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核定位信号结构特点及工作原理
核内的功能蛋白包括转录因子、剪接因子和其他的核蛋白,它们在胞浆中合成,通过本身的核定位信号与入核转运受体结合形成复合物,然后通过细胞核膜上的核孔复合体进入核内发挥它们的生物学功能.而要研究这些核蛋白的入核机制,可能会有许多问题萦绕脑中,例如:什么是核定位信号?它的结构特点是什么?它的工作原理是什么?通过什么样的方式才能预测核定位信号?入核转运的结构基础是什么?入核转运的影响因素有哪些?本篇综述通过核定位信号的结构和特点、影响核定位信号依赖的蛋白质入核转运的因素、入核转运的工作原理、入核转运的结构基础等几方面内容, 目的是使那些准备研究蛋白质入核机制,但是对核定位信号及其相关研究都不熟悉的研究者对核定位信号及其工作原理有个初步的认识,为将来的实验设计打下一个良好的基础.
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神经系统特异性剪接因子NOVA研究进展
神经-肿瘤腹侧抗原(NOVA)是第一个在哺乳动物中发现的组织特异性剪接因子,广泛分布于中枢神经系统,通过其KH结构域(KH domain)与靶基因mRNA前体中的YCAY基序(YCAY motif)结合,调控可变剪接过程.根据其与靶标结合位置的不同,NOVA作为剪接调节因子具有双重作用,既可以增强剪接,也可以抑制剪接.NOVA作为剪接因子特异性地调控了神经突触中一组功能密切相关的基因.
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剪接因子SF2/ASF在儿童白血病细胞中的表达
目的 研究剪接因子SF2/ASF在儿童白血病不同治疗阶段骨髓细胞的表达及在白血病细胞系中的表达变化.方法 用Western blotting方法 检测儿童急性B淋巴细胞性白血病(acute B-lymphoblastic leukemia,B-ALL)初诊和缓解骨髓细胞中SF2/ASF的表达变化情况;用Western blotting检测B-ALL细胞系SF2/ASF的表达,并用化疗药物长春新碱和阿糖胞苷体外诱导NALM-6细胞系,观察诱导前后SF2/ASF表达的改变.结果 Western blotting检测结果 显示SF2/ASF在初诊B-ALL患儿骨髓细胞中明显表达,而在缓解期白血病患儿及对照特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患儿骨髓中仅有微弱表达;SF2/ASF在NALM-6细胞系中表达升高;用长春新碱、阿糖胞苷处理后,SF2/ASF表达明显减少.结论 SF2/ASF在初诊B-ALL患儿骨髓或白血病细胞系中表达升高,随着临床缓解或体外化疗药物诱导后表达减少,可以作为监测白血病治疗效果的指标之一.
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剪接因子SRp30c在激素抵抗型哮喘发病机制中的作用
糖皮质激素是目前治疗哮喘的首选药物,然而临床上有部分患者对激素治疗反应不敏感,称为激素抵抗型哮喘.激素抵抗型哮喘的发病机制非常复杂,目前尚不十分清楚.已有许多研究证据提示激素抵抗与糖皮质激素受体-β亚型(GR-β)表达异常增多有关,近来又有研究发现剪接因子家族成员富含丝氨酸/精氨酸蛋白30c(serine/arginine-ridl proteins 30c,SRp30c)在GR初级转录产物pre-mRNA发生选择性剪接形成GR-β的过程中发挥重要作用.
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剪接因子SC35在大鼠胸腺细胞内的定位
目的：观察剪接因子SC35在大鼠体内重要器官内分布情况。方法：采用免疫酶以及免疫电镜技术对剪接因子SC35从组织学分布到超微结构定位进行了系统研究。结果：胸腺内大部分细胞内含有SC35或SC35类蛋白，而在肝和肾内未发现有标记。金颗粒主要分布在细胞核的染色质间区和染色质周边及核仁的致密纤维组分区中。大白鼠胸腺细胞内的金颗粒密度为细胞核内33.05个/μm~2，核仁内21.77个/μm~2，细胞质内9.90个/μm~2，对照组细胞内则金颗粒极少或没有，而在肝和肾细胞内未见。结论：SC35或SC35类蛋白存在于大鼠胸腺内，而非肝和肾。
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丝/精氨酸蛋白特异性激酶生理功能及其在肿瘤中的研究进展
丝氨酸/精氨酸(serine/arginine,SR或RS)蛋白激酶是一类能与SR或RS二肽模体特异性结合的酶,而SR蛋白是细胞生长发育过程中的关键因子.目前,在人类、鼠、酵母菌、果蝇、线虫类及植物基因组中发现了至少9种不同编码的SR蛋白激酶基因.其中,SR蛋白特异性激酶(serine/arginine-rich specific kinase,SRPK)家族是一类能特异性磷酸化RNA剪接子内RS结构域的蛋白激酶,人体内主要含有SRPK1和SRPK2,分布于不同的组织和器官中,通过调节SR蛋白磷酸化反应,调节SR蛋白与mRNA前体的特异序列结合,从而帮助拼接因子识别正确的拼接点,同时,在细胞周期中SRPK也具有调节RNA剪接因子在细胞核中分布的功能[1].可见,SRPK在人体正常组织和异常病变中起着某些重要作用,因此,现对SRPK基本生理功能和其在肿瘤中相关研究进行综述.
