ERK、JNK及p38磷酸化程度的影响,结果采用方差分析.结果 分离培养获得的hOB中牙本质基质蛋白1(DMP1;tmRNA=6.206,PmRNA=0.0024;t蛋白=11.48,P蛋白=0.001)、牙本质涎磷蛋白(DSPP;tmRNA=4.284,PmRNA=0.0155;t蛋白=34.93,P蛋白＜0.0001)和巢蛋白(Nestin;tmRNA=6.397,PmRNA=0.0021;t蛋白=19.04,P蛋白=0.0001)的表达均较人牙髓细胞(hDPC)高,提示已成功获得hOB.炎性因子蛋白芯片结果显示,LTA刺激后14种炎性因子均升高(P＜0.05),其中IL-6和IL-8升高为明显且经实时荧光定量PCR(FIL.6=40.62,PIL.6＜0.0001;FIL.8=1768,PIL-8＜0.0001)和ELISA(FIL-6=380.9,PIL.6＜0.0001;FIL-8=252.5,PIL.8＜0.0001)验证.10μg/ml LTA刺激16h后,hOB中TLR2蛋白表达显著性升高,差异具有统计学意义(F=3.175,P=0.0469).LTA刺激可使NF-κB和MAPK信号通路关键蛋白IKKα/β (F=28.7,P＜0.0001)、IκBα(F=106.3,P＜ 0.0001)、p65(F=44.58,P ＜0.0001)、ERK (F=45.49,P＜0.0001)、JNK(F=12.43,P=0.0007)及p38(F=28.28,P＜0.0001)磷酸化程度升高.结论 LTA可能通过TLR2/NF-κB/MAPK信号通路促进hOB释放炎性因子.
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Wnt5a在炎症微环境下的牙周膜干细胞中的作用研究
目的:研究Wnt5a在炎症微环境作用下的牙周膜干细胞(periodontal stem cells,PDLSCs)中的作用.方法:有限稀释法分离获取PDLSCs并进行干细胞鉴定;实时定量qPCR检测正常PDLSCs组及炎症因子组(10ng/ml TNFα预刺激24h)炎症因子TNFα及IL-1β的mRNA表达水平;实时定量qDCR检测两组成骨诱导前后成骨基因Runx2、ALP的mRNA表达水平、Wnt5a的mRNA表达水平;Western Blot检测两组成骨诱导前后Wnt5a的蛋白表达水平.结果:炎症因子组与正常组的克隆形成率无显著性差异、炎症因子组TNFα mRNA表达水平IL-1β mRNA表达水平显著高于正常组(P＜0.05);常规培养条件下,炎症因子组Runx2、ALPmRNA表达水平与正常组无显著性差异,成骨诱导后成骨基因表达水平正常组显著高于炎症组,(P＜0.05);常规培养条件下,炎症因子组Wnt5a mRNA表达水平高于正常组(P＜0.05),成骨诱导后正常组及炎症因子组Wnt5a mRNA表达水平均显著高于常规培养条件;Western Blot结果示,Wnt5a蛋白表达量正常组diff(成骨诱导后)、炎症因子组undiff(成骨诱导前)、炎症因子组diff分别为正常组undiff的1.2709倍、1.8246倍、2.2176倍.炎症因子组Wnt5a蛋白表达水平增加,成骨诱导后两组Wnt5a蛋白表达水平均增加,炎症因子组高于正常组.结论:在炎症微环境下,PDLSCs的炎症因子表达增加,成骨能力降低,Wnt5a mRNA及蛋白表达水平均增加,Wnt5a非经典通路可能通过与经典Wnt通路的交通等参与PDLSCs炎症及破骨的过程.
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多囊卵巢综合征肝经湿热证患者炎症微环境状态及补肾清肝法的改善作用
目的 探讨多囊卵巢综合征(PCOS)肝经湿热证患者的炎症微环境状态以及补肾清肝法的改善作用.方法 招募健康育龄女性及PCOS肝经湿热证患者,采用蛋白芯片及ELISA技术分析血清内炎症因子的差异.予PCOS肝经湿热证患者补肾清肝药物连续治疗3个月并随访3个月,统计患者的妊娠及排卵情况,观察患者治疗前后各项临床症状、内分泌水平及差异炎症因子变化情况,分析各有效指标间的相关性.结果 与健康育龄女性相比,PCOS肝经湿热证患者血清黑素瘤生长刺激因子/生长调节致癌基因 α(CXCL1/GROα)、人白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1 ra/IL-1F3)、人白细胞介素8(IL-8)、人白细胞介素16(IL-16)、人白细胞介素18(IL-18/IL-1F4)水平增加(P<0.05).补肾清肝法可有效促进患者排卵,有利于妊娠;改善患者月经不调、痤疮、经前乳胀、心烦易怒、口干口苦症状(P<0.05);降低患者血清促黄体生成素(LH),睾酮(T),游离睾酮(FT),胰岛素(INS)60、120 min,胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)以及血清差异炎症因子IL-1ra/IL-1F3、IL-18/IL-1 F4水平(P<0.05);且IL-1 ra/IL-1 F3、IL-18/IL-1 F4均与FT成显著正相关(P<0.01,P<0.05).结论 PCOS肝经湿热证患者存在炎症微环境状态;补肾清肝法具有明显的治疗效果,其作用效应可能与降低患者雄激素及炎症因子水平、改善患者炎症微环境状态相关.
