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马蔺子素放射增敏作用对MDA-MB231细胞Warburg效应的影响
目的 研究马蔺子素放射增敏作用在人乳腺癌MDA-MB231细胞照射过程中对Warburg效应的影响.方法 取指数生长期的人乳腺癌MDA-MB231细胞,分为空白对照组、马蔺子素组、单纯照射组、马蔺子素+照射组、阴性对照组及转染己糖激酶-Ⅱ(HKⅡ)siRNA的实验组.克隆形成实验检测MDA-MB231细胞的存活分数;单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比(SER);用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;通过qRT-PCR和Western blot分别检测各组细胞HKⅡmRNA和蛋白相对表达水平.结果 马蔺子素+照射组的D0、Dq及SF2较单纯照射组均有所下降,放射增敏比(SER)为1.52.马蔺子素+照射组凋亡率高于空白对照组、马蔺子素组、单纯照射组、转染HKⅡsiRNA组,差异有统计学意义(=13.29、12.09、5.90、3.83,P＜0.05).马蔺子素+照射组与空白对照组、马蔺子素组、单纯照射组相比,HKⅡmRNA的相对表达水平明显降低,差异有统计学意义(t=9.14、10.48、3.40,P＜0.05),HKⅡ蛋白的相对表达水平也明显降低,差异有统计学意义(t=13.39、16.08、5.81,P＜0.05).结论 马蔺子素放射增敏作用能通过下调HKⅡ基因的表达,从而抑制MDA-MB231细胞的Warburg效应.
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缺氧对食管鳞状细胞癌中缺氧诱导因子-1α和己糖激酶-Ⅱ表达的影响
目的 观察缺氧对食管鳞状细胞癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和己糖激酶-Ⅱ(HK-Ⅱ)表达的影响及对糖酵解的作用.方法 培养人食管鳞状细胞癌TEl3、Ecal09细胞株,采取分组方式培养,观察组在1％氧浓度下培养,对照组在20％氧浓度下培养.利用实时定量PCR方法检测两组细胞中HIF-1 α和HK-ⅡRNA表达,同时利用分光光度法检测常氧和缺氧条件下细胞培养液中细胞的乳酸浓度变化.结果 实时定量PCR法检测显示,常氧条件下被干扰的TEl3/shRNA和Ecal09/shRNA细胞中HIF-1α RNA表达量较未干扰的TEl3、Ecal09细胞明显减弱(P＜0.01),HK-ⅡRNA表达结果与HIF-1α RNA一致.另外,TEl3和Ecal09细胞在缺氧条件下分泌乳酸明显较对照组增多.结论 食管鳞癌中HIF-1α及HK-Ⅱ在缺氧条件下表达明显增强,HK-Ⅱ表达及乳酸浓度与HIF-1α表达密切相关,HIF-1α可能通过HK-Ⅱ影响细胞的糖酵解水平.
