首页 > 文献资料
-
沉默小鼠成纤维细胞活化蛋白表达对原代胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响
目的 应用RNA干扰技术沉默小鼠胰腺癌相关成纤维细胞的成纤维活化蛋白(FAP)表达,观察其对小鼠原代胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 构建靶向小鼠FAP基因的重组表达质粒siFAP及对照质粒siMOCK,分别转染小鼠原代胰腺癌相关成纤维细胞mPCa-FCs-1212,采用定量RT-PCR法及蛋白质印迹法检测转染细胞的FAP mRNA及蛋白表达.将该细胞与小鼠原代胰腺癌细胞mPCa-1212按1∶1的比例共培养,应用MTT比色法检测mPCa-1212细胞的增殖抑制率,应用Annexin V-FTTC/PI染色及流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 转染重组质粒siFAP的mPCa-FCs-1212细胞的FAP mRNA及蛋白表达较转染对照质粒siMOCK的细胞的表达明显下调[0.584±0.029比1.052±0.281,P=0.0213;(27.18±3.23)％比(61.58±4.72)％,P=0.0317].转染siFAP和转染siMOCK的mPCa-FCs-1212分别与mPCa-1212细胞共培养3d后,mPCa-1212的增殖抑制率分别为(23.02±3.32)％和(1.11±0.23)％；细胞凋亡率分别为(42.31±5.34)％和(7.38±2.09)％,两组细胞的差异具有统计学意义(P=0.000).结论 沉默FAP基因的mPCa-FCs-1212在体外可有效抑制mPCa-1212细胞的增殖,诱导细胞凋亡,可能是一种潜在的基因治疗新方法.
-
小鼠成纤维细胞活化蛋白核酸疫苗对其宿主胰腺癌抑制作用的研究
成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)是肿瘤基质中成纤维细胞合成的Ⅱ型膜抗原,仅在恶性上皮肿瘤间质中表达[1].本研究旨在验证构建的FAP核酸疫苗能否增强小鼠免疫系统对肿瘤间质内FAP表达阳性成纤维细胞的免疫杀伤作用,从而对胰腺癌的生长和转移起到抑制作用.
-
乳腺癌组织FAP表达病理生物学意义的研究
目的:探讨乳腺癌成纤维细胞活化蛋白(FAP)的表达与乳腺癌临床病理因素和生物学预后因子( ER、PR、p53、c-erbB-2、Ki-67)的相关性,评价FAP在乳腺癌的表达意义.方法:选取经病理确诊的乳腺癌患者82例,免疫组织化学法检测乳腺癌组织FAP的表达.收集乳腺癌患者的临床病理信息,分析FAP与乳腺癌临床病理因素和生物学预后因子的表达水平的关系.结果:FAP表达与患者年龄、肿瘤部位、肿瘤大小与FAP的表达无相关性(P>0.05),临床分期与FAP表达呈正相关(r=0.922,P=0.000),病理分级与FAP表达呈弱正相关,r=0.360,P=0.001.FAP表达在有无淋巴结转移组间差异统计学意义,t=11.003,P=0.00.FAP表达与p53(r=0.498,P=0.000)、c-erbB-2(r=0.326,P=0.004)、Ki-67(r=0.449,P=0.000)的表达呈正相关,FAP表达与ER、PR的表达无相关性,P＞0.05.结论:FAP在女性乳腺癌发生、发展、侵袭转移方面起到了重要的作用.FAP可作为预测乳腺癌预后的重要因子.
-
卵巢癌相关成纤维细胞和正常卵巢成纤维细胞的基因表达差异
目的:对卵巢癌相关成纤维细胞(Carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)及卵巢正常成纤维细胞(Normal fibroblasts,NFs)进行分离、培养、纯化,并分析两者多种基因表达的差异.方法:①用组织块贴壁培养法获得原代卵巢癌CAFs和卵巢NFs,通过胰酶消化法和反复传代法进行细胞的纯化;②观察细胞形态,多种基因的免疫细胞化学染色检测及相应mRNA的半定量分析,对CAFs和NFs进行初步鉴定;③应用RT-PCR的方法对CAFs和NFs中多种基因进行分析比较.结果:①获得了纯化的卵巢CAFs和NFs;②卵巢CAFs的细胞免疫化学染色α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)染色呈阳性,角蛋白呈阴性,卵巢NFs波彤蛋白(Vimentin)阳性,而α-SMA和细胞角蛋白阴性;③卵巢CAFs与NFs中Vimentin与α-SMA的mRNA发现均有表达,但CAFs中表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);④与NFs相比,CAFs中多种mRNA的表达增加,其中包括生长因子,血管生成促进因子,细胞因子等.结论:与NFs相比,CAFs在mRNA、蛋白表达等方面均有统计学差异;卵巢癌中CAFs基因表达的检测表明,其基因表达有显著变化,提示这些成纤维细胞可能为卵巢癌细胞的生长提供了适合的微环境.推测卵巢-宿主界面微环境在上皮性卵巢癌的发展中可能起重要作用.