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苯并[a]芘诱导肺癌的分子机制研究进展
肺癌发病率及死亡率均较高,其对患者经济及社会医疗成本造成沉重的负担.大量研究证实环境致癌物苯并[a]芘{benz(a)pyrene,B[a]P}在肺癌发生发展中发挥关键作用,目前对其诱导肺癌的分子机制已尚有研究,但具体机制尚不清楚.本文将从B[a]P诱导肺癌生物学功能方面如细胞凋亡、细胞周期及增殖、细胞迁移及侵袭、炎症微环境以及表观遗传学方面进行综述,为环境致癌物诱导肺癌的预防及治疗提供依据.
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肝细胞肝癌NTS的表达与炎症微环境形成和肿瘤上皮间质转化及预后的相关性研究*
目的：利用免疫组织化学染色法（IHC）检测肝细胞肝癌（HCC）中神经降压素（NTS）的表达，并探讨HCC中NTS/IL-8通路的激活与炎性微环境形成和肿瘤上皮间质转化（EMT）及临床预后的关系。方法：收集本院2007年11月至2009年7月期间进行部分肝切除术后确诊为肝细胞癌（HCC）、随访资料完整的肝癌患者64例。采用IHC法检测肝癌及相应癌旁正常组织中NTS，多种炎症因子和EMT相关蛋白的表达情况，包括IL-8、VEGF、MMP-9、CD68、E-cadherin，β-Catenin和Vimentin的表达水平，并比较不同NTS表达对HCC患者总生存时间（OS）的影响。结果：NTS在HCC中表达率为17.19%（11/64），NTS阳性HCC标本中IL-8阳性率较NTS阴性标本明显增加（90.91%vs.41.17%），二者表达呈正相关（R2=0.298，P=0.006）。NTS和IL-8双阳性（NTS+IL-8+）HCC标本中，VEGF和MMP-9表达显著增加。同时，NTS+IL-8+HCC细胞EMT特征明显，表现为E-Cadherin表达降低和Vi-mentin表达升高。在肿瘤中NTS和IL-8共表达与患者的临床疗效呈正相关，术后NTS+IL-8+HCC患者的死亡率比非NTS和IL-8共表达的患者高2.5倍（P=0.022）。NTS+IL-8+HCC患者的OS显著缩短[（24.65±4.45）个月vs.（75.79±16.32）个月，P=0.013）]，而死亡风险明显升高，其预期危险比（HR）为3.457。结论：在部分HCC中存在NTS/IL-8炎症通路的异常活化，NTS的高表达与炎症微环境形成和肿瘤EMT与肝癌患者预后较差密切相关。
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玉屏风散加味方对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症微环境的影响
目的 探究玉屏风散加味方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道炎症微环境相关因子分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、多聚免疫球蛋白受体分泌片(SC)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)的影响.方法 将36只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、罗红霉素组、玉屏风散加味方低剂量组、玉屏风散加味方中剂量组、玉屏风散加味方高剂量组,每组6只.除正常组外,其余组均采用气管内注入脂多糖(LPS)和持续被动烟熏刺激的方法复制大鼠COPD模型,模型成功后给予大鼠继续隔天烟熏刺激8周,于实验第17周开始各给药组给予相应剂量药物灌胃,模型组给予生理盐水灌胃,共灌胃28 d.末次灌胃24 h后,取各组大鼠肺组织做病理切片,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化,并用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠肺组织匀浆中SIgA、SC,TNF-α、IL-8的表达水平.结果 模型组大鼠气管上皮脱落、充血,可见肺大泡,肺内细支气管上皮增生、管腔变窄、管壁增厚,管壁及肺间质周围可见炎性细胞浸润;玉屏风散加味方各组大鼠肺内细支气管上皮增生不明显,管壁及肺间质周围炎性细胞浸润不明显,可见肺大泡,细支气管管腔狭窄及间质炎性细胞浸润等情况较模型组有明显改善,且高剂量组改善效果更明显.模型组大鼠肺组织匀浆中SIgA、IL-8、SC表达水平与正常组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05),TNF-α表达水平明显高于正常组(P＜0.05).玉屏风散加味方低剂量组SIgA表达水平和玉屏风散加味方中、低剂量组SC表达水平均明显高于模型组(P均＜0.05),玉屏风散加味方高、低剂量组TNF-α表达水平明显低于模型组(P均＜0.05);玉屏风散加味方高、中剂量组SIgA表达水平和玉屏风散加味方高剂量组SC表达水平、玉屏风散加味方中剂量组TNF-α表达水平、玉屏风散加味各剂量组IL-8表达水平与模型组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 玉屏风散加味方可改善COPD模型大鼠肺组织病理形态,增强SIgA和SC的表达,降低TNF-α和IL-8的表达,提示该方药可干预COPD气道炎症微环境,增强机体局部黏膜免疫功能,减轻炎症反应.