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缺氧诱导因子-1α和己糖激酶-Ⅱ在食管鳞状细胞癌中的表达及对糖酵解的影响
目的 探讨人食管鳞状细胞癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和己糖激酶-Ⅱ(HK-Ⅱ)的表达变化及对糖酵解的影响.方法 缺氧条件(1％氧浓度)下培养TE13及Eca109细胞,设置不同缺氧时间(分别为6、12、24、48 h),并以常氧培养(20％氧浓度)为对照.Western印迹检测HIF-1α及HK-Ⅱ的蛋白表达变化；经RNA干扰技术特异性静默HIF-1α,利用实时定量PCR及Western印迹检测HIF-1α和HK-Ⅱ的表达变化；分光光度法检测常氧和缺氧条件下细胞培养液中细胞的乳酸浓度变化.结果 ①缺氧条件下,TE13及Eca109细胞中HIF-1α表达均随缺氧时间延长而逐渐升高(P＜0.05),在缺氧12 h表达达到高峰,后表达又随时间延长而下降.TE13及Eca109细胞缺氧12 h后HK-Ⅱ表达均较常氧培养明显增强(P＜0.05).②实时定量PCR法检测显示,常氧条件下被干扰的TE13/shRNA和Eca109/shRNA细胞中HIF-1α RNA表达量较未干扰的TE13、Eca109细胞明显减弱(P＜0.05).HK-ⅡRNA表达结果与HIF-1 RNA一致.③常氧及缺氧培养时,HK-Ⅱ蛋白在TE13/shRNA和Eca109/shRNA细胞的表达均较未干扰的TE13、Eca109细胞明显减弱,差异有统计学意义(P＜0.05).④缺氧时TE13和Eca109细胞乳酸分泌量为14.707±3.594和15.062±3.901,较常氧时增多(6.070±1.839和6.891±1.592,P＜0.05).TE13/shRNA、Eca109/shRNA乳酸分泌量较未静默TE13、Eca109细胞显著减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 食管鳞癌中HIF-1α及HK-Ⅱ在缺氧条件下表达明显增强,HK-Ⅱ表达及乳酸浓度与HIF-1α表达密切相关,HIF-1α可能通过HK-Ⅱ影响细胞的糖酵解水平.
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葡萄糖转运蛋白1和己糖激酶-Ⅱ在乳腺癌组织中的表达及其评价患者预后的价值
目的 探讨葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)和己糖激酶-Ⅱ(HK-Ⅱ)蛋白在乳腺癌组织中的表达及其预测患者预后的价值.方法 选取2016年1月至2016年7月行手术治疗的乳腺癌患者32例为研究对象,术后随访至少半年.术后均采用免疫组织化学法行乳腺癌组织和癌旁组织GLUT-1和HK-Ⅱ蛋白表达的检测,比较不同预后患者的乳腺癌组织GLUT-1和HK-Ⅱ蛋白表达情况,分析其表达与预后的关系,进一步评价其预测患者预后的价值.结果 32例患者随访期间的复发转移率为31.25％.乳腺癌组织GLUT-1蛋白阳性表达率(65.63％)及HK-Ⅱ蛋白阳性表达率(68.75％)明显高于其癌旁组织(9.38％,18.75％;P均＜0.01);复发转移患者乳腺癌组织GLUT-1蛋白阳性表达率(100.00％)和HK-Ⅱ蛋白阳性表达率(100.00％)均高于无复发转移患者(50.00％,54.55％;P均＜0.05).Logistic回归分析结果显示,乳腺癌组织GLUT-1和HK-Ⅱ蛋白表达与其复发转移均密切相关(P均＜0.01).诊断性试验四格表分析结果显示,乳腺癌组织GLUT-1蛋白表达预测其复发转移的敏感度、特异度、准确性分别为47.62％、100.00％、65.63％,HK-Ⅱ蛋白表达分别为45.45％、100.00％、62.50％,两者联合预测分别为86.36％、100.00％、90.63％.结论 乳腺癌组织GLUT-1和HK-Ⅱ蛋白表达升高且两者联合预测患者预后的价值良好,可能作为乳腺癌预后评估指标和临床治疗靶点.
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己糖激酶-Ⅱ在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨己糖激酶-Ⅱ(HK-Ⅱ)在人体胃癌组织中的表达情况及其临床意义,分析HK-Ⅱ与临床病理特征之间的关系.方法 选取2013年3-9月在东南大学医学院附属江阴医院确诊的胃癌病患100例,切除标本,运用免疫组化及RT-PCR方法检测胃癌组织及正常胃黏膜组织中HK-Ⅱ的表达情况,并分析其与性别、年龄、浸润深度、TNM分期、分化程度、淋巴结转移、脉管侵犯、肿瘤大小等的关系.结果 HK-Ⅱ在胃癌组织中的阳性表达率为68.00％,显著高于正常胃黏膜组织(P＜0.05).HK-Ⅱ表达与性别、年龄、浸润深度无关(P＞0.05);与TNM分期、分化程度、淋巴结转移、脉管侵犯、肿瘤大小有关(P＜0.05).胃癌组织HK-ⅡmRNA阳性率显著高于正常胃黏膜组织(P＜0.01).结论 HK-Ⅱ在胃癌组织中高表达,可作为胃癌的恶性预后指标和临床治疗靶点.
