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聚维酮碘对人角膜内皮细胞的影响
聚维酮碘(povidone-iodine,PI)是针对细菌、病毒、真菌及原生动物等的广谱杀菌剂.5%PI可用于眼科术前准备工作[1-5].但文献报道供体角膜保存在0.1%PI中5 d,角膜内皮可出现损伤表现[6];高浓度PI注入兔眼前房可导致角膜内皮损伤[7,8];0.01%PI对体外纤维母细胞具有毒性作用,0.1%PI可抑制纤维母细胞生长[9].因此,我们于2003年开始观察不同浓度PI对体外培养的人角膜内皮细胞的潜在影响,以期为临床提供参考,提高使用PI的安全性.
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改良K液保存人眼角膜的临床应用研究
目的 我们曾在改良K液的动物试验中获得良好的效果,现在将其用于临床是想进一步获得有关改良K液的临床疗效.方法 将收集7对(14眼)不适于穿透角膜移植的角膜为一配对,一只浸入K洼,另一只侵入改良K液,分别于保存10d后取出,行1%茜素红和0.25%台盼蓝联合染色,另收集了5对(10只眼)适用于穿透角膜移植的角膜浸入改良K液,置4℃冰箱保存,供穿透角膜移植用.结果 保存在改良K液中的角膜内皮细胞质量明显优于保存在K液者,保存在10d内的供体角膜透明度好.结论 改良K液配方合理,性质稳定,不仅具有比K液配置简单、经济、安全可靠等优点,更主要的是延长了角膜保存时间,提高了角膜保存质量.
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角膜移植手术的临床观察及护理体会
角膜疾病是眼科的常见病之一，也是致盲的原因之一 。角膜移植术利用异体的正常透明角膜组织，取代混浊、病变的角膜组织，使患者复明或控制角膜病变并达到美容的目的。为目前同种器官移植中成功率高的一种，是眼科手术中重要的复明手术之一，随着手术显微镜的问世，精细缝合针、缝合线的发明，角膜保存方法的进步及眼库的建立与发展，近十年来角膜移植有巨大进步，眼部条件好的病例，其移植片的成功率为95%左右，中等条件达到75%左右，差者30%左右。1 临床资料1.1 一般资料 我院自1998年5月至2000年6月共治疗患者48例，其中角膜白斑40例，大泡性角膜病变2例，外伤3例、翼状胬肉2例，眼睑球粘连1例，年龄9～76岁，男32例，女16例。
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改良甘油冷冻保存角膜用于桥式穿透性角膜移植效果观察
目的 探索在没有新鲜供体角膜供穿透性角膜移植的情况下,观察以改良甘油长期冷冻保存的角膜行桥式穿透性角膜移植的效果.方法 角膜大面积溃疡并穿孔病例共10例10只眼,溃疡直径5～8 mm,穿孔直径2～4 mm.以改良甘油冷冻保存法保存2个月至2年的角膜进行桥式穿透性角膜移植,术后观察植片透明情况、角膜上皮愈合时间、眼压及并发症等.结果 术后随访12～24个月,10例患者溃疡均治愈无复发,植片呈半透明状,角膜植片上皮完全修复时间(10.2±3.6)d,植片水肿完全消退时间(30.7±6.8)d,眼压均正常.术后视力指数/眼前～0.25.结论 在没有新鲜供体角膜的情况下,以改良甘油冷冻保存法长期保存的角膜进行桥式穿透性角膜移植治疗重症角膜溃疡穿孔,能保住眼球和部分视力,成功率较高.
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透明质酸在角膜保存及干眼病治疗方面的研究进展
透明质酸(Hyaluronan acid HA)又名玻璃酸,其钠盐为透明质酸钠(SH),是由葡糖醛酸和乙酰氨基己糖组成的双糖单位聚合而成的直链高分子粘多糖,广泛存在于动物组织细胞间质中.