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丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1在肿瘤发生发展过程中的作用
选择性剪接(alternative splicing)是产生蛋白质组多样性的重要机制,并与肿瘤的发生、发展密切相关.丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1(serine/arginine-rich splicing factor 1,SRSF1)是选择性剪接因子家族的代表性成员,参与前体mRNA的选择性剪接与加工、胞内定位与运输等生理过程.研究已证实,SRSF1为原癌蛋白,并在肺癌、乳腺癌和白血病等人类肿瘤细胞中存在过表达现象.SRSF1蛋白通过与肿瘤相关基因的相互作用、调控细胞周期及凋亡等多种途径参与肿瘤的发生、发展过程.此外,SRSF1蛋白通过影响PI3 K-Akt-mTOR、Ras-MNK-MAPK及Wnt-β-catenin信号转导通路中相关基因的剪接方式发挥致癌作用.针对剪接异常事件,目前主要采用反义寡核苷酸方法特异性纠正基因的错误性剪接,该方法已在肺癌及乳腺癌等实体肿瘤治疗中开展研究.深入研究选择性剪接的位点选择机制和作用机制必将对探讨肿瘤发病机制、诊断和治疗方法产生深远影响.
关键词： 选择性剪接 剪接因子 丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1 肿瘤 -
选择性剪接调控的研究进展
选择性剪接是剪除未成熟mRNA中的内含子、保留外显子后生成成熟mRNA的过程.在各类疾病发生和发展过程中,异常的选择性剪接起着重要作用.该文就选择性剪接的发生与调控机制、功能及其与疾病关系的研究进展进行综述.
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剪接因子对雌激素受体α7号外显子选择性剪接调控作用的研究
目的 通过上调或下调肿瘤细胞内hnRNP G、hnRNP I、hTra2-beta1的表达,探索细胞内三种剪接因子对内源性ERa△7形成的作用.方法 Real-Time PCR和Western blot筛选ERα阳性表达细胞株,对细胞株转染hnRNP G、hnRNP I、hTra2-beta1表达质粒和shRNA干扰质粒以上调或下调三种剪接因子的表达,Real-time PCR检测ERa△7和ERα exon7的表达量.结果 筛选出MCF-7为ERα阳性表达细胞株.在hnRNP G表达上调组中,ERα△7和ERα exon7的相对表达量与上调空载体对照组存在统计学差异(P＜0.05,P＜0.05),在hnRNP G表达下调组中,ERα△7和ERα exon7的相对表达量与下调空载体对照组显著差异(P＜0.05,P＜0.05);在hnRNP I表达上调组中,ERα exon7的相对表达量与上调空载体对照纽显著差异(P＜0.05);在hTra2-beta1表达上调组中,ERα△7和ERα exon7的相对表达量与上调空载体对照组显著差异(P＜0.05,P＜0.05),在hTra2-beta1表达下调组中,ERα△7和ERα exon7的相对表达量与下调空载体对照组显著差异(P＜0.05,P＜0.05),其中hnRNP G和hTra2-beta1对ERα7号外显子的作用为相反趋势.结论 hnRNP G和hTra2-beta1这两种蛋白可能在ERα exon7的选择性剪接方面存在相互拮抗的作用,hnRNP I对于ERα exon7的纳入存在拮抗作用,据此推测hnRNP G和hnRNP I在ERαexon7的选择性剪接存在协同作用.
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剪接因子SRp55原核表达质粒的构建和表达
目的:本研究通过扩增剪接因子SR蛋白家族的SRp55基因,构建GST融合蛋白原核表达质粒pGEX-2T/SRp55,并在大肠杆菌中诱导表达并进行纯化.方法:用PCR法扩增SRp55基因,将扩增产物和载体pGEX-2T进行双酶切后回收,连接载体和目的片段,获得重组质粒.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).在大肠杆菌BL21(DE3)中通过IPTG进行诱导表达,然后用谷胱甘肽-琼脂糖球珠,亲和纯化得到纯的GST-SRp55融合蛋白.结果:SRp55基因以正确的阅读框架插入pGEX-2T.IPTG诱导大肠杆菌BL21(DE3)表达,随诱导时间的增加蛋白表达量增高,4 h以后接近高表达量.通过亲和纯化得到分子量在60 kD左右的蛋白,经蛋白印迹分析证实为GST-SRp55融合蛋白.结论:成功地构建了GST融合蛋白原核表达质粒pGEX-2T/SRp55,并获得GST-SRp55融合蛋白,为进一步研究tau蛋白可变剪接机制提供了必要的基础.