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己糖激酶-Ⅱ在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨己糖激酶-Ⅱ在乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中的表达与临床意义. 方法 收集2002年7月至2009年7月在我院接受手术治疗的71例乳腺癌患者的手术标本,所有肿瘤组织均经术后病理学检测结果证实,通过免疫组织化学方法检测己糖激酶-Ⅱ蛋白在乳腺癌及癌旁正常组织中的表达,并探讨其表达量与临床病理特征和预后的相关性. 结果 乳腺癌组织中己糖激酶-Ⅱ的阳性表达率为70.4％,显著高于癌旁正常乳腺组织中的11.3％ (P＜0.05);进一步研究发现,己糖激酶-Ⅱ的阳性表达情况与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、分化程度和病理类型无关,与患者的有无淋巴结转移及临床分期相关(P＜0.05);己糖激酶-Ⅱ阳性表达的患者5年生存率显著低于阴性表达的患者(P=0.026). 结论 己糖激酶-Ⅱ在乳腺癌组织中的表达明显升高,对乳腺癌患者的预后判断具有重要意义.
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己糖激酶-Ⅱ在直肠癌组织中表达临床意义
目的：检测己糖激酶-Ⅱ基因在直肠癌组织中表达，探讨其与患者预后的关系。方法：通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质印迹方法、免疫组织化学方法了解己糖激酶-Ⅱ在直肠癌100例组织中表达，探讨与肿瘤病理因素关系。结果：RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示直肠癌组织阳性表达己糖激酶-Ⅱ在RNA水平显著高于正常组织阳性表达。直肠癌组织中己糖激酶-Ⅱ表达阳性率显著高于对照组（P<0.01）。肿瘤大小、分化程度、合并肿瘤分期与己糖激酶-Ⅱ的表达呈正相关（P值分别为P=0.001，P=0.000，P=0.019），而淋巴转移与否与己糖激酶-Ⅱ的表达无相关性（P=0.815）。结论：直肠癌组织中HK-Ⅱ呈高表达，HK-Ⅱ抑制剂能抑制肿瘤糖酵解从而抑制肿瘤生长、增殖，促进肿瘤凋亡，为肿瘤治疗提供契机。
关键词： 直肠癌 己糖激酶-Ⅱ 逆转录-聚合酶链反应 蛋白质印迹法 免疫组织化学法 -
结直肠癌18F-FDG的摄取与HK一Ⅱ表达的相关性
目的 探讨结直肠癌的18F标记的脱氧葡萄糖(18 F-FDG)摄取与肿瘤组织己糖激酶-Ⅱ(HKⅡ)表达的相关性.方法 20例结直肠癌患者术前进行18 F-FDG正电子发射断层显像(PET)-CT检查,测定肿瘤平均标准摄取值(SUVmean).应用免疫组织化学法检测肿瘤组织HK-Ⅱ的表达；分析SUVmean与组织病理关系及与HK-Ⅱ表达的相关性.结果 20例结直肠癌患者均为高摄取,SUVmean为5.42±1.67.浸润型SUVmean为6.55±1.63,明显高于肿块型的4.20±1.29和溃疡型的5.83±1.60(P＜0.05).有远处转移组SUVmean为7.14±1.07,高于无转移组的4.84±1.41(P＜0.05).SUVmean与HK-Ⅱ的表达呈正相关(r=0.589,P＜0.01).结论 结直肠癌组织的18 F-FDG摄取与HK-Ⅱ表达呈现正相关.