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肺癌转移的炎症微环境机制研究进展
近年来,炎症微环境在肿瘤进展过程中的作用日益受到重视,多项研究表明肺癌的炎症微环境在肺癌的转移中起着重要作用.炎症微环境可以通过直接或间接促进肿瘤血管生成、细胞增殖和抑制细胞凋亡进程,从而促进肺癌的转移,而这一过程主要是借助炎症因子、炎症信号通路等途径而实现的.本文就近年来肺癌转移的炎症微环境机制相关的研究进展作一综述.
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炎症微环境下间充质干细胞的免疫学研究及调节作用
背景:间充质干细胞是一种具有自我更新及多向分化潜能的成体干细胞,具有免疫调节、调控细胞生长和修复损伤等功能.近年来研究发现在炎症状态下,间充质干细胞可以调节炎症因子的分泌,对各种淋巴细胞产生调节作用,从而修复机体由于炎症引起的组织损伤.目的:综述机体处于炎症状态时,间充质干细胞与T淋巴细胞、B淋巴细胞、树突状细胞和自然杀伤细胞的免疫调节作用,为间充质干细胞应用于临床提供重要的理论基础.方法:应用计算机检索2000至2018年PubMed和CNKI数据库相关文章,中文检索词为"炎症为环境,间充质干细胞,免疫反应,T 细胞,B 细胞,树突状细胞,自然杀伤细胞",英文检索词为"inflammatory microenvironment,mesenchymal stem cell,immune response,T cell,B cell,DC,NK cell",从中筛选出与主题相关且论据可靠的文献,终纳入76篇文献进行综述.结果与结论:间充质干细胞和炎性细胞之间的相互作用决定组织损伤修复的结果,炎症状态下间充质干细胞的生物学特性会发生一定的变化,但炎症环境下的间充质干细胞仍可通过分泌各种可溶性细胞因子或者细胞接触发挥免疫调节作用.在间充质干细胞的临床应用中,还有很多问题需要进一步探究,以便于更好的运用于临床.
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肝细胞肝癌NTS的表达与炎症微环境形成和肿瘤上皮间质转化及预后的关系
目的：探讨肝细胞肝癌（HCC）中神经降压素（NTS）的表达与炎症微环境形成和肝瘤上皮间质转化（EMT）及预后的相关关系。方法选取2011年8月至2013年10月来该院通过部分肝切除术确诊为HCC患者78例，回顾性分析所有患者的资料，包括运用免疫组织化学染色法（IHC）检测的肝癌及对应癌旁正常组织NTS，几种炎症因子和EMT相关蛋白白细胞介素（IL）-8、基质金属蛋白酶（MMP）-9、上皮细胞钙黏蛋白（E-Cadherin）、β-连环蛋白（β-Catenin）和波形蛋白（Vimentin）的水平，且比较分析各因素对患者预后的影响（OS总生存时间）。结果 HCC 患者中 NTS的表达阳性率是19.23％，NTS阳性的标本中有86.67％（13/15）表达IL-8，而NTS阴性的标本中仅有47.62％（30/63）表达IL-8，且NTS与IL-8表达存在正相关关系（Rs＝0.296， P＝0.006）；NTS和IL-8表达均阳性的肝癌样本中，EMT相关蛋白、膜E-Cadherin丢失表达，而细胞质中β-Catenin和Vi-mentin增加积累。经过相关性分析发现，HCC患者组织中的E-Cadherin和β-Catenin表达与IL-8表达水平存在正相关；NTS和 IL-8对患者的生存期存在重要影响，NTS阳性组和IL-8阳性组患者生存期均短于阴性组（P＜0.001）。结论 HCC患者存在NTS/IL-8炎症通路的异常活化，NTS的表达与炎症微环境形成能促进肿瘤上皮间质转化及对患者预后产生不良影响。
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PIAS1调控炎症微环境诱导的胃癌上皮-间质转化的实验研究
