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双单抗夹心ELISA方法检测血浆及组织中金葡菌肠毒素B
目的:细菌学研究表明,可溶性外毒素的产生是革兰阳性菌(G+菌)感染的重要标志之一,在G+菌感染性疾病的发生、发展中具有重要意义.其中金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)肠毒素和中毒性休克毒素-1(TSST-1)因其"超抗原"特性,以及它们在脓毒症和中毒性休克综合征中的特殊意义而倍受关注.本文建立了一种敏感、快速的酶免疫测定方法,用于定量检测动物体液及组织中金葡菌肠毒素B(SEB).方法:采用生物素-链亲素系统放大的双抗体夹心酶联免疫吸附方法,以SEB单抗1D2为包被抗体、生物素标记的另一种SEB单抗2D1为标记抗体进行测定.结果:在0.039~10.000μg/L浓度范围内将SEB标准品进行倍比稀释,平行测定4次.当SEB标准品浓度为0.039μg/L时,测得的平均A值仍明显高于阴性对照(分别为0.193和0.108).若以样品A值/阴性对照A值大于2(P/N>2)作为阳性判断标准,则低检出限为0.078μg/L(A=0.220).在0.078~10.000μg/L的浓度范围内,SEB标准品浓度与吸光度值线性关系良好,相关系数为r=0.9906,平均变异系数为5.32%.为了考察方法的精确度,在标准曲线适用的范围内选择3个SEB浓度(10.000μg/L、5.000μg/L和2.500μg/L),每个浓度重复测定4次,变异系数分别为6.82%、5.25%、和3.90%,平均变异系数为5.32%.回收实验显示,正常大鼠、家兔和人血浆中的平均回收率分别为96.43%、97.34%和19.99%,正常人尿液中平均回收率为91.53%.上述结果表明该方法准确性较高,可用于定性及定量检测动物血浆及人尿液中的SEB.结论:本法灵敏度高、准确性好、稳定性强,而且简便、快速,适用于动物血浆及组织中微量SEB的定量测定,并有一定的临床应用前景.
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金葡菌肠毒素C对胶质瘤的体外杀伤及其联合放射治疗的研究
金葡菌肠毒素(staphylococcal enterotoxin,SE)作为一种超抗原,可以激活比普通抗原多达数千倍的淋巴细胞,国内外学者多应用SEA和SEB二型进行抗肿瘤实验,SEC则少见报道,其杀伤肿瘤的机制尚未完全阐明.笔者观察SEC活化的淋巴细胞对胶质瘤的杀伤作用,并对其作用机制进行探讨.
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金黄色葡萄球菌肠毒素与多器官功能障碍综合征
临床资料表明,革兰阳性(G+)菌脓毒症的发病率逐年上升,至20世纪90年代已达脓毒症发病率的40%以上,并仍有升高趋势.其中金黄色葡萄球菌(金葡菌)发病率位居首位,是烧伤创面感染、急性肝衰竭的重要病原菌.由于其致病因素复杂、耐药性不断增强,特别是中间型抗万古霉素金葡菌的出现,金葡菌感染所致脓毒症及多器官功能障碍综合征(MODS)的防治已成为现代创伤外科和危重病医学面临的棘手难题之一.我们回顾性调查了近5年间从创面分离的病原菌1 661株,其中金葡菌分离率从1995年的17.7%(居第3位)上升为1999年的29.3%(居第1位);此外,278例次静脉内置管的严重烧伤患者,7例次发生导管脓毒症(5例死亡),其分离病原菌中金葡菌占50%以上.由此可见,金葡菌是烧伤感染中常见的菌种之一,其中耐甲氧西林金葡菌(MRSA)的耐药性强,易引起脓毒症和MODS等致死性并发症.细菌学研究表明,可溶性外毒素的产生是G+菌感染的重要标志之一,在G+菌感染性疾病的发生、发展中具有重要意义.其中金葡菌肠毒素因其“超抗原”(superantigen)特性以及在中毒性休克综合征、MODS发病中的特殊意义而倍受关注.
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高聚生(高聚金葡素)对肿瘤患者免疫细胞的影响
高聚生(高聚金葡素Highly Agglutinative Staphylococcin,HAS)是由沈阳协合集团研制的一种新型国家级抗癌生物制剂.其主要成分是C型金葡菌肠毒素.它已被证明是一种对T细胞具有强大刺激功效的超级抗原(Staphy lococcal enterotoxin,SE).国内已有许多医院将HAS用于临床治疗多种恶性肿瘤,取得了良好的效果.我院临床亦将HAS应用于多种恶性肿瘤患者,特别是用于手术后治疗,目的是防止复发和转移.本文重点检测患者用HAS前、后外周血8种免疫细胞及白细胞总数对比变化的观察,从而研究HAS对恶性肿瘤患者免疫细胞与白细胞变化的影响.