关键词： 结直肠癌 18F标记的脱氧葡萄糖 正电子发射断层显像 己糖激酶-Ⅱ -
卵巢上皮性癌组织中HK-Ⅱ、PKB蛋白的表达及其意义
目的 探讨己糖激酶-Ⅱ(HK-Ⅱ)、蛋白激酶B(PKB)蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达及其意义.方法采用免疫组织化学SP法检测56例卵巢上皮性癌组织(恶性组)、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织(良性组)、20例正常卵巢上皮组织(正常组)中HK-Ⅱ、PKB蛋白的表达水平,分析二者与卵巢上皮性癌临床病理参数的关系及二者在卵巢上皮性癌组织中表达的相关性.结果恶性组HK-Ⅱ、PKB蛋白阳性表达率均显著高于正常组、良性组(均P<0.01).卵巢上皮性癌组织学分级为高、中分化和病理类型为浆液性囊腺癌、黏液性囊腺癌HK-Ⅱ、PKB蛋白阳性表达率与组织学分级为低分化、病理类型为子宫内膜样腺癌比较差异无统计学意义(P>0.05).卵巢上皮性癌FIGO分期为Ⅰ—Ⅱ期、有淋巴结转移HK-Ⅱ、PKB蛋白阳性表达率与FIGO分期为Ⅲ—Ⅳ期、无淋巴结转移比较差异均有统计学意义(均P<0.05).卵巢上皮性癌组织中HK-Ⅱ蛋白表达与PKB蛋白表达呈正相关(r=0.402,P<0.05).结论HK-Ⅱ、PKB可能与卵巢上皮性癌的发生发展有关.
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HK-Ⅱ、TS和Ki-67在青年人结肠癌组织中的表达及其意义
目的 检测己糖激酶-Ⅱ(HK-Ⅱ)、胸苷酸合成酶(TS)和Ki-67核抗原(Ki-67)在青年人结肠癌组织中的表达,并探讨其临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测78例青年人(≤40岁)结肠癌和75例随机抽取的同期收治的中老年人(＞40岁)结肠癌组织中HK-Ⅱ、TS及Ki-67蛋白的表达.结果 HK-Ⅱ和TS在青年人组和中老年人组结肠癌组织中的阳性表达率分别为82.1%(64/78)和65.3%(49/75),69.2%(54/78)和52.0%(39/75),而Ki-67增殖指数分别为(59.1±3.0)%和(48.5±3.2)%.两组比较,以上三种蛋白的表达水平差异均有统计学意义(均P＜0.01).HK-Ⅱ、TS及Ki-67表达在青年人结肠癌肿瘤分化程度、分期之间的差异均有统计学意义(均P＜0.05).青年人结肠癌HK-Ⅱ表达与TS、Ki-67成正相关性.结论 HK-Ⅱ、TS和Ki-67阳性蛋白表达可作为青年人结肠癌的恶性指标.
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HK-Ⅱ在结肠癌组织中的表达及其临床意义
目的 检测己糖激酶-Ⅱ(HK-Ⅱ)在人结肠癌组织中的表达,并探讨其与肿瘤细胞增殖、凋亡的关系及临床意义. 方法 采用免疫组织化学法检测68例结肠癌组织HK-Ⅱ和增殖细胞核抗原(PC-NA)表达,采用脱氧核糖核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,计算增殖指数(PI)和凋亡指数(AI). 结果 52例结肠癌组织HK-Ⅱ表达阳性,阳性率为76.5%.HK-Ⅱ阳性表达的结肠癌PI显著增高,而AI明显下降(均P<0.01).结肠癌HK-Ⅱ表达在患者年龄、性别和肿瘤发生部位之间的差异无统计学意义(P>0.05);但在肿瘤分化程度、分期和淋巴结转移之间差异有统计学意义(P<0.05). 结论 HK-Ⅱ在结肠癌增殖和进展中起着重要作用,可作为结肠癌恶性预后指标和临床治疗靶点.