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深圳眼库582例捐献角膜供体资料分析
目的 通过对深圳眼库成立14年所获得的582例捐献角膜供体资料进行回顾性分析,探讨深圳模式的角膜捐献以及现阶段获得更多角膜供体的有效方法.方法 对深圳眼库2000年2月到2014年10月入库的582例捐献角膜供体资料进行统计分析,包括年捐献量、捐献者性别、年龄、死因、地域、捐献途径、眼球摘取和保存时间等.结果 角膜捐献者男性(58％)略多于女性(42％);年龄跨度在11个月到95岁;捐献者年龄50岁左右者居多(20％);死亡原因中肿瘤所占比重较大(54％);深圳当地及接收外省市角膜捐献数量呈现逐年递增又趋于平稳态势;捐献途径以协调员劝捐为主;身后眼球平均摘取时间为4.6 h;角膜中期保存液的使用令角膜供体的保存时间由9.8 h延长至42.2 h.结论 深圳眼库成立14年,年角膜捐献量逐渐增多且日趋平稳,这与器官捐献协调员的设立,眼库与深圳红十字会、慈善团体、国内外交流合作等密切相关.深圳的角膜捐献模式遵循了立法先行、媒体合作、多方协作、广开渠道、全民动员的原则,这也为现阶段提高国内角膜捐献率,获得更多角膜供体材料提供了较为有效地借鉴途径.
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改良C3F8保存法中期保存兔角膜植片的实验研究
目的 采用改良的C3F8保存法中期保存新西兰兔的角膜植片.方法 将新西兰白兔眼的角膜植片采用C3F8保存于无菌小房,观察保存不同时间后角膜内皮细胞的数量、形态以及角膜厚度,并用同一保存时间的新西兰白兔角膜植片进行同种异体的穿透性角膜移植技术,观察术后第5天角膜植片中央部的角膜厚度以及内皮细胞密度.结果 经C3F8中期保存3、5天后的角膜植片,其内皮细胞数量、大小与0天相比无明显的统计学差异,7、9天后的角膜植片,其内皮细胞数量减少,内皮细胞面积增大,而角膜厚度与0天相比有统计学差异.保存5天的角膜内皮细胞界限清晰,上皮细胞微绒毛结构形态正常.保存7、9天的角膜内皮细胞的边界不清晰.将保存后第3、5天的角膜植片同种异体角膜移植术,术后第5天,保存3天及5天移植级与保存0天角膜植片相比,角膜内皮细胞计数及角膜厚度无显著性差异.结论 采用改良的C3F8保存法中期保存角膜植片是可行的.
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应用酶组织细胞化学技术对真空冷冻干燥保存兔角膜内皮细胞的研究
目的:探讨真空冷冻干燥保存法对于兔角膜内皮细胞活性的影响.方法:将冷冻及冻干保存兔角膜片分别复水及复温后,与新鲜角膜同时行内皮细胞三磷酸腺苷酶(ATPase)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的酶组织细胞化学染色,观察3组酶活性的差异.结果:3组样本ATPase及SDH酶组化染色均呈阳性反应.实验组与对照组间ATPase和SDH酶的平均积分光密度值(IOD)差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:真空冷冻干燥保存法可使离体角膜组织保持一定的活性.与新鲜及冷冻角膜相比,冻于法有望成为一种新的角膜长期保存方法.
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受体血清保存植片角膜移植术后排斥反应的实验研究
目的和方法:通过建立兔穿透性角膜移植(PKP)模型,对在受体血清和Hanks 液分别进行24h和72h保存后的兔角膜植片 PKP术后的排斥反应指数(RI)进行比较,对受体血清保存的植片能否减轻排斥反应作出初步的评价.结果:72h保存组的RI明显低于其余3组,而血清和Hanks液两组之间保存时间相同的情况下,差异无显著性.结论:支持植片保存液24h以上保存比24h以内者排斥反应发生率低的假说;不支持受体血清保存植片能较其它保存方法减少PKP术后排斥反应率的论断.
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受体血清和Hanks液保存兔角膜植片的内皮细胞比较
目的:评价血清对角膜植片保存的意义.方法:对新鲜兔角膜在受体血清和Hanks液中分别进行24h和72h保存后,各组的平均内皮细胞密度及内皮细胞存活率等指标进行比较.结果:血清74h保存组的植片内皮细胞各项指标均优于Hanks液72h保存组.结论:血清有着维护角膜内皮细胞结构和功能的作用.