背景：作为炎症网络调控的重要介质，STAT活化抑制蛋白1（ PIAS1）在胃癌组织中低表达，并与疾病进展相关，但具体机制还有待研究。目的：探讨PIAS1对炎症微环境下胃癌上皮-间质转化（ EMT）的影响。方法：构建重组腺病毒Ad5/F35-PIAS1和Ad5/F35-null并转染胃癌细胞株SGC-7901，以RT-PCR法和蛋白质印迹法分别验证PIAS1 mRNA和蛋白表达。随后将SGC-7901细胞分为IL-6治疗组、Ad5/F35-PIAS1﹢IL-6治疗组、Ad5/F35-null﹢IL-6治疗组，以MTT法测定细胞增殖率，细胞划痕实验和Transwell侵袭实验测定细胞迁移和侵袭能力，蛋白质印迹法测定E-cadherin、Snail、Twist、Vimentin、P-p38MAPK 蛋白表达。结果：转染 Ad5/F35-PIAS1可明显上调 SGC-7901细胞中PIAS1 mRNA和蛋白表达。与IL-6治疗组和Ad5/F35-null﹢IL-6治疗组相比，Ad5/F35-PIAS1﹢IL-6治疗组细胞增殖率、细胞迁移和侵袭能力均显著下降（ P﹤0.01），Snail、Twist、Vimentin、P-p38MAPK蛋白表达显著降低（P﹤0.01），E-cadherin蛋白表达显著增高（P﹤0.01）。而IL-6治疗组和Ad5/F35-null﹢IL-6治疗组上述指标相比差异均无统计学意义（ P﹥0.05）。结论：PIAS1可抑制胃癌细胞在炎症微环境下发生的EMT，进而可能在抑制肿瘤侵袭与转移的过程中发挥重要作用。
关键词： 胃肿瘤 上皮-间质转化 炎症微环境 活化STAT的蛋白抑制物 白细胞介素6 -
慢性牙周炎中淀粉样前体蛋白家族的表达研究
目的·观察淀粉样前体蛋白(APP)家族在慢性牙周炎牙龈组织中的表达情况,及其在炎症微环境下人牙龈成纤维细胞(HGF)中的表达.方法·采用real-time PCR技术和免疫组化法分别检测健康成人和慢性牙周炎病例牙龈组织中APP家族基因和蛋白表达变化.体外培养HGF细胞,用1μg/mL牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.g-LPS)模拟炎症微环境,运用real-time PCR技术检测APP家族基因表达.结果·慢性牙周炎组与健康组相比,APP和APLP2基因和蛋白表达均显著升高,APLP1无明显变化.HGF细胞在P.g-LPS刺激后APP、APLP1和APLP2基因表达均升高.结论·APP家族可能在慢性牙周炎发生发展过程中发挥一定作用.
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炎症微环境下重组人釉原蛋白对人牙周膜成纤维细胞炎症因子表达的影响
目的 观察在炎症微环境下,重组人釉原蛋白(rhAm)对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(hPDLCs)炎症因子表达的影响.方法 体外培养hPDLCs,采用免疫组织化学染色法鉴定hPDLCs.用10 μg/mL牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)脂多糖(LPS)模拟炎症微环境,选取20 μg/mL rhAm作用于hPDLCs,运用实时荧光定量PCR和ELISA技术检测炎症因子白介素(IL)-1β、IL-6和IL-8的表达.结果 免疫组织化学染色结果证实,培养细胞为hPDLCs.在所检测的4个时间点(6、12、24、72 h),10 μg/mL P.gingivalis LPS均可诱导IL-1β、IL-6和IL-8的表达;加入20 μg/mL rhAm后,各因子表达均有所降低.结论 rhAm可以抑制炎症微环境下hPDLCs炎症因子的表达.