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子宫内膜癌与RNA选择性剪接相关性的研究进展
子宫内膜癌(EC)是常见的女性生殖系统恶性肿瘤.EC与雌激素受体的RNA剪接存在相关性,ERα△7、5、3、2和ERβ1、2、5在EC组织中发挥着不同的生物学作用.EC中剪接因子表达的种类及数量发生变化,影响了ER的剪接方式.hnRNP G、hTra2-beta1通过改变其靶基因ER功能进而影响EC的生物学行为.其他与EC相关的剪接因子包括YT521、QKI、NSSR1等.
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视网膜色素变性疾病相关前体mRNA剪接因子研究进展
视网膜色素变性(RP)是临床上常见的一组遗传性视网膜变性疾病,并具有显著的遗传异质性.前体mRNA(pre-mRNA)的剪接是指在剪接体的催化作用下,将基因初始mRNA中的内含子去掉并将外显子拼接的过程.在目前已发现的80多个RP致病基因中,有8个(PRPF3、PRPF8、PRPF31、PRPF6、PRPF4、SNRNP200、RP9和DHX38)在全身广泛表达并与前体mRNA剪接相关,然而这些基因突变只引起眼部病变的机制尚不清楚.本文介绍了pre-mRNA的剪接过程,总结了与RP相关的pre-mRNA的基因突变和8种剪接基因在剪接过程中的作用,并探讨相关基因突变仅引起眼部病变的机制.
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剪接因子突变与MDS关系研究的新进展
骨髓增生异常综合征(myelodyssolastic syndrome,MDS)是一组起源于骨髓造血干细胞的高度异质性的恶性克隆性疾病.MDS患者因髓系无效造血而导致外周血细胞减少,并且许多患者随着时间的推移骨髓中的恶性细胞逐渐增多,有30％～40％的MDS患者会转化为急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML).而目前应用于治疗MDS的去甲基化药物只有阿扎胞苷和地西他滨.
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糖皮质类固醇激素受体与糖皮质类固醇激素抵抗的研究进展
糖皮质类固醇激素(GC)具有抗炎、抗过敏及抗免疫作用,临床上可用于治疗各种自身免疫病、肾病综合征、哮喘等疾病,但不同的个体对GC的治疗反应不同,GC抵抗病例的出现,对于以激素为主要治疗药物的疾病是一个严峻的挑战.激素抵抗的发病机制非常复杂,目前尚不十分清楚,但有许多研究证据提示激素抵抗与GC受体(GR)β亚型的表达异常增多或GRα的表达降低有关,近来又有研究发现剪接因子家族成员富含丝氨酸/精氨酸蛋白30 c(SRP30c)在GR初级转录产物pre-mRNA发生选择性剪接形成GRβ的过程中发挥重要作用.本文就GR亚型的特点、作用机制及剪接因子,尤其是与GC抵抗之间的关系进行了系统综述.
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顺铂处理后肺癌细胞剪接因子SRSF1 mRNA异构体的变化
目的: 观察不同浓度顺铂处理后肺癌细胞中剪接因子(SRSF1)mRNA异构体的变化,并寻找其中发挥主要抗凋亡作用的异构体.方法:使用不同浓度的顺铂处理肺癌细胞系A549和H1299后提取总RNA,设计SRSF1基因不同的引物(F1∶R1、F1∶F2及F2∶R1)进行RT-PCR以检测其mRNA剪接异构体的变化.结果:在A549和H1299细胞中检测到了5种异构体(Isoform-a、Isoform-b、Isoform-d、Isoform-e、Isoform-f),且主要表现为随着顺铂浓度的升高,非编码蛋白的mRNA异构体的比例明显上升,主要是Isoform-d的上升;而编码蛋白的mRNA异构体所占比例明显下降,主要是Isoform-a下降;同时SRSF1的总mRNA水平也是逐渐降低的.结论:在顺铂处理下,肺癌A549和H1299细胞中的SRSF1的转录水平被下调,其mRNA选择性剪接向下调编码蛋白的mRNA异构体的方向转变,造成编码蛋白的mRNA异构体降低的主要原因为Isoform-a, 该异构体可能是SRSF1基因发挥抗细胞凋亡作用的主要异构体.