-
成纤维细胞活化蛋白—实体肿瘤免疫治疗新靶点
肿瘤毛细血管内皮细胞表面抗原或间质细胞表面抗原的靶向治疗为肿瘤的治疗开辟了新的研究领域.这些靶向抗原的筛选及其抗体在临床中的应用已成为近年来肿瘤研究的热点.成纤维细胞活化蛋白属于丝氨酸蛋白酶家族成员,选择性表达于肿瘤间质活化的成纤维细胞表面,而在正常组织成纤维细胞表面很少表达或不表达,成纤维细胞活化蛋白(FAP)的蛋白水解酶活性能够促进肿瘤的生长和增殖.这使其成为肿瘤免疫靶向治疗理想的候选蛋白.
-
成纤维细胞活化蛋白在胆囊癌组织中的表达及意义
目的 探讨成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)在胆囊癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学检测71例胆囊癌、5例慢性胆囊炎、5例胆囊腺瘤组织中的FAP表达,并应用单因素变量、生存分析观察与胆囊癌临床病理参数的关系.结果 慢性胆囊炎、胆囊腺瘤组织中FAP无表达;71例胆囊癌组织中52例FAP阳性(73.2％),且FAP阳性表达与胆囊癌肝浸润、淋巴结转移、肿瘤浸润深度相关.结论 FA岬在胆囊癌组织中高表达,有望成为胆囊癌临床、预后判断的独立指标.
-
ShRNA干扰FAP蛋白表达对小鼠Lewis 肺癌生长的影响
[目的]研究shRNA干扰成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达对小鼠Lewis肺癌生长的影响并探讨可能的作用机制.[方法]建立C57雌鼠皮下移植瘤和肺转移瘤模型,随机分成3组:FAP-shRNA组、HK组、5％葡萄糖(5％GS)组,分别接受FAP-shRNA干扰质粒脂质体复合物、空载质粒脂质体复合物及5％葡萄糖水治疗.记录移植瘤大小、重量,肺转移瘤数目及肺湿重.检测各组FAP表达水平、肿瘤微血管密度、胶原纤维情况.[结果]FAP-shRNA组小鼠皮下移植瘤生长较5％GS组和HK组缓慢.FAP-shRNA组的肺转移瘤结节数目和肺湿重均小于5％GS组和HK组.并且FAP-shRNA组FAP表达量下调,肿瘤微血管密度减少,Ⅰ型胶原蛋白表达增多,胶原纤维沉积增加且分布紊乱.[结论] FAP-shRNA干扰质粒抗肿瘤作用可能是通过减少肿瘤血管生成,增加Ⅰ型胶原蛋白表达,终改变肿瘤微环境而实现的.
-
TGF-β1对口腔鳞癌相关成纤维细胞FAP表达的影响
目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对癌相关成纤维细胞(CAFs)中成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达的影响.方法 应用10 ng/ml的TGF-β1作用于CAFs细胞,设置正常成纤维细胞(NFs)和未经处理的CAFs细胞作为对照组,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中FAP的蛋白和mRNA表达情况.结果 FAP在NFs中几乎不表达,而在CAFs中FAP的mRNA和蛋白表达均增加.与NFs组和CAFs组相比,10 ng/ml的TGF-β1能够明显促进CAFs细胞分泌FAP,作用12、24 h后FAP mRNA和蛋白的相对表达量差异有统计学意义(P＜0.05).且随着作用时间的延长,FAP的表达持续升高,24 h较12 h表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TGF-β1能够促进CAFs中FAP的表达,在肿瘤上皮-间质交互作用中扮演着重要角色.