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炎症微环境中经典Wnt信号通路对牙周膜干细胞成骨分化的调控作用
目的:探讨炎症微环境中经典Wnt信号通路对牙周膜干细胞(periodontai iigament stem ceiis,PDLSCs)成骨分化的调控作用. 方法:通过有限稀释法获得健康个体和慢性牙周炎患者的牙周膜干细胞( H-PDLSCs和P-PDLSCs ) ,比较两组PDLSCs成骨分化能力. 成骨诱导后Western Biot 检测经典Wnt信号通路关键分子GSK3β/p-GSK3β和β-catenin在两种细胞中的表达;TOPFiash/FOPFiash荧光素酶检测β-catenin/TCF转录活性;加入GSK3β抑制剂后,茜素红染色观察PDLSCs成骨能力的变化;小分子RNA下调β-catenin, ALP染色观察 PDLSCs 成骨分化. 结果:P-PDLSCs 的成骨分化能力低于 H-PDLSCs;在 P-PDLSCs中p-GSK3β和β-catenin的蛋白表达水平较H-PDLSCs明显增高;小分子RNA干扰下调β-catenin可减弱TNF-α引起的成骨能力下降;LiCi或Wnt3a抑制GSK3β活性后,PDLSCs成骨分化受到抑制. 结论:GSK3β的磷酸化和Wnt/β-catenin信号通路的激活是炎症环境中TNF-α抑制PDLSCs成骨分化的关键步骤.
关键词： 牙周膜干细胞 炎症微环境 Wnt/β-catenin信号通路 成骨分化 -
炎症微环境对牙周组织再生的影响
慢性牙周炎是一种以牙周组织破坏为特征的慢性炎症性疾病。牙周病的终治疗目的是牙周组织再生。而牙周炎时形成的局部炎症微环境，不仅造成牙周组织的破坏，而且会影响牙周组织再生过程，比如影响牙周膜干细胞的增殖分化以及生长因子的作用等。本文就炎症微环境对牙周组织再生的影响作一综述。
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实现牙周组织形态与功能重建是牙再生的关键科学问题
组织工程与干细胞技术的发展为成功实现牙再生带来了希望，但牙周组织疾病却阻碍了再生牙体内应用的脚步。目前临床对牙周病的治疗并不能从根本上解决牙周功能重建的问题，主要原因可能在于对维持牙周稳态的重要干细胞－牙周膜间充质干细胞的认识不清。牙周膜间充质干细胞与骨髓间充质干细胞具有十分相似的特性，但更容易被炎症因子破坏正常的再生功能。慢性炎症是诱发牙周病主要因素，如何应对炎症因子的破坏作用，是牙周膜间充质干细胞再生应用面临的难题。利用组织工程技术，牙周膜间充质干细胞聚合体可以成功在慢性炎症条件下实现牙周组织形态和功能的重建。另外考虑骨髓间充质干细胞对炎症因子的耐受性，在一定的条件刺激下，动员体内的骨髓间充质干细胞亦能实现牙周组织的修复重建。无论是上述外源性的，还是内源性的牙周重建再生方法的发展，对牙再生都具有十分重要的临床研究价值和科学研究意义。
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炎症微环境中HMGB1表达变化对肺癌细胞生物学行为的影响
目的 探讨炎症微环境中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达变化对肺癌细胞生物学行为的影响.方法 选择支气管上皮细胞HBE(以下称HBE细胞),构建氧糖剥夺/复氧模型,将其分为空白对照组、阴性对照组、HMGB1组.阴性对照组、HMGB1组分别转染阴性对照siRNA和HMGB1 siRNA,空白对照组不予转染.经验证成功下调了HBE细胞HMGB1表达.取氧糖剥夺/复氧培养的HBE细胞与人肺腺癌细胞A549(以下称A549细胞),于共培养装置上下层中共培养,上层细胞分组及转染方法同上.各组转染6 h再培养48 h,收集A549细胞,制成细胞悬液.细胞悬液培养6、12、24、48、72时,采用MTT法检测各组A549细胞增殖能力.细胞悬液培养24时,采用流式细胞术检测各组A549细胞凋亡率和细胞周期,采用Western blotting法检测各组Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)蛋白表达.结果 HMGB1组培养6、12、24、48、72hA549细胞增殖能力均低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05),而阴性对照组与空白对照组比较P均>0.05.HMGB1组A549细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05),而阴性对照组与空白对照组比较P>0.05.HMGB1组G0/G1期、S期细胞所占比例均高于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05),G2/M期细胞所占比例低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05),而阴性对照组与空白对照组比较P均>0.05.HMGB1组TLR4、NF-κB相对表达量明显低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05),而阴性对照组与空白对照组比较P均>0.05.结论 下调炎症微环境中HMGB1表达可抑制肺癌细胞增殖并促进其凋亡;HMGB1可能通过TRL4信号通路抑制NF-κB下游信号通路,导致肿瘤细胞逃脱免疫监视.