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VitE对中期保存的兔角膜内皮细胞的影响
目的探讨Vitamin E对中期保存的兔角膜内皮细胞的保护作用及机制.方法前房内分别注入M-K液,以及含有25、50、100mol/LVitaminE的M-K液,全眼球保存兔角膜.在保存1、3、5 d后,分别进行角膜内皮细胞活性染色以及角膜内皮显微镜检查.结果保存后实验组内皮细胞存活率高于对照组.保存后各实验组的六边形细胞百分率、细胞平均密度均较对照组高.结论在角膜中期保存液中加入一定剂量的Vitamin E,能够提高内皮细胞的抗氧化能力,延长角膜的保存时间.
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硒对中期保存的兔角膜内皮细胞的影响
目的探讨硒对中期保存的兔角膜内皮细胞的保护作用及机制.方法前房内分别注入M-K液,以及含有3 μmol/L、5μmol/L、8 μmol/L亚硒酸钠的M-K液后,全眼球保存兔角膜.在保存1、3、5 d后,分别行内皮细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力检测、角膜内皮细胞活性染色、角膜内皮显微镜检查.结果保存后实验组GSH-Px活力明显高于对照组.保存3d及5d后实验组内皮细胞存活率高于对照组.内皮显微镜显示,保存后的六边形细胞百分率各实验组均较对照组高.保存5d后实验组细胞平均密度高于对照组.结论在角膜中期保存液中加入一定剂量的硒,能够提高内皮细胞的抗氧化能力,延长角膜的保存时间.
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眼球甘油冷冻保存在穿透性角膜移植中的应用
角膜供体的保存方法分为活性与非活性保存两类,目前活性保存角膜主要用于穿透性角膜移植,非活性保存只适用于板层角膜移植.而且,活性角膜保存对于保存的设备和技术有较高的要求,还不能在一般性的眼科医院开展.近期,我院眼科中心采用了保存方法较为简单的眼球甘油冷冻保存方法[1],对5例(5只眼)角膜溃疡患者行穿透性角膜移植,现报道如下.
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角膜活性保存质量影响因素研究进展
有效的角膜保存技术是角膜移植成功的基础。近年来，角膜活性保存技术得到不断改进和发展。角膜保存过程中，细胞活性、角膜免疫原性等诸多因素和角膜保存的质量密切相关。本文对角膜活性保存过程中影响保存结果的因素进行综述。
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受体血清保存后的兔角膜行角膜移植术的实验研究
目的 评价受体血清保存7 d的兔角膜行角膜移植术后植片的内皮细胞功能.方法 30只新西兰大白兔随机分为2组:A组(对照组)15只和B组(实验组)15只.以传统湿房保存1 d的兔角膜作为A组供体;以受体血清保存7 d的兔角膜作为B组供体,对2组新西兰大白兔行角膜移植术.裂隙灯观察2组术后第3天,第1、8周角膜植片(大体形态)情况.2组术后第8周取角膜植片行扫描电镜观察超微结构及锥虫蓝-茜素红检测角膜内皮细胞活性;角膜厚度仪测量角膜厚度及图像分析系统计算内皮细胞密度和细胞面积.结果 A、B2组术后第8周眼部充血消退,植片透明、清亮,未见排斥反应.A组细胞密度、细胞面积与B组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01),A组角膜厚度与B组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 受体血清有维护角膜内皮细胞结构和功能的作用.
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硫酸软骨素在眼科中的应用
综合国内外相关文献,现将硫酸软骨素在眼科中应用的研究进展做一综述.
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角膜保存技术研究进展
角膜病是当今世界主要致盲眼病之一,角膜移植是脱盲、恢复视力的有效的方法.角膜保存和建立眼库是开展角膜移植的基础,可以充分利用有限的角膜资源.1906年ZIRM人新鲜供体角膜移植成功后,角膜移植技术得到了迅猛发展,但新鲜角膜来源有限,无法满足临床需求.1953年STOCKER发现角膜内皮细胞是维持角膜透明状态的基本条件,是决定角膜移植成功的关键.这一重要发现,使得保存技术转向以保存内皮细胞活性为主,研究角膜保存技术不断改进和创新.1945年美国建立了第一个眼库,为角膜移植发展创造了有利条件.本文从角膜保存进展角度介绍角膜保存技术以及角膜保存与移植相关的几个相关热点问题.