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PCR-ELISA检测葡萄球菌肠毒素A
葡萄球菌肠毒素(SE)是引起食物中毒和医院感染的重要病原.金葡菌肠毒素分为7个血清型.近年来,国外学者又发现了新的血清型即SEH[1]、SEG、SEI[2].近来发现[3],造成医院感染的耐青霉素金黄色葡萄球菌(MRSA),80%以上产生肠毒素,个别医院分离株几乎100%产生肠毒素.肠毒素的检测有生物学方法、免疫学方法、分子生物学方法等,近年来又发展基因探针的检测方法,由于放射性同位素标记探针的半衰期及放射污染特点,限制了该技术的推广应用,聚合酶链反应(PCR)在临床应用时,遇到了一些问题,比如灵敏度的特异性问题、污染问题,因为存在TapDNA聚合酶抑制物质而致假阳性结果[4].虽然可以通过斑点技术,Southern杂交法提高PCR的灵敏度和特异性,但是,这些方法多存在费时、繁琐、易污染等问题,不适合大量标本的检测,在参考国内外文献的基础上,本文建立了PCR-ELISA法检测金葡菌肠毒素基因的方法.结果报告如下.
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一起金葡菌肠毒素食物中毒的检测
2005年7月22日,路桥某乡镇一早餐店内发生一起因食用污染的糕团(新鲜米糕包裹卤肉、咸菜等佐料,是当地居民喜爱的早餐)引起的食物中毒.据流行病学调查、临床症状及病原学检测证实:是金葡菌肠素素引起的食物中毒,现将病原学检测结果报告如下.
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金黄色葡萄球菌及其L型诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡研究
巨噬细胞(macrophage)在机体的非特异性和特异性免疫中发挥重要的作用.近来的研究表明,某些细菌感染体外培养的巨噬细胞可以导致其凋亡[1-2](apoptosis).细菌感染巨噬细胞的凋亡对感染性疾病的发生、发展和转归都具有重要的作用.金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)可在体内外各种因素的作用下失去细胞壁变成L型,但仍可以致病.国内外研究表明金葡菌感染可以导致免疫细胞的凋亡,如淋巴细胞、单核细胞等[3-5].但金葡菌及其L型是否可以导致巨噬细胞的凋亡,目前未见报道.本文以金葡菌、金葡菌L型、金葡菌肠毒素B(Staphylococcal enterotoxin B, SEB)感染体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞,探讨巨噬细胞凋亡与金葡菌及其L型感染的关系.
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一起由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的幼儿园食物中毒的病原学分析
目的:准确分析一起细菌性食物中毒的原因,为食物中毒处理提供依据.方法:按照GB/T4789.10-94<食品卫生微生物学检验>和WS/T80-1996<葡萄球菌食物中毒诊断标准及处理原则>方法进行检验,分析中毒的原因.结果:3家幼儿园当天饮用的乳制品均检出金葡菌肠毒素,其它食品样中未检出;患儿呕吐物中有5份分离培养出金黄色葡萄球菌,分离菌株中有2份检出金葡菌肠毒素,其中3株经同源性分析认为同一来源;2份乳品厂工人手面破损涂抹样分离出金黄色葡萄球菌,分离菌株均检出金葡菌肠毒素,2份原料罐中的生鲜奶样品中均分离出金黄色葡萄球菌,分离菌株均检出金葡菌肠毒素,所有样品均未检测出其它致病菌;菌株经不同增菌液培养后肠毒素的产生有差异,胰酪大豆肉汤产毒率高为66.7%(6/9),脑心浸液产毒率为44.4%(4/9),普通肉汤中为11.1%(1/9).结论:病原学结果证实本起食物中毒由饮用金葡菌肠毒素污染的乳制品引起.
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一起由金黄色葡萄球菌引起的疑似食物中毒的病原学分析
目的:准确分析一起细菌性食物中毒的原因,提出预防措施,保障人们的身体健康.方法:按照GB/T4789.10-2008<食品卫生微生物学检验>和WS/T80-1996<葡萄球菌食物中毒诊断标准及处理原则>方法进行检验,分析中毒的原因.结果:从米饭中检出金葡菌,用ELISA方法检测其肠毒素为A型.结论:因为没有从患者呕吐物中检出致病菌[1](因采样不规范),所以没有定为食物中毒.应加强对餐饮行业及从业人员的卫生监督,并规范采样人员的采样方法,以提高检出率.