-
胰腺癌的ADC值和患者病理参数的关系研究
目的 探讨胰腺癌高场磁共振扩散成像(DWI)表观扩散系数(ADC)值与纤维化含量、成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达评分的相关性.方法 对28例胰腺癌患者进行高场磁共振扩散加权成像扫面,每例患者取癌区与非癌区样本各一处,共取56处样本,使用单一层面发选取样本ROC并对ADC值进行测量.取28例患者经病理学检验证实的蜡块进行Masson染色,对FAP免疫组化染色,对ADC值与纤维化含量以及成纤维细胞活化蛋白表达评分之间的相关性进行Pearson相关分析.结果 ADC测量结果发现,患者胰腺癌区ADC值为(1.159±0.210)×10ˉ3mm2/s,非胰腺癌区ADC值为(1.543±0.294)×10ˉ3mm2/s,两项数据相比具有统计学差异.选取的28个癌区蜡块经病理学检验均为胰腺导管腺癌,检测其分化程度发现其中5例低分化,4例中-低分化,12例中分化,3例高-中分化,4例高分化,纤维化含量检测结果发现癌区纤维化含量小值为20%,大值为87%.FAP评分结果中12例5分,8例4分,3例3分,3例2分以及2例1分.相关性分析结果发现胰腺癌ADC值与纤维化含量之间呈负相关关系,但经统计学检验并未发现统计学意义,中-高分化的胰腺癌患者ADC与纤维化含量呈负相关关系,此数据具有统计学意义,而胰腺癌ADC值与成纤维细胞活化蛋白表达评分之间同样为负相关关系,P<0.05,数据具有统计学意义.结论 胰腺癌高场磁共振扩散呈现表观扩散系数与纤维化含量以及成纤维细胞活化蛋白表达评分之间存在负相关关系,DWI可成为临床定量描述胰腺癌患者病理参数的有效工具.
-
乳腺癌相关成纤维细胞与成纤维活化蛋白
0 引言肿瘤基质中具有大量增殖性成纤维细胞[1],这些细胞具有鼓形纺锤形间充质结构,锯齿状的核[2],分泌更多的细胞外基质(extracellular matrixc,ECM)组分,有收缩的特性[3].这些细胞能产生相关的信号介质,例如生长因子、细胞因子、化学因子和其他的免疫调节物,在肿瘤形成中起到了显著的作用,被称为肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)[4-5].因此,近年来肿瘤中的这些成纤维细胞受到极大的关注,而成纤维细胞活化蛋白(fibroblasts activation protein,FAP)是活化成纤维细胞表面的特征性蛋白,对于降解基质、促进肿瘤的生长及转移起着重要的作用.
-
成纤维细胞活化蛋白在乳腺癌中表达的临床病理意义
目的:探讨成纤维细胞活化蛋白在乳腺癌中表达的临床病理意义.方法:应用免疫组织化学技术检测乳腺癌和正常乳腺组织中成纤维细胞活化蛋白的表达,分析蛋白表达与临床指标的相关性.结果;α-FAP在50例正常乳腺组织和良性增生性病变中的阳性表达率为10.0％(5/50),在220例浸润性导管癌中的阳性表达率为31.8％(70/220),两者比较有统计学意义(P＜0.05).α-FAP阳性率与乳腺癌患者的年龄、肿块大小、淋巴结转移、分期无显著性相关,但与患者病死率有密切相关(P=0.01).α-FAP表达可影响乳腺癌的生存,α-FAP阴性患者生存期显著长于α-FAP阳性患者(P=0.002).结论:乳腺癌中α-FAP表达与乳腺癌的发生、演进、预后相关,α-FAP表达提示乳腺癌预后差.
-
MLCK和FAP表达量与子宫肌瘤细胞增殖、侵袭相关性的研究
目的:研究肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达量与子宫肌瘤细胞增殖、侵袭的相关性.方法:选择在武汉市红十字会医院手术切除的子宫肌瘤样本和肌瘤旁正常子宫肌样本,采用荧光定量PCR试剂盒测定MLCK和FAP的mRNA表达量,采用酶联免疫吸附试剂盒测定增殖、侵袭基因的蛋白表达量.结果:子宫肌瘤样本中MLCK和FAP的mRNA表达量均显著高于正常子宫肌样本,Survivin、Livin、Bcl-2、Snail、N-cadherin、MMP2的蛋白表达量均显著高于正常子宫肌样本;MLCK和FAP高表达的子宫肌瘤样本中Survivin、Livin、Bcl-2、Snail、N-cadherin、MMP2的蛋白表达量均显著高于MLCK和FAP低表达的子宫肌瘤样本.结论:子宫肌瘤病灶中高表达的MLCK和FAP能够促进子宫肌瘤细胞的增殖、侵袭.