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己糖激酶-Ⅱ在骨肉瘤组织中的表达及意义
目的:探讨己糖激酶-Ⅱ在骨肉瘤及瘤旁正常组织中的表达及临床意义.方法:收集2001年9月至2008年12月在在我院接受手术治疗的骨肉瘤患者89例,通过免疫组织化学方法检测己糖激酶-Ⅱ蛋白在骨肉瘤及瘤旁正常组织中的表达,并探讨其表达量与临床病理特征和预后的相关性.结果:己糖激酶-Ⅱ在骨肉瘤组织中的核阳性表达率明显高于瘤旁正常骨组织中的阳性表达率(91％ vs.4.5％,P＜0.05);己糖激酶-Ⅱ的表达量与患者的性别、年龄、肿瘤部位和病理类型无关(P＞0.05),与患者有无转移及组织学分级相关(P＜0.05);己糖激酶-Ⅱ阳性表达的患者5年生存率显著低于阴性表达的患者(P＜0.05).结论:己糖激酶-Ⅱ在骨肉瘤组织中存在异常表达,并与患者的预后存在显著相关性,提示己糖激酶-Ⅱ有可能成为骨肉瘤治疗的重要靶点.
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HK-Ⅱ基因的多态性分析及其与原发性肝癌的关系
目的:探讨已糖激酶-Ⅱ(HK-II)基因的多态性位点和原发性肝癌(PHC)易感性之间的关系.方法:应用PCR-SSCP、PCR-RFLP和PCR产物测序技术对80例原发性肝癌患者、122例健康对照者的HK-Ⅱ基因进行序列分析及测序.结果:①HK-Ⅱ基因启动子活性区在病例组和对照组中均没发现多态性位点;②HK-Ⅱ基因第4外显子142位遗传密码存在CAA→CAT多态性改变,在PHC组和健康对照组之间差异有统计学意义(P<0.05);③第15外显子736位遗传密码存在CCC→CCG的多态性改变,产生的SS基因型在病例组和对照组的分布差异有统计学意义(P<0.05);④联合分析发现,SS基因型和第4外显子的多态性改变同时存在的情况在两组之间差异有统计学意义(P<0.05).结论:①HK-Ⅱ基因的启动子活性区碱基组成稳定,不易发生突变;②CAA→CAT和CCC→CCG的多态性改变会增加PHC的发病危险;③SS基因型和CAA→CAT多态性改变同时存在时,会增加个体患肝癌的危险性.
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mTOR信号通路调控HK-Ⅱ表达对结肠癌细胞增殖的影响
目的:探讨mTOR信号通路是否可通过调控HK-Ⅱ蛋白表达的途径来影响结肠癌细胞增殖.方法:Western印迹检测结肠癌细胞mTOR、HK-Ⅱ蛋白表达水平,并观察抑制mTOR信号通路对HK-Ⅱ蛋白表达的影响.采用MTT法检测mTOR和HK-Ⅱ特异性抑制剂作用后结肠癌细胞增殖的变化.结果:mTOR、HK-Ⅱ蛋白在4种结肠癌细胞中均明显表达;抑制mTOR可阻断结肠癌细胞HK-Ⅱ蛋白表达;抑制mTOR和抑制HK-Ⅱ均可明显控制结肠癌细胞增殖,且两者有协同效应.结论:mTOR信号通路可能通过调控HK-Ⅱ的表达影响结肠癌细胞增殖.
关键词： 结肠肿瘤 糖酵解 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 己糖激酶-Ⅱ -
肿瘤FDG代谢与己糖激酶-Ⅱ关系的研究进展
18F脱氧葡萄糖(FDG)PET/CT将PET的功能显像与CT的解剖成像有机融合，不仅能有效显示肿瘤的代谢、增生、乏氧和细胞凋亡状态，而且在肿瘤患者的诊断、分期、指导治疗、疗效监控和预后评价等方面，都具有重要的临床应用价值，然而肿瘤FDG聚集的具体机制目前尚不清楚。己糖激酶-Ⅱ（HK-Ⅱ）作为肿瘤FDG代谢相关的重要免疫分子之一，成为了目前研究的热点。本文旨在对肿瘤中HK-2表达、与FDG代谢关系及靶向治疗做一综述。