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角膜长期保存的研究进展
角膜病是当今世界主要致盲眼病之一.以目前的医疗条件,角膜移植术是使角膜盲患者恢复视力的主要手段.由于受传统观念的影响,在我国能捐献角膜的人数十分有限,角膜来源极为匮乏.
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透明质酸钠联合抗氧化剂中期保存兔角膜
目的 研究透明质酸钠联合抗氧化剂(还原型谷胱甘肽和维生素C)在角膜中期保存中的作用,以探讨一种简便有效的角膜中期保存液,为临床应用提供动物实验依据.方法 以自制MK液为对照组,以添加透明质酸钠和抗氧化剂的改良MK液为实验组,分别对保存3d、7d、10d、14d的兔角膜行大体形态观察、角膜中央厚度测量、台盼蓝-茜素红联合染色及电镜观察.结果 应用透明质酸钠和抗氧化剂的各实验组保存的角膜均较对照组透明度好,水肿轻,电镜观察角膜内皮细胞连接紧密,活细胞百分率高,2组差异比较有显著性(P＜0.001).结论 透明质酸钠及抗氧化剂有减轻角膜组织损伤,保持细胞活性的作用,将2者联合应用于角膜中期保存液中,可显著提高保存效果.
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ROCK抑制剂Y-27632在角膜保存时对角膜缘干细胞活性的促进作用
背景 角膜缘干细胞(LSCs)对维持角膜上皮的稳定和角膜组织透明性有重要作用.Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)抑制剂Y-27632能够促进人胚胎干细胞、角质上皮细胞等的增生,减少细胞凋亡.目的 探讨Y-27632对离体兔角膜保存和体外LSCs扩增能力的影响. 方法 在细胞培养基MEM中加入质量分数12.5％硫酸软骨素、质量分数10.0％低分子右旋糖酐、20.0 mg/L地塞米松、100 mg/L妥布霉素注射液、9.5 g/L Hepes,使用时添加0.375 mg/L L-谷氨酰胺,制备成角膜活性保存液.将新西兰大白兔的角膜组织片分别置于含或不含Y-27632的角膜活性保存液中保存4、7、14d,采用质量分数0.25％锥虫蓝和质量分数0.2％茜素红染色法观察角膜内皮细胞密度及形态,采用Giemsa染色法并使用Image J图像分析软件计数克隆球数量和LSCs活性,计算LSCs存活率和克隆形成效率. 结果 角膜片保存4d时,Y-27632保存液组和单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞形态无明显差别,角膜片保存7d时,Y-27632保存液组角膜内皮细胞形态仍保持规则的六边形,而单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞的细胞膜轻微皱缩,少数细胞体积变大.角膜片保存14 d时单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞可见较多的茜素红斑.单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞计数为(2 262±75)/mm2,Y-27632保存液组角膜内皮细胞计数为(2 425 ±95)/mm2,差异有统计学意义(P＜0.001).新鲜角膜片和角膜片保存4d时,Y-27632保存液组和单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆球均较大,其内细胞数较多,而保存7d和14 d时,与Y-27632保存液组比较,单纯角膜中期保存液组LSCs克隆球直径明显缩小.新鲜分离的角膜片和角膜片保存4d时,Y-27632保存液组与单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆形成率和角膜上皮细胞存活率的差异均无统计学意义(均P＞0.05);角膜片保存7d和14d时,角膜缘上皮细胞的活性率分别为(73.00±2.12)％和(56.00±0.71)％,明显高于单纯角膜中期培养液组的(66.00±4.00)％和(49.00±0.71)％,差异均有统计学意义(t=3.098,P=0.018;t=9.798,P=0.000);角膜片保存7d和14 d时,Y-27632保存液组与单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆形成效率分别为(11.05±0.21)％和(3.10±1.97)％,明显高于单纯角膜中期保存液组中的(2.05±1.20)％和(0.40±0.14)％,差异均有统计学意义(t=18.107,P=0.000;t=3.184,P=0.017).结论角膜保存液中添加Y-27632可明显提高离体角膜保存的效果,同时可维持LSCs的活性及克隆形成能力.Y-27632可作为角膜保存液的有效添加成分.