-
成纤维细胞活化蛋白在上皮癌中表达的意义及研究进展
纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)广泛存在于上皮癌组织中,在肿瘤间质成纤维细胞选择性表达而在正常的成熟组织中几乎不表达,是上皮癌的特异性靶标.FAP具有蛋白酶活性,并且可与其他细胞表面蛋白分子形成复合物,可能作用于细胞信号传导,参与肿瘤间质重塑和血管网的形成,调节肿瘤细胞的生长、分化、黏附和转移.目前,有许多临床前期实验及临床研究报导,靶向FAP能有效抑制上皮癌的生长和转移.FAP将可能成为治疗上皮癌的新靶点.现综述总结了FAP的生物学特性,其表达对上皮癌发生发展的影响,以及靶向FAP的抗肿瘤研究进展.
-
沉默肌瘤基质成纤维细胞FAP基因可抑制雌激素的细胞增殖效应
目的 观察成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达在雌激素对子宫肌瘤基质成纤维细胞的活化和促增殖中的作用.方法 采用免疫磁珠法分离成纤维细胞并检测雌激素受体(ER-α/ER-β)表达情况.以雌激素分别刺激子宫正常平滑肌基质成纤维细胞及子宫肌瘤基质成纤维细胞(TAF),并检测FAP、细胞外基质(ECM)、生长因子的分泌情况和细胞增殖活力的改变,以及检测细胞增殖通路相关信号分子的改变;使用RNAi技术沉默TAF的FAP基因,观察雌激素刺激对TAF上述指标表达水平的影响.结果 TAF的FAP、ER-α/ER-β的表达水平高于成纤维细胞(n=10,P<0.05).经雌激素刺激,成纤维细胞和TAF的FAP、ECM(Fibronectin、Laminin、Collgen I)和生长因子(TGF-β、IGF-1)表达水平,细胞增殖活力、细胞增殖通路相关信号分子(AKT、ERK、c-Fos、MEK)的磷酸化水平均上调;RNAi沉默FAP基因可抑制雌激素介导的上述生物学作用.结论 FAP基因表达是E2活化及促进子宫肌瘤基质成纤维细胞增殖过程中的关键,其可能在子宫肌瘤发病机制中具有重要作用并且可能成为治疗子宫肌瘤的新靶点.
-
SACC-83来源的外泌体调节唾液腺间质成纤维细胞表达FAP的实验研究
目的:研究腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)细胞SACC-83来源的外泌体(exosome,EXO)对人正常唾液腺间质成纤维细胞(human normal salivary gland stromal fibroblasts,hSGSFs)表达成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)的影响.方法:采用超滤管浓缩与EXO提取试剂盒相结合的方法从SACC-83的培养上清中提取EXO,通过透射电镜及Western Blot对所提取的EXO进行鉴定;将SACC-83来源的EXO用荧光染料PKH67标记后与hSGSFs共培养48 h,采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察hSGSFs对于SACC-83来源的EXO的摄取情况;利用qRT-PCR和Western Blot法检测在SACC-83来源的EXO作用下,hSGSFs中FAP的表达变化.结果:SACC-83培养上清中所提取到的微囊泡直径为30～100 nm,EXO的膜蛋白标记物CD63和TSG101的表达为阳性;携带PKH67荧光标记的EXO可被hSGSFs摄取,并可在mRNA和蛋白水平上调hSGSFs中FAP的表达.结论:SACC-83来源的EXO可被hSGSFs摄取,并可显著上调hSGSFs中FAP的表达.提示ACC可能通过EXO途径促进正常唾液腺间质成纤维细胞向癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAF)的转化.
-
胰腺癌表观扩散系数与纤维化含量、成纤维细胞活化蛋白表达相关性研究
目的：探讨高场磁共振扩散成像表观扩散系数（ADC ）值与纤维化含量、成纤维细胞活化蛋白（FA P ）表达评分的相关性。方法对18例经病理证实的胰腺癌患者进行3．0T MRI平扫及扩散加权成像（DWI）扫描，使用单一层面法选取感兴趣区（ROI）测量癌区ADC值，并对胰腺癌患者的蜡块进行Masson染色及FAP免疫组化染色，采用 Pearson相关分析检验ADC值与纤维化含量、FA P染色评分的相关性。结果胰腺癌区的ADC值与纤维化含量呈负相关（ r＝－0．459），但无统计学意义（ P＝0．056），中～高分化组ADC值与纤维化含量呈负相关（ r＝－0．564，P＝0．044）。ADC值与 FA P染色评分呈负相关（ r＝－0．479，P＝0．036）。结论胰腺癌的ADC值与其病理参数间呈负相关，DWI有望对胰腺癌的病理特征实现定量成像，有助于进一步了解其病理特征。